Cucurbita Pepo L. sėklų etanolinis ekstraktas modifikuoja neuroendokrininės sistemos sutrikimus lėtinio streso patiriančioms žiurkėms ir uždegimo žymenų bei HSP70 antinksčių raišką

1 Princesės Nourah Bint Abdulrahman universiteto (PNU) Medicinos koledžo Pagrindinių mokslų katedra, Rijadas, Saudo Arabija,

2 Medicinos histologijos ir ląstelių biologijos katedra, Medicinos fakultetas, Mansoura universitetas, Mansoura, Egiptas,

3 Histologijos katedra, Medicinos fakultetas, Menoufifia universitetas, Shebin ElKoum, Egiptas,

4 Pagrindinių medicinos mokslų katedra, Unaizah medicinos ir medicinos mokslų kolegija, Kasimo universitetas, Buraida, Saudo Arabija,

5 Biologijos mokslų katedra, Karaliaus Abdulazizo universiteto Mokslų fakultetas, Džida, Saudo Arabija,

6 Medicinos laboratorinių technologijų katedra, Taikomųjų medicinos mokslų fakultetas, Tabuko universitetas, Tabukas, Saudo Arabija,

7 Biochemijos katedra, Karaliaus Abdulazizo universiteto Mokslų fakultetas, Džida, Saudo Arabija,

8 Histologijos ir ląstelių biologijos katedra, Medicinos fakultetas, Assuit universitetas, Asyut, Egiptas,

9Yousef Abdullatif Jameel Prophetic Medical Applications (YAJCPMA) katedra, Medicinos fakultetas, Karaliaus Abdulazizo universitetas, Džida, Saudo Arabija,

10 Hematologijos / vaikų onkologijos skyrius, Karaliaus Abdulazizo universitetinė ligoninė (KAUH), Karaliaus Abdulazizo universiteto Medicinos fakultetas, Džida, Saudo Arabija,

11 Medicinos histologijos katedra, Medicinos fakultetas, Damietta universitetas, Damietta, Egiptas

Daugiau informacijos: ali.ma@wecistanche.com

Fonas:Apibūdinta, kad moliūgai (Cucurbita pepo L.) turi antioksidacinį, priešuždegiminį, nuovargį ir į antidepresantą panašų poveikį. Theantinksčių liaukayra svarbus į stresą reaguojantis organas, palaikantis homeostazę streso metu.

Tikslai:Šiuo tyrimu buvo siekiama įvertinti Cucurbita vartojimo veiksmingumąpepo L. (CP) ekstraktas, mažinantis elgesio, biocheminius ir struktūrinius pokyčiusantinksčių liaukasukeltas lėtinio nenuspėjamo lengvo streso (CUMS) ir ištirti šio poveikio mechanizmą. Medžiagos ir metodai: keturiasdešimt žiurkių patinų buvo suskirstyti į 4 grupes (n-10): kontrolinės, CUMS, fluoksetinu ir CP. Eksperimento pabaigoje serume buvo įvertinti elgsenos pokyčiai, kortikosterono lygis, uždegimą skatinantys citokinai TNF- ir IL-6 bei oksidantų/antioksidantų profilis.Antinksčiailiaukos buvo apdorotos histopatologiniam ir imunohistocheminiam įvertinimui. Kaspazės{0}} ir Ki67 bei šilumos šoko baltymo 70 (HSP70) genų ekspresija buvo įvertinta antinksčiuose naudojant RT-PGR.

Rezultatai:CP ekstraktas reikšmingai sumažino kortikosterono lygį (p < 0.001),nejudrumo laikas (p < 0,001)="" ir="" uždegiminiai="" bei="" oksidaciniai="" pokyčiai,="" susiję="" su="" cums="" sukelta="" depresija,="" palyginti="" su="" negydyta="" grupe.="" cp="" ekstraktas="" sumažino="" cums="" sukeltą="">antinksčiųhistopatologiniai pokyčiai ir reikšmingai sumažinta apoptozė (p < 0,001) ir reikšmingai sureguliuotas antioksidantų kiekis serume.

Raktiniai žodžiai:moliūgas, stresas, depresija, kaspazė-3, ki67, Hsp70, apoptozė

Spustelėkite, kad pamatytumėte cistanche tubulosa dozę antinksčiams

ĮVADAS

Daugiau nei 264 milijonai įvairaus amžiaus žmonių visame pasaulyje kenčia nuo depresijos (PSO, 2020). Depresija sergančio žmogaus veikla mokykloje, darbe ir šeimoje paprastai būna prasta. Depresija gali sukelti savižudybę; taigi, ji laikoma antra pagrindine mirties priežastimi tarp 15- iki 29- metų amžiaus (PSO, 2020). Žinduoliai gali išgyventi stresinius įvykius, suaktyvindami atitinkamą fiziologinį atsaką į šiuos įvykius. Antinksčiai yra pagumburio-hipofizės-antinksčių žievės (HPA) ašies ir simpatijos-adrenomedulinės ašies dalis, kuri palaiko homeostazę streso metu (Ulrich-Lai ir kt., 2006). Buvo pranešta, kad šiluminio streso poveikis sukelia greitą HSP70 ekspresiją antinksčių žievėje (Huang ir kt., 2001). Šie baltymai dalijasi intraceluline prekyba, antigenų pateikimu, apoptoze ir daugeliu kitų veiksmų (Khar ir kt., 2001). Buvo aprašyta, kad egzogeniniai hormonai arba trukdžiai endogeniniams hormonams kritiniais vystymosi laikotarpiais gali turėti nuolatinį poveikį fiziologiniams ir elgesio keliams, kuriuos reguliuoja pagumburio neuroendokrininės grandinės (Gore ir Patisaul, 2010). Neuroendokrininis sutrikimas taip pat buvo aprašytas siekiant išplėsti endokrininės sistemos sutrikimo sąvoką, kad apimtų visą integracinės fiziologijos sritį; todėl tai daugiau nei hormoninis sutrikimas (Waye ir Trudeau, 2011). Neuroendokrininės sistemos reguliavimo, metabolizmo ir dietos / mikrobiotos pokyčiai laikomi uždegimo ir polinkio į depresiją priežastimi (Huang ir kt., 2019). Buvo teigiama, kad depresija – vienas iš neuropsichiatrinių sutrikimų – ir uždegimas turi dvipusį ryšį. Nors depresija skatina uždegimines reakcijas, uždegimas skatina neuropsichiatrinius sutrikimus, įskaitant depresiją (Bauer ir Teixeira, 2019). Fluoksetinas, klasikinis antidepresantas, yra vienas iš rinkoje esančių vaistų, skirtų depresijai gydyti. Dabar jis laikomas nauju neuroendokrininės sistemos ardikliu.

