Anastatica Hierochuntica etanolinių ir vandeninių ekstraktų antioksidacinis aktyvumas, fenolio profilis ir nefroprotekcinis potencialas prieš CCl{0}}sukeltą nefrotoksiškumą žiurkėms

Susisiekite:ali.ma@wecistanche.com

Tariq I. Almundarij ir kt

Santrauka:Kaff-e-Maryam (Anastatica hierochuntica L.) plačiai naudojamas įvairioms sveikatos problemoms gydyti, ypač siekiant palengvinti gimdymą ir palengvinti su reprodukcine sistema susijusius sutrikimus. Šiuo tyrimu buvo siekiama įvertinti A. hierofhantic etanolio (KEE) ir vandens (KAE) ekstrahavimo CCl4-sukeltas oksidacinis stresas ir nefrotoksiškumas žiurkėms, naudojant biocheminius žymenisinkstųfunkcijasir antioksidacinė būklė bei histopatologiniai inkstų audinio tyrimai.A. hierofante buvo 67,49 mg GAE g-1 visų fenolio junginių (TPC), 3,51 µg g-1 bendro karotinoidų (TC) ir 49,78 ir 17,45 mg QE g-1 bendro flavonoidų (TF) ir bendro flavonolių (TFL), atitinkamai. Gauta 128,71 µmol TE g-1 DPPH-RSA ir 141,92 µmol TE g-1 ABTS-RSA. A. hierofantikas pristatė viršininkąantioksidacinis aktyvumasslopindamas linolo rūgšties radikalus ir sudarydamas chelatinius oksidacinius metalus. HPLC analizė parodė 9 ir 21 fenolio rūgštį ir 6 ir 2 flavonoidus.KEEir KAE, kur vyrauja sinapo ir siringo rūgštys, atitinkamai. Injekcija į raumenis vit. E plius Se ir peroralinis KEE, KAE ir KEE plus KAE vartojimas esant 250 mg kg-1 kūno svorio reikšmingai atkūrė kreatinino, karbamido, K, bendro baltymų ir albumino kiekį serume. Be to, jie sumažino malondialdehidą (MOD), atkūrė redukuotą glutationą (GSH) ir padidino superoksido dismutazės (SOD) lygį. KEE, KAE ir KEE plus KAE apsaugojoinkstainuo CCl4-nefrotoksiškumo, nes jie daugiausia susilpnino sukeltą oksidacinį stresą. Iš visonefronasKEE, KAE ir KEE plius KAE sekcijoje buvo atitinkamai apie 83,27 proc., 97,62 proc. ir 78,85 proc. Tiek vit. E plius Se ir A. hierofantiniai ekstraktai susilpnino histopatologinius pokyčius CCl4-gydytose žiurkėse. Apibendrinant galima teigti, kad A. hierophantic, ypač KAE, turi potencialų gebėjimą atkurti oksidacinį stabilumą ir pagerintiinkstasfunkcija po CCl4ūminis inkstų pažeidimasgeriau nei KEE. Todėl A. hierophantic gali būti naudingas terapinis agentas gydant vaistų sukeltą nefrotoksiškumą.

Raktiniai žodžiai:Kaff-e-Maryam; polifenoliai; biologinis aktyvumas; antriniai metabolitai;inkstų žymenys; antioksidaciniai fermentai;inkstųdisfunkcija

Cistanche NZ užkerta kelią inkstų ligai, spustelėkite čia, kad gautumėte mėginį

1. Įvadas

Inkstų ligayra 9-a pagrindinė mirties priežastis, kurią sudaro daugiau nei 1 iš 7, ty 15 procentų JAV suaugusiųjų arba 37 milijonai žmonių.lėtinė inkstų liga(CKD) [1]. Pažymėtina, kad 2015 m. užfiksuota dažniausia ŠKL priežastis yra cukrinis diabetas, po kurio seka aukštas kraujospūdis ir glomerulonefritas [2]. Kitos CKD priežastys yra idiopatinės (dažnai susijusios su mažais inkstais inkstų ultragarsu) [3]. Anksčiau CCl4 buvo naudojamas metalų nuriebalinimui, sausam valymui, audinių dažymui, gesintuvų skysčiams ir grūdų fumigacijai [4]. Jis sukelia sunkius kepenų, plaučių ir sėklidžių bei kraujo sutrikimus, generuodamas aktyvius laisvuosius radikalus [5]. Remiantis Ogeturko ir kt. [6], šio tirpiklio poveikis sukelia ūminį ir lėtinį inkstų pažeidimą. Manoma, kad laisvųjų radikalų sukelta lipidų peroksidacija yra viena iš pagrindinių ląstelių membranų pažeidimo priežasčių, sukeliančių įvairias patologines sąlygas [7]. Reaktyvių radikalų susidarymas buvo susijęs su CCl4-sukeltam nefrotoksiškumui, kuris yra susijęs su lipidų peroksidacija ir disfunkcinių baltymų kaupimu, dėl kurio pažeidžiami inkstai [8]. Nuostabus, tradicinis vaistinių augalų panaudojimas pastaraisiais metais išaugo, o daugybė tyrimų patvirtino jų gydomąjį vaidmenį kovojant su keliomis ligomis [9–12].

