Bendrojo šlapimo atmetimo modulio (uCRM) balas neinvaziniam inkstų transplantacijos stebėjimui

Kontaktai: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 El. paštas:audrey.hu@wecistanche.com

Abstraktus

Anksčiau buvo pranešta, kad bendras atmetimo modulis (CRM), susidedantis iš 11 genų, išreikštų alotransplantacijos biopsijose, tarnauja kaip ūminio atmetimo (AR) biomarkeris, koreliuoja su transplantato sužalojimo mastu ir prognozuoja būsimą transplantato žalą. Ištyrėme šios genų grupės naudojimą pacientų, kuriems atlikta inkstų transplantacija, šlapimo ląstelių granulėse. Šlapimo ląstelių nuosėdos buvo paimtos iš pacientų, kuriems buvo biopsija patvirtintas ūminis atmetimas, ribinė AR (bAR), BK viruso nefropatija (BKVN), o stabilūs inkstų transplantatai su normalios protokolo biopsijomis (STA) buvo analizuojami šių 11 genų ekspresijai naudojant kiekybinę polimerazės grandinę. reakcija (qPCR). Įvertinome šiuos 11 CRM genų pagal jų gausą, autokoreliaciją ir individualius ekspresijos lygius. 10/11 genų ekspresija AR buvo didesnė, lyginant su STA.Psmb9 ir Cxcl10 gali klasifikuoti AR ir STA taip pat tiksliai, kaip ir 11-geno modelis ( jautrumas=93.6 proc.,specifiškumas=97.6 proc.). Au CRM balas, pagrįstas geometriniu išraiškos lygių vidurkiu, gali labai tiksliai atskirti AR nuo STA (AUC= 0.9886) ir konkrečiai koreliuoti su histologiniais tubulito ir intersticinio uždegimo rodikliais, o ne kanalėlių atrofija, glomeruloskleroze, intimos proliferacija, kanalėlių vakuolizacija arba ūminis glomerulitas. Šis šlapimo geno ekspresija pagrįstas balas gali leisti neinvaziškai ir kiekybiškai stebėti AR.

CSITANCHE POVEIKIS: PRIEŠUŽDEGIMAS

Įvadas

Inkstų transplantacija (KTx) yra tinkamiausias būdas gydyti galutinę inkstų ligos stadiją (ESRD) dėl bet kokios priežasties [1]. Nors šis terapinis metodas tapo įprasta praktika visame pasaulyje, žymiai pagerindamas pacientų gyvenimo kokybę ir išgyvenamumą[2], ilgalaikių inkstų transplantacijos rezultatai nepagerėjo, kaip tikėtasi, nepaisant geresnio alotransplantato atmetimo imuninės biologijos supratimo ir naujų priemonių atsiradimo. ir stipresnių imunosupresinių medžiagų [3]. Pagrindinė nuolatinio ir prasto transplantato išgyvenimo priežastis yra nesugebėjimas neinvaziškai kiekybiškai įvertinti transplantato imuninės sistemos pažeidimo naštą ir numatyti ūminį atmetimą prieš esminį funkcinį nuosmukį ir histologinį pažeidimą. Iš tiesų, nors gerai žinoma, kad KTx pacientai yra nuolat veikiami su imuniniais ir su imuniniais sutrikimais susijusių sužalojimų [4, 5], periodinis KTx stebėjimas priklauso nuo nejautrų alotransplantato disfunkcijos pakaitinių žymenų, tokių kaip kreatinino kiekis serume (6, Z) ir sporadinis KTx stebėjimas. yra pagrįstas protokolinėmis alotransplantato biopsijomis, kad būtų galima nustatyti subklinikinį histologinį transplantato pažeidimą, kai serumo kreatinino kiekis nėra sutrikęs[8]. Nors transplantato disfunkcijos vertinimas, pagrįstas tik kreatinino kiekiu serume, yra jautrus nespecifiniam, nustatytam transplantato pažeidimui, jo specifiškumas ūminio atmetimo (AR) diagnozei yra mažas, nes kreatinino koncentracijos serume padidėjimą gali lemti kitos priežastys, tiesiogiai nesusijusios su transplantato atmetimu, pvz., su imunosupresiniais (IS) vaistais susijęs nefrotoksiškumas, ūmi kanalėlių nekrozė, infekcija. ir intersticinė fibrozė bei kanalėlių atrofija (IFTA). Be to, nors stebėjimo biopsijų naudojimas buvo laikomas auksiniu standartu diagnozuojant lografto pažeidimai, šis metodas yra brangus, invazinis, su procedūrų sergamumu (kraujavimo rizika; procedūra, kuriai reikalinga sedacija, ypač vaikams, sergantiems KTx)[9], pasižyminti tarp operatoriaus skaitymo svyravimų ir dažnai prastai reprezentuojančia židininį histologinį pažeidimą, todėl naudojami neinvaziniai biologiniai žymenys, kurie gali tiksliai numatyti ir kiekybiškai įvertinti imuninis sužalojimas allografte būtų reikšmingas pažanga siekiant tikslaus KTx stebėjimo [10-12].

Mūsų grupės ir kiti [13-17] įrodė, kad proteominių, RNR ir mikroRNR biožymenų tyrimas KTx pacientų šlapime yra optimalus biologinis skystis nuosekliam inkstų transplantato stebėjimui, nes tai yra inkstų ultrafiltratas. inkstuose ir atspindi biologinius procesus bei uždegiminę naštą, randamą inksto transplantate [18]. Nepaisant daugelio tyrimų, kuriuose šlapimo biomarkeriai anksčiau buvo vertinami kaip neinvazinis diagnostinis metodas AR analizuojant inkstų transplantaciją, išskirtinis dėmesys skiriamas pavieniams biomarkeriams, tokiems kaip tam tikri chemokinai ir receptoriai, tokie kaip CXCR3, CXCL9 arba CXCL10 [{{ 6}}], todėl sunku užfiksuoti AR molekulinį sudėtingumą ir nevienalytiškumą skirtingiems KTx pacientams. Užfiksuoti šį nevienalytiškumą būtina norint kiekybiškai įvertinti sužalojimo naštą taip, kad būtų galima stebėti AR ir atsigauti po transplantato sužalojimo po terapinės intervencijos [25, 26].