Šis fluoksetino poveikis yra šalutinis poveikis, o ne pagrindinis terapinis taikinys žinduoliams (León-Olea ir kt., 2014). Todėl reikia saugesnių antidepresantų, neturinčių šalutinio poveikio neuroendokrininei būklei. Moliūgai (Cucurbita pepo L.) yra ekonomiškai svarbi rūšis, auginama visame pasaulyje. Jie turi naudos mitybai ir sveikatai, nes juose gausu fenolių, flavonoidų, amino rūgščių, angliavandenių ir vitaminų (Wang ir kt., 2002). Keletas tyrimų atskleidė, kad moliūgai turi didelį biologinį aktyvumą, pvz., antidiabetinį, priešvėžinį, antioksidacinį, priešuždegiminį, nuovargį ir į antidepresantą panašų poveikį (Wang ir kt., 2012; Zhang ir kt., 2012; Nawirska-Olszańska ir kt. al., 2013; Kim Nr ir kt., 2016). Tradicinė medicina, daugiausia ajurvedos sistemos ir kinų medicina, naudojo skirtingas moliūgo dalis, įskaitant vaisių ir sėklų minkštimą (Perez Gutierrez, 2016). Sweetme Sweet Pumpkin (SSP) ir Cucurbita moschata Duch antidepresinis veiksmingumas anksčiau buvo išbandytas in vivo tyrime, naudojant priverstinio plaukimo testą (FST) sukeltą depresijos gyvūnų modelį ir buvo lyginamas su fluoksetinu (Kim Nr ir kt., 2016). . Vienoje iš palyginti neseniai pateiktų apžvalgų buvo apibendrinta, kad antidepresantų maisto produktų, tokių kaip moliūgų sėklos, antidepresantų maisto balas yra 47 procentai, o tai suteikia antidepresantą panašų poveikį (Lachance ir Ramsey, 2018). Neseniai Dotto ir Chacha pritarė atlikti daugiau su gyvūnais ir klinikiniais tyrimais pagrįstų tyrimų, kad patvirtintų moliūgų sėklų poveikį depresijai (Dotto ir Chacha, 2020). Šie pranešimai paskatino išbandyti moliūgų veiksmingumą mažinant lėtinio streso poveikį antinksčiams. Todėl šis tyrimas buvo atliktas siekiant įvertinti geriamojo Cucurbita pepo L. (CP) ekstrakto poveikį lėtinio nenuspėjamo lengvo streso (CUMS) sukelto elgesio, biochemijos ir antinksčių struktūros mažinimui ir ištirti šio poveikio mechanizmą. .

MEDŽIAGOS IR METODAI

Moliūgų ekstrahavimas ir dozavimas

Cucurbita pepo L. (čekio pavyzdys: AQJ_95) buvo įsigytas iš vietinės Džidos, Saudo Arabijos, rinkos. Jie buvo identifikuoti Karaliaus Abdulazizo universiteto herbariume, naudojant herbariumo ir KSA floros pavyzdžius (Chaudhary, 2001). Vaučerių pavyzdžiai buvo deponuoti herbariuje. CP nustatė autoriai ir jį patikrino botanikas iš Karaliaus Abdulazizo universiteto Mokslo fakulteto. CP ekstrahavimas buvo atliktas pagal ankstesnius tyrimus (Wang ir kt., 2012). Neapdoroti vaisiai su žievele buvo supjaustyti pjaustykle ir išdžiovinti naudojant liofilizatorių (FD5508; ilShinBioBase Co., Ltd., Korėja), o po to susmulkinti naudojant elektrinę šlifavimo mašiną. Milteliai buvo pertrinami per 40-tinklelio sietelį, kad gautųsi smulkūs milteliai, ir laikomi sandariame inde. Išdžiovinti milteliai (50 g) sumaišyti su 450 ml 80 procentų etanolio ir palikti 1 dieną 37 °C temperatūroje purtyklėje (JSSI-100T; JS Research Inc., Compact Shaking Incubator., Korėja) ir po to antrą dieną filtruojamas su medvilne ir filtravimo popieriumi. Šis ekstrahavimo procesas buvo pakartotas du kartus 37 laipsnių temperatūroje, kad būtų gautas etanolio ekstraktas.

CP sudedamųjų dalių identifikavimas

PE cheminė sudėtis buvo ištirta naudojant pėdsakų dujų chromatografiją GC-TSQ Evo 8000 masės spektrometrą (Thermo Scientific, Austin, TX, JAV) su tiesiogine kapiliarine kolonėle TG-5MS ( 30 m × 0,25 mm × 0,25 µm plėvelės storio). Kolonėlės krosnies temperatūra iš pradžių buvo nustatyta iki 50 laipsnių, po to padidinta 5 laipsniais C/min iki 250 laipsnių C ir palaikoma 2 minutes, o po to padidinta iki galutinės 300 laipsnių temperatūros 25 laipsnių per minutę ir palaikoma 2 minutes. Injektoriaus ir MS perdavimo linijos temperatūra buvo palaikoma atitinkamai 270 ir 260 laipsnių C; helis buvo naudojamas kaip nešančiosios dujos, esant pastoviam 1 ml/min srauto greičiui. Tirpiklio uždelsimas buvo 4 min., o praskiesti 3 µl mėginiai buvo įšvirkščiami automatiškai, naudojant automatinį mėginių ėmiklį AS1300, sujungtą su GC be padalijimo režimu PTV purkštuve. EI masės spektrai buvo renkami esant 70 eV jonizacijos įtampai m/z 50–650 diapazone viso skenavimo režimu. Jonų šaltinio temperatūra buvo nustatyta 250 laipsnių. Komponentai buvo identifikuoti palyginus jų masių spektrus su WILEY 09 ir NIST 14 masių spektrų duomenų bazėmis, kurios naudojamos nežinomų komponentų cheminei sudėčiai identifikuoti ir tirti bet kuriame ekstrakte (Wiley, 2006; Mikaia ir kt., 2014). Analizė buvo atlikta kokybiniu būdu, naudojant Thermo Scientifific™ Xcalibur™ 2.2 programinę įrangą, o visos vertės buvo pateiktos santykiniais procentais (Abd El-Kareem ir kt., 2016).