2. Medžiagos ir metodai

2.1. Mėginio paruošimas

Kaff-e-Maryam (A. hierophantic L.) augalo pavyzdys buvo įsigytas iš vietinės rinkos Buraydah mieste, Kasimo regione, Saudo Arabijoje. Augalinę medžiagą patvirtino Saudo Arabijos Kasimo universiteto Žemės ūkio ir veterinarijos medicinos koledžo Augalų auginimo ir apsaugos departamentas. Mėginys buvo nuplautas švariu vandeniu iš čiaupo, kad būtų pašalintas smėlis ir nešvarumai nuo lapų, o po to ore išdžiovinta augalinė medžiaga (28 ± 1 ◦ C temperatūroje 48 val.) buvo mechaniškai sumalta į miltelius ir laikoma nepermatomuose polietileno maišeliuose 4 ± 1 ◦ C temperatūroje. iki naudojimo.

2.2. Etanolių ir vandeninių ekstraktų ruošimas

Maždaug 200 g išdžiovinto A. hierophantic buvo ekstrahuoti 300 ml 70 procentų etanolio Soksleto ekstraktoriuje, kad būtų paruošta ekstrakcija etanoliu (KEE). Ekstraktas koncentruojamas rotaciniu garintuvu 40 °C temperatūroje, kad išgaruotų likęs tirpiklis, tada iki sausumo N2 srove. Vandeninis ekstrahavimas (KAE) buvo atliktas taip, kaip aprašyta Asuzu [23] su nedideliais pakeitimais. Du šimtai gramų džiovintos augalinės medžiagos įpilama į 500 ml karšto sterilaus distiliuoto vandens. Tada mišinys gerai suplakamas ir paliekamas 1 val. Tada prie kolbos buvo prijungtas grįžtamasis kondensatorius ir 10 minučių kaitinamas iki švelnaus virimo, atvėsinamas, gerai sukratytas ir filtruojamas per Whatman Nr. 1 filtravimo popierių. Filtratas išgarinamas rotaciniu garintuvu, po to iki sausumo N2 sraute. Alkoholiniai ir vandeniniai ekstraktai (250 mg ml-1) buvo šviežiai paruošti distiliuotame vandenyje, kad būtų galima vartoti per burną.

2.3. Bendras fenolio kiekis (TPC)

TPC kiekis A. hierophantic buvo nustatytas pagal pritaikytą metodą Bettaieb ir kt. [24]. Rezultatai buvo lyginami su nubrėžta galio rūgšties (GA) standartine kreive, sudaryta 50–500 mg ml-1 (R2=0.99) diapazone, o TPC buvo apskaičiuotas kaip galo rūgšties ekvivalento (GAE) mg. ) vienam gramui A. hierofhantic (mg GAE g−1 ).

2.4. Bendras karotinoidų (TC), flavonoidų (TF) ir flavonolių (TFL) kiekis

Kaip pranešė Al-Qabba ir kt. [10], 5 g A. hierophantic buvo pakartotinai ekstrahuoti acetono ir petrolio eterio mišiniu (1:1, v/v). Bendras karotinoidų (TC) kiekis buvo nustatytas spektrofotometriškai ties 451 nm. TC buvo išreikštas mg g-1 DW. TF kiekis A. hierophantic buvo ištirtas pagal aprašytą Mohdaly ir kt. protokolą. [25]. TF kiekis buvo apskaičiuotas kaip mg kvercetino ekvivalento (QE) 100 g-1 DW. Tame pačiame kontekste buvo atliktas TFL turinys [26]. Buvo užfiksuota absorbcija ties 440 nm, o TFL buvo apskaičiuotas kaip mg kvercetino ekvivalento (QE) 100 g-1 DW.

2.5. Antioksidacinės talpos nustatymas

DPPH radikalų pašalinimo tyrimas: RSA buvo išbandytas spektrofotometriškai, priklausomai nuo DPPH purpurinės spalvos tirpalo balinimo pagal pakeistą techniką Lu ir kt. [27]. Antiradikalinis pajėgumas buvo pateiktas kaip µmol Trolox ekvivalentų (TE) vienam gramui A. hierophantic (µmoL TE g-1 ). ABTS radikalų šalinimo aktyvumas: A. hierophantic RSA prieš ABTS radikalus buvo išbandytas pritaikytu Lu ir kt. metodu. [27]. Rezultatai buvo išreikšti µmoL TE g-1. -karotino-linolo rūgšties balinimo tyrimas: A. hierophantic antioksidacinis procentas buvo įvertintas balinimo karotenu požiūriu, lyginant su butilinto hidroksianizolu (BHA), taikant pritaikytą spektrofotometrinį protokolą, kurį nurodė Koleva ir kt. [28]; rezultatai buvo pateikti kaip su BHA susiję procentai. Chelatinis A. hierophantic poveikis geležies jonams: A. hierophantic kompleksonų aktyvumas buvo išmatuotas pagal Zhao et al. protokolą. [29]. Ferrozino-Fe2 ir komplekso susidarymo, kaip metalo kompleksonų, slopinimo procentas buvo išmatuotas ir pateiktas mg ml-1, kai kaip teigiama kontrolė buvo naudojama etilendiaminotetraacto rūgštis (EDTA).