Šiame tyrime mes pritaikome žinias, įgytas panaudojus 11 genų bendrąjį atmetimo modulį (CRM) [27], kuris iš pradžių buvo sukurtas naudojant išsamią viešai prieinamų transplantacijos audinių mikromatricos duomenų rinkinių iš keturių skirtingų kietųjų medžiagų tipų biopsijos mėginius. organai. CRM genai audiniuose (tCRM) buvo pernelyg išreikšti tarp AR pacientų, neatsižvelgiant į organo tipą, imunosupresijos protokolų skirtumus ar genų ekspresijos tyrimo platformų skirtumus. Kiekybinis slenkstis, nustatytas atliekant kombinuoto geno balo (tCRM balo) skaičiavimo analizę, tiksliai numatė AR buvimą kryžminiu audinių genų ekspresijos parašų patvirtinimu 8 nepriklausomose žmogaus inksto transplantato grupėse (n=236 mėginių). biopsijos[27]. tCRM balas toliau buvo patvirtintas qPCR atliekant atskirą tyrimą su KTx biopsijos mėginiais, kaip AR ir lėtinio alografo pažeidimo (CAl) diagnostiką su skirtingomis genų rinkinio slenksčiais [28]. Be to, šis CRM genų rinkinys buvo patvirtintas nepriklausomame audinių, paimtų iš plaučių persodinimo pacientų, sergančių lėtine plaučių alotransplantacijos disfunkcija (CLAD), rinkinyje [29].

Šiame tyrime vertiname CRM genų rinkinį, skirtą naudoti KTx pacientų šlapimo mėginiams, kartu su alotransplantato biopsijomis su žinoma histologija, neinvazinei AR ir kitų imuninės sistemos sukeltų sužalojimų diagnozei. Be to, mes sukuriame šlapimo CRM (uCRM) balą, kuris tiksliai atskiria STA ir AR pacientus. Įvertiname šio balo klinikinį potencialą nustatant bAR, koreliuodami šį balą su tubulito ir intersticinio uždegimo histologiniais balais.

CSITANCHE POVEIKIS: PAGERINTI IMUNITETĄ

medžiagos ir metodai

Šlapimo mėginiai ir tyrimo grupė

Į tyrimą buvo įtraukti biobanko šlapimo mėginiai (n=1760) iš KTx recipientų, įstojusių į Stanfordo universitetą 2000–2011 m. ir UCSF medicinos centre 2014–2016 m. Tyrimą patvirtino Kalifornijos universiteto San Francisko institucinė peržiūros taryba ir etikos komitetas. Visi pacientai pateikė raštišką informuotą sutikimą dalyvauti tyrime, visiškai laikydamiesi Helsinkio deklaracijos. Klinikinė ir mokslinių tyrimų veikla, apie kurią pranešama, atitinka Stambulo deklaracijos principus, išdėstytus Stambulo deklaracijoje dėl prekybos organais ir transplantacijos turizmo. Šlapimo mėginiuose, naudojamuose nustatant AR uCRM slenkstį, 178 šlapimo mėginiai buvo identifikuoti su suporuotomis inkstų transplantato biopsijomis su aiškiai apibrėžtomis Banff laipsnio AR [30, 31] patologijomis arba be sužalojimo / stabilių (STA) transplantatų (Eig 1). Be to, mes taip pat įvertinome uCRM tyrimo parašą sergant BK virusine nefropatija, kuri yra svarbus AR diagnozavimo sutrikimas ir dažnai pasireiškia reikšmingu uždegimu alotransplantacijos biopsijoje. Apskritai 28 mėginiai buvo atmesti dėl kokybės kontrolės problemų, susijusių su mažu kiekiu ir prastos kokybės RNR, todėl galutinai suskaičiuota 150 šlapimo mėginių iš 150 asmenų imuninės sistemos sukelto KTx pažeidimo skerspjūvio analizei. Šlapimo paėmimo metu kiekvienas šlapimo mėginys buvo suderintas su biopsija, kurią įvertino Stanfordo universiteto (Richard Sibley) arba UCSF (Zol-tan Laszik) pagrindinis personalo patologas.

Paciento savybės

150 unique urine samples were assessed for the uCRM assay in 150 unique kidney transplant patients. Baseline clinical and demographic variables by AR, bAR, BKVN, or STA phenotype are shown in Table1, There were no significant differences between the groups in the demographic variables, except in recipient age (p= 0.025) and in donor-source (p=0.0008). These samples were used in cross-sectional analyses for modeling of gene expression data and subsequent development and validation of the uCRM threshold for biopsy-proven AR. Samples were collected from both pediatric (n=94) and adult (n=56)patients to enable a model-independent of recipient age or baseline immunosuppression. Based on the matched biopsy diagnosis, urine samples were categorized in the following categories: AR(n=64;45 biopsies met criteria for Banff confirmed AR with >i2,t2, and infiltration by >4 monobranduolinės ląstelės /vamzdinis skerspjūvis, o 19 atitiko ribinio AR kriterijus su il/i2 ir t0/t1 ir 1-4 mononuklearinių ląstelių / vamzdinio skerspjūvio infiltracija), STA (n { {8}}), BK viruso nefritas (n =43), Pacientai gavo kalcineurino inhibitorių ILS režimą, pagrįstą takrolimuzu ir mikofenolato mofetiliu, su steroidais arba be jų, ir indukcinį gydymą timoglobulinu arba anti-IL{{ 12}} receptorių monokloninis antikūnas (daklizumabas arba bazinis infliksimabas)[32]. Šlapimo mėginiai buvo paimti vidutiniškai praėjus 731 dienai po transplantacijos (diapazonas 169-1335 d.).

Traumos fenotipų apibrėžimas

All kidney biopsies were blindly and centrally analyzed at each institution by staff pathologists (RS and ZL)and were graded by the Banff dassification[31,33] for acute rejection.Intragraft C4d stains were performed [34] to assess for acute humoral rejection(AHR)[35]. Transplant injury was defined as>20 procentų padidėjęs kreatinino kiekis serume, palyginti su ankstesne pastovios būsenos pradine verte, ir susijusi biopsija, kuri buvo klasifikuojama kaip AR arba BKVN. AR buvo nustatytas mažiausiai pagal Banff schemą, tubulito balas, didesnis arba lygus 1, kartu su intersticinio uždegimo balas Didesnis arba lygus 1, kai Cd ir DSA neigiami. Buvo sukelti tiek Tląstelių sukeltas AR (TCMR), tiek antikūnų sukeltas atmetimo (ABMR) atvejai, nors visi pastebėti ABMR atvejai turėjo mišrų TCMR ir ABMR fenotipą, nes gryno ABMR laikymasis retai pastebimas mažos rizikos, nejautriose grupėse. Kai kuriais TCMR atvejais buvo pastebėti ribiniai pokyčiai (bAR), kuriems būdinga mononuklearinių ląstelių infiltracija (<25% of="" the="" parenchyma)or="" foci="" of="" mild="" tubulitis(1-4="" mononuclear="" cells/tubular="" cross-section),="" and="" for="" purposes="" of="" molecular="" correlation="" analysis,="" these="" have="" been="" shown="" as="" bar,="" as="" the="" burden="" of="" histological="" inflammation="" was="" overall="" lower="" for="" these="" biopsy="" samples.="" bkvn="" was="" defined="" as="" the="" positivity="" of="" polyomavirus="" pcr="" in="" peripheral=""><1000-28,800,000), together="" with="" a="" positive="" sv40="" stain="" in="" the="" concomitant="" renal="" allograft="" biopsy.="" normal="" (sta)="" allografts="" were="" defined="" by="" an="" absence="" of="" significant="" injury="" pathology="" on="" the="" 6-month="" protocol="" biopsy,="" as="" defined="" by="" banff="" schema,="" stable="" graft="" function,="" no="" proteinuria,="" and="" no="">