Eksperimentinis dizainas

Šį tyrimą patvirtino Karaliaus Abdulazizo universiteto Medicinos fakulteto Biomedicininių tyrimų etikos komitetas, Džida, KSA (nuorodos numeris {{0}}). Šiame tyrime iš King Fahd medicinos tyrimų centro (KFMRC) buvo gauta keturiasdešimt 150–200 g sveriančių ir 2–3 mėnesių amžiaus albinosų žiurkių patinų. Prieš pradedant eksperimentą, žiurkės buvo paliktos 1 savaitę aklimatizuotis prie laboratorinių sąlygų. Dešimt žiurkių buvo paskirta kaip kontrolinė grupė, kuri nebuvo veikiama CUMS. Kitoms trisdešimčiai žiurkių 4 savaites buvo taikoma CUMS procedūra, kuri apėmė įvairių tipų stresorius skirtingu dienos metu, kad būtų išvengta pripratimo prie streso. CUMS procedūra buvo išsamiai aprašyta ankstesniuose darbuose (Ayuob ir kt., 2016; Ali ir kt., 2017) ir parodyta 1 lentelėje. Žiurkės, paveiktos CUMS, buvo suskirstytos į 3 grupes (n 10). Neapdorota grupė (CUMS) 2 savaites gavo nešiklio 0,03 procento karboksimetilceliuliozės (CMC-Na) zondu. FLU gydyta grupė gavo FLU (Dar Al Dawa Pharmaceuticals Co., Ltd., Amanas, Jordanija) – antidepresantą, naudojamą farmakologiniam patvirtinimui, ištirpintą 0,03 proc. CMC-Na, 20 mg/kg doze per skrandžio zondą (Li ir kt., 2014). CP gydyta grupė gavo CP ekstraktą, ištirpintą distiliuotame vandenyje 100 mg/kg doze zondu 2 savaites pagal Wang ir kt. (2012).

Elgesio pokyčių įvertinimas

FST buvo atlikta po 4 savaičių, siekiant patvirtinti CUMS poveikį žiurkėms (Ali ir kt., 2017). Šio bandymo metu kiekviena žiurkė buvo patalpinta į stiklinį cilindrinį indą (aukštis 20 cm, skersmuo 14 cm) su 15 cm vandens 25 ± 2 °C temperatūroje. Žiurkė buvo filmuojama 6 minutes naudojant elgsenos programinę įrangą (Noldus Information Technology, EthoVision). XT®), o bendras laikas, praleistas nejudėdamas per 6 minutes, buvo išmatuotas techniko, aklu nuo eksperimentinių grupių. Buvo nustatytas bendras laikas, sekundėmis, kurį žiurkės praleido be galūnių judesių, išskyrus nedidelį judesį, būtiną, kad pelė išliktų ant vandens, „nejudrumo laikas“ per 6 minutes.

Biocheminiai metodai

Praėjus 24 valandoms po elgesio testo, kraujo mėginiai buvo paimti iš žiurkių intraorbitinio sinuso, anestezavus 4 procentų izofluranu (SEDICO Pharmaceuticals Company, Kairas, Egiptas) 100 procentų deguonies. Po to žiurkės buvo numarintos išnirusios gimdos kaklelio. Kraujo mėginiai buvo centrifuguojami 3, 000 aps./min. greičiu 15 minučių 4 °C temperatūroje, kad būtų gautas serumas, ir buvo laikomi –18 °C temperatūroje biocheminiam įvertinimui. Kortikosterono lygis (ALPCO Diagnostics, Orangeburg, NY, Jungtinės Valstijos) buvo įvertintas naudojant su fermentais susietus imunosorbento tyrimo rinkinius pagal gamintojo instrukcijas. Remiantis gamintojo instrukcijomis, TNF ir IL-6 (Quantakin R&D sistema, JAV rinkinys) buvo įvertintas naudojant su fermentu susietą imunosorbentinį tyrimą. Kiekvieno mėginio optinis tankis buvo nustatytas dviem egzemplioriais, naudojant mikroplokštelės ELISA skaitytuvą, nustatytą 450 nm. Malondialdehido (MDA) lygiui spektrofotometriškai išmatuoti 535 nm bangos ilgio bangos ilgiui buvo naudojamas tiobarbitūro rūgšties (TBARS) tyrimo rinkinys (Biodiagnostic; Egiptas) (Gamal ir kt., 2018). Superoksido dismutazės (SOD) lygis buvo matuojamas naudojant SOD tyrimo rinkinį (Biodiagnostic; Egiptas) (Packer, 2002). Glutationo peroksidazės (GPX) lygio įvertinimas atliktas naudojant GPX rinkinį (Randox Labs, Crumlin, Jungtinė Karalystė). Norint kiekybiškai įvertinti katalazės (CAT) aktyvumą, naudojant tyrimo rinkinius (Biodiagnostic; Egiptas), buvo sukurta bandymo ir visų mėginių kalibravimo kreivė. Metodas aprašytas anksčiau (Gamal ir kt., 2018).

