Cucurbita Pepo L. sėklų etanolinis ekstraktas modifikuoja neuroendokrininės sistemos sutrikimus lėtinio streso patiriančiose žiurkėse ir uždegimo žymenų bei HSP70 antinksčių raišką

Kontaktai: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 El. paštas:audrey.hu@wecistanche.com

Hailah M. Almohaimeed1, Shereen Hamed2, Hanan S. Seleem 3,4, Ashwaq H. Batawi 5, Zuhair M. Mohammedsaleh6, Maha Jameal Balgoon7, Soad S. Ali 8,9, Soad Al Jaouni 9,10 ir Nasra Ayuob11*

Fonas: Moliūgai(Cucurbita pepo L.) buvo aprašyti turintysantioksidantas,turi priešuždegiminį, nuovargį ir į antidepresantą panašų poveikį. Antinksčiai yra svarbus į stresą reaguojantis organas, kuris streso metu palaiko homeostazę.

Tikslai:Šiuo tyrimu buvo siekiama įvertinti Cucurbitapepo L. (CP) ekstrakto vartojimo veiksmingumą mažinant elgsenos, biocheminius ir struktūrinius antinksčių pokyčius, sukeltus lėtinio nenuspėjamo lengvo streso (CUMS), ir ištirti šio poveikio mechanizmą.

Medžiagos ir metodai:Keturiasdešimt žiurkių patinų buvo suskirstyti į 4 grupes (n=10): kontrolinė, CUMS, fluoksetinu ir CP. Elgesio pokyčiai, kortikosterono lygis, priešuždegiminiai citokinai TNF- ir IL-6 ir oksidatorius/antioksidantasprofilis buvo įvertintas serume eksperimento pabaigoje. Antinksčių liaukos buvo apdorotos histopatologiniam ir imunohistocheminiam įvertinimui. Kaspazės -3 ir Ki67 bei šilumos šoko baltymo 70 (HSP70) genų ekspresija buvo įvertinta antinksčiuose naudojant RT-PGR.

Rezultatai:CP ekstraktas reikšmingai sumažino kortikosterono lygį (p < {0}},001),="" nejudrumo="" laiką="" (p="">< 0,001)="" ir="" uždegiminius="" bei="" oksidacinius="" pokyčius,="" susijusius="" su="" cums="" sukelta="" depresija,="" palyginti="" su="" negydyta="" grupe.="" cp="" ekstraktas="" sumažino="" cums="" sukeltus="" antinksčių="" histopatologinius="" pokyčius="" ir="" žymiai="">apoptozė(p < 0.001) ir gerokai padidintasantioksidantaskoncentracija serume.

Išvada:Cucurbita pepo L. veiksmingai palengvino lėtinio streso sukeltus elgesio, biocheminius ir antinksčių struktūrinius pokyčius, daugiausia dėl savoantioksidantasir priešuždegiminį poveikį.

Raktiniai žodžiai: moliūgas, stresas, depresija, kaspazė-3, ki67, Hsp70,apoptozė

Cistanche, Kinijos žolė, turi antioksidacinę funkciją.

ĮVADAS

Daugiau nei 264 milijonai įvairaus amžiaus žmonių visame pasaulyje kenčia nuo depresijos (PSO, 2020). Depresija sergančio žmogaus veikla mokykloje, darbe ir šeimoje paprastai būna prasta. Depresija gali sukelti savižudybę; taigi, ji laikoma antra pagal dažnumą 15-–29- metų amžiaus vaikų mirties priežastimi (PSO, 2020). Žinduoliai gali išgyventi stresinius įvykius suaktyvindami atitinkamą fiziologinį atsaką į šiuos įvykius. Antinksčiai yra pagumburio-hipofizės-antinksčių žievės (HPA) ašies ir simpatijos-adrenomedulinės ašies dalis, kuri palaiko homeostazę streso metu (Ulrich-Lai ir kt., 2006). Buvo pranešta, kad dėl terminio streso greita HSP70 ekspresija antinksčių žievėje (Huang ir kt., 2001). Šie baltymai dalijasi tarpląsteline prekyba, antigenų pateikimu,apoptozė, ir daugelis kitų veiksmų (Khar ir kt., 2001). Buvo aprašyta, kad egzogeniniai hormonai arba trukdžiai endogeniniams hormonams kritiniais vystymosi laikotarpiais gali turėti nuolatinį poveikį fiziologiniams ir elgesio keliams, kuriuos reguliuoja pagumburio neuroendokrininės sistemos (Gore ir Patisaul, 2010). apima visą integracinės fiziologijos sritį; todėl tai yra daugiau nei hormoninis sutrikimas (Waye ir Trudeau, 2011).

Neuroendokrininio reguliavimo, medžiagų apykaitos ir mitybos / mikrobiotos pokyčiai laikomi uždegimo ir polinkio į depresiją priežastimi (Huang ir kt., 2019). Buvo teigiama, kad depresija – viena iš neuropsichiatrinių sutrikimų – ir uždegimas turi dvipusį ryšį. Nors depresija skatina uždegimines reakcijas, uždegimas – neuropsichiatrinius sutrikimus, įskaitant depresiją (Bauer ir Teixeira, 2019).

Fluoksetinas, klasikinis antidepresantas, yra vienas iš rinkoje esančių vaistų, skirtų depresijai gydyti. Dabar jis laikomas nauju neuroendokrininės sistemos ardikliu. Šis fluoksetino poveikis yra šalutinis poveikis, o ne pagrindinis terapinis taikinys žinduoliams (León-Olea ir kt., 2014). Todėl reikia saugesnių antidepresantų, neturinčių šalutinio poveikio euroendokrininei būklei.