1 pav. Mėginio parinkimas ir tyrimo schema. 2000–2016 m. buvo paimta 1760 šlapimo mėginių,

iš jų 643 buvo suderinti biopsijos duomenys. 178 iš šių 643 turėjo aiškiai apibrėžtus AR, bAR, BKVN arba STA fenotipus.

Po RNR ekstrahavimo, cDNR sintezės ir qPCR kiekybinio įvertinimo 28 mėginiai nepraėjo QA/QC, todėl liko 150

pavyzdžiai statistinei analizei ir modeliavimui.

Šlapimo surinkimas, apdorojimas, visos RNR ekstrahavimas, cDNR sintezė ir qPCR

Šlapimas (50 ml; sterilus indas) buvo paimtas iš pacientų, kuriems buvo persodintas inkstas, prieš biopsijos procedūrą ir prieš bet kokį AR gydymo intensyvinimą. RNR buvo išskirta iš šlapimo ląstelių nuosėdų pagal mūsų anksčiau pateiktą protokolą [36]. Trumpai tariant, šlapimo ląstelės buvo gautos centrifuguojant 50- ml šlapimo mėginį 2000 x g greičiu 20 minučių. RNR buvo išskirta iš šlapimo ląstelių granulių naudojant RNeasy Plus Micro Kit (Qiagen, Valencia, CA). RNR kokybė buvo įvertinta naudojant NanoDrop ND-2000 spektrofotometrą (ThermoFisher Scientific, Waltham, MA) santykiu 260/280. cDNR sintezė buvo atlikta naudojant 50 ng ekstrahuotos RNR naudojant SuperScript VILO"Master Mix (Invitrogen, Carlsbad, CA). qPCR buvo atlikta su cDNR, susintetinta iš 50 ng bendros RNR, tada 1,56 ng cDNR buvo apdorota naudojant specifinį taikinio amplifikaciją ir mėginį. praskiedimas su sujungtais Taqman tyrimais, siekiant nustatyti 1 l uCRM genus multipleksuose, naudojant Taqman PreAmp Master Mix (ABI) iki 5 ul galutinio tūrio, 18 ciklų terminiame cikle, tada praskiestas DNR suspensijos buferiu (TEKnova, CA). Buvo atliktas mikrofluidinis qPCR atlikta su 96,96 dinaminėmis matricomis („Fluidigm“, Pietų San Franciskas, CA), naudojant 2,25 ul praskiesto mėginio iš specifinio tikslinio amplifikacijos, kartu su „Taqman Assays“ (ABI) kiekvienam geno transkriptui (S1 lentelė), „Taqman Universal“ pagrindiniu mišiniu (Applied Biosystems, Foster City, CA) ir Loading Reagent (Fluidigm), užpildydami ir įkeldami lustą per HX IFC valdiklį ir atlikdami qPCR sistemoje BioMark (Fluidgm). Santykinis RNR ekspresijos kiekis buvo apskaičiuotas naudojant lyginamąjį cy cle slenksčio (CT) metodas. Ekspresijos reikšmės buvo normalizuotos iki 18, naudojant ribosominę RNR endogeninę etaloninę ir universaliąją RNR (Agilent Inc., Santa Clara, CA).

Statistika

Visi qPCR tyrimai buvo atlikti dviem egzemplioriais. Visi duomenys pateikiami kaip vidurkis ± SEM. Palyginus CRM genus pagal fenotipą, buvo naudojamas mišraus poveikio modelis su Geisser-Greenhouse korekcija, o daugkartinės palyginimo pataisos buvo atliktos naudojant dviejų pakopų linijinio žingsnio procedūrą, kurią sukūrė Beniaminas, Kriegeris ir Yekutieli. Pirsono koreliacija ir hierarchinis dulkių valymas buvo atliktas Morpheus (Broad Institute). Mašininio mokymosi numatymo modelių duomenys buvo suskirstyti į mokymo rinkinį (80 proc.) ir testavimo rinkinį (20 proc.). Sprendimų medžio klasifikavimo modelis, patvirtintas bandymų rinkinyje, buvo naudojamas tiksliausia uCRM balo ribai nustatyti. Kintamoji atranka naudojant atsitiktinius miškus (VSURF) buvo naudojama klasifikuojant AR ys STA, taip pat siekiant įvertinti ir reitinguoti atskirų genų svarbą. Atsitiktinio miško kintamojo svarbos išvestis apibrėžiama kaip vidutinis procentinis kintamojo (geno) modelio netikslumo sumažėjimas, kuris buvo pašalintas (atsitiktinai permutuotas) iš modelio. Neprižiūrimas dulkių valymas, siekiant vizualizuoti fenotipų atskyrimą, buvo atliktas naudojant paskirstytą stochastinį kaimynų įterpimo algoritmą (t-SNE) Mathematica 11.3 (Wolfram Research, Champaign. IL). CRM genų tinklo analizė buvo atlikta naudojant GeneMANIA [37]. Demografinių kintamųjų statistika buvo atlikta naudojant Chi kvadrato analizę diskretiesiems kintamiesiems ir Kruskal-Wallis testą nuolatiniams kintamiesiems IMP 14.2 (SASInstitute, Cary, NC). Jei nenurodyta kitaip. visos kitos analizės buvo atliktos ir vizualizuotos naudojant Prism 8.0.1 (GraphPad, Carlsbad, CA).