Kiekybinė realaus laiko PGR

RNR išskyrimas iš audinių mėginių buvo atliktas naudojant TriFast™ reagentą (PeqLab, Vokietija, Kat. Nr.: {{0}}), kaip aprašyta gamintojo protokole. Išgrynintos RNR koncentracija buvo įvertinta naudojant NanoDrop 2000c spektrofotometrą (Thermo Scientific, JAV). Iš kiekvieno mėginio išskirta RNR buvo atvirkštinė transkribuota naudojant SensiFAST™ cDNR sintezės rinkinį, skirtą RT-qPCR (Bioline USA Inc., Jungtinės Valstijos, Kat. Nr.: BIO-65053), vadovaujantis gamintojo instrukcijomis. Susintetinta cDNR buvo laikoma -80 laipsniu iki panaudojimo qRT-PGR. qRT-PGR reakcijos buvo atliktos naudojant SensiFAST™ SYBR Lo-ROX rinkinį (Bioline USA Inc., Jungtinės Valstijos, kat. Nr.: BIO-94002) ​​su Applied Biosystems 7500 realaus laiko PGR aptikimo sistema (Life Technology). , Jungtinės Valstijos). Šiame tyrime naudojami genų specifiniai pradmenys žiurkėms buvo sukurti Primer3 programine įranga (v.0.4.0), o jų specifiškumas patikrintas naudojant NCBI/Primer-BLAST programą. Tada gruntai buvo įsigyti iš Willowfort™ (Jungtinė Karalystė). Pradmenys buvo GAPDH (5′-TGCACCACCAACTGCTTAGC-3′, 5′-GGC ATGGACTGTGGTCATGAG-3′), kaspazė-3 (pirmyn 5- TGT ATGCCTACCCTG, atvirkštinis 5-GCGCAAAGT GACTGGATGAACC-3), HSP70 (5′-ACGAGGGTCTCAAGG GCAAG-3′, 5′-CTCTTTCTCAGCCAGCGTGTTAG-3′). Ki67 (pirmyn 5-AGAAGAGCCCACAGCACAGAGAA-3, atvirkštinė 5-AGAAGAGCCCACAGCACAGAGAA 3). PGR mišinys buvo paruoštas taip: 10 µl SensiFASTTM SYBR Lo-ROX mišinio, 0,8 µl priekinio pradmens, 0,8 µl atvirkštinio pradmenų, 2 µl šablono cDNR ir 6,4 µl vandens be nukleazės. Reakcijos mišinys buvo perkeltas į terminį ciklą, kuris anksčiau buvo užprogramuotas palaikyti 95 laipsnių temperatūroje 2 minutes, po to sekė 40 ciklų 95 laipsnių 15 s, o po to 60 laipsnių 30 s. Kiekviename eksperimente buvo vykdoma neigiama kontrolinė reakcija be šablono. Lydymosi kreivės analizė buvo atlikta siekiant įrodyti PGR produktų specifiškumą, o kiekvienos reakcijos Ct vertė buvo gauta iš amplifikacijos diagramų. Santykinis kiekvieno geno ekspresijos kiekybinis įvertinimas audinių mėginiuose buvo apskaičiuotas naudojant lyginamąjį slenksčio (ΔΔCt) metodą, kai vidinis kontrolės genas yra GAPDH. Bendram lenkimo pokyčiui jis buvo apskaičiuotas ir tiesinis pagal 2-ΔΔCt aritmetinę formulę.

Histologiniai metodai

Eksperimento pabaigoje ir po to, kai žiurkės buvo anestezuotos, buvo atidarytas pilvas ir išpjaustyta dešinė antinksčių liauka. Parafino blokams gauti buvo atlikta antinksčių fiksacija 10 proc. neutraliame buferiniame formaline ir tolesni procesai. Buvo paruoštos 4- μm storio parafino sekcijos ir nudažytos hematoksilinu ir eozinu (H&E). Be to, kitos parafino sekcijos buvo imunohistochemiškai nudažytos naudojant streptavidino-biotino-peroksidazės metodą. Skaidrės buvo inkubuojamos per naktį 4 laipsnių temperatūroje, o po to buvo inkubuojamos su monokloniniu anti-Ki67 (Dako Cytomation, Jungtinės Valstijos, skiedimu 1:1, 000), siekiant parodyti ląstelių proliferaciją. Be to, polikloninis anti-kaspazės{10}} antikūnas (Santa Cruz Biotechnology, Jungtinės Valstijos, praskiedimas santykiu 1:1, 000) buvo naudojamas apoptozei nustatyti. Taip pat buvo panaudotas polikloninis antikūnas prieš šilumos šoko baltymą -70 (HSP70) (Dako, Carpinteria, CA, Jungtinės Valstijos, praskiedus 1:1, 000). Buvo naudojamas atitinkamas biotinilintas konjuguotas antrinis antikūnas iš Dako dažymo sistemos. Skaidrės, nudažytos tik antriniu antikūnu, buvo naudojamos kaip neigiamos kontrolės. Branduoliai buvo nudažyti hematoksilinu. Rudas citoplazminis dažymas buvo laikomas teigiama reakcija. Dažytos dalys buvo ištirtos ir nufotografuotos naudojant Olympus Microscope BX-51 (Olympus), prijungtą prie skaitmeninio fotoaparato ir kompiuterio. Pusiau kiekybinė antikūnų imunoreaktyvumo analizė buvo atlikta Pro Plus vaizdo analizės programine įranga. Imunopozityvios reakcijos procentinis plotas buvo įvertintas 30 laukų, padidinant × 400. Teigiamos ląstelės buvo skaičiuojamos 1,0 mm2 ploto, kaip aprašyta Zhou ir kt. (2016). Iš kiekvienos skaidrės buvo ištirti mažiausiai penki laukai, o kiekvieno gyvūno vidurkis buvo apskaičiuotas. Morfometrinei analizei buvo ištirtos keturios kiekvieno gyvūno sekcijos (padidinimas × 100). Skirtingų antinksčių zonų storis matuojamas mikrometrais. Antinksčių žievės storis buvo gautas išmatavus atstumą tarp medulla ir antinksčių kapsulės tiesia linija, po vieną matavimą atliekamas kiekviename antinksčių žievės kvadrante.

Statistinė analizė

REZULTATAI

Elgesio rezultatai

CP ekstrakto analizės naudojant GC-MS rezultatai

Biocheminis įvertinimas

Kortikosterono lygis serume

Kortikosterono lygis reikšmingai padidėjo (p < {0}},001) negydytoms žiurkėms, kurioms buvo taikomas CUMS, palyginti su kontrolinėmis žiurkėmis, o tų, kurios buvo gydomos FLU ir CP, reikšmingai sumažėjo (p < 0,001). kortikosterono koncentracija serume.

TNF- ir IL-6 lygiai serume

MDA, SOD, GPX ir CAT lygiai serume

Ki67, kaspazės-3 ir HSP70 genų ekspresija

RT-PGR atskleidė nežymiai aukštą Ki67 geno ekspresiją CUMS grupės antinksčių liaukose, palyginti su kontroline grupe, o FLU ir CP gydytų grupių ekspresija buvo žymiai aukštesnė, palyginti su CUMS paveikta grupe (3E pav.). . Kaspazės-3 genų ekspresija reikšmingai padidėjo (p < 0.001)="" cums="" grupės="" antinksčių="" liaukose,="" palyginti="" su="" kontroline="" grupe,="" o="" flu-="" ir="" cp="" gydytose="" grupėse="" nustatytas="" reikšmingas="" sumažėjimas,="" palyginti="" su="" cums="" paveiktų="" grupių="" grupe="" (3f="" pav.="" kalbant="" apie="" hsp70="" geno="" ekspresiją,="" ji="" užfiksavo="" žymiai="" didesnį="" (p="">< 0,001)="" lygį="" cums="" grupės="" antinksčių="" liaukose="" nei="" cums="" grupėje.="" kontrolinėje="" grupėje,="" o="" flu="" ir="" cp="" gydytų="" grupių="" skaičius="" sumažėjo="" nežymiai,="" palyginti="" su="" cums="" paveikta="" grupe="" (3g="">

Histopatologinis įvertinimas

DISKUSIJA

Šiuolaikinė visuomenė akivaizdžiai kupina streso, kuris gali kilti dėl kasdienių problemų, sveikatos priežiūros ir su darbu susijusių problemų. Šie stresoriai gali sukelti vadinamuosius su stresu susijusius sutrikimus (Clayton ir McCance, 2014). Šiame tyrime Cucurbita pepo L. minkštimo ir žievelės etanolinis ekstraktas buvo naudojamas siekiant ištirti jo potencialą palengvinti CUMS sukeltą depresinį elgesį ir jo poveikį antinksčiams. Tai įrodė a

reikšmingas kortikosterono koncentracijos serume padidėjimas ir patvirtintas ilgesniu nejudrumo laiku per FST. Šie rezultatai atitiko anksčiau praneštus (Tang ir kt., 2015). Buvo pranešta, kad tiek TNF-, tiek IL-6 dalyvauja depresijos patogenezėje (Taraz ir kt., 2015; Pedraz-Petrozzi ir kt., 2020). Buvo pranešta, kad pelės, kurioms trūksta IL-6 arba TNF receptorių, yra atsparios depresiniam elgesiui (Viana ir kt., 2010). Todėl jie buvo įvertinti šiame tyrime ir pastebėta, kad žiurkių, kurios 4 savaites buvo veikiamos CUMS, serume žymiai padidėjo TNF ir IL{10}}, o tai rodo, kad joms buvo depresija. Šią išvadą patvirtino Numakawa ir kt. (2014) pelėms, turinčioms elgsenos neviltį, ir Taraz ir kt. (2015) pacientams, sergantiems depresija. Šiame tyrime moliūgų ekstrakto vartojimas buvo susijęs su depresinio elgesio pagerėjimu, o tai matyti iš reikšmingo FST nejudrumo laiko sumažėjimo ir patvirtinto reikšmingo kortikosterono bei uždegiminių citokinų TNF- ir IL-6 sumažėjimo. serumas. Šias išvadas patvirtino Kim Nr ir kt. (2016), kurie pranešė, kad SSP 28 dienas sumažino uždegiminių citokinų lygį depresija sergančiose žiurkėse.

Priešuždegiminis moliūgų aktyvumas gali būti siejamas su aktyviais moliūgų junginiais, tokiais kaip oleino ir palmitino rūgštys bei estradiolis. Sumažėjęs oleino rūgšties, palmitino rūgšties ir linolo rūgšties reguliavimas buvo aprašytas sergant depresija (Conklin ir kt., 2010; Martín ir kt., 2010). Buvo pranešta, kad oleino rūgšties sukelta neuroprotekcija yra susijusi su jos priešuždegiminiu poveikiu, kurį sukelia peroksisomų proliferatoriaus aktyvuoto gama receptorių (PPAR-) aktyvacija (Song ir kt., 2019). Be to, buvo pranešta, kad palmitino rūgštis slopina fosfolipazę A (2), todėl ji laikoma priešuždegiminiu junginiu (Aparna ir kt., 2012). Estradiolis buvo vienas iš šio tyrimo metu aptiktų moliūgų junginių. Buvo pranešta, kad estradiolis sukelia priešuždegiminį poveikį ir vėliau palengvina depresinį elgesį (Xu ir kt., 2015). Kitas mechanizmas, kuriuo estradiolis gali sukelti antidepresinį poveikį, yra smegenų kilmės neurotrofinio faktoriaus (BDNF) ekspresijos ir ERK fosforilinimo reguliavimas aktyvinant ER- smegenyse (Yang ir kt., 2010). Šiame tyrime MDA koncentracija serume buvo padidinta, o SOD, GPX ir CAT lygiai sumažėjo CUMS paveiktose žiurkėse. Panašūs pokyčiai buvo užfiksuoti po CUMS poveikio ankstesniuose tyrimuose, ir jie pridūrė, kad šie biocheminiai pokyčiai sukėlė oksidacinį stresą ir pablogino HPA (Nabavi ir kt., 2015). Liu T. ir kt. (2015) taip pat pranešė, kad depresijos išsivystymas gali būti siejamas su mažu antioksidantų kiekiu organizme.

Dažnai buvo pranešta apie antioksidacines moliūgų vaisių ekstrakto savybes (Bahramsoltani ir kt., 2017). Be to, pranešta, kad Cucurbita pepo L. minkštimas ir žievelė apdoroja didesnį antioksidacinį aktyvumą nei kitos dalys, pavyzdžiui, sėklos (Oyeleke ir kt., 2019). Daugelyje ankstesnių tyrimų moliūgų ekstraktas žymiai padidino SOD ir GPX kiekį ir sumažino MDA pelių serume (Guo-Hua ir kt., 2000; Dang, 2004), ir šis poveikis taip pat buvo užfiksuotas šiame tyrime. Todėl antioksidacinis moliūgų aktyvumas gali būti už jo antidepresinio poveikio, kuris akivaizdus šiame tyrime. Tai atitinka Kim Nr ir kt. pastabas. (2016). Buvo pranešta, kad natūralūs produktai, turintys priešuždegiminį, antioksidacinį ir nuovargį mažinantį poveikį, taip pat turi antidepresantą panašų poveikį (Jeong ir kt., 2015). Visos šios ankstesnės veiklos buvo įrodytos moliūguose. Padidėjusi citoplazminė antinksčių žievės ląstelių vakuolizacija, pastebėta šiame tyrime CUMS grupėje, gali būti siejama su didėjančia lipidų, kurie yra kortizolio sintezės akmuo, paklausa. Cigankova ir kt. (2005) pastebėjo, kad dėl ilgalaikės eksperimentinės hiperdinamikos susilieja daugybė žievės ląstelių citoplazminių lipidų lašelių. Šiuose lipidų lašeliuose yra cholesterolio, kuris yra pagrindinis steroidinių hormonų sintezės pirmtakas.

Tačiau Koldysheva ir Lushnikova (2008) pranešė, kad dėl streso labai sumažėjo lipidų lašelių antinksčių žievės ląstelėse, ypač ZF (Koldysheva ir Lushnikova, 2008). Buvo aprašyta, kad fizinio streso metu skausmo dirgikliai perduodami į pagumburį, todėl CRH išsiskiria į hipofizės vartų sistemą, o tai padidina AKTH sekreciją ir stimuliuoja jo receptorius ZF ir ZR, kad padidėtų kortizolio sekrecija (Patti ir kt. , 2018). Anksčiau buvo pranešta apie sutirštėjusią antinksčių kapsulę ir trabekules, pastebėtas CUMS paveiktose žiurkėse (El-Desouki ir kt., 2011; Altayeb ir Salem, 2017) dėl padidėjusios fibroblastų kolageno sintezės, veikiant imobilizacijos stresui. Daugelyje CUMS paveiktų žiurkių antinksčių ląstelių buvo giliai nusidažę branduoliai, o tai rodo, kad jos patyrė apoptozę, kurią patvirtino kaspazės -3 imunohistocheminis dažymas. Panašų stebėjimą pranešė Altayebas ir Salemas (2017), tirdami imobilizacijos streso poveikį žiurkių antinksčiams. Liu Q. ir kt. (2015) pranešė, kad per didelis oksidacinis stresas, akivaizdus po CUMS poveikio šiame tyrime, keičia „su apoptoze susijusių genų“ ekspresijos lygius ir sukelia ląstelių apoptozę bei degeneraciją per Bcl-2, Bax ir kaspazės signalizacijos kelius. -3. Šis mechanizmas buvo patvirtintas šiame tyrime RT-PGR, kuris atskleidė reikšmingą kaspazės-3 geno ekspresijos reguliavimą.

Peržiūrėjus literatūrą, Cucurbita pepo tiesioginio poveikio kaspazės{0}} sąlygojamai apoptozei skirtinguose audiniuose nebuvo. Atrodo, kad antinksčių liaukose aptiktų kaspazės -3teigiamų apoptozinių ląstelių sumažėjimas buvo susijęs su šiame tyrime užfiksuotu antioksidaciniu Cucurbita pepo poveikiu. Tai patvirtina daugelis ankstesnių tyrimų, atliktų su kitais augalais ir žolelėmis, turinčiais reikšmingą antioksidacinį poveikį (Banagozar Mohammadi ir kt., 2019; Ghazizadeh ir kt., 2020). Šis tyrimas parodė, kad CUMS poveikis padidino Ki67- teigiamų ląstelių skaičių antinksčių žievėje, o tai buvo akivaizdžiai matoma ZF, o tai rodo padidėjusį proliferuojančių ląstelių skaičių, todėl šio sluoksnio storis žymiai padidėjo. Kita vertus, Ki67-teigiamų proliferuojančių ląstelių skaičius nežymiai sumažėjo smegenyse, reaguojant į CUMS. Šie stebėjimai atitiko Ulrich-Lai ir kt. (2006), kurie pranešė apie Ki67-teigiamų ląstelių branduolių padidėjimą tik išorinėje ZF po patirto lėtinio kintamo streso, o smegenyse pasireiškė ląstelių hipertrofija, o ne hiperplazija. Be to, Laborie ir kt. (2003) pranešė apie bendrą smegenų funkcijos padidėjimą po ilgalaikio streso,

rodo, kad lėtinis stresas gali sukelti meduliarinę hipertrofiją. Šiame tyrime moliūgų ekstrakto vartojimas žymiai padidino ląstelių dauginimąsi, o tai matyti iš Ki67 geno padidėjimo ir imuninės ekspresijos beveik visose zonose ir antinksčių smegenyse, palyginti su CUMS. Tai paaiškino šiame tyrime užfiksuotą padidėjusį liaukų zonų storį. Jis taip pat gali kompensuoti apoptotinį poveikį, kurį sukelia CUMS poveikis. Šią išvadą patvirtina Kim Hy ir kt. (2016). Šiame tyrime CUMS poveikis žymiai padidino HSP70 genų ekspresiją ir imuninę ekspresiją visose antinksčių zonose. Atsižvelgiant į tai, Zheng ir kt. (2008) taip pat įrodė, kad padidinta HSP70 ekspresija po stresinių sąlygų moduliuoja uždegiminius atsakus, slopindama uždegiminio transkripcijos faktoriaus, branduolinio faktoriaus-kappa B (NF-kappaB) aktyvavimą. Be to, HSP70 gali tiesiogiai trukdyti apoptozei ir nekrozei (Yenari ir kt., 2005). Visai neseniai Li ir kt. (2019) pranešė apie HSP70 ekspresijos padidėjimą kiaulių antinksčių audinyje po karščio streso, o tai rodo HSP70 vaidmenį antinksčių pažeidime ir pabrėžia jo svarbą uždegiminėms reakcijoms.

Manoma, kad greita HSP70 indukcija reaguojant į stresą yra būtina ląstelių apsaugos procesui. Mūsų tyrime CUMS paveiktų žiurkių gydymas moliūgais buvo susijęs su nereikšmingu HSP70 ekspresijos sumažėjimu, kuris buvo susijęs su sumažėjusia apoptoze ir uždegiminiais atsakais. Tai gali reikšti teigiamą santykinai aukšto HSP70 lygio, kurį sukelia tiek FLU, tiek CP, poveikį, nes dėl to sumažėjo kaspazės -3 sukeliama apoptozė ir išsiskyrė uždegiminiai citokinai. Nors moliūgų poveikis šilumos šoko baltymų šeimai anksčiau nebuvo aprašytas, oleino rūgštis, kuri yra pagrindinė šiame tyrime naudotų moliūgų sudedamoji dalis, sumažina HSP60 ekspresiją žmogaus T limfocitų ląstelių linijoje (Martins De Lima). ir kt., 2004), o tai patvirtina mūsų tyrimo išvadas. Siūlomas Cucurbita pepo, kaip į antidepresantus panašios medžiagos, veikimo mechanizmas apibendrintas 7 paveiksle. Vienas iš šio tyrimo apribojimų buvo nesugebėjimas toliau tirti CP antidepresinio poveikio mechanizmo, todėl tolesnis tyrimas. paskatino tai daryti. Apibendrinant, šis tyrimas pateikia moksliškai pagrįstų įrodymų apie Cucurbita pepo L. ekstrakto veiksmingumą mažinant CUMS sukeltus elgesio ir biocheminius pokyčius, taip pat histopatologinį poveikį antinksčiams. Šie poveikiai buvo akivaizdūs dėl sumažėjusio apoptozės ir HSP70 ekspresijos reguliavimo ir atrodė, kad tai buvo susiję su Cucurbita pepo L. ekstrakto antioksidaciniu ir priešuždegiminiu poveikiu. Nors šiame tyrime ir kai kuriuose kituose naujausiuose tyrimuose buvo užfiksuotas į antidepresantus panašus Cucurbita pepo poveikis ir ištirtas jo mechanizmas, norint patvirtinti šį poveikį žmonėms, reikia atlikti tolesnius tyrimus, įskaitant klinikinius tyrimus.

Tai mūsų produktas nuo nuovargio! Norėdami gauti daugiau informacijos, spustelėkite paveikslėlį!

NUORODOS

Abd-El-Kareem, MSMA, Rabbih, MAEF, Selim, ETM, Elsherbiny, EAE-M. ir El-Khateeb, AY (2016). GC/EIMS taikymas kartu su pusiau empiriniais skaičiavimais kai kurių lakiųjų komponentų identifikavimui ir tyrimui baziliko eteriniame aliejuje.

Altayeb, Z. ir Salem, M. (2017). Šviesos ir elektronų mikroskopinis tyrimas dėl imobilizacijos streso poveikio suaugusių žiurkių antinksčių žievei ir galimo vitamino EJ Med. Histologija 1, 44–56.

Aparna, V., Dileep, KV, Mandal, PK, Karthe, P., Sadasivan, C. ir Haridas, M. (2012). N-heksadekano rūgšties priešuždegiminė savybė: struktūriniai įrodymai ir kinetinis įvertinimas. Chem. Biol. Drug Des. 80, 434–439.

Bahramsoltani, R., Farzaei, MH, Abdolghaffari, AH, Rahimi, R., Samadi, N., Heidari, M. ir kt. (2017). Cucurbita Moschata Duchesne vaisių žievelės fitocheminių medžiagų, antioksidantų ir nudegimų žaizdų gydymo veiklos įvertinimas. Iranas J. Basic Med. Sci. 20, 798–805. doi:10.22038/ IJBMS.2017.9015

Banagozar Mohammadi, A., Torbati, M., Farajdokht, F., Sadigh-Eteghad, S., Fazljou, SMB, Vatandoust, SM ir kt. (2019). Sericinas mažina suvaržymo streso sukeltą depresinį ir į nerimą panašų elgesį, moduliuodamas oksidacinį stresą, neurouždegimą ir apoptozę prefrontalinėje žievėje ir hipokampe.

Bauer, ME ir Teixeira, AL (2019). Psichikos sutrikimų uždegimas: kas pirmiausia? Ann. N. Y akad. Sci. 1437, 57–67.

Chaudhary, S. (2001). Saudo Arabijos Karalystės flora: Iliustruotas Rijadas: Žemės ūkio ir vandens ministerija, Nacionalinis herbariumas, Nacionalinis žemės ūkio ir vandens tyrimų centras, 2. Rijadas: Anatomija ir morfologija.

Cigankova, V., Zibrin, M., Bod A, K. ir Holovska, K. (2005). Ilgalaikės eksperimentinės hipodinamijos poveikis japonų putpelių antinksčiams: ir ultrastruktūrinis tyrimas. BIULETENIS-VETERINARIJOS INSTITUTAS PULAWY 49, 449.

Clayton, M. ir McCance, K. (2014). „Stresas ir ligos“ patofiziologijoje – suaugusiųjų ir vaikų ligų biologinis pagrindas. Redaktoriai K. McCance, S. Huether, V. Brashers ir N. Rote. 7-asis leidimas (JAV: Canada Elsevier).

Conklin, SM, Runyan, CA, Leonard, S., Reddy, RD, Muldoon, MF ir Yao, JK (2010). Su amžiumi susiję N-3 ir N-6 polinesočiųjų riebalų rūgščių pokyčiai priekinėje cingulinėje žievėje asmenų, sergančių didžiuoju depresijos sutrikimu. Prostaglandinai Leukot. Essentas. Riebalų rūgštys 82, 111–119.

Doronas, R., Lotanas, D., Versano, Z., Benatav, L., Franko, M., Armoza, S. ir kt. (2014). Gydymas escitalopramu arba nauju vaistažolių mišiniu patiriant stresą arba po jo sumažina nerimą panašų elgesį dėl kortikosterono ir BDNF modifikacijų.

Dotto, JM ir Chacha, JS (2020). Moliūgų sėklų, kaip funkcinio maisto ingrediento, potencialas: apžvalga. Mokslinis Afr. 10, e00575.

Duke, JA (1992). GRAS žolelių ir kitų ūkinių augalų fitocheminių sudedamųjų dalių vadovas. [Prisijungęs]. Boca Raton: FL: CRC Press.

El-Desouki, N., El-Refaiy, A., Abdel-Azeem, H. ir El-Baely, M. (2011). Imobilizacijos poveikio histologiniai ir ultrastruktūriniai tyrimai

Albino žiurkės antinksčių žievės stresas ir diazepamo gerinantis vaidmuo. J. Egiptas. Ger. Soc. Zoola 62, 25–45. Gamal, M., Moawad, J., Rashed, L., Morcos, MA ir Sharawy, N. (2018).

Galimas tetrahidrobiopterino įsitraukimas į redokso homeostazės sutrikimą sergant sepsiu – sukelta smegenų disfunkcija. Brain Res. 1685, 19–28.

Gore, AC ir Patisaul, HB (2010). Neuroendokrininis sutrikimas: istorinės šaknys, dabartinė pažanga, ateities klausimai. Priekyje. Neuroendokrinolis. 31, 395–399.

Guo-Hua, X., Zhi-Hong, H. ir Yong-Fangl, W. (2000). Moliūgų polisacharido galimo priešnavikinio poveikio ir imunokompetencijos tyrimas. J. Wuhan Prof. Med. Coll. 28, 1–4.

Hema, R., Kumaravel, S. ir Alagusundaram, K. (2011). Murraya Koenigii bioaktyvių komponentų GC/MS nustatymas. J. Am. Sci. 7, 80–83. Huang, L., Mivechi, NF ir Moskophidis, D. (2001). Pagrindinės streso sukeltos Hsp70 molekulės reguliavimo ir funkcijos įžvalgos

Chaperone in vivo: pelių, kurių hsp70.1 arba hsp70.3 genas sutrikęs, analizė. Mol. Cel, Biol. 21, 8575–8591.

Huang, Q., Liu, H., Suzuki, K., Ma, S. ir Liu, C. (2019). Valgomo maisto susiejimas su nuotaika: dietos, dietinių antioksidantų ir depresijos apžvalga. Antioksidantai 8, 376. doi: 10.3390/antiox8090376

Jeong, HJ, Kim, JH, Kim, NR, Yoou, MS, Nam, SY, Kim, KY ir kt. (2015). Antidepresinis Stillen poveikis. Arch. Pharm. Res. 38, 1223–1231.

Jonnalagadda, SC, Suman, P., Morgan, DC ir Seay, JN (2017). 2 - skyrius. Naujausi betulino ir betulino rūgšties darinių, kaip terapinių agentų, sintezės ir taikymo pokyčiai, Natūralių produktų chemijos tyrimai. Redaktorius R. Atta Uras (Elsevier). Khar, A., Ali, AM, Pardhasaradhi, BY, Varalakshmi, CH, Anjum, R. ir Kumari, AL (2001). Streso atsako sukėlimas sukuria žmogaus naviko ląsteles

Kurkumino sukeltai apoptozei atsparios linijos: reaktyviųjų deguonies tarpinių medžiagų vaidmuo. Ląstelių streso šalininkai 6, 368–376. doi:10.1379/1466-1268(2001) 006<0368:iosrrh>2.0.co;2 Kikuchi, T., Ando, ​​H., Maekawa, KI, Arie, H., Yamada, T. ir Tanaka, R. (2015). Du nauji Ent-kaurane tipo diterpeno glikozidai iš cukinijų (Cucurbita Pepo L.) sėklų. Fitoterapija 107, 69–76. doi:10.1016/j.fifitote.2015.09.019 Kim, HY, Nam, SY, Yang, SY, Kim, HM ir Jeong, HJ (2016a). Cucurbita

Duch Moschata. O jo aktyvus komponentas karotinas efektyviai skatina imuninį atsaką aktyvindamas blužnies ir makrofagus. Imunofarmakolas. Imunotoksikolis. 38, 319–326.

Koldysheva, EV, ir Lushnikova, EL (2008). Ultrastruktūrinis žiurkės antinksčių žievės pertvarkymas po viso kūno hipertermijos. Bull. Exp. Biol. Med. 145, 650–655.

Metirapono sukeltas gliukokortikoidų išeikvojimas moduliuoja tirozino hidroksilazės ir feniletanolamino N-metiltransferazės genų ekspresiją žiurkės antinksčiuose necholinerginiu transsinapsiniu aktyvavimu. J. Neuroendokrinolis. 15, 15–23 d.

Lachance, LR ir Ramsey, D. (2018). Maistas nuo depresijos: įrodymais pagrįsta depresijos maistinių medžiagų profiliavimo sistema. World J. Psychiatry 8, 97–104.