Akteozidas: antioksidacinės ir antihipertenzinės veiklos tyrimai

Kontaktas:joanna.jia@wecistanche.com

Akteozido ir jo analogų antioksidacinė ir antihipertenzinė veikla

Chao-Hsiang CHEN1,2, Yin-Shiou LIN3, Mei-Yin CHIEN2,4, Wen-Chi HOU5,6,* ir Miao-Lin HU1,*

Abstraktus. Akteozidas(Act), feniletanoido glikozidas, yra aktyvus junginys keliuose augaluose ir tradiciniuose vaistažolių vaistuose. Veikti kartu su jo struktūriniu izomeru,izoakteozidas(Isoact) ir analogas, 6-O-Acety-lakteozidas (6-O-acetillaktas), buvo naudojami tyrime tiriantantioksidantas, antiangiotenziną konvertuojantis fermentas (AKF) ir hemolizę slopinantis aktyvumasin vitroir antihipertenzinis aktyvumas prieš spontaniškai hipertenzija sergančias žiurkes (SHR)in vivo. Mes parodėme, kad Act, Isoact ir 6-O-acetilaktas veiksmingai pašalino 1,1-difenil-2-pikrilhidrazilo radikalus (su IC50 atitinkamai 11,4, 9,48 ir 9,55 μM) ir superoksido radikalus (su IC50 686,5, , ir atitinkamai 39,1 μM). Kaip Isoact ir 6-O-acetillaktas turėjo panašią radikalų sunaikinimo veiklą, tik Act ir Isoact buvo naudojami tolesniems tyrimams. Tiek Act, tiek Isoact slopino ksantino oksidazės aktyvumą, kai IC50 buvo atitinkamai 53,3 ir 62,2 μM. Tiek Act, tiek Isoact taip pat reikšmingai slopino AKF aktyvumą ir 2,2'-azo-bis(2-amidinopropano)dihidrochlorido sukeltą hemolizę, tačiau Act poveikis buvo stipresnis nei Isoact. Tada per burną SHR skyrėme vieną Act arba Isoact dozę (10 mg / kg kūno svorio) ir išmatavome sistolinio kraujospūdžio (SBP) ir diastolinio kraujospūdžio (DBP) pokyčius per 24 valandas. Act, bet ne Isoact, parodė antihipertenzinį aktyvumą mažinant SBP ir DBP. Rezultatai rodo, kad įstatymas gali būti naudingas kaip sveiko maisto produktasantioksidantasapsauga ir kraujospūdžio reguliavimas.

Raktiniai žodžiai: Akteozidas; Antihipertenzinis aktyvumas; Angiotenziną konvertuojantis fermentas (AKF); Antioksidantas; Hemolizė.

Akteozidas cistanche

ĮVADAS

Akteozidas(Act), feniletanoido glikozidas, kurio sudėtyje yra kavos rūgšties, 3',4'-dihidroksifeniletanolio, gliukozės ir ramnozės, pirmą kartą buvo išskirtas išSyringa Vul- garis(Birkofer ir kt., 1968) ir kartu su struktūriniu izomeruizoakteozidas(Isoact) ir vedinys iš6-O- acetillakteozidas(6-O-acetilakt), buvo rasta daugelyje augalų ir vaistažolių, pvzLigstrum purpurascens(Wong ir kt., 2001),Callicarpa dichotoma(Koo ir kt., 2006; Lee ir kt., 2006),Cistanche deserticolairBoschniakia rossica(Wu ir kt., 2006),Scrophularia ningpoenis(Huang ir kt., 2008),Rehmannia glutinosa(Li ir kt., 2006). Buvo pranešta, kad šis veiksmas turi antimetastazinį aktyvumą B16 melanomos ląstelėse C57BL/6 pelių modeliuose (Ohno ir kt., 2002). Act, Isoact ir 6-ONeseniai buvo įrodyta, kad acetillaktas slopina IL-1 -aktyvuotą tarpląstelinio CAM-1 ir kraujagyslių CAM-1 ekspresiją žmogaus bambos venų endotelio ląstelėse (Chen ir kt., 2009). Act taip pat apsaugo galvijų plaučių endotelio ląsteles nuo hidroksilo radikalų sukelto oksidacinio streso (Chiou ir kt., 2004) ir slopina azoto oksido bei TNF gamybą blokuodamas AP-1 aktyvaciją lipopolisacharidų stimuliuojamuose makrofaguose (Rao ir kt. , 2009). Act ir Isoact demonstruoja neuroprotekcinę veikląin vitro(Koo ir kt., 2005). Koo ir kt. (2006) pranešė, kad Act ir jo aglikonai veiksmingai pašalina 1,1-difenil-2-pikrilhidrazilą (DPPH) ir azoto oksidą.in vitro. Tačiau keliuose tyrimuose buvo lyginamosin vitro antioksidantasAct ir su juo struktūriškai susijusių junginių, tokių kaip Isoact ir 6-, veiklaO- acetillaktas.