Studijų patvirtinimas

Tyrimą patvirtino ir Stanfordo universiteto medicinos mokyklos, ir UCSF medicinos centro etikos komitetai. Visi suaugę pacientai ir nesuaugusių pacientų tėvai/globėjai pateikė raštišką informuotą sutikimą dalyvauti tyrime, visiškai laikydamiesi Helsinkio deklaracijos. Klinikinė ir mokslinių tyrimų veikla, apie kurią pranešama, atitinka Stambulo deklaracijos principus, išdėstytus Stambulo deklaracijoje dėl prekybos organais ir transplantacijos turizmo.

CSITANCHE POVEIKIS: PAGERINTI IMUNITETĄ

Rezultatai

Visų 150 KTx gavėjų, turinčių AR, bAR, BKVN ir STA fenotipus, pradiniai klinikiniai ir demografiniai kintamieji pateikti 1 lentelėje.

Santykinis CRM geno ekspresijos gausa ir koreliacija pelių ląstelių nuosėdose

Santykinė gausa. Norint nustatyti santykinį CRM geno transkriptų gausą šlapimo nuosėdose, ciklo slenksčio (Ct) vertės buvo naudojamos kaip gausos metrika. Kuo mažesnė Ct vertė, tuo didesnė jos gausa tarp CRM genų. Tarp 11 CRM genų BASP1 buvo gausiausias nuorašas šlapimo ląstelių nuosėdose. Po BASP1 sekė TAP1, PSMB9 ir ISG20, kaip 4 labiausiai gausūs nuorašai. LCK ir CD6 buvo vieni iš mažiausiai gausių nuorašų šlapimo nuosėdose CRM genų rinkinyje. Kadangi Ct reikšmės svyravo nuo mažiausios Ct vertės 14 iki didžiausios Ct vertės 20, tarp BASP1 ir CD6 genų transkriptų buvo 64-karto skirtumas, o CD6 buvo mažiausiai gausus transkriptas.

2 pav. Santykinis CRM genų šlapime gausa ir koreliacija bei CRM genų ekspresija skirtinguose klinikiniuose inkstų transplantacijos fenotipuose. A. Pearsono koreliacinė matrica, rodanti koreliaciją tarp 11 CRM genų jų ekspresijoje šlapimo ląstelių nuosėdose. Kvadrato dydis yra vizualus koreliacijos stiprumo rodiklis. B. Šilumos žemėlapis su prižiūrimu klasterizavimu pagal fenotipą, rodantį santykinę CRM genų raišką AR, bAR, BKVN ir STA. C. Smuiko brėžiniai, vaizduojantys CRM genų pasiskirstymą AR, bAR, BKVN ir STA šlapimo ląstelių granulėse. � rodo, kad AR ir STA buvo reikšmingi po kelių palyginimų. # rodo, kad po kelių palyginimų bAR ir STA buvo reikšmingi. Papildoma statistika pateikiama 2 lentelėje.

Genų ekspresijos koreliacija tarp CRM genų genų.

Toliau įvertinome genų ekspresijos koreliaciją tarp 11 CRM genų. Koreliacija svyravo nuo labai silpnos (r=-0.17 CXCL9 ir NKG7 ir r=-0.10 CXCL10 ir RUNX3) iki labai stiprios (r=0.77 INPP5D ir TAP1 ir ta pati reikšmė CD6 ir LCK). Nors CXCL9 ir CXCL10 priklauso tai pačiai chemokinų klasei, genų ekspresijos koreliacija tarp jų buvo tik vidutinė (r=0.46). Koreliacinės matricos grafinis vaizdas pateiktas 2A pav. Šilumos žemėlapis, sukurtas naudojant prižiūrimą klasterizavimą, rodo, kad AR, bAR ir BKVN CRM genų genų ekspresijos vertės labai padidėja, palyginti su STA fenotipu (2B pav.).

uCRM geno ekspresija šlapimo nuosėdose su biopsija patvirtintu AR ir BKVN

CRMgenų genų ekspresija AR ir bar. Toliau įvertinome kiekvieno iš 11 CRM genų genų ekspresiją pagal jų santykinę raišką AR, bAR, BKVN ir STA. Analizės rezultatų santrauka pateikta 2 lentelėje ir 2C pav.1 0 iš 11 genų buvo reikšmingai padidėjęs AR šlapimo nuosėdose, palyginti su šlapimo nuosėdomis iš STA. Tačiau tik penki CRM genai (Cd6, Cxcll0, Cxd9, Nkg7 ir Psmb9) buvo žymiai padidinti bAR mėginiuose, palyginti su STA, o jų ekspresija bAR grupėje buvo santykinai mažesnė nei Banff laipsnio AR grupėje, pabrėžiant, kad uCRM genai gali atspindi uždegiminę naštą allografte Eig 2C.

2 lentelė. CRM genų genų ekspresijos lygiai skirtinguose fenotipuose

CRMgenų genų ekspresija BKVN. CD6, CXCL10, CXCL9, LCK, NKG7 ir PSMB9 ekspresija pacientų, sergančių BKVN, šlapimo mėginiuose buvo skirtingai reguliuojama, palyginti su STA pacientų mėginiais. Iš šešių genų, turinčių statistiškai skirtingas genų ekspresijos vertes tarp BKVN ir STA mėginių, tik NKG7 ekspresija BKVN šlapime buvo žymiai mažesnė.

Šlapimo CRM (uCRM) geno ekspresijos balo nustatymas, siekiant nustatyti inkstų transplantacijos atmetimą

Kadangi CRM genų rinkinio ekspresija nebuvo vienalytė visuose transplantacijos fenotipuose ir tarp skirtingų genų buvo didelis fiziologinis pokalbis (S1 pav.), mes naudojome netiesinius prižiūrimus metodus, kad galėtume toliau diferencijuoti ir klasifikuoti fenotipus. Siekiant nustatyti ryšį tarp uCRM genų ir fenotipų, buvo atliktas neprižiūrimas grupavimas per t-SNE. 3A paveiksle parodytas t-SNE grafikas, nurodantis, kad 11 CRM genų gali beveik visiškai atskirti AR nuo STA mėginių. VSURF modelis, priklausantis nuo Random Forests svarbos balų, nustatė, kad PSMB9 ir CXCL10 buvo du svarbiausi genai, patenkinantys AR iš STA. 3B paveiksle toliau pavaizduota šių 2 genų reikšmė. Genų svorių svarbos grafikas rodo, kad bet kuris iš 2 genų, jei neįtrauktas į modelį, atitinka maždaug 20 procentų modelio netikslumo sumažėjimą. Šie du genai gali klasifikuoti AR ir STA beveik tokiu pat tikslumu kaip 1l geno modelis, kurio jautrumas yra 93,6 proc., o specifiškumas - 97,6 proc. Šių dviejų genų genų ekspresijos slenksčiai buvo nustatyti sprendimų medžio klasifikatoriumi, o šių dviejų genų logaritminės skalės vertės pavaizduotos 3C pav. 28 CXCL10 ir 3 PSMB9 slenkstis teisingai klasifikavo 86/88 AR ir STA atvejus, o bendras 97,7 proc. tikslumas. Pažymėtina, kad barAR mėginiai pateko tarp AR ir STA fenotipų, o tai rodo šių dviejų genų gradaciją alotransplantacijos uždegimo laipsnio atžvilgiu.