2.6. A. hierofantinių vandeninių ir etanolinių ekstraktų frakcionavimas polifenoliniais junginiais

Polifenolių nustatymas iš etanolinių ir vandeninių ekstraktų buvo atliktas HP1100 (Agilent Technologies, Palo Alto, CA, JAV) HPLC sistema su automatiniu mėginių ėmikliu, ketvirtiniu siurbliu ir diodų matricos detektoriumi (Hewlett Packard 1050), naudojant kolonėlę (Altima). C18 150 × 4,6 mm, 5 µm) su 5 mm Altima C18 apsaugine kolonėle (Alltech, Nettetal, Vokietija) pagal Goupy ir kt. [30]. Naudota tirpiklių sistema buvo A (acto rūgštis 2,5 proc.), B (acto rūgštis 8 proc.) ir C (acetonitrilas) gradientas. Tirpiklio greitis buvo 1 ml min-1, o atskyrimas buvo atliktas 35 °C temperatūroje. Sušvirkštas tūris buvo 10 µl. Fenoliniai junginiai buvo tiriami išoriniu standartiniu kalibravimu ir išreikšti mg g–1 DW ekvivalentų (plius)-katechino flavan{19}}oliams ir ekvivalentišku kumarinu poliniams aromatiniams junginiams. 8 procentų kintamumas buvo nustatytas penkiems fenolio ekstraktams iš to paties mėginio. Visos vertės buvo dvigubų injekcijų vidurkis. Polifenoliai ir jų dariniai buvo identifikuoti ir kiekybiškai įvertinti ties 280 ir 320 nm, o flavonoidai – ties 360 nm.

2.7. Eksperimentinis dizainas

Visus eksperimentus patvirtino Institucinis gyvūnų etikos komitetas (IAEC) KSA (Nr. {0}}), KSA, kurį reglamentuoja Eksperimentų su gyvūnais kontrolės ir priežiūros tikslas (CPCSEA). Komitetas prie Nacionalinio bioetikos komiteto (NCBE), Gyvų būtybių tyrimų etikos įstatymo įgyvendinimo taisyklės. Iš viso šiame tyrime buvo panaudoti 36 žiurkių patinai albinosai, suskirstyti į 6 grupes po 6 gyvūnus ir gydomi taip: I grupei (kontrolei) buvo sušvirkšta į pilvaplėvės ertmę (ip) alyvuogių aliejaus (1.0 ml kg–1 du kartus per savaitę) ir 0,5 ml distiliuoto vandens per burną/dieną 21 dieną iš eilės. II grupei buvo įšvirkščiama šviežio vienodo tūrio CCl4 ir alyvuogių aliejaus mišinio (po 10 ml kg-1 du kartus per savaitę) ir 0,5 ml distiliuoto vandens per burną/ kasdien, pasak Al-Qabba ir kt. [10] su nedideliais pakeitimais. III grupė (referencinė grupė) gavo į raumenis (im) 50 mg kg-1 vit. E plius Se (Selepherol, Vetoquinol Co., Magny-Vernois, Prancūzija) du kartus per savaitę, pasak Asuka ir kt. [31] ir El-Desoky ir kt. [32] ir 0,5 ml distiliuoto vandens per burną / kasdien. IV grupė buvo bandymas ir gavo 250 mg kg-1 KEE per burną / kasdien kartu su CCl4 ip du kartus per savaitę. V grupė gavo 250 mg kg-1 KAE per burną / kasdien kartu su CCl4 ip du kartus per savaitę. VI grupė gavo 250 mg kg-1 KEE ir KAE (1:1) per burną / kasdien kartu su CCl4 ip du kartus per savaitę. Praėjus dvidešimt keturioms valandoms po paskutinio gydymo (21 diena), žiurkės buvo anestezuotos mišiniu (alkoholis:chloroformas:eteris, 1:2:3). Visiems gyvūnams buvo paimti širdies punkcijos kraujo mėginiai, o serumas atskirtas centrifuguojant 4000 aps./min 10 min. ir laikomas –20 ◦C temperatūroje biocheminiam tyrimui.

2.7.1. Inkstų biocheminė analizė

Kreatinino, karbamido, bendro baltymų ir albumino koncentracijos serume buvo nustatytos automatizuotais spektrofotometriniais metodais (BM/Hitachi autoanalyzer-911; Boehringer Mannheim, Vokietija) pagal gamintojo nurodymus. Kalio kiekis buvo nustatytas liepsnos fotometrija esant 766 nm.