Hipertenzijai gydyti buvo naudojamos kelios farmakologinių medžiagų klasės (Mark ir Davis, 2000). Viena antihipertenzinių vaistų klasė, žinoma kaip angiotenziną I konvertuojančio fermento (AKF) inhibitoriai (ty peptidazės inhibitoriai), retai sukelia nepageidaujamą šalutinį poveikį ir yra tinkamiausia antihipertenzinių vaistų klasė.

vaistai, gydant pacientus, sergančius gretutinėmis antrinėmis ligomis (Fotherby ir Panayiotou, 1999). AKF (peptidildipeptido hidrolazė EC 3.4.15.1) yra dipeptidą atpalaiduojanti Zn turinti egzopeptidazė, kuri pašalina dipeptidą iš angiotenzino I C galo, kad susidarytų angiotenzinas II – labai hipertenzinis junginys. Keletasantioksidantaspeptidai (sumažintas glutationas ir su karnozinu susiję peptidai) pasižymi AKF slopinamuoju aktyvumu (Hou ir kt., 2003). Pirmasis kliniškai prieinamas geriamasis AKF inhibitorius kaptoprilis buvo sukurtas hipertenzijai gydyti (Ondetti ir kt., 1977; Borer, 2007). Buvo pranešta, kad šis veiksmas daro azoto oksido sukeltą atpalaiduojantį poveikį SD žiurkių endotelio nepažeistiems aortos žiedams (Wong ir kt., 2001). Ahmadas ir kt. (1995) pranešė, kad Act sukelia nuo dozės priklausomą sistolinio kraujospūdžio (SBP) ir diastolinio kraujospūdžio (DBP) sumažėjimą po jo suleidimo į veną normaliai anestezuotoms Wistar žiurkėms. Tačiau neaišku, ar per burną vartojamas Act ir (arba) su juo susiję izomerai yra antihipertenziniai.in vivo. Šiame tyrime mes ištyrėmein vitro antioksidantaspajėgumą ir AKF slopinamąjį aktyvumą, taip patin vivoantihipertenzinis Act, Isoact ir (arba) 6-O- acetilakt, naudojant spontaniškai hipertenzija sergančias žiurkes (SHR). Tikimasi, kad šie tyrimai suteiks naudingų duomenų kuriant „Act“ kaip sveiko maisto produktą.

Medžiagos ir metodai

Medžiagos

2,2'-azo-bis(2-amidinopropan)dihidrochloridas (AAPH), AKF (I vienetas, triušio plaučiai), butilintas hidroksitoluenas (BHT), DPPH, N-(3-[{{7) }}furil]akriloil)-Phe-Gly-Gly (FAPGG), NADH, fenazino metosulfatas (PMS), ksantinas ir ksantino oksidazė buvo įsigyti iš Sigma Chemical Co. (St. Louis, MO, JAV). Kaptoprilis buvo nupirktas iš Calbiochem Co. (CA, JAV). Act, Isoact ir 6-O-acetillaktas (1 pav.) buvo įsigytas iš Equal Corp. (grynumas > 98 proc., Šanchajus, Kinija). Kitos cheminės medžiagos ir reagentai buvo iš Sigma Chemical Co. (St. Louis, MO, JAV).

Valymas veikla apie veikti, Isoact, ir 6-O- acetillaktas prieš dPPH radikalai pateikė spektrofotometrija

Tūris (0,3 ml) Act, Isoact ir 6-O-acetilakto (galutinė koncentracija buvo 1,56–50 µM), BHT ir askorbo rūgšties (galutinė koncentracija buvo 2,4–60 µM) buvo pridėta į 0,1 ml 1 M Tris-HCl buferio (pH 7,9). ) ir tada sumaišoma su 0,6 ml 100 µM DPPH metanolyje iki galutinės koncentracijos 60 µM 20 min. kambario temperatūroje apsaugotoje nuo šviesos (Liu ir kt., 2004; Lin ir kt., 2008). Išmatuotas absorbcijos sumažėjimas ties 517 nm ir išreikštas kaip ΔA517 nm. Dejonizuotas vanduo buvo naudojamas kaip tuščias eksperimentas. DPPH radikalo pašalinimo aktyvumas (procentais) buvo apskaičiuotas pagal lygtį: (ΔA517tuščias – ΔA517 mėginys) ÷ ΔA517tuščias × 100. IC50 reiškia pusinio slopinimo koncentraciją.

Slopinantis veikla apie aktas ir Isoact prieš ksantinas oksidazė

Ksantino oksidazės aktyvumas buvo matuojamas nustatant šlapimo rūgšties susidarymą esant 295 nm, naudojant ksantiną kaip substratą (Kalckar, 1947). Skirtingi Act ir Isoact kiekiai (galutinės koncentracijos buvo 25, 50 ir 75 µM) buvo iš anksto sumaišyti su 50 μL 1 mU/mL ksantino oksidazės 4 laipsnių temperatūroje 1 valandą, o tada su 300 μL 1 mM ksantino. buvo pridėtos. Absorbcijos pokyčiai esant 295 nm buvo užregistruoti per 2 minutes ir išreikšti kaip ΔA295 nm/min. Ksantino oksidazę slopinantis aktyvumas (procentais) buvo apskaičiuotas taip: (ΔA295 nm/min juodas – ΔA295 nm/min mėginys) ÷ ΔA295 nm/min juodas × 100. Vietoj mėginio tirpalo kaip tuščiasis eksperimentas buvo naudojamas dejonizuotas vanduo. IC50 reiškia pusės slopinimo koncentraciją.