Norint ištirti uCRM balo klasifikavimo našumą AR, ribinio AR ir STA atvejais, buvo sukurtas sprendimų medžio klasifikatorius (4A pav.). Sprendimų medis nustatė optimalias uCRM balų ribas kiekvienam fenotipui. balas didesnis nei 4 teisingai klasifikuojami 44/49 AR atvejai; balas mažesnis nei 1.8 teisingai klasifikuoti 33/35 STA atvejai.14/23 ribinių atvejų buvo tarp šių dviejų slenksčių. uCRM balų pasiskirstymas pagal fenotipą parodytas 4B pav. Vidutiniai uCRM balai (SEM) AR, bAR ir STA buvo 8,195 (0,631), 3,265 (0,412{{21). }}), ir 1,404 (0,162), o visi palyginimai buvo reikšmingi po kelių palyginimų korekcijos. Pagal uCRM balą buvo galima labai tiksliai atskirti AR ir STA – esant 3,63 ribai, jautrumas ir specifiškumas buvo atitinkamai 95,35 ir 97,78 procentai (pvz., 4C. Atskiriant AR ir barAR ir STA derinį, uCRM balas išliko). didelis tikslumas prie tos pačios slenksčio, jautrumas ir specifiškumas buvo atitinkamai 87,10 ir 97,78 procentai (S2A pav.).

Įtraukiant BKVN mėginius, visi fenotipai labai skyrėsi vienas nuo kito po kelių palyginimų korekcijos, išskyrus bAR ir BKVN (S2B pav.). Atskiriant AR ir bar, STA ir BKVN derinį, uCRM balas vis tiek išliko aukštas, bet mažesnis. Naudojant tuos pačius 3,63 slenksčius, jautrumas ir specifiškumas buvo atitinkamai 76,92 ir 97,78 procentai (S2CFig).

ComScore koreliuoja su AR specifiniais biopsijos histologiniais pažeidimais Pažymėtina, kad tendencija didinti uCRM balą nuo STA iki bAR iki AR leido manyti, kad uCRM balas gali aptikti kliniškai reikšmingus uždegimo laipsnius. Taigi įvertinome, ar uCRM balas buvo susijęs su histologinių AR pažeidimų, pastebėtų to paties paciento suderintose biopsijose, surinktose vienu metu, mastu. Kaip matyti 5A ir 5B pav., uCRM balai koreliavo su tubulito (t) mastu ir intersticinio uždegimo (i) biopsijos balais pagal AR (R=0.5479, P).<0.0001 and="" r="0.4420,"><0.0001 for="" the="" ucrm="" score="" regarding="" t="" and="" ii,="" respectively).="" there="" was="" no="" correlation="" between="" the="" ucrm="" score="" and="" measures="" of="" tubular="" atrophy="" (ta),glomerulosclerosis="" (gs),mesangial="" matrix="" (mm),="" intimal="" proliferation="" (cv),="" medial="" arteriolar="" hyaline="" (ah),="" tubular="" vacuolization(tv),="" arteritis="" (v),="" or="" acute="" glomerulitis="">

CSITANCHE POVEIKIS: NUONUVARGIS

Diskusija

Transplantacijos medicinoje skubiai reikia sukurti patikimas ir neinvazines stebėjimo priemones, kurios padėtų transplantacijos gydytojams numatyti alotransplantacijos sužalojimo riziką, pirmiausia prieš dar nustatant transplantato pažeidimą. Nors daugelis transkripcijos biomarkerių buvo susieti su AR, dauguma tyrimų iš esmės buvo sutelkti į unikalų arba vieną transkripcijos faktorių ir neatspindi viso alotransplantato atmetimo biologinio proceso molekulinio sudėtingumo [11, 38]. Be to, nors dabartinis imuninės sistemos sukelto alotransplantato pažeidimo diagnozavimo auksinis standartas yra alotransplantato biopsija, gerai žinoma, kad procedūra turi esminių apribojimų, susijusių su dažnu klaidingu mėginių ėmimo vaizdavimu, didelėmis sąnaudomis ir nepraktiškumu pasikartojant. atranka dėl invazinio technikos pobūdžio.

Keletas ataskaitų parodė, kad naudinga tirti skirtingus biologinius žymenis, numatančius AR inkstų transplantacijos recipientų šlapimo mėginiuose [20-22]. Padidėjęs imuninės sistemos efektorių molekulių ir transkriptų, tokių kaip granzimas B. CXCL10.CXCL9.IFN-y ir CXCR3, kiekis šlapime. buvo įrodyta, kad jie yra labai susiję su AR ir kai kuriais atvejais netgi nuspėja AR atsiradimą iš anksto [19,24, 39-43]. Pasinaudojus neseniai pateiktais mūsų grupės duomenimis [2Z, 29, 44], rodančiais bendrą genų ekspresijos atmetimo modulį alotransplantacijos biopsijose AR metu, neatsižvelgiant į audinio organo tipą, pagrindinis šio tyrimo tikslas buvo ištirti, ar CRM kiekis pacientų, kuriems persodintas inkstas, šlapime gali būti naudingas kaip idealus neinvazinis biomarkeris, numatantis AR atsiradimą.

Nors daugelis atskirų CRM genų ir genų produktų buvo įvertinti atskirai, tai yra pirmoji ataskaita apie kolektyvinį, neinvazinį CRM genų naudojimą prognozuojant AR KTx. Pavyzdžiui, šlapimo CXCL9 mRNR ir baltymai bei CXCL10 mRNR anksčiau buvo įvertinti daugiacentriuose tyrimuose, siekiant diagnozuoti AR[13,45,46. PSMB9 transkriptai inkstų biopsijose taip pat anksčiau buvo siejami su transplantato kokybe ir ūminio atmetimo numatymu. 47].