2.7.2. Inkstų antioksidacinio aktyvumo įvertinimas

Po kraujo mėginių paėmimo visų grupių gyvūnai buvo paaukoti; teisingaiinkstaibuvo greitai izoliuoti ir nuplauti lediniu fiziologiniu tirpalu. Tada audinys buvo nukirptas, nuplaunamas šaltu fiziologiniu tirpalu, nusausinamas ir nedelsiant dedamas ant ledo. Naudojant elektrinį audinių homogenizatorių, audinio dalys (1.0 g) buvo pasvertos ir homogenizuotos su 9 tūriais ledo šalto 0,05 M fosfatinio buferio, kurio pH 7,4. Ląstelių liekanos buvo pašalintos centrifuguojant 12, 000 aps./min (4 ◦C) 20 min., siekiant surinkti supernatantus malondialdehido (MDA) koncentracijai [33], superoksido dismutazės (SOD) aktyvumui [34] nustatyti ir sumažinti. glutationo (GSH) kiekis [35]. Baltymų koncentracijainkstashomogenatas buvo nustatytas Bradfordo metodu [36].

2.7.3. Nefroprotekcijos procentas

Nefroprotekcijos (F) procentas vit. E plius Se, KEE, KAE ir KEE plius KAE buvo apskaičiuoti kiekvienam biocheminiam parametrui atskirai pagal Wakchaure ir kt. [37] naudojant šią lygtį:

kur T=vidutinė gydymo grupės vertė, C=vidutinė teigiamos kontrolinės grupės vertė ir N= vidutinė neigiamos kontrolinės grupės vertė. Be to, bendras nefroprotekcijos procentas (TFP proc.) buvo lyginamas su vit. E plus Seas taip:

2.7.4. Histopatologiniai tyrimai

Skrodimo mėginiai buvo paimti iš kairėsinkstasatskirų žiurkių grupių ir fiksuota 10 procentų formalino fiziologiniame tirpale 24 val. Po plovimo vandentiekio vandeniu buvo dehidratuojama serijiniu alkoholio (metilo, etilo ir absoliutaus etilo) skiedimu. Mėginiai buvo išvalyti ksilene ir įterpti į parafiną 24 valandas 56 °C temperatūroje karšto oro krosnyje. Bičių parafino vaško audinių blokai buvo paruošti pjaustymui 4-mikrono storiu, naudojant rogučių mikrotomą. Audinių griežinėliai buvo surinkti ant stiklinių stiklelių, deparafinuoti ir nudažyti hematoksilinu ir eozinu, kad būtų galima reguliariai tikrinti šviesos elektriniu mikroskopu [38].

2.8. Statistinė analizė

Rezultatai rodomi kaip vidurkis ± standartinė paklaida (SE). Vidurkių skirtumų reikšmė įvairiose grupėse buvo ištirta naudojant vienpusę dispersijos analizę (ANOVA), po kurios buvo atliktas Dunkano testas, o p-reikšmė tarp vidurkių buvo pateikta esant p < 0,05="" lygiui="" [39].="">

3. Rezultatai

3.1. A. hierophantic fitocheminės medžiagos ir antioksidacinė talpa

Atlikta kiekybinė A. hierofantinių fitocheminių medžiagų ir susijusių antioksidacinių veiklų analizė, naudojant DPPH ir ABTS radikalų pašalinimą, -karotino-linolo rūgšties balinimo aktyvumą ir chelatinį gebėjimą (CA). Kaip aiškiai matyti 1 lentelėje, TPC kiekis buvo 67,49 mg GAE g-1. TC kiekis buvo 3,51 µg g-1. TF ir TL kiekis buvo atitinkamai 49,78 ir 17,45 mg QE g-1. Be to, DPPH-RSA ir ABTS-RSA buvo naudojami antioksidacinės veiklos progresavimui matuoti. Rezultatai parodė atitinkamai 128,71 µmol TE g-1 ir 141,92 µmol TE g-1 atitinkamai DPPH-RSA ir ABTS-RSA. Be to,antioksidacinis aktyvumas(AOA) A. hierophantic pateiktas 1 lentelėje. Linolo rūgšties radikalų slopinimo procentas buvo apskaičiuotas kaip 45,74 proc., palyginti su BHA, naudojant -karotino balinimo (-CB) testą. Be to, įvertinus metalo kompleksono aktyvumą, nustatyta 42,89 mg g-1, kuris, atrodo, gali trukdyti Fe2 plius – ferrozino komplekso susidarymui, o tai rodo, kad jis gali chelatuoti oksidacinius metalus.