Moliūgai(Cucurbita pepo L.) yra ekonomiškai svarbios rūšys, auginamos visame pasaulyje. Jie turi naudą mitybai ir sveikatai, nes juose gausu fenolių, flavonoidų, amino rūgščių, angliavandenių ir vitaminų (Wang ir kt., 2002). Keletas tyrimų atskleidė, kad moliūgai turi didelį biologinį aktyvumą, pvz., antidiabetinį, priešvėžinį,antioksidantas, priešuždegiminis, nuovargį mažinantis ir į antidepresantus panašus poveikis (Wang ir kt., 2012; Zhanget al., 2012; Nawirska-Olszańska ir kt., 2013; Kim Nr ir kt., 2016). Tradicinė medicina daugiausia ajurvedinė. sistemos ir kinų medicina naudojo skirtingas moliūgo dalis, įskaitant vaisių ir sėklų minkštimą (Perez Gutierrez, 2016). Sweetme Sweet Pumpkin (SSP) ir Cucurbita moschata Duch antidepresinis veiksmingumas anksčiau buvo išbandytas in vivos tyrime, naudojant priverstinio plaukimo testą (FST) sukeltą gyvūnų depresijos modelį ir buvo lyginamas su fluoksetinu (Kim Nr ir kt., 2016). Vienoje iš palyginti neseniai paskelbtų apžvalgų buvo apibendrinta, kad antidepresantų maisto produktų, tokių kaip moliūgų sėklos, antidepresinis maisto balas yra 47 procentai, todėl jo poveikis panašus į antidepresantą (Lachance ir Ramsey, 2018). Neseniai Dotto ir Chacha pritarė daugiau su gyvūnais ir klinikiniais tyrimais pagrįstų tyrimų atlikimui, siekdami patvirtinti gerinantį moliūgų sėklų poveikį depresijai (Dotto ir Chacha, 2020).

Šios ataskaitos paskatino išbandyti veiksmingumąmoliūgaisumažinti lėtinio streso poveikį antinksčių liaukoms. Todėl šis tyrimas buvo atliktas siekiant įvertinti geriamojo Cucurbita pepo L. (CP) ekstrakto poveikį lėtinio nenuspėjamo lengvo streso (CUMS) sukelto elgesio, biochemijos ir antinksčių struktūros mažinimui ir ištirti šio poveikio mechanizmą.

dykumos cistanche ekstraktas: antioksidacinis

MEDŽIAGOS IR METODAI

Moliūgų ekstrahavimas ir dozavimas

Cucurbita pepo L. (vaučerio pavyzdys: AQJ_95) buvo nupirktas iš vietinės Džidos, Saudo Arabijos, rinkos. Jie buvo identifikuoti Karaliaus Abdulazizo universiteto herbariume, naudojant herbariumo pavyzdžius ir KSA florą (Chaudhary, 2001). Vaučerių pavyzdžiai buvo deponuoti herbariuje. CP nustatė autoriai ir jį patvirtino botanikas iš KingAbdulazizo universiteto Mokslo fakulteto.

CP ekstrahavimas buvo atliktas pagal ankstesnius tyrimus (Wang ir kt., 2012). Neapdoroti vaisiai su žievele buvo supjaustyti pjaustykle ir išdžiovinti naudojant liofilizatorių (FD5508; ilShinBioBase Co., Ltd., Korėja), o po to susmulkinti naudojant elektrinę šlifavimo mašiną. Milteliai buvo pertrinami per 40-tinklelio sietelį, kad būtų gauti smulkūs milteliai, ir laikomi hermetiškame inde. Išdžiovinti milteliai (50 g) buvo sumaišyti su 450 ml 80 procentų etanolio ir palikti 1 dienai 37 laipsnių temperatūroje purtyklėje (JSSI-100T; JS Research Inc., Compact ShakingIncubator., Korėja), tada filtruojama. su medvilne ir filtravimo popieriumi antrą dieną. Šis ekstrahavimo procesas buvo pakartotas du kartus 37 laipsnių temperatūroje, kad būtų gautas etanolio ekstraktas.

CP sudedamųjų dalių identifikavimas

PE cheminė sudėtis buvo analizuojama naudojant pėdsakų dujų chromatografiją GC-TSQ evo 8000 masės spektrometrą (ThermoScientific, Ostinas, Teksasas, Jungtinės Valstijos) su tiesiogine kapiliarine kolonėle TG-5MS (30 m × 0,25 mm × 0,25 µm plėvelės storio). Kolonėlės krosnies temperatūra iš pradžių buvo nustatyta iki 50 laipsnių, po to padidinta 5 laipsniais per minutę iki 250 laipsnių ir palaikoma 2 minutes, o tada padidinta iki galutinės 300 laipsnių temperatūros 25 laipsnių per minutę ir palaikoma 2 minutes. Injektoriaus ir MS perdavimo linijos temperatūra buvo palaikoma atitinkamai 270 ir 260 laipsnių; helis buvo naudojamas kaip nešančiosios dujos esant pastoviam 1 ml/min srauto greičiui. Tirpiklio uždelsimas buvo 4 min., o praskiesti 3 µl mėginiai buvo įšvirkščiami automatiškai, naudojant automatinį mėginių ėmiklį AS1300, sujungtą su GC, neskirstymo režimu PTV purkštuve. EI masių spektrai buvo renkami esant 70 eVionizacijos įtampai m/z 50–650 diapazone visu skenavimo režimu. Jonų šaltinio temperatūra buvo nustatyta 250 laipsnių. Komponentai buvo identifikuoti palyginus jų masių spektrus su WILEY 09 ir NIST 14 masių spektro duomenų bazės, kurios naudojamos nežinomų komponentų cheminei sudėčiai bet kuriame ekstrakte nustatyti ir tirti, masių spektrais (Wiley, 2006; Mikaia ir kt., 2014). Analizė buvo atlikta nekokybiniu būdu naudojant Thermo Scientific™ Xcalibur™ 2.2 programinę įrangą, o visos vertės buvo pateiktos santykiniais procentais (Abd El-Kareem ir kt., 2016).

Eksperimentinis dizainas

Šį tyrimą patvirtino Biomedicininių tyrimų etikos komitetas prie Medicinos fakulteto, King Abdulaziz University, Jeddah, KSA (nuorodos numeris {{0}}). Šiame tyrime iš King Fahd medicinos tyrimų centro (KFMRC) buvo paimta keturiasdešimt 15{18}}–200 g sveriančių ir 2–3 mėnesių amžiaus albinosų žiurkių patinų. Prieš pradedant eksperimentą, žiurkės buvo paliktos 1 savaitę aklimatizuotis prie laboratorinių sąlygų. Dešimt žiurkių buvo paskirta kaip kontrolinė grupė, kuri nebuvo veikiama CUMS. Kitoms trisdešimčiai žiurkių 4 savaites buvo taikoma CUMS procedūra, kuri apėmė įvairių tipų stresorius skirtingu dienos metu, kad būtų išvengta pripratimo prie streso. CUMS procedūra buvo išsamiai aprašyta ankstesniuose darbuose (Ayuob ir kt., 2016; Ali ir kt., 2017) ir parodyta 1 lentelėje. Žiurkės, paveiktos CUMS, buvo suskirstytos į 3 grupes (n 10). Neapdorota grupė (CUMS) 2 savaites gavo nešiklio 0,03 procento karboksimetilceliuliozės (CMC-Na) zondu. FLU gydyta grupė gavo FLU (Dar Al Dawa Pharmaceuticals Co., Ltd., Amanas, Jordanija) – antidepresantą, naudojamą farmakologiniam patvirtinimui, ištirpintą 0,03 % CMC-Na 20 mg/kg doze per skrandžio zondą (Li ir kt. , 2014). CP gydyta grupė gavo CP ekstraktą, ištirpintą distiliuotame vandenyje 100 mg/kg doze zondu 2 savaites pagal Wang ir kt. (2012).

Elgesio pokyčių įvertinimas

FST buvo atlikta po 4 savaičių, siekiant patvirtinti CUMS poveikį žiurkėms (Ali ir kt., 2017). Šio bandymo metu kiekviena žiurkė buvo patalpinta į stiklinį cilindrinį indą (aukštis 20 cm, skersmuo 14 cm) su 15 cm vandens 25 ± 2 laipsnių temperatūroje. Žiurkė buvo filmuojama 6 minutes, naudojant elgsenos programinę įrangą (Noldus InformationTechnology, EthoVision XT®), o bendras laikas, praleistas nejudėdamas per 6 minutes, buvo išmatuotas techniko, kuris buvo aklas eksperimentinėms grupėms. Buvo nustatytas bendras laikas, sekundėmis, kurį žiurkės praleido be galūnių judesių, išskyrus nedidelį judesį, būtiną, kad pelė išliktų „nejudrumo laikas“ per 6 minutes.

Biocheminiai metodai

Praėjus dvidešimt keturioms valandoms po elgesio testo, iš žiurkių intraorbitinio sinuso buvo paimti kraujo mėginiai, anestezuojant 4 procentų izofluranu (SEDICO PharmaceuticalsCompany, Kairas, Egiptas) 100 procentų deguonyje. Po to žiurkės buvo eutanazuotos dėl gimdos kaklelio išnirimo. Kraujo mėginiai buvo centrifuguojami 3, 000 aps./min. greičiu 15 minučių 4 laipsnių temperatūroje, kad būtų gautas serumas, ir buvo laikomi –18 laipsnių temperatūroje biocheminiam įvertinimui.

Kortikosterono lygis (ALPCO Diagnostics, Orangeburg, NY, Jungtinės Valstijos) buvo įvertintas naudojant fermentų imunosorbento tyrimo rinkinius pagal gamintojo instrukcijas. Remiantis gamintojo instrukcijomis, TNF ir IL-6 (Quantakin R&D sistema, JAV rinkinys) buvo įvertintas naudojant su fermentu susietą imunosorbentinį tyrimą. Kiekvieno mėginio optinis tankis buvo nustatytas dviem egzemplioriais, naudojant mikroplokštelės ELISA skaitytuvą, nustatytą 450 nm.

Tiobarbitūro rūgštimi reaguojančių medžiagų (TBARS) tyrimo rinkinys (Biodiagnostic; Egiptas) buvo naudojamas malondialdehido (MDA) lygiui spektrofotometriškai matuoti esant 535 nm (Gamal ir kt., 2018). Superoksido dismutazės (SOD) lygis buvo matuojamas naudojant SOD tyrimo rinkinį (Biodiagnostic; Egiptas) (Packer, 2002). Glutationo peroksidazės (GPX) lygis buvo įvertintas naudojant GPX rinkinį (Randox Labs, Crumlin, Jungtinė Karalystė). Norint kiekybiškai įvertinti katalazės (CAT) aktyvumą, naudojant tyrimo rinkinius (Biodiagnostic; Egiptas), buvo sukurta kalibravimo kreivė tyrimui ir visiems mėginiams. Metodas aprašytas anksčiau (Gamal ir kt., 2018).

dykumos cistanche ekstrakto privalumai: priešuždegiminis

Kiekybinė realaus laiko PGR

RNR ekstrahavimas iš audinių mėginių buvo atliktas naudojant TriFast™ reagentą (PeqLab, Vokietija, Kat. Nr.: 30-2010), kaip aprašyta gamintojo protokole. Išgrynintos RNR koncentracija buvo įvertinta naudojant NanoDrop 2000 spektrofotometrą (Thermo Scientific, JAV). Iš kiekvieno mėginio išskirta RNR buvo atvirkštinė transkribuota naudojant SensiFAST™ cDNR sintezės rinkinį, skirtą RT-qPCR (Bioline USA Inc., Jungtinės Valstijos, Kat. Nr.: BIO-65053), vadovaujantis gamintojo instrukcijomis. Susintetinta cDNR buvo saugoma -80 laipsniu iki panaudojimo qRT-PGR.

qRT-PGR reakcijos buvo atliktos naudojant SensiFAST™ SYBR Lo-ROX rinkinį (Bioline USA Inc., Jungtinės Valstijos, katės Nr.: BIO-94002) Applied Biosystems 7500real. -time PGR aptikimo sistema (Life Technology, Jungtinės Amerikos Valstijos). Šiame tyrime naudojami genų specifiniai pradmenys žiurkėms sukurti Primer3 programine įranga (v.0.4.0), o jų specifiškumas patikrintas naudojant NCBI/Primer-BLAST programą. Tada gruntai buvo įsigyti iš Willowfort™ (Jungtinė Karalystė). Pradmenys buvo GAPDH (5′-TGCACCACCAACTGCTTAGC-3′, 5′-GGCATGGACTGTGGTCATGAG-3′), kaspazė-3 (pirmyn 5- TGTATG} 5- TGTATG} 20}}GCGCAAAGTGACTGGATGAACC-3), HSP70 (5′-ACGAGGGTCTCAAGGGCAAG-3′, 5′-CTCTTTCTCAGCCAGCGTGTTAG-3′).

Ki67 (pirmyn 5-AGAAGAGCCCACAGCACAGAGAA-3, atvirkštinė 5-AGAAGAGCCCACAGCACAGAGAA 3). PCR mišinys buvo paruoštas taip: 10 µl SensiFASTTM SYBRLo-ROX mišinio, 0,8 µl priekinio pradmens, 0,8 µl atvirkštinio pradmenų, 2 µl šablono cDNR ir 6,4 µl vandens be nukleazės. Reakcijos mišinys buvo perkeltas į terminį ciklą, kuris anksčiau buvo užprogramuotas palaikyti 95 laipsnių temperatūroje 2 minutes, po to sekė 40 ciklų po 95 laipsnių 15 s, o po to 60 laipsnių 30 s. Kiekviename eksperimente buvo vykdoma neigiama kontrolinė reakcija be šablono.

Lydymosi kreivės analizė buvo atlikta siekiant įrodyti PGR produktų specifiškumą, o kiekvienos reakcijos Ct vertė buvo gauta iš amplifikacijos diagramų. Santykinis kiekvienos geno ekspresijos kiekybinis įvertinimas audinių mėginiuose buvo apskaičiuotas naudojant lyginamąjį slenksčio (ΔΔCt) metodą, kai GAPDH kaip vidinis kontrolės genas. Bendram lenkimo pokyčiui jis buvo apskaičiuotas ir tiesinis pagal 2-ΔΔCt aritmetinę formulę.

Histologiniai metodai

Eksperimento pabaigoje ir po to, kai žiurkės buvo anestezuotos, pilvas buvo atidarytas ir dešinė antinksčių liauka buvo išpjaustyta. Parafino blokams gauti buvo atlikta antinksčių fiksacija 10 procentų neutraliame buferiniame formaline ir tolesni procesai. Buvo paruoštos 4-μm storio parafino sekcijos ir nudažytos hematoksilinu ir eozinu (H&E). Be to, kitos parafino sekcijos buvo imunohistochemiškai nudažytos naudojant streptavidino-biotino-peroksidazės metodą. Skaidrės buvo inkubuojamos per naktį 4 laipsnių temperatūroje, o po to buvo inkubuojamos su monokloniniu anti-Ki67 (Dako Cytomation, Jungtinės Valstijos, praskiedus santykiu 1:1, 000), siekiant parodyti ląstelių proliferaciją. Be to, polikloninis antikaspazės{10}} antikūnas (Santa Cruz Biotechnology, JAV, praskiedus santykiu 1:1,000) buvo naudojamas aptiktiapoptozė. Taip pat buvo panaudotas polikloninis organizmas prieš šilumos šoko baltymą -70 (HSP70) (Dako, Carpinteria, CA, Jungtinės Valstijos, praskiedus santykiu 1:1, 000). Buvo naudojamas atitinkamas biotinilintas konjuguotas antrinis antikūnas iš Dako dažymo sistemos. Skaidrės, nudažytos tik antriniu antikūnu, buvo naudojamos kaip neigiamos kontrolės.

Branduoliai buvo nudažyti hematoksilinu. Browncitoplazminis dažymas buvo laikomas teigiama reakcija. Dažytos sekcijos buvo ištirtos ir nufotografuotos naudojant Olympus Microscope BX{{0}} (Olympus), prijungtą prie skaitmeninio fotoaparato ir kompiuterio. Pusiau kiekybinė antikūnų imunoreaktyvumo analizė buvo atlikta naudojant Pro Plus vaizdo analizės programinę įrangą. Imunopozityvios reakcijos procentinis plotas buvo įvertintas 30 laukų, padidinus 400 kartų. Teigiamos ląstelės buvo skaičiuojamos 1,0 mm2 plote, kaip aprašyta Zhou ir kt. (2016). Iš kiekvienos skaidrės buvo ištirti mažiausiai penki laukai, o kiekvieno gyvūno vidurkis buvo apskaičiuotas.

Morfometrinei analizei buvo ištirtos keturios sekcijos kiekvienam gyvūnui (padidinimas × 100). Skirtingų antinksčių zonų storis matuojamas mikrometrais. Antinksčių žievės storis buvo gautas išmatuojant atstumą tarp smegenų ir antinksčių kapsulės tiesia linija, kiekviename antinksčių žievės kvadrante atliekamas vienas matavimas.

Statistinė analizė

Elgsenos, biocheminiai ir imunohistocheminiai duomenys buvo analizuojami naudojant Socialinių mokslų statistinio paketo (SPSS) 16 versiją. Tyrimo kintamuosius paveikė du nepriklausomi veiksniai: streso poveikis ir gydymas. Todėl buvo atlikta analizė naudojant mišraus modelio dvipusę ANOVA, pagrįstą Bonferroni post hoc. Statistinis reikšmingumas buvo laikomas p <>

dykumos cistanche privalumai: stabdo senėjimą

REZULTATAI

Elgesio rezultatai

Nejudrumo laikas per FST buvo žymiai ilgesnis (p=0.03) CUMS grupėje nei kontrolinis, tuo tarpu jis buvo žymiai mažesnis (p=0.01, p{4}}.001) FLU ir CP gydytose grupėse nei CUMS grupėje (1A pav.).

CP ekstrakto analizės naudojant GC-MS rezultatai

Pagrindiniai CP aptikti junginiai daugiausia yra oleino rūgštis (apie 56 proc.), palmitino rūgštis (apie 8,9 proc.), linoleno rūgštis 3,5 proc. ir linolo rūgštis 2,8 proc., be daugelio kitų junginių (2 lentelė; 2 pav.). Tarp CP junginių, kurie, kaip pranešta, turi priešuždegiminį poveikį, yra oleino rūgštis, palmitino rūgštis, linoleno rūgštis, betulinas ir linolo rūgštis, oantioksidantaspalmitino rūgštis, 10-oktadeceno rūgštis ir metilo esteris.

Biocheminis įvertinimas

Kortikosterono lygis serume

Kortikosterono lygis reikšmingai padidėjo (p < {0}},001) negydytų žiurkėms, kurioms buvo taikomas CUMS, palyginti su kontrolinių žiurkių žiurkėmis, o gydytų FLU ir CP kortikosterono kiekis serume žymiai sumažėjo (p < 0,001). lygiu, palyginti su negydytomis žiurkėmis, paveiktomis CUMS (1B pav.).

TNF- ir IL-6 lygiai serume

Eksperimento pabaigoje TNF ir IL-6 serume įvertinimas parodė, kad CUMS grupėje jie buvo reikšmingai padidėję (p < 0,001), o reikšmingai sumažėjo (p< 0.001)="" in="" flu-="" and="" cp-treated="" groups="" compared="" with="" those="" in="" the="" untreated="" rats="" exposed="" to="" cums="" (figures="" 1c,="">

MDA, SOD, GPX ir CAT lygiai serume

Pastebėta, kad serumo MDA lygis buvo žymiai didesnis (p < {0}},001)="" cums="" grupėje="" nei="" kontrolinių="" žiurkių,="" o="" cp="" gydytų="" grupių="" buvo="" žymiai="" mažesnis="" (p="" 0,003).="" nei="" negydytoms="" žiurkėms,="" paveiktoms="" cums.="" flu="" administravimas="" negalėjo="" reikšmingai="" sumažinti="" mda="" lygio="" žiurkėms,="" paveiktoms="" cums="" (3a="">

Priešingai, SOD, GPX ir CAT lygiai CUMS grupės serume buvo žymiai mažesni (p < {{0}}.{10}}01,="" p="">< 0,001,="" p="0"> CUMS-exposed grupėje. FLU vartojimas negalėjo žymiai padidinti SOD, GPX ir CAT žiurkėms, paveiktoms CUMS (3B – D pav.).

Ki67, kaspazės-3 ir HSP70 genų ekspresija

RT-PGR atskleidė nežymiai didelę Ki67 geno ekspresiją (p=0.14) CUMS grupės antinksčių liaukose, palyginti su kontroline grupe, o FLU ir CP gydytų grupių ekspresija buvo reikšmingai aukšta (p {{6). }}.02, p 0.01), palyginti su grupe, kuriai veikiama CUMS (3E pav.). Kaspazės-3 genų ekspresija buvo žymiai padidėjusi. (p < 0,001) CUMS grupės antinksčių liaukose, palyginti su kontroline grupe, o FLU ir CP gydytų grupių rodiklis reikšmingai sumažėjo (p=0,03, p=0,04) lyginant su CUMS paveikta grupe (3F pav.). Kalbant apie HSP70 geno ekspresiją, ji užfiksavo žymiai didesnį (p < 0,001) lygį CUMS grupės antinksčių liaukose nei kontrolinėje grupėje, o FLU ir CP gydytų grupių sumažėjimas buvo nereikšmingas (p=0,07, p=0,08), palyginti su grupe, kuriai buvo taikomas CUMS (3G pav.).

Histopatologinis įvertinimas

Kontrolinių žiurkių antinksčių struktūra yra nepažeista ir išlikusi žievės architektūra, įskaitant glomerulų zoną, fasciculata zoną ir reticularis, taip pat smegenis (4 pav.). CUMS paveiktų žiurkių antinksčių liaukose ZG, ZF ir ZR buvo daug ląstelių su akivaizdžia vakuolizacija ir išsigimusių branduolių, o kartais ir giliai nudažytų branduolių, kurių kapsulėje ir jungiamojo audinio trabekulėse buvo vidutinio storio, sustorėjimas. Daugelis ZR ląstelių pasirodė tamsios su rudojo lipofuscino pigmentais. Kita vertus, CP gydytų žiurkių antinksčių liaukose ZG buvo mažiau akivaizdžiai vakuoliuotų ląstelių ir giliai nusidažytų branduolių, o ZF ir ZR atskleidė keletą tamsių ląstelių.

Morfometriniai matavimai parodė, kad ZG ir ZR storis nežymiai padidėjo po CUMS poveikio, o žymiai padidėjo sergant FLU- (p 0.01,p 0.02) ir CP gydytų grupių (p=0.02, p=0.001), atitinkamai. Kalbant apie ZF storį, jis žymiai padidėjo (p 0, 02) grupėje, kuriai buvo taikoma CUMS, ir toliau padidėjo, bet nereikšmingai, FLU ir CP gydytose grupėse, palyginti su negydytomis CUMS grupėmis.

Siekiant nustatyti, ar ląstelių hiperplazija buvo apribota tik tam tikru antinksčių subregionu, buvo naudojamas imunohistocheminis Ki67 (dalijimosi ląstelės žymeklis) žymėjimas. Ki67-teigiamų proliferuojančių ląstelių skaičius reikšmingai padidėjo (p < 0.001)="" zf="" po="" cums="" poveikio,="" o="" gydymas="" flu="" ir="" cp="" nežymiai="" padidėjo,="" palyginti="" su="" negydyta="" cums="" grupe.="" nors="" zg="" ir="" zr="" proliferuojančių="" ląstelių="" skaičius="" nežymiai="" padidėjo,="" o="" cums="" grupės="" smegenyse="" nežymiai="" sumažėjo,="" palyginti="" su="" kontroline="" grupe,="" gydymas="" flu="" ir="" cp="" reikšmingai="" padidino="" proliferuojančių="" ląstelių="" skaičių="" zg="" (p="0.001)." ,="" p="0.003)," zr="" (p="">< 0,001)="" ir="" smegenyse="" (p="0.004," p="0.003)," palyginti="" su="" negydyta="" cums="" grupe="" (4,="" 5="">

Įvertinimui buvo atliktas imunohistocheminis dažymas naudojant kaspazę-3apoptozė(6 pav.). Pastebėta, kad kaspazės-3 išraiškos procentinė dalis reikšmingai padidėjo (p < 0.001)="" visose="" liaukos="" zonose="" po="" 4="" savaičių="" poveikio="" cums.="" palyginti="" su="" kontroline="" grupe.="" cp="" gydytų="" pacientų="" grupėje="" reikšmingai="" sumažėjo="" kaspazės="" -3raiška="" zg="" (p="">< 0,001),="" zf="" (p="">< 0,001),="" zr="">< 0.001,="" p=""
="" 0.005),="" and="" medulla="" (p="0.004," p="0.001)," in="" comparison="" to="" that="" of="" the="" cums="" group="" (figures="">

HSP70 ekspresijos ploto procentas reikšmingai padidėjo (p < 0,001) visose CUMS grupės žievės zonose, taip pat antinksčių smegenyse, palyginti su kontroline grupe, o nežymiai sumažėjo visos FLU ir CP gydytų grupių zonos ir smegenys, palyginti su CUMS grupe (5 pav.).

Džiovintos Cistanche tubulosa griežinėliai

DISKUSIJA

Šiuolaikinė visuomenė akivaizdžiai kupina streso, kuris gali kilti dėl kasdienių problemų, sveikatos priežiūros ir su darbu susijusių problemų. Šie stresoriai gali sukelti vadinamuosius su stresu susijusius sutrikimus (Clayton ir McCance, 2014). Šiame tyrime Cucurbita pepo L. minkštimo ir žievelės etanolinis ekstraktas buvo naudojamas siekiant ištirti jo potencialą palengvinti CUMS sukeltą depresinį elgesį ir jo poveikį antinksčiams. Tai įrodė reikšmingas kortikosterono koncentracijos serume padidėjimas ir pailgėjęs nejudrumas FST metu. Šie rezultatai atitiko anksčiau praneštus (Tang ir kt., 2015).

Buvo pranešta, kad ir TNF-, ir IL-6 yra susiję su depresijos patogeneze (Taraz ir kt., 2015; Pedraz-Petrozziet al., 2020). Buvo pranešta, kad pelės, kurioms trūksta IL-6 arba TNF receptorių, yra atsparios depresiniam elgesiui (Viana ir kt., 2010). Todėl šiame tyrime jos buvo įvertintos ir pastebėta, kad tiek TNF, tiek IL{ {9}} buvo reikšmingai padidėję žiurkių, kurios 4 savaites buvo paveiktos CUMS, serume, o tai rodo, kad jos sirgo depresija. Šią išvadą patvirtino Numakawa ir kt. (2014) su elgesio nevilties pelėmis ir Taraz ir kt. (2015) pacientams, sergantiems depresija.

Šiame tyrime moliūgų ekstrakto vartojimas buvo susijęs su depresinio elgesio pagerėjimu, o tai matyti iš reikšmingo FST nejudrumo laiko sumažėjimo ir patvirtinto reikšmingo inkortikosterono ir uždegiminių citokinų TNF- ir IL{1}} sumažėjimo serume. Šias išvadas patvirtino Kim Nr ir kt. (2016), kurie pranešė, kad SSP 28 dienas sumažino uždegiminių citokinų lygį depresija sergančiose žiurkėse. Priešuždegiminis aktyvumasmoliūgasgali būti siejami su moliūgų veikliosiomis medžiagomis, tokiomis kaip oleino ir palmitino rūgštys bei estradiolis.