Mes išanalizavome genų ekspresijos duomenis apie KTx pacientų šlapimo nuosėdas, kad nustatytų santykinį CRM nuorašų gausumą ir jų ekspresijos koreliaciją tarp CRMgenų (2A pav.). Remiantis anksčiau praneštu tyrimu, kuriame analizuojamas CRM balas audinių inkstų ir plaučių transplantatų mėginiuose, CRMgenai padidino AR ir kitų transplantacijos sužalojimų, tokių kaip AR ir BKVN, ekspresiją (2B ir 2C pav.). Šioje ataskaitoje taip pat pastebėjome tvirtą ryšį tarp naujai sukurto uCRM balo ir histologinių uždegiminių balų (inkstų biopsijų t ir ii balų). Kadangi dauguma šių CRM genų ekspresuojami beveik išimtinai infiltruojančiose imuninėse ląstelėse, padidėjusi CRM genų ekspresija šlapimo nuosėdose rodo, kad inksto transplantato recipientų, patyrusių transplantato pažeidimą, šlapime padidėja infiltruojančių imuninių ląstelių išsiskyrimas.

Tada mes panaudojome kombinuotą balą, apskaičiuotą pagal atskirų CRM genų atskirų genų ekspresijos vertes, ComScore, kaip metriką, kad suskirstytume persodintus inkstus į pacientus, kuriems buvo ūminis atmetimas arba jo nėra, ir nustatėme AR slenkstį. Šio tyrimo rezultatai rodo, kad uCRM tyrimo galia ne tik identifikuoja pacientus, sergančius AR, bet ir kiekybiškai įvertina alotransplantato sužalojimo laipsnį, nes balas didėja nuo žemų verčių STA pacientams iki vidutinių verčių pacientams, sergantiems bAR, ir didelės vertės AR sergantiems pacientams, kaip rodo tubulito ir intersticinio uždegimo histologijos balai. Manome, kad uCRM balas gali būti naudingas stebint transplantaciją ir gali būti naudojamas kaip papildomas arba nukreipiamasis biopsijų testas. Pacientas, kurio uCRM balas yra žemas, gali išvengti nereikalingų protokolo biopsijų, o pacientui, kurio uCRM balas yra aukštas, gali prireikti nuoseklaus stebėjimo arba biopsijos, kad būtų galima įvertinti transplantato būklę.

Pripažįstame keletą šio tyrimo apribojimų, įskaitant (i) ribotą tyrimo imties dydį, (ii) kitų transplantacijos sužalojimo fenotipų, tokių kaip lėtinis alotransplantacijos sužalojimas ar vaistų toksiškumas, nebuvimą ir (i) uCRM balo įvertinimo išilginiu požiūriu trūkumą. imtis didesnės kohortos dydžio. Šios daug žadančios išvados rodo, kad norint patvirtinti ir visiškai įvertinti galimą uCRM balo naudingumą klinikinėje aplinkoje, reikia atlikti papildomus, perspektyvius tyrimus. Apibendrinant, pristatome neinvazinį šlapimo pagrindu sukurtą biomarkerį, sukurtą iš bendro atmetimo modulio, sudaryto iš 11 genų, kurie gali nustatyti transplantacijos pažeidimą ir atmetimą pacientams, kuriems persodintas inkstas.

CSITANCHE POVEIKIS: PAGERINTI ATMINTĮ

Nuorodos

1 Wolfe RA, Ashby VB, Milford EL, Ojo AO, Ettenger RE, Agodoa LY ir kt. Visų dializuojamų pacientų, transplantacijos laukiančių dializuojamų pacientų ir pirmosios lavono transplantacijos recipientų mirtingumo palyginimas. Naujosios Anglijos medicinos žurnalas. 1999 m.; 341(23):1725–30.

2. Laupacis A, Keown P, Pus N, Krueger H, Ferguson B, Wong C ir kt. Inksto transplantacijos gyvenimo kokybės ir naudingumo tyrimas. Inkstai tarptautiniai. 1996 m.; 50(1):235–42. PMID: 8807593.

3. Lodhi SA, Lamb KE, Meier-Kriesche HU. Ilgalaikių rezultatų gerinimas pacientams, kuriems atlikta transplantacija: ilgalaikių specifinių ligų ir daugiadalykių tyrimų pagrindas Amerikos transplantacijos žurnalas: oficialus Amerikos transplantacijos draugijos ir Amerikos transplantacijos chirurgų draugijos žurnalas. 2011 m.; 11(10):2264–5.

4. Naesens M, Khatri P, Li L, Sigdel TK, Vitalone MJ, Chen R ir kt. Progresuojantis histologinis inkstų transplantatų pažeidimas yra susijęs su įgimto ir adaptyvaus imuniteto genų ekspresija. Inkstai tarptautiniai. 2011 m.; 80(12):1364–76.

5. Sigdel TK, Li L, Tran TQ, Khatri P, Naesens M, Sansanwal P ir kt. Ne HLA antikūnai prieš imunogeninius epitopus prognozuoja lėtinio inkstų transplantato pažeidimo raidą. Amerikos nefrologijos draugijos žurnalas: JASN. 2012 m.; 23(4):750–63.

6. Pape L, Offner G, Ehrich JH, de Boer J, Persijn GG. Inkstų transplantato funkcija suderintose to paties donoro vaikų ir suaugusiųjų recipientų porose. Transplantacija. 2004 m.; 77(8):1191–4. PMID: 15114083.

7. Provoost AP, Wolff ED, de Keijzer MH, Molenaar JC. Recipiento dydžio įtaka inkstų funkcijai po inksto transplantacijos. Eksperimentinis ir klinikinis tyrimas. Vaikų chirurgijos žurnalas. 1984 m.; 19(1):63–7.

8. Moreso F, Lopez M, Vallejos A, Giordani C, Riera L, Fulladosa X ir kt. Serijinės protokolo biopsijos, skirtos kiekybiškai įvertinti lėtinės transplantacijos nefropatijos progresavimą stabiliuose inkstų allograftuose. Amerikos transplantacijos žurnalas: oficialus Amerikos transplantacijos draugijos ir Amerikos transplantacijos chirurgų draugijos žurnalas. 2001 m.; 1(1):82–8. PMID: 12095044.

9. Davis ID, Oehlenschlager W, O'Riordan MA, Avner ED. Vaikų inkstų biopsija: ar ši procedūra turėtų būti atliekama ambulatoriškai? Vaikų nefrologija. 1998 m.; 12(2):96–100. PMID: 9543363.

10. Roedder S, Sigdel T, Salomonis N, Hsieh S, Dai H, Bastard O ir kt. kSORT tyrimas, skirtas nustatyti pacientams, kuriems persodintas inkstas, kuriems yra didelė ūminio atmetimo rizika: daugiacentrio AART tyrimo rezultatai. PLoS medicina. 2014 m.; 11(11):e1001759.

11. Sarwal M, Chua MS, Kambham N, Hsieh SC, Satterwhite T, Masek M ir kt. Ūminio inkstų transplantato atmetimo molekulinis heterogeniškumas, nustatytas atliekant DNR mikrogardelių profiliavimą. Naujosios Anglijos medicinos žurnalas. 2003 m.; 349(2):125–38.

12. Sigdel TK, Sarwal MM. Naujausi pažanga, susijusi su biomarkerių atradimu kietųjų organų transplantacijos naudojant proteomiksus. Proteomikos ekspertų apžvalga. 2011 m.; 8(6):705–15. https://doi.org/10.1586/epr.11.66 PMID: 22087656.

13. Suthanthiran M, Schwartz JE, Ding R, Abecassis M, Dadhania D, Samstein B ir kt. Šlapimo ląstelių mRNR profilis ir ūminis ląstelių atmetimas inkstų allografuose. Naujosios Anglijos medicinos žurnalas. 2013 m.; 369 (1):20–31.

14. Sigdel TK, Gao Y, He J, Wang A, Nicora CD, Fillmore TL ir kt. Žmogaus šlapimo proteomo kasyba, siekiant stebėti inkstų persodinimo pažeidimą. Inkstai tarptautiniai. 2016 m.; 89(6):1244–52. https://doi.org/10.1016/j. megzti.2015.12.049 PMID: 27165815.

15. Sigdel TK, Ng YW, Lee S, Nicora CD, Qian WJ, Smith RD ir kt. Perturbacijos šlapimo egzosomoje transplantato atmetimo atveju. Sienos medicinoje. 2014 m.; 1:57.

16. Yang JY, Sarwal MM. Transplantacijos genetika ir genomika. Gamtos apžvalgos Genetika. 2017 m.; 18(5):309–26.

17. Loupy A, Lefaucheur C, Vernerey D, Chang J, Hidalgo LG, Beuscart T ir kt. Molekulinio mikroskopo strategija, skirta pagerinti ankstyvo antikūnų sukelto inkstų transplantato atmetimo rizikos stratifikaciją. Amerikos nefrologijos draugijos žurnalas: JASN. 2014 m.; 25(10):2267–77. Epub 2014-04-05.

18. Sigdel TK, Vitalone MJ, Tran TQ, Dai H, Hsieh SC, Salvatierra O ir kt. Greitas neinvazinis tyrimas inkstų persodinimo pažeidimui nustatyti. Transplantacija. 2013 m.; 96(1):97–101. PMID: 23756769.

19. Hauser IA, Spiegler S, Kiss E, Gauer S, Sichler O, Scheuermann EH ir kt. Ūminio inkstų transplantato atmetimo, kurį sukelia IFN-gama (MIG) sukeltas šlapimo monokinas, prognozė. Amerikos nefrologijos draugijos žurnalas: JASN. 2005 m.; 16(6):1849–58.

20. Hu H, Kwun J, Aizenstein BD, Knechtle SJ. Neinvazinis ūminių ir lėtinių sužalojimų aptikimas po žmogaus inksto transplantacijos, padidinus daugybę citokinų / chemokinų šlapime. Transplantacija. 2009 m.; 87(12):1814–20. PMID: 19543058.

21. Jacksonas JA, Kim EJ, Begley B, Cheeseman J, Harden T, Perez SD ir kt. Šlapimo chemokinai CXCL9 ir CXCL10 yra neinvaziniai inkstų transplantato atmetimo ir BK virusinės infekcijos žymenys. Amerikos transplantacijos žurnalas: oficialus Amerikos transplantacijos draugijos ir Amerikos transplantacijos chirurgų draugijos žurnalas. 2011 m.; 11(10):2228–34.

22. Schaub S, Nickerson P, Rush D, Mayr M, Hess C, Golian M ir kt. Šlapimo CXCL9 ir CXCL10 lygiai koreliuoja su subklinikinio tubulito mastu. Amerikos transplantacijos žurnalas: oficialus Amerikos transplantacijos draugijos ir Amerikos transplantacijos chirurgų draugijos žurnalas. 2009 m.; 9 (6): 1347–53.

23. Segerer S, Cui Y, Eitner F, Goodpaster T, Hudkins KL, Mack M ir kt. Chemokinų ir chemokinų receptorių ekspresija žmogaus inkstų transplantacijos atmetimo metu. Amerikos inkstų ligų žurnalas: oficialus Nacionalinio inkstų fondo žurnalas. 2001 m.; 37(3):518–31. PMID: 11228176.

24. Tatapudi RR, Muthukumar T, Dadhania D, Ding R, Li B, Sharma VK ir kt. Neinvazinis inkstų transplantato uždegimo nustatymas, matuojant IP-10 ir CXCR3 mRNR šlapime. Inkstai tarptautiniai. 2004 m.; 65(6):2390–7.

25. Menon MC, Murphy B, Heeger PS. Biomarkerių perkėlimas link klinikinio įgyvendinimo inkstų transplantacijoje. JASN. 2017 m.

26. Naesens M, Anglicheau D. Tikslioji transplantacijos medicina: biomarkeriai gelbėjimui. JASN. 2017 m.

27. Khatri P, Roedder S, Kimura N, De Visser K, Morgan AA, Gong Y ir kt. Bendras atmetimo modulis (CRM), skirtas ūminiam kelių organų atmetimui, nustato naujus organų transplantacijos gydymo būdus. Eksperimentinės medicinos žurnalas. 2013 m.; 210(11):2205–21.

28. Sigdel TK, Bestard O, Tran TQ, Hsieh SC, Roedder S, Damm I ir kt. Skaičiavimo genų ekspresijos balas, skirtas nuspėti imuninės sistemos pažeidimą inkstų transplantatuose. PloS vienas. 2015 m.; 10(9):e0138133.

29. Paslaptys A, Yang JYC, Vanaudenaerde BM, Sigdel TK, Liberto JM, Damm I ir kt. Bendras atmetimo modulis lėtiniam atmetimui po plaučių transplantacijos. PloS vienas. 2018 m.; 13(10):e0205107. Epub 2018-10-06.

30. Sis B, Mengel M, Haas M, Colvin RB, Halloran PF, Racusen LC ir kt. Banff '09 susitikimo ataskaita: antikūnų sukeltas transplantato pablogėjimas ir Banff darbo grupių įgyvendinimas. Amerikos transplantacijos žurnalas: oficialus Amerikos transplantacijos draugijos ir Amerikos transplantacijos chirurgų draugijos žurnalas. 2010 m.; 10(3):464–71.

31. Solez K, Colvin RB, Racusen LC, Haas M, Sis B, Mengel M ir kt. Banff 07 inkstų transplantato patologijos klasifikacija: atnaujinimai ir ateities kryptys. Amerikos transplantacijos žurnalas: oficialus Amerikos transplantacijos draugijos ir Amerikos transplantacijos chirurgų draugijos žurnalas. 2008 m.; 8 (4): 753–60.

32. Sarwal MM, Ettenger RB, Dharnidharka V, Benfield M, Mathias R, Portale A ir kt. Visiškas steroidų vengimas yra veiksmingas ir saugus vaikams, kuriems persodinti inkstai: daugiacentris atsitiktinių imčių tyrimas su trejų metų stebėjimu. Amerikos transplantacijos žurnalas: oficialus Amerikos transplantacijos draugijos ir Amerikos transplantacijos chirurgų draugijos žurnalas. 2012 m.; 12(10):2719–29.

33. Racusen LC. Banff schema ir diferencinė allografto disfunkcijos diagnozė. Transplantacijos procedūra. 2004 m.; 36(3):753–4.

34. Jianghua C, Wenqing X, Huiping W, Juan J, Jianyong W, Qiang H. C4d kaip reikšmingas humoralinio atmetimo veiksnys inkstų transplantatuose. Klinikinė transplantacija. 2005 m.; 19(6):785–91.

35. Crespo M, Pascual M, Tolkoff-Rubin N, Mauiyyedi S, Collins AB, Fitzpatrick D ir kt. Ūminis humoralinis atmetimas inksto transplantato recipientams: I. Dažnis, serologija ir klinikinės charakteristikos. Transplantacija. 2001 m.; 71(5):652–8. PMID: 11292296.

36. Keslar KS, Lin M, Zmijewska AA, Sigdel TK, Tran TQ, Ma L ir kt. Daugiacentris standartizuoto neinvazinio genų ekspresijos profiliavimo protokolo įvertinimas. AJT. 2013 m.

37. Montojo J, Zuberi K, Rodriguez H, Bader GD, Morris Q. GeneMANIA: greitas genų tinklo konstravimas ir funkcijų numatymas Cytoscape. F1000Research. 2014 m.; 3:153.

38. Der SD, Zhou A, Williams BR, Silverman RH. Alfa, beta arba gama interferono skirtingai reguliuojamų genų identifikavimas naudojant oligonukleotidų matricas. Jungtinių Amerikos Valstijų nacionalinės mokslų akademijos darbai. 1998 m.; 95(26):15623–8.

39. Hartono C, Muthukumar T, Suthanthiran M. Neinvazinė ūminio inkstų transplantatų atmetimo diagnozė. Dabartinė nuomonė apie organų transplantaciją. 2010; 15(1):35–41. https://doi.org/10.1097/MOT. 0b013e3283342728 PMID: 19935064.

40. Lazzeri E, Rotondi M, Mazzinghi B, Lasagni L, Buonamano A, Rosati A ir kt. Didelė CXCL10 ekspresija atmestuose inkstuose ir nuspėjamas serumo prieš transplantaciją CXCL10 vaidmuo ūminiam atmetimui ir lėtinei alotransplantato nefropatijai. Transplantacija. 2005 m.; 79(9):1215–20. PMID: 15880073.

41. Matz M, Beyer J, Wunsch D, Mashreghi MF, Seiler M, Pratschke J ir kt. Ankstyvoji šlapimo IP-10 ekspresija po transplantacijos po inksto transplantacijos numato trumpalaikę ir ilgalaikę transplantato funkciją. Inkstai tarptautiniai. 2006 m.; 69(9):1683–90.

42. Simon T, Opelz G, Wiesel M, Ott RC, Susal C. Serijiniai periferinio kraujo perforino ir granzimo B geno ekspresijos matavimai, skirti prognozuoti ūminį inkstų transplantato recipientų atmetimą. Amerikos transplantacijos žurnalas: oficialus Amerikos transplantacijos draugijos ir Amerikos transplantacijos chirurgų draugijos žurnalas. 2003 m.; 3(9):1121–7. PMID: 12919092.

43. Yannaraki M, Rebibou JM, Ducloux D, Saas P, Duperrier A, Felix S ir kt. Šlapimo citotoksiniai molekuliniai žymenys, skirti neinvazinei diagnozei ūminiam inkstų transplantacijos atmetimui. Transplant international: oficialus Europos organų transplantacijos draugijos žurnalas. 2006 m.; 19(9):759–68. https://doi.org/10. 1111/j.{8}}.2006.00351.x PMID: 16918537.

44. Yang JYC, Verleden SE, Zarinsefat A, Vanaudenaerde BM, Vos R, Verleden GM ir kt. DNR be ląstelių ir CXCL10, gautos iš bronchoalveolinio plovimo, prognozuoja plaučių transplantacijos išgyvenimą. J Clin Med. 2019 m.; 8 straipsnio 2 dalį. Epub 2019-02-20.

45. Faddoul G, Nadkarni GN, Bridges ND, Goebel J, Hricik DE, Formica R ir kt. Biomarkerių analizė per pirmuosius 2 metus po transplantacijos ir 5-metų inkstų transplantacijos rezultatai: klinikinių organų transplantacijos tyrimų rezultatai{3}}. Transplantacija. 2018 m.; 102(4):673–80. Epub 2017/12/01.

46. ​​Hricik DE, Nickerson P, Formica RN, Poggio ED, Rush D, Newell KA ir kt. Daugiacentris šlapimo CXCL9 patvirtinimas kaip rizikingas biomarkeris inkstų transplantacijos pažeidimui. Amerikos transplantacijos žurnalas: oficialus Amerikos transplantacijos draugijos ir Amerikos transplantacijos chirurgų draugijos žurnalas. 2013 m.; 13(10):2634–44. Epub 2013-08-24.

47. Kotsch K, Kunert K, Merk V, Reutzel-Selke A, Pascher A, Fritzsche F ir kt. Nauji žymenys nulinės valandos inkstų biopsijose rodo transplantato kokybę ir klinikinį rezultatą. Transplantacija. 2010 m.; 90(9):958–65. Epub 2010-09-23. PMID: 20859252.