Valymas veikla apie veikti, Isoact, ir 6-O- acetillaktas prieš superoksidas radikalai pateikė spektrofotometrija

Superoksido radikalą generavo PMS-NA-DH sistema (Liu ir kt., 2004; Lin ir kt., 2008). Visi 0,2 ml mėginiai, kuriuose yra skirtingi Act, Isoact ir 6- kiekiaiO-acetilato (galutinė koncentracija buvo 15,6, 31,3, 62,5, 125 ir 250 µM) iš eilės buvo pridėta į 0,2 ml 630 µM nitromėlynojo tetrazolio, 0,2 ml 33 µM PMS ir 0,2 ml 156 µM NADH 100 mM fosfatiniame buferyje (pH 7,4). Vietoj mėginio tirpalo kaip tuščiasis eksperimentas buvo naudojamas dejonizuotas vanduo. Askorbo rūgštis (galutinė koncentracija buvo 6, 9, 12 ir 24 µM) buvo naudojama kaip teigiama kontrolė. Absorbcijos pokyčiai esant 560 nm buvo užregistruoti per 2 minutes ir išreikšti ΔA560 nm/min. Superoksido radikalų šalinimo aktyvumas (procentais ) buvo apskaičiuotas taip: (ΔA560 nm/min juodas – ΔA560 nm/min mėginys) ÷ ΔA560 nm/min juodas × 100. IC50 reiškia pusės slopinimo koncentraciją.

ryžtas apie AcE slopinantis veikla apie aktas ir Isoact pateikė HPLC

Kiekvienas 50 µL Act (0.2, 0.4, 0.5 ir 2.0 µmol) ir Isoact ({{ 11}}.1, 0.2, 0.5, 1.0 ir 2.0 µmol) buvo iš anksto sumaišyti su 15 µL 1 U/mL AKF 5 min., o po to buvo pridėta 200 µl 0,5 mM FAPGG ir 10 min reagavo kambario temperatūroje (Anzenbacherova ir kt., 2001). Reakcijai sustabdyti buvo pridėta 800 µl metanolio. Tuščias eksperimentas buvo tik FAPGG. Kontroliniame eksperimente AKF reagavo su FAPGG tokiomis pačiomis sąlygomis. FAPGG ir FAP chromatografinis atskyrimas buvo atliktas naudojant Hitachi (Japonija) chromatografinę sistemą su 10 µL kilpa. HPLC analizė buvo atlikta naudojant Biosil Aqua-ODS-W 5 µm kolonėlę (Biotic Chemical Co., Ltd., Taivanas, 250 × 4,6 mm id), dalelių dydis 5 µm. Reagavęs mišinys buvo izokratiškai atskirtas mobilia faze, susidedančia iš 0,02 M nonilamino (pH sureguliuotas iki 2,4 fosforo rūgštimi) ir acetonitrilo santykiu 67,5:32,5 (V/V) (Anzenbacherova ir kt., 2001). Srauto greitis buvo 1 ml/min.; injekcijos tūris buvo 10 µL; detektorius buvo nustatytas ties 345 nm. Act ir Isoact AKF slopinimas (procentais ) buvo apskaičiuotas taip: [(FAPGGblanko plotas – FAPGGkontrolės plotas) – (FAPGGblanko plotas – FAPGG mėginio plotas) ÷ (FAPGGblanko plotas – FAPGGcontrol plotas) × 100.

Slopinantis veikla apie aktas ir Isoact prieš AAPH tarpininkauja hemolizė

Žiurkių raudonųjų kraujo kūnelių (RBC) laisvųjų radikalų grandinės oksidacija per AAPH sukeltą hemolizę (Miki ir kt., 1987). Žiurkių kraujas buvo dedamas į heparinizuotus mėgintuvėlius ir centrifuguojamas 1000 ×g10 min. Tris kartus išplauti 0,15 M NaCl, supakuoti RBC buvo gauti centrifuguojant 1000 ×g10 min. Skirtingi Act ir Isoact kiekiai (galutinės koncentracijos buvo 2, 5 ir 10 µM) buvo sumaišyti su 25 μL 20 procentų eritrocitų suspensijos (V/V, 10 mM PBS) ir 25 μL 500 mM AAPH tirpalo 37 laipsnių temperatūroje 0 , 1, 1,5, 2, 2,5, 3 ir 3,5 val. švelniai purtant. Kiekvienas mišinys buvo centrifuguotas 1000 ×g10 min., o supernatantas matuojamas esant 536 nm. Dejonizuotas vanduo buvo naudojamas vietoj AAPH tirpalo arba mėginio tirpalo, atitinkamai, kaip tuščioji grupė arba kaip kontrolinė grupė. „Act“ ir „Isoact“ hemolizės slopinimas (procentais) 3 val. arba 3,5 val. buvo apskaičiuotas taip: (ΔA536 nmkontrolė – ΔA536 nmsample) ÷ ΔA536 nmkontrolė × 100.

Antihipertenzinis efektai apie aktas ir Isoact įjungta SHr

Act, Isoact ir kaptoprilio, vartojamo per šėrimo vamzdelį (20 × 80 mm), poveikis sumažėjusiam SBP ir sumažėjusiam DBP buvo nustatytas pagal ankstesnių pranešimų metodą (Lin). ir kt., 2006; Lin ir kt., 2008; Han ir kt., 2011). Visos eksperimentinės su gyvūnais procedūros buvo vykdomos pagal paskelbtas gaires (Nacionalinė mokslo taryba, 1994). SHR patinai (8 savaičių amžiaus, Nacionalinis laboratorinių gyvūnų centras, Taipėjus) buvo laikomi atskirai plieniniuose narvuose, laikomuose 24 laipsnių temperatūroje su 12-h šviesos-tamsos ciklu ir turėjo laisvą prieigą prie standartinio pelės/žiurkės maudymosi ( Prolab RMH2500, 5P14 dieta, PMI Nutrition International, Brentwood, MO) ir vandens. SHR buvo atsitiktinai suskirstyti į kontrolinius ir mėginius, skirtus SBP ir DBP nustatyti (šešios žiurkės grupėje). Atliekant trumpalaikį antihipertenzinį eksperimentą, vieną kartą buvo sušvirkšta 0,5 ml 10 mg Act arba Isoact/kg SHR arba 5 mg kaptoprilio/kg SHR, o uodegos kraujospūdis buvo matuojamas 2, 4, 6 ir 24 h po vienkartinio geriamojo vartojimo. Tuščiam eksperimentui buvo naudojamas 0,5 ml distiliuoto vandens. Netiesioginis kraujospūdžio matuoklis (BP-98A, Softron Co. Ltd. Tokyo, Japonija) buvo naudojamas SBP ir DBP matuoti keturis kartus kiekvieno nustatymo metu kiekvienam gydymui.

duomenis analizė

Reikšmės pateikiamos kaip vidurkiai ± SD ir analizuojamos naudojant vienpusę ANOVA, o po to atliekamas post hoc Tukey testas daugkartiniam vidurkių palyginimui. Studentait-testas buvo atliktas, kai buvo lyginamos tik dvi duomenų grupės (pvz., tarp Act ir Isoact toje pačioje koncentracijoje). P reikšmė < 0,05="" laikoma="" statistiškai="" reikšminga.="" statistinė="" analizė="" atlikta="" naudojant="" spss="" for="" windows="" 10="" versiją="" (spss,="" inc.,="" chicago,="" il,="">

akteozidocistanche, kad pagerintų atmintį

Rezultatai

Valymas veikla apie PPH ir superoksidas radikalai

Act, Isoact ir 6-O-acetillaktas pasižymėjo nuo dozės priklausomu DPPH šalinimo aktyvumu, kai pH 7,9 (2 pav.). Act, Isoact ir 6- IC50 vertės buvo atitinkamai 11,4, 9,48 ir 9,55 µM.O- acetillaktas. Askorbo rūgšties ir BHT teigiamų kontrolinių mėginių IC50 reikšmės buvo atitinkamai 13,1 ir 18,5 µM.

Slopinimas apie ksantinas oksidazė veikla

Nustatyta, kad Act ir Isoact slopina nuo dozės priklausomą ksantino oksidazę (3 pav.). Apskaičiuota, kad Act ir Isoact IC50 yra atitinkamai 53,3 ir 62,2 µM.

Slopinimas apie superoksidas dismutazė veikla

Kadangi ir Act, ir Isoact slopino ksantino oksidazės aktyvumą, superoksido radikalams generuoti panaudojome PMS-NADH sistemą (Liu ir kt., 2004; Lin ir kt., 2008). veikti,

Isoact ir 6-O-acetillaktas pasižymėjo nuo dozės priklausomu superoksido radikalų šalinimo aktyvumu (4 pav.). Act, Isoact ir 6- IC50 vertės buvo atitinkamai 66,0, 38,5 ir 39,1 µM.O- acetillaktas. Teigiamos askorbo rūgšties kontrolės IC50 reikšmės buvo 9,0 µM. Iš 2 ir 4 paveikslų rezultatų buvo aišku, kad Isoact ir 6-O-acetilatas turėjo panašų radikalų šalinimo aktyvumą prieš DPPH ir superoksido radikalus, todėl tolesniems biologinio aktyvumo patikrinimams buvo atrinkti tik Act ir Isoact.

AcE slopinantis veikla apie aktas ir Isoact

Preliminariame bandyme mes nustatėme, kad Act ir Isoact trukdė AKF substrato FAPGG ir jo hidrolizuoto produkto FAP absorbcijai esant 345 nm, naudojamiems nuolatiniam spektrofotometriniam tyrimui (Holmquist ir kt., 1979). Todėl atskyrimas kartu su Act arba Isoact ir FAPGG nustatymu HPLC buvo naudojamas AKF slopinančiai veiklai stebėti. 5A–5D paveikslai yra tipinės HPLC chromatogramos iš 10 µl tuščiojo bandymo reakcijos mišinių (tik FAPGG, 5A pav.); kontrolinis testas (AKF pakartotinai veikė su FAPGG, kad susidarytų FAP, 5B pav.); 0.5 µmol Acto (312,5 µg), ACE ir FAPGG (5C pav.); ir 0,5 µmolio Isoact (312,5 µg), ACE ir FAPGG (5D pav.). FAPGG plotas 5B paveiksle buvo mažiausias, o 5A paveiksle - didžiausias iš keturių tipinių HPLC chromatogramų. FAPGG sritys 5C ir 5D paveiksluose priklauso nuo skirtingų Act ir Isoact koncentracijų AKF slopinimo. Apskaičiuoti Act ir Isoact AKF slopinimai parodyti 5E paveiksle. Šis aktas parodė didesnį AKF slopinamąjį aktyvumą nei Isoact, o pirmojo IC50 buvo apskaičiuotas kaip 472 µM pagal plotą HPLC chromatogramose.

Slopinantis veikla apie aktas ir Isoact prieš AAPH tarpininkauja hemolizė

Act ir Isoact slopinamasis aktyvumas prieš AAPH sukeltą hemolizę esant 2, 5 ir 10 µM koncentracijoms buvo įvertintas per 3,5 val. (Miki ir kt., 1987). 6A paveikslo rezultatai rodo, kad hemolizė žiurkės eritrocituose smarkiai padidėjo (išreiškiama kaip ΔA536 nm) po 3-h arba 35-h reakcijos, dalyvaujant AAPH radikalams (kaip kontrolinės grupės, baltas ciklo simbolis). ). Per 3{13}}h reakciją, nesant AAPH radikalų, hemolizė buvo nedidelė arba jos visai nebuvo (kaip tuščios grupės, juodas ciklo simbolis). Todėl Act ir Isoact hemolizės slopinimas po 3 val. arba po 3,5 val. buvo apskaičiuotas taip: (ΔA536 nmkontrolė − ΔA536 nmsample) ÷ ΔA536 nmkontrolė × 100. 6B pav.

rodo, kad ir Act, ir Isoact, esant 2, 5 ir 10 µM, rodė nuo koncentracijos priklausomą AAPH sukeltos hemolizės slopinimą, o Act slopinantis poveikis buvo žymiai stipresnis nei Isoact esant kiekvienai naudojamai koncentracijai.

Antihipertenzinis efektai apie aktas ir Isoact įjungta SHr

SHR gavo vieną kartą per burną Act ir Isoact (10 mg / kg SHR), o SBP ir DBP pokyčiai buvo užfiksuoti per 24 valandas. Anksčiau pranešėme, kad SHR kraujospūdis (SBP ir DBP) keitėsi 24- val. (Lin ir kt., 2006; Han ir kt., 2011). Todėl buvo naudojamas tuščiojo mėginio ir mėginio palyginimas fiksuotu laiku (pvz., 2, 4, 6, 8 ir 24 val.), o ne prieš ir po geriamojo vartojimo. Nustatyta, kad Act, bet ne Isoact, veiksmingai sumažino SHR SBP ir DBP, palyginti su tuščiojo (distiliuoto vandens) grupe. SBP buvo reikšmingai sumažintas Act grupėje po 2, 4 ir 6 valandų, atitinkamai 18,8, 16,5 ir 14,9 mmHg, tačiau SBP (3,3 mmHg) sumažėjimas praėjus 24 valandoms po gydymo Act nebuvo stabilus.

meniškai reikšmingas (7A pav.). Kaip parodyta 7B paveiksle, DBP sumažėjo Act grupėje po 2, 4 ir 6 valandų (atitinkamai 8,5, 7,6 ir 12{10}} mmHg), nors tik rezultatas, gautas po 6 valandų, buvo statistiškai reikšmingas. (P< 0.05).="" pastebėta,="" kad="" act="" ir="" kaptoprilis="" (kaip="" teigiama="" kontrolė)="" turėjo="" panašų="" poveikį="" sbp="" ankstyvose="" stadijose="" (2,="" 4="" ir="" 6="" val.)="" po="" geriamojo="">

akteozidocistanche turi gerą poveikį antioksidantams

DISKUSIJA

Aktyvios deguonies rūšys ir laisvųjų radikalų sukeltos reakcijos yra susijusios su degeneraciniais ar patologiniais procesais, tokiais kaip senėjimas, vėžys, koronarinė širdies liga ir Alzheimerio liga (Ames, 1983; Gey, 1990; Smith ir kt., 1996). Keliose ataskaitose daugiausia dėmesio buvo skirta atrankaiantioksidantasveikla iš gamtos išteklių. Šiame tyrime pirmiausia palyginomeantioksidantasAct, Isoact ir 6- veiklaO- acetilatas. Act ir Isoact yra struktūriniai izomerai, kuriuose kavos rūgšties fragmento sudedamoji dalis yra sujungta su C-4 gliukozės hidroksilo grupe pirmajame ir su C -6 hidroksilo grupe gliukozės antrojoje. Nors ramnozės ir 3',4'-dihidroksifenilo etanolio, atitinkamai, sudedamosios dalys yra prijungtos prie gliukozės dalies C-3 ir C-1 hidroksilo grupių toje pačioje Act ir Isoact molekulėje, { {8}}O-acetilaktas yra Act darinys, kuriame acto rūgštis yra prijungta prie C-6 hidroksilo grupės gliukozės dalyje (1 pav.). Koo ir kt. (2006) pranešė, kad Act ir jo aglikonai pasižymėjo DPPH šalinimo veikla, o šių veiklų tvarka (išreikšta kaip IC50) buvo Act (1,28 µM) > kavos rūgštis (2,22 µM) > 3',4'-dihidroksifenilo etanolis ( 7,72 µM) > -tokoferolis (15,1 µM). Šioje ataskaitoje (2 pav.) DPPH šalinimo veiksmų tvarka (išreikšta kaip IC50) yra 6-O-acetilatas (9,55 µM) ≈ Isoact (9,48 µM) > Act (11,4 µM). Šios vertės buvo panašios į askorbo rūgšties (IC50 13,1 µM) ir BHT (IC50 18,5 µM) arba geresnės už DPPH radikalų pašalinimą. Didesnis Act IC50 šioje ataskaitoje gali būti dėl galutinės 60 µM DPPH koncentracijos, o ne 30 µM, naudotos Koo ir kt. pranešė (2006). Kadangi DPPH radikalas, kaip sakoma, priklauso elektronų perdavimo reakcijai (Huang ir kt., 2005), spėjama, kad gliukozės fragmento C-6 hidroksilo grupės darinys, pvz., acetilo grupė {{21 }}O- acetilato ir kavos rūgšties fragmentas Isoact, gali lengviau atlikti elektronų perdavimo reakciją nei C-6 laisvos hidroksilo grupės, esančios Act gliukozės dalyje, atliekant DPPH pašalinimo tyrimą.

Veik, 6-OBuvo pranešta, kad -acetilatas ir Isoact turi superoksidą sugeriantį aktyvumą in vitro, naudojant ksantino/ksantino oksidazės sistemą superoksido radikalams generuoti (Wang ir kt., 1996; Gao ir kt., 1999). Tačiau mūsų dabartinis tyrimas parodė, kad Act parodė ksantino oksidazę slopinantį poveikį (3 pav.). Todėl superoksido radikalas buvo sukurtas naudojant PMS-NADH sistemą šioje ataskaitoje (Liu ir kt., 2004; Lin ir kt., 2008), o ne ksantino / ksantino oksidazės sistemą. Iš tiesų, naudojant ksantino/ksantino oksidazės sistemą superoksido radikalams generuoti, Wang ir kt. (1996) gavo 63 µM Act prieš superoksido radikalus IC50, ir ši vertė yra artima ksantino oksidazės aktyvumo slopinimui Act, kaip nurodyta šiame tyrime (53,3 µM). Buvo pranešta, kad kavos rūgštis slopina ksantino oksidazę (Chiang ir kt., 1994). Galima spėti, kad kai kurių fitocheminių medžiagų, kurių struktūra yra susijusi su kavos rūgštimis, pvz., Act ar Isoact (Wang ir kt., 1996; Gao ir kt., 1999), superoksido pašalinimo veikla naudojant ksantino/ksantino oksidazę generuojančią sistemą. bent iš dalies prisidėjo prie ksantino oksidazės slopinimo. Įdomu tai, kad Wang ir kt. (1996) nustatė, kad Act (0,5 ir 2,5 mM) neslopino ksantino oksidazės aktyvumo, kuris buvo nustatytas deguonies elektrodu deguonies suvartojimui ksantino oksidacijos metu. Taigi svarbu turėti omenyje, kad skirtingi superoksido šalinimo aktyvumo tyrimo metodai gali gauti prieštaringų duomenų.

Li ir kt. (1993) pranešė apie panašų Act ir Isoact slopinimo mastą prieš AAPH sukeltą hemolizę pelių eritrocituose. Tačiau čia parodėme, kad Act turėjo daug didesnį slopinamąjį aktyvumą prieš AAPH sukeltą hemolizę žiurkių eritrocituose nei Isoact (6 pav.). Neaišku, ar toks neatitikimas galėjo atsirasti dėl graužikų rūšių skirtumo.

Kang ir kt. (2003) pranešė, kad Act pasižymėjo AKF slopinamuoju aktyvumu, o IC50 buvo 373,3 µg/mL, o tai buvo apskaičiuota kaip 598 µM, naudojant Hip-His-Leu kaip substratą. Šioje ataskaitoje aktas parodė didesnį AKF slopinamąjį aktyvumą nei Isoact, o pirmojo IC50 buvo apskaičiuotas kaip 472 µM pagal plotą HPLC chromatogramose (5 pav.). Buvo pranešta, kad šis veiksmas daro azoto oksido sukeltą atpalaiduojantį poveikį SD žiurkių endotelio nepažeistiems aortos žiedams (Wong ir kt., 2001). Nors buvo įrodyta, kad Actas Wistar žiurkėms mažina hipertenziją,

tyrime buvo naudojama Act injekcija į veną anestezuotai žiurkei, siekiant atmesti adsorbcijos faktorių (Ahmad ir kt., 1995). Čia mes administravome Act žodžiu SHR ir nustatėme kraujospūdžio pokyčius. Mes nustatėme, kad vartojant per burną, bet ne Isoact, buvo antihipertenzinis poveikis, nes sumažėjo SBP ir DBP per 24 valandas po vienkartinio vartojimo (7 pav.). Act 10 mg/kg kūno svorio dozė turėjo artimą kaptoprilio 5 mg/kg SHR dozės poveikiui mažinant SBP ir geriau nei kaptoprilis mažinant DBP.

Apibendrinant, Aktas buvo eksponuojamasantioksidantasaktyvumą, AKF slopinamąjį poveikį ir antihipertenzinį poveikį SHR. Čia pateikti rezultatai bus naudingi pastangoms kurti augalinius vaistus ar susijusius produktus, naudojant įstatymą, kuris buvo rastas daugelyje augalų ir vaistažolių, siekiant ateityje apsaugoti nuo antioksidacinių ir gydomųjų savybių.

Cistancheakteozidoskirtas antioksidacijai ir senėjimui

1 Maisto mokslo ir biotechnologijų katedra, Nacionalinis Chung Hsing universitetas, Taichung, Taivanas

2Ko Da Pharmaceutical Co., Ltd, Tao-Yuan, Taivanas

3 Farmacijos mokykla, Taipėjaus medicinos universitetas, Taipėjus, Taivanas

4 Taipėjaus medicinos universiteto Biomedicininių medžiagų ir inžinerijos instituto absolventas, Taipėjus, Taivanas

5 Tradicinės vaistažolių medicinos tyrimų centras, Taipėjaus medicinos universiteto ligoninė, Taipėjus, Taivanas

6 Taipėjaus medicinos universiteto Farmakognozijos instituto absolventas, Taipėjus, Taivanas

(Gauta 2012 m. kovo 12 d.; priimta 2012 m. balandžio 20 d.)

CITUOTA LITERATŪRA

Ahmad, M., GH Rizwani, K. Aftab, VU Ahmad, AH Gilani ir SP Ahmad. 1995 m.Akteozidas: naujas antihipertenzinis vaistas. Fitoteris. Res. 9: 525-527.

Ames, BN 1983. Dietiniai kancerogenai ir antikancerogenai: deguonies radikalai ir degeneracinės ligos. Science 221:1256-1264.

Anzenbacherova, E., P. Anzenbacheris, K. Macek ir J. Kvetina. 2001. Fermentų (angiotenzino konvertazės) inhibitorių nustatymas pagal fermentinę reakciją ir po to HPLC.J. Vaistininkas. Biomed. Anal. 24: 1151-1156.

Birkofer, L., C. Kaiser ir U. Thomas. 1968 metai.Akteozidasir neoakteozidas: Zuckerester aus Syringa vulgaris. Naturforsc- pakabintas 23B: 1051-1058.

Borer, JS 2007. Angiotenziną konvertuojančio fermento slopinimas: svarbus žingsnis gydant širdies ir kraujagyslių ligas. Euras. Heart J. Suppl. 9 (E priedas): E2-E9.

Chen, CH, TY Song, YC Liang ir ML Hu. 2009 m.Akteozidasir 6-O-acetilakteozidas sumažina IL sukeltas ląstelių adhezijos molekules-1, slopindamas ERK ir JNK žmogaus kraujagyslių endotelio ląstelėse. J. Agrič. Maistas

Chem. 57: 8852-8859.

Chiang, HC, YJ Lo ir FJ Lu. 1994. Ksantino oksidazės inhibitoriai iš Alsophila spinulosa (Hook) Tryon lapų. J. Enzyme Inhibit. 8: 61-71.

Chiou, WF, LC Lin ir CF Chen. 2004 m.Akteozidasapsaugo endotelio ląsteles nuo laisvųjų radikalų sukelto oksidacinio streso. J. Pharm. Pharmacol. 56: 743-748.

Fotherby, MD ir B. Panayiotou. 1999. Antihipertenzinė terapija insulto profilaktikai: kas, kada ir kam? Narkotikai 58: 663-674.

Gao, JJ, K. Igalashi ir M. Nukina. 1999. Radikalų šalinimo aktyvumas fenilpropanoidinių glikozidų Caryopteris incana. Biosci. Biotechnol. Biochem. 63: 983-988.

Gey, KF 1990antioksidantasširdies ir kraujagyslių ligų hipotezė: epidemiologija ir mechanizmai. Biochem. Soc. Trans. 18: 1041-1045.428 Botanical Studies, t. 53, 2012 m

Han, CH, JC Liu, KH Chen, YS Lin, CT Chen, CT Fan, HL Lee, DZ Liu ir WC Hou. 2011. Apdorotų česnakų antihipertenzinis aktyvumas spontaniškai hipertenzija sergančioms žiurkėms ir hipertenzija sergantiems žmonėms. Botas. Stud. 52: 277-283.

Holmquist, B., P. Bunning ir JF Riordan. 1979. Nepertraukiamas spektrofotometrinis angiotenziną konvertuojančio fermento tyrimas. Anal. Biochem. 95: 540-548.

Hou, WC, HJ Chen ir YH Lin. 2003. Antioksidaciniai peptidai, turintys angiotenziną konvertuojančių fermentų slopinimo aktyvumą, ir pritaikymas angiotenziną konvertuojančių fermentų gryninimui. J. Agrič. Food Chem. 51: 1706-1709.

Huang, D., B. Ou ir RL Prior. 2005. Chemija už nugarosantioksidantastalpos tyrimai. J. Agrič. Food Chem. 53: 1841-1856.

Huangas, CG, YJ Shang, J. Zhang, JR Zhang, WJ Li ir BH Jiao. 2008. Hipourikeminis fenilpropanoidinių glikozidų poveikisakteozidoScrophularia ningpoenis dėl šlapimo rūgšties kiekio serume kalio oksonatu anksčiau apdorotose pelėse. Amer. J.

Smakras. Med. 36: 149-157.

Lee, KY, EJ Jeong, HS Lee ir YC Kim. 2006 m.AkteozidasCallicarpa dichotoma susilpnina skopolamino sukeltus atminties sutrikimus. Biol. Pharm. Bull. 29: 71-74.

Li, J., P. Wang, R. Zheng, Z. Liu ir Z. Jia. 1993. Fenilpropanoidinių glikozidų nuo Pedicularis apsauga nuo oksidacinės hemolizės in vitro. Planta Med. 59: 315-317.

Li, H., GX Chou, ZT Wang ir ZB Hu. 2006. HPLC nustatymasakteozidoRadix Rehmanniae. Zhongguo Zhong Yao Za Zhi 31: 822-824.

Lin, SY, CC Wang, YL Lu, WC Wu ir WC Hou. 2008 m.Antioksidantas, anti-semikarbazidui jautri aminooksidazė ir geraniino, išskirto iš Phyllanthus urinaria, antihipertenzinė veikla. Food Chem. Toksikolis. 46: 2485-2492.

Liu, DZ, YS Lin ir WC Hou. 2004. Asparto rūgšties ir glutamo rūgšties monohidroksamataiantioksidantasir angiotenziną konvertuojančio fermento slopinimo veikla. J. Agric.Food Chem. 52: 2386-2390.

Kalckar, HM 1947. Purino junginių diferencinė spektrofotometrija naudojant specifinį fermentą. J. Biol. Chem.167: 429-443.

Kang, DG, YS Lee, HJ Kim, YM Lee ir HS Lee. 2003. Angiotenziną konvertuojantį fermentą slopinantys fenilpropanoido glikozidai iš Clerodenron trichotomum. J. Ethnopharmacol. 89: 151-154.

Koo, KA, SH Sung, JH Park, SH Kim, KY Lee ir YC Kim. 2005. In vitro neuroprotekcinė feniletanoidinių glikozidų veikla iš Callicarpa dichotoma. Planta Med.71: 778-780.

Koo, KA, SH Kim, TH Oh ir YC Kim. 2006 m.Akteozidaso jo aglikonai apsaugo pirmines žiurkių žievės ląstelių kultūras nuo glutamato sukelto eksitotoksiškumo. Life Sci. 79:709-716.

Lin, CL, SY Lin, YH Lin ir WC Hou. 2006. Jamo (Dioscorea alata cv. Tainong No.1) gumbų saugojimo baltymo ir jo pepsinių hidrolizatų poveikis spontaniškai hipertenzija sergančioms žiurkėms. J. Sci. Maistas Agric. 86: 1489-1494.

Markas, KS ir TP Davisas. 2000. Insultas: vystymasis, profilaktika ir gydymas peptidazės inhibitoriais. Peptidai 21:1965-1973.

Miki, M., H. Tamai, M. Mino, Y. Yamamoto ir E. Niki. 1987. Žiurkių raudonųjų kraujo kūnelių laisvųjų radikalų grandininė oksidacija molekuliniu deguonimi ir jos slopinimas -tokoferoliu. Arch Biochem. Biofizė. 258: 373-380.

Nacionalinė mokslo taryba. 1994. Laboratorinių gyvūnų priežiūros ir naudojimo vadovas. Nacionalinė mokslo taryba, Taivanas.

Ohno, T., M. Inoue, Y. Ogihara ir I. Saracoglu. 2002. Anti-metastazinis aktyvumasakteozido, feniletanoido glikozidas.Biol. Pharm. Bull. 25: 666-668.

Vendetti, MA, B. Rubinas, DW Cushman. 1977. Specifinių angiotenziną konvertuojančio fermento inhibitorių projektavimas: nauja geriamųjų antihipertenzinių vaistų klasė. Mokslas 196: 441-444.

Rao, YK, SH Fang, SC Hsieh, TH Yeh ir YM Tzeng. 2009. Anisomeles India sudedamosios dalys ir jų priešuždegiminė veikla. J. Ethnopharmacol. 121: 292-296.

Smith, MA, G. Perry, PL Richey, LM Sayre, VE Anderson, MF Beal ir N. Kowal 1996. Oksidacinis pažeidimas Alzheimerio liga. Nature 382: 120-121.Wang, P., J. Kang, R. Zheng, Z. Yang, J. Lu, J. Gao ir Z. Jia.

1996. Iš Pedicularis kilusio fenilpropanoido glikozido pašalinamasis poveikis superoksido anijonui ir hidroksilo radikalui naudojant sukimosi gaudymo metodą. Biochem. Pharmacol. 51: 687- 691.

Wongas, IYF, Y. Huangas, ZD He, CW Lau ir ZY Chen. 2001. Atpalaiduojantis Ligstrum purpurascens ekstrakto poveikis ir išgrynintasakteozidožiurkės aortos žieduose. Planta Med. 67:317-321.

Wu, YT, LC Lin, JS Sung ir TH Tsai. 2006. NustatymasakteozidoCistanche deserticola ir Boschniakia rossica ir jo farmakokinetika laisvai judančiose žiurkėse, naudojant LC-MS/MS. J. Chromatogr. B 844: 89-95.