Sumažėjęs oleino rūgšties, palmitino rūgšties ir linolo rūgšties reguliavimas buvo aprašytas sergant depresija (Conklin ir kt., 2010; Martín ir kt., 2010). Buvo pranešta, kad oleino rūgšties sukelta neuroprotekcija yra susijusi su jo priešuždegiminiu poveikiu, kurį sąlygoja peroksisomų proliferatoriaus aktyvuoto receptorių gama (PPAR-) aktyvacija (Song ir kt., 2019). Be to, buvo pranešta, kad palmitino rūgštis slopina fosfolipazę A (2) ir todėl. laikomas priešuždegiminiu junginiu (Aparna ir kt., 2012). Estradiolis buvo vienas iš moliūgų junginių, aptiktų šiame tyrime. Buvo pranešta, kad estradiolis sukelia priešuždegiminį poveikį ir vėliau mažina depresinį elgesį (Xu ir kt., 2015). Kitas mechanizmas, kuriuo estradiolis gali sukelti anantidepresinį poveikį, yra padidėjęs smegenų kilmės neurotrofinio faktoriaus (BDNF) ekspresija ir ERK fosforilinimas aktyvuojant ER- smegenyse (Yang ir kt., 2010).

Šiame tyrime MDA lygis serume buvo padidintas, o CUMS ekspozicijose sumažėjo SOD, GPX ir CAT lygiai. Panašūs pokyčiai buvo užfiksuoti po CUMS poveikio ankstesniuose tyrimuose, ir jie pridūrė, kad šie biocheminiai pokyčiai sukėlė oksidacinį stresą ir pablogino HPA (Nabavi ir kt., 2015). Liu T. ir kt. (2015) taip pat pranešė, kad depresijos išsivystymas gali būti siejamas su mažu antioksidantų kiekiu organizme. Antioksidacinės savybėsmoliūgasbuvo dažnai pranešama apie vaisių ekstraktą (Bahramsoltani ir kt., 2017). Be to, buvo pranešta, kad Cucurbita pepo L. kūno žievelė apdoroja didesnį antioksidacinį aktyvumą nei kitos dalys, pavyzdžiui, sėklos (Oyeleke ir kt., 2019). Daugelio ankstesnių tyrimų metu moliūgų ekstrakto vartojimas žymiai padidino SOD ir GPX kiekį ir sumažino MDA pelių serume (Guo-Huaet al., 2000; Dang, 2004), ir šis poveikis taip pat buvo užfiksuotas šiame tyrime. Todėl,antioksidantasMoliūgų aktyvumas gali būti už antidepresinio poveikio, kuris akivaizdus šiame tyrime. Tai atitinka Kim Nr ir kt. pastabas. (2016). Buvo pranešta, kad natūralūs produktai su priešuždegiminiais,antioksidantas, o nuovargį mažinantis poveikis taip pat turi į anantidepresantus panašų poveikį (Jeong ir kt., 2015). Visa ši ankstesnė veikla buvo įrodytamoliūgai.

Cistanche turi senėjimą stabdantį poveikį

Padidėjusi antinksčių žievės ląstelių citoplazminė vakuolizacija, pastebėta šiame tyrime CUMS grupėje, gali būti siejama su didėjančia lipidų, kurie sudaro kertinį kortizolio sintezės akmenį, paklausa. Cigankova ir kt. (2005) pastebėjo, kad dėl ilgalaikės eksperimentinės hiperdinamikos susilieja daug žievės ląstelių citoplazminių lipidų lašelių. Šiuose lipidų lašeliuose yra cholesterolio, kuris yra pagrindinis steroidinių hormonų sintezės pirmtakas. Tačiau Koldysheva ir Lushnikova (2008) pranešė, kad dėl streso antinksčių žievės ląstelėse, ypač ZF, labai sumažėjo lipidų lašelių (Koldysheva ir Lushnikova, 2008). Buvo aprašyta, kad fizinio streso metu skausmo dirgikliai perduodami į pagumburį, todėl CRH išsiskiria į hipofizės vartų sistemą, o tai padidina AKTH sekreciją ir stimuliuoja jo receptorius ZF ir ZR, kad padidėtų kortizolio sekrecija (Patti ir kt., 2018). Anksčiau buvo pranešta apie sutirštėjusią antinksčių kapsulę ir trabekules, pastebėtas CUMS paveiktose žiurkėse (El-Desouki ir kt., 2011; Altayeb ir Salem, 2017) dėl padidėjusios fibroblastų kolageno sintezės, veikiant imobilizacijos stresui.

Daugelyje CUMS paveiktų žiurkių antinksčių ląstelių buvo giliai nusidažę branduoliai, o tai rodo, kad jos patyrė apoptozę, kurią patvirtino kaspazės -3 imunohistocheminis dažymas. Panašų stebėjimą pranešė Altayebas ir Salem (2017), tirdami imobilizacijos streso poveikį žiurkių antinksčiams. Liu Q. ir kt. (2015) pranešė, kad per didelis oksidacinis stresas, akivaizdus po CUMS poveikio šiame tyrime, keičia raiškos lygius.apoptozė- giminingus genus" ir sukelia ląstelių apoptozę bei degeneraciją per Bcl-2, Bax ir kaspazės-3 signalizacijos kelius. Šis mechanizmas buvo patvirtintas šiame tyrime RT-PGR, kuris atskleidė reikšmingą kaspazės-3 geno reguliavimą. Peržvelgus literatūrą, Cucurbita pepo tiesioginio poveikio kaspazės -3-medijuojamai apoptozei skirtinguose audiniuose nebuvo. Atrodo, kad antinksčių liaukose aptiktų kaspazės-3-teigiamų apoptotinių ląstelių sumažėjimas buvo susijęs suantioksidantasCucurbita pepo poveikis užfiksuotas šiame tyrime. Tai patvirtina daugelis ankstesnių tyrimų, atliktų su kitais augalais ir žolelėmis, turinčiais reikšmingą antioksidacinį poveikį (Banagozar Mohammadi ir kt., 2019; Ghazizadeh ir kt., 2020).

Šis tyrimas parodė, kad CUMS poveikis padidino Ki67-teigiamų antinksčių žievės ląstelių skaičių, o tai buvo labai akivaizdu ZF, o tai rodo padidėjusį proliferuojančių ląstelių skaičių, todėl šio sluoksnio storis žymiai padidėjo. Kita vertus, Ki67-teigiamų proliferuojančių ląstelių skaičius nežymiai sumažėjo smegenyse, reaguojant į CUMS. Šie stebėjimai sutapo su Ulrich-Lai ir kt. (2006), kurie pranešė apie Ki{{ padidėjimą. 4}}teigiami ląstelių branduoliai tik išoriniame ZF po chroniško kintamo streso, o teminė ląstelė parodė ląstelių hipertrofiją, o ne hiperplaziją. Be to, Laborie ir kt. (2003) pranešė apie bendrą meduliarinės funkcijos padidėjimą po ilgalaikio streso, o tai rodo, kad lėtinis stresas gali sukelti meduliarinę hipertrofiją. Šiame tyrime skiriamasmoliūgasekstraktas žymiai padidino ląstelių dauginimąsi, o tai akivaizdu dėl Ki67 geno padidėjimo ir imunoekspresijos beveik visose antinksčių zonose ir teminėse antinksčių liaukose, palyginti su CUMS. Tai paaiškino šiame tyrime užfiksuotą padidėjusį liaukų zonų storį. Jis taip pat gali kompensuoti apoptotinį poveikį, kurį sukelia CUMS poveikis. Šią išvadą patvirtina Kim Hy ir kt. (2016), kuris pranešė apie reikšmingą Ki67 mRNR ekspresijos reguliavimą ir splenocitų, išskirtų iš BALB/c pelių, gydytų SSP, streamed ir Cucurbita moschataDuch bei pagrindiniu jo komponentu karotinu, blužnies proliferaciją.

Šiame tyrime CUMS poveikis žymiai padidino HSP70 genų ekspresiją ir imuninę ekspresiją visose antinksčių liaukos zonose. Atsižvelgiant į tai, Zheng ir kt. (2008) taip pat įrodė, kad padidinta HSP70 ekspresija po stresinių sąlygų moduliuoja uždegiminius atsakus, slopindama uždegiminio transkripcijos faktoriaus, branduolinio faktoriaus-kappa B (NF-kappaB) aktyvavimą. Be to, HSP70 gali tiesiogiai trukdyti apoptozei ir nekrozei (Yenari ir kt., 2005). Visai neseniai Liet al. (2019) pranešė apie HSP70 ekspresijos padidėjimą kiaulių antinksčių audinyje po karščio streso, o tai rodo HSP70 vaidmenį antinksčių pažeidime ir pabrėžia jo svarbą uždegiminiams atsakams. Greita HSP70 indukcija reaguojant į stresą yra laikoma esminiu ląstelių apsaugos procesu.

Mūsų tyrime, gydant CUMS paveiktas žiurkes sumoliūgaibuvo susijęs su nereikšmingu HSP70 ekspresijos sumažėjimu, kuris buvo susijęs su sumažėjusia apoptoze ir uždegiminiais atsakais. Tai gali reikšti teigiamą santykinai aukšto HSP70 lygio, kurį sukelia tiek FLU, tiek CP asit, poveikį, dėl kurio sumažėjo kaspazės{2}} tarpininkaujamaapoptozėir uždegiminių citokinų išsiskyrimas. Nors moliūgų poveikis šilumos šoko baltymų šeimai anksčiau nebuvo aprašytas, oleino rūgštis, kuri yra pagrindinės sudedamosios dalys.moliūgaiŠiame tyrime naudotas, buvo aprašytas siekiant sumažinti HSP60 ekspresiją žmogaus T limfocitų ląstelių linijoje (Martins De Lima ir kt., 2004), o tai patvirtina mūsų tyrimo rezultatus. Siūlomas Cucurbita pepo kaip į antidepresantus panašios medžiagos veikimo mechanizmas apibendrintas 7 paveiksle. Vienas iš šio tyrimo apribojimų buvo nesugebėjimas toliau tirti CP antidepresinio poveikio mechanizmo, todėl tolesnis tyrimas paskatino tai daryti. .

Apibendrinant, šis tyrimas pateikia moksliškai pagrįstų įrodymų apie Cucurbita pepo L. ekstrakto veiksmingumą mažinant CUMS sukeltus elgesio ir biocheminius pokyčius, taip pat histopatologinį poveikį antinksčiams. Šis poveikis buvo akivaizdus sumažinus reguliavimąapoptozėirHSP70 išraiška ir atrodė, kad tarpininkauja perantioksidantasir priešuždegiminį Cucurbita pepoL poveikį. ekstraktas. Nors šis tyrimas ir kai kurie kiti naujausi tyrimai patvirtino į antidepresantus panašų Cucurbita pepo poveikį ir ištyrė jo mechanizmą, norint patvirtinti šį poveikį žmonėms, reikia atlikti tolesnius tyrimus, įskaitant klinikinius tyrimus.

Cistanche granulės