3.2. A. hierofantinių fenolinių junginių kiekybinis nustatymas

Atlikta kiekybinė fenolinių junginių KEE ir KAE analizė HPLC analize, o duomenys pateikti 2 lentelėje. Iš A. hierophantic KEE buvo identifikuoti devynios atskirtos fenolio rūgštys ir šeši flavonoidai. Gausiausios fenolio rūgštys buvo hidroksicinamono rūgštys, pvz., sinapo rūgštis (28,704 mg 100 g−1), po to kavos rūgštis (6,621 mg 10{). {61}} g-1), rozmarino rūgštis (2,884 mg 100 g-1), ferulo rūgštis (1,854 mg 100 g-1) ir cinamono rūgštį (0,094 mg 100 g-1); ir hidroksibenzenkarboksirūgštys, tokios kaip p-hidroksibenzenkarboksirūgštis (3,440 mg 100 g-1), protokatecho rūgštis (1,811 mg 100 g-1), vanilinė rūgštis (3,326 mg 100 g-1) ir siringo rūgštis (1,083 mg 100 g). −1). Flavonoidai, tokie kaip miricetinas (16,269 mg 100 g-1), D-katechinas (2,410 mg 100 g-1), kaempferolis (0,434 mg 100 g-1), rutinas (0,539 mg 100 g-1), apigeninas{{56} }gliukozido (0,192 mg 100 g−1 ), ir kvercetino (0,184 mg 100 g−1 ) buvo aptikti neįkainojami kiekiai. Taip pat buvo nustatyti A. hierophantic KAE fenoliniai junginiai, o duomenys pateikti 2 lentelėje. Siringo rūgštis buvo užfiksuota kaip didžiausia fenolio rūgštis tarp 21 identifikuoto fenolio. Katecholio ir pirogalolio buvo atitinkamai 2,526 ir 1,589 mg 100 g-1. Duomenys

nurodė, kad kai kurių fenolio rūgščių, pvz., kavos, katechino, chlorogeno, epikatechino, e-vanilino, p-hidroksibenzenkarboksirūgšties ir protokatecho rūgščių, buvo aptikta nedideliais kiekiais 0.725, 0.256, { {6}}.136, 0.193, {{10}}.443, 0.223 ir 0,454 mg 100 g−1 atitinkamai. Tame pačiame kontekste nedideli 3,4,5-laikinio etoksicinamono, 4-aminobenzenkarboksirūgšties, benzenkarboksirūgšties, cinamono, kumarino, ellaginės, ferulinės, galinės, izoferulinės, kumarino, p-kumaro rūgšties kiekiai. , o salicilo rūgštis buvo kiekybiškai įvertinta po to, kai buvo nustatyta. Epikatechinas ir D-katechinas kaip flavonoidai taip pat buvo kiekybiškai įvertinti A. hierophantic KAE.

3.3. Kreatinino, karbamido, K, bendro baltymo ir albumino kiekis serume

CCl4 injekcija žymiai padidino kreatinino, karbamido ir k koncentraciją serume GII žiurkėms, palyginti su kontrolinėmis žiurkėmis (GI). Ir atvirkščiai, CCl4-gydytose žiurkėse bendras baltymų ir albumino kiekis gerokai sumažėjo (3 lentelė). Vit. E plius Se ir A. hierofantiniai ekstraktai (G III, IV, V ir VI) iš esmės sumažino kreatinino ir karbamido pokyčius, atsiradusius dėl CCl4 injekcijos, o padidino albumino ir bendrųjų baltymų kiekį, kad jie būtų artimi normalioms GI reikšmėms (3 lentelė). ). K lygis serume buvo žymiai padidėjęs CCl{5}}gydytų žiurkių (GII), palyginti su GI (3 lentelė). Suleidžiama vit. E plius Se ir A. hierofhantic alkoholinių ir vandeninių ekstraktų (G IV, V ir VI) vartojimas taip pat teigiamai pagerino k lygį, palyginti su GI (3 lentelė).

3.4. Inkstų antioksidantų biomarkeriai

Kaip parodyta 4 lentelėje, CCl4 vartojimas žymiai sumažino SOD ir GSH lygį ir padidino MDA lygį GII.inkstashomogenizuoti audinį. Tačiau, lyginant su GI, žiurkės, gydytos tiek vit. E plius Se ir A. hierofantiniai ekstraktai (GIII, VI, V ir VI) iš esmės pagerino antioksidantų fermentų SOD ir GSH aktyvumą, taip pat sumažino MDA lygį (4 lentelė). A. hierofantinis alkoholinis ekstraktas (GIV) pralenkė A. hierofhantinį vandeninį ekstraktą (GV) ir sujungęs A. hierofhantinį alkoholinį ir vandeninį ekstraktą sumažino antioksidantų kiekį, o kovojant su autoksidacijos procesu, MDA lygis buvo žemas, palyginti su GI.

3.5. Nefroprotekcijos procentas

Nefroprotekcijos procentas (palyginti su neigiama kontrole (GI) ir teigiama (GII) grupėmis).inkstasTokios funkcijos kaip kreatininas, karbamidas, k, TP ir albuminas, taip pat antioksidacinis aktyvumas inkstų homogenate (MDA, SOD, GSH) parodytas 5 lentelėje. Nefroprotekcijos procentas užfiksavo didžiausią reikšmę kaip kreatininas, karbamidas, k GIII, TP ir albuminas GV, MDA ir GSH GIII ir SOD GV (5 lentelė). Bendras nefroprotekcijos procentas, palyginti su vit. Gydymas E plius Se užregistravo didžiausią koncentraciją KAE gydytoje grupėje (GV, 97,62 proc.), tada KEE (GIV, 83,27 proc.), o vėliau KEE plius KAE (GVI, 78,85 proc.), kaip parodyta 5 lentelėje.

3.6. A. hierofantinių ekstraktų poveikis inkstų histoarchitektūrai

Biocheminių tyrimų rezultatus patvirtino histopatologinis tyrimas. 6 lentelėje ir 1 paveiksle parodytas histologinių pokyčių laipsnis pagrindinėje žiurkės struktūrojeinkstaiįvairiose eksperimentinėse grupėse, apdorotose A. hierofantiniais ekstraktais. Atliekant dabartinį tyrimą,inkstaskontrolinės grupės (GI) buvo nustatyta normali histologinė struktūra (1 pav. (I.1)). CCl4- gydytų žiurkių (GII) histoarchitektūra parodė židininių uždegiminių ląstelių infiltraciją (plius plius ) tarp kanalėlių ties žieve, kraujagyslių perkrovą (plius plius ) tarp kanalėlių (1 paveikslas (II.2). ), daugybiniai eozinofiliniai gipsiniai (plius plius) dariniai kai kurių kanalėlių spindyje ir židininis kraujavimas (plius plius ) tarp degeneruotų kanalėlių kortikomeduliarinėje dalyje (1 pav. (II.3), 6 lentelė). Esant GIII, suleidžiama vit. E plius Se, vartojant alkoholinį A. hierophantic ekstraktą (GIV), vandeninį A. hierophantic ekstraktą (GV) ir A. hierophantic ekstraktų (GVI) derinį, susilpnino citotoksinį CCl4 poveikį ir užfiksavo lengvą (pliusą) vidutinio sunkumo (plius plius ) susikaupimas kraujagyslėse tarp kanalėlių ties žieve (1(III.4–VI.8 pav.), 6 lentelė) su gerai išsivysčiusia Bowmano kapsule su išsiplėtusiais glomerulais ir vingiuotais kanalėliais. Be to, vandeninis A. hierophantic (GV) ekstraktas užfiksavo židininių uždegiminių ląstelių infiltraciją (plius plius ) kortikomeduliarinėje dalyje (1 pav. (V.7), 6 lentelė).

4. Diskusija

Fitocheminės medžiagos dažniausiai yra veiksmingos laisvųjų radikalų šalinimo priemonės ir laikomos geriausiomis augalinės kilmės antioksidantais. Manoma, kad polifenolinės medžiagos turi antikancerogeninių ir antimutageninių savybių žmonėms [40]. Vertingas TPC kiekis A. hierophantic buvo šiek tiek didesnis nei gautas Mohamed ir kt. [21] kaip 51,97 mg GAE g × 1 A. hierofantinėje žolėje ir AlGamdi et al. [41], kuris A. hierofantinėse sėklose rado 4 mmol L × 1 GAE. Neseniai Zin ir kt. [42] nurodė taninų buvimą A. hierophantic kaip bioaktyvų junginį ir rekomendavo jo biologinį aktyvumą, kurį reikia nuodugniai ištirti. Karotino kiekis, kaip bendro karotinoidų dalis, buvo 2,27 µg g × 1, kaip nurodė Mohamed ir kt. [21], ir net dabartiniai rezultatai parodė, kad bendras karotinoidų kiekis yra 3,51 µg g × 1 . Mohamedas ir kt. [21]. Yra biologiškai aktyvių komponentų, tokių kaip fenolio junginiaiantioksidacinis aktyvumaskaip lipidų oksidacijos grandininių reakcijų suskaidymas, suteikiant vandenilį aktyviems laisviesiems radikalams. Šis fenolių pašalinimo potencialas slopinti radikalus buvo išaiškintas jų fenolio hidroksilo grupėmis [8, 10, 22]. Ši fenolio rūgštis buvo aprašyta kaip veiksmingas antioksidantas, įskaitant vandenilio peroksidą, hidroksilo radikalą ir superoksido anijoną [43]. Atrodo, kad A. hierofantinis metalo kompleksonų aktyvumas gali sutrikdyti „Fe2 plius – ferrozino“ komplekso konstrukciją, o tai rodo, kad jis gali sugauti „geležies“ jonus prieš „feroziną“. Teigiamas ryšys tarp fenolinių junginių kiekio padidėjimo tiesiogiai rodomas jų antioksidacinėmis savybėmis [42]. Andjelkovi'c ir kt. [44] nustatė daugelio fenolio rūgščių aktyvumą formuojant kompleksus su metalais. Vertingas TPC ir atitinkamas antioksidacinis aktyvumas, naudojant skirtingus matavimo metodus, suteikia aiškią plokštelę ir patvirtina A. hierofhantic kaip vaistinio augalo, skirto maistui ar gėrimams, biologinį aktyvumą.

Veiksmingi antioksidaciniai komponentai, įskaitant vandenilio peroksidą, hidroksilo radikalą ir superoksido anijoną [43,45,47]. HPLC būdu nustatyti ir kiekybiškai įvertinti A. hierophantic KAE junginiai buvo didesni nei identifikuotų junginių A. hierophantic KEE, tačiau identifikuoti junginiai A. hierophantic KEE buvo pateikti didesniais kiekiais [22]. Rezultatai atspindi, kad vartojantis A. hierophantic gali turėti daug komponentų tiek polinėmis, tiek nepolinėmis formomis. Šiuos rezultatus panašiai pateikia AlGamdi ir kt. [41], nes jie identifikavo ir kiekybiškai įvertino 20 polifenolinių junginių A. hirerochuntica sėklose. Ekstrakte buvo chlorogeno rūgščių ir hidroksibenzenkarboksirūgščių, tačiau pagrindiniai komponentai buvo flavono C-glikozidai, C-diglikozidai, O-glikozidai ir O-glikozidų-C-glikozidai, daugiausia susidarę kaip liuteolino konjugatai. Be to, buvo eksponuojama 14 iš 20 A. hierophantinio ekstrakto junginiųantioksidacinis aktyvumasnaudojant HPLC on-line antioksidantų aptikimo sistemą [41]. Įdomu tai, kad dabartiniai duomenys patvirtino, kad A. hierophantic yra daug fitocheminių junginių ir yra geras natūralių antioksidantų, galinčių turėti naudos sveikatai, šaltinis, kaip retai buvo pabrėžta sėklose [41]. Taigi arbata, paruošta iš viso augalo miltelių, yra tradicinė vartojimo forma; duomenys iliustravo naujus identifikuotus biologiškai aktyvius junginius A. hirerochuntica KEE ir KAE, kurie skyrėsi nuo AlGamdi ir kt. [41]

Daugelyje tyrimų CCl4-sukeltas nefrotoksiškumas buvo naudojamas kaip pavyzdinė augalų ekstraktų / vaistų nefroprotekcinio poveikio tikrinimo sistema [48, 49]. Šiame tyrime buvo nagrinėjamas A. hierofantinių ekstraktų poveikis CCl4-sukeltaiinkstasžala, taip pat jo nefroprotekcija ir antioksidacinis potencialas žiurkėms. Dabartiniame tyrime CCl4 gydymo (GII) grupė žymiai padidino kreatinino, karbamido ir k kiekį ir sumažino bendrą baltymų ir albumino koncentraciją, palyginti su GI. Taip gali būti dėl to, kad apsinuodijimas CCl4 yra pagrindinis laisvųjų radikalų gamybos šaltinis daugelyje organų, įskaitant kepenis, inkstus, plaučius, smegenis ir kraują [50]. Taip pat pastebėta, kad po CCl4 injekcijos žiurkėms CCl4 koncentracija inkstuose pasiskirsto tolygiau nei kepenyse [51], nesinkstasturi didelį afinitetą CCl4 ir turi citochromo P450, daugiausia žievėje. Dažniausi laisvieji radikalai iš CCl4 yra trichlormetilo radikalas (CCl3• ) ir trichlormetilperoksilo radikalas (CCl3O2• ) [52]. Šie radikalai prisijungia prie tarpląstelinio baltymo, ląstelės membranos lipidų ir DNR, sukeldami baltymų denatūraciją, lipidų peroksidaciją ir oksidacinį DNR pažeidimą, dėl kurio miršta ląstelė [53]. Priešingai, gydant CCl4-žiurkes vit. E plius Se (GIII) ir A. hierofantiniai ekstraktai (GVI: VI) veiksmingai sumažino kreatinino ir karbamido koncentracijos padidėjimą, taip pat padidino albumino ir bendrųjų baltymų kiekį serume, kad jie būtų labai artimi jų lygiui GI. Tai gali būti dėl antioksidacinių savybių ir gausaus fenolio kiekio A. hierofhantic ekstraktuose bei vit. E plius Se, kuris sulaiko laisvuosius radikalus ir taip slopina inkstų pažeidimą. Fitocheminės medžiagos yra veiksmingiausios laisvųjų radikalų gaudyklės ir laikomos geriausiomis augalų antioksidantais [54]. Gausiausi fenolio junginiai buvo hidroksicinamono rūgštys, tokios kaip sinapo rūgštis, tarp devynių nustatytų fenolio junginių KEE, o siringo rūgštis buvo didžiausia fenolio rūgštis tarp 21 identifikuotos fenolio rūgšties KAE. Šeši flavonoidai buvo nustatyti KEE ir du KAE naudojant HPLC analizę [55]. Be to, kaip antioksidantas, vit. Manoma, kad E apsaugo audinius nuo žalos, kurią sukelia reaktyvūs deguonies metabolitai. Selenas taip pat yra gerai žinomas kaip esminis mikroelementas žmonių sveikatai, apsaugantis ląsteles nuo žalingo laisvųjų radikalų poveikio [22].

Dabartiniame tyrime CCl4 vartojimas žymiai sumažino GSH ir SOD ir padidino MDA lygįinkstashomogenizuojasi, palyginti su GI. Vit. E plius Se ir A. hierofantiniai ekstraktai pagerino įvairų CCl4 poveikį, atkurdami pakitusį antioksidantų, tokių kaip SOD ir GSH, aktyvumą ir gali deaktyvuoti MDA gamybos procesą, kaip buvo neseniai pranešta [15,21,40,41]. . GSH yra nefermentinis antioksidantas, randamas visose žinduolių ląstelėse. Oksiduota forma, GSSG, GSH veikia kaip daugelio detoksikuojančių fermentų (GPx, GST ir kitų) kofaktorius prieš oksidacinį stresą ir palaiko ląstelių redokso pusiausvyrą [47]. Ši išvada seka Khan ir Siddique [56] bei Makni ir kt. [57], kurie pranešė, kad CCl4 sumažino GSH lygį žiurkių inkstuose. Gydymas vit. E plius Se ir A. hierofantiniai ekstraktai parodė apsaugą nuo CCl4 sukelto GSH lygio sumažėjimo. Tame pačiame kontekste SOD katalizuoja dviejų superoksido anijono (*O2) molekulių dismutaciją į vandenilio peroksidą (H2O2) ir molekulinį deguonį (O2), todėl potencialiai žalingas superoksido anijonas tampa mažiau pavojingas [58, 59]. CCl4 intoksikacija keičia genų ekspresijos lygį, mažindama inkstų SOD [60]. SOD aktyvumo sumažėjimas yra jautrus ląstelių pažeidimo indeksas. Mūsų išbandyti A. hierophantiniai ekstraktai sumažino toksiškumą inkstams, sumažindami SOD lygį. Jis dalyvauja įvairiuose fermentiniuose procesuose, siekiant sumažinti detoksikacijos reakcijų koncentraciją [61]. MDA yra pirmasis lipidų peroksidacijos produktas ir vienas iš svarbių oksidacinio streso žymenų. A. hierofantiniai ekstraktai sumažino MDA lygio padidėjimą ir atkūrė bendrą antioksidacinę galią CCl4-gydytų žiurkių inkstuose. Šį apsauginį poveikį gali lemti stiprus antioksidacinis A. hierophantinių ekstraktų aktyvumas [15,21,40,41]. Šie rezultatai taip pat rodo, kad A. hierofantiniai ekstraktai gali susilpninti oksidacinį stresą, mažindami lipidų peroksido koncentraciją CCl4-atviruose žiurkių inkstuose ir užkirsdami kelią inkstų pažeidimui. Šie rezultatai sutapo su Zn antioksidacinio aktyvumo CCl4-sukeltam ūminiam nefrotoksiškumui rezultatais [62,63].

A. hirerochuntica ekstraktai parodė vertingą nefroapsauginį pajėgumąinkstasfunkciniai tyrimai (kreatininas, karbamidas, K, TP ir albuminas) ir inkstai homogenizuoja antioksidacinį aktyvumą (GSH, SOD, MDA) atitinkamai GIV, V ir IV. Bendras nefroprotekcijos procentas, palyginti su vit. Gydymas E plius Se užregistravo didžiausią koncentraciją KAE gydytoje grupėje (GV, 97,62 proc.), tada KEE (GIV, 83,27 proc.), o vėliau KEE plius KAE (GVI, 78,85 proc.) atitinkamai mažėjimo tvarka. Tai gali būti dėl fenolio ir antioksidantų kiekio ir kokybės skirtumų A. hirerochuntica ekstraktuose, kurie yra susiję su antioksidaciniu pajėgumu [15,19,22,40,42].

Histopatologiniai radiniai, esantysinkstaiatitinka tirtų eksperimentinių grupių biocheminius įvertinimus. CCl4 vartojimas (GII) sukėlė glomerulų ir kanalėlių pažeidimą su vazokongezija inkstuose. Dogukan ir kt. [64] atrado panašų histologinį modelį žiurkės inkstų audinyje, reaguojant į ilgalaikį gydymą CCl4. Taip pat manoma, kad histologinius pokyčius sukelia funkcinis nefronų perkrovimas, dėl kurio atsiranda inkstų funkcijos sutrikimas [65], ir (arba) dėl audinių sunaikinimo, kurį sukelia laisvųjų radikalų susidarymas per CCl4 metabolizmą [56, 66]. . Poveikis vit. E plius Se ir A. hierofantinis ekstraktas, skirtas atkurti ir atkurti inkstus, CCl4 sunaikinimo poveikis buvo pastebimas. Taip gali būti dėl to, kad vit. E plius Se (kaip stiprus antioksidantas) veikia CCl4 sukeltą ROS [67]. A. hierofantiniai ekstraktai slopina CCl4-sukeltą ūmų nefrotoksiškumą dėl fenolio junginių, esančių A. hirerochuntica ekstraktuose, antioksidacinio vaidmens ir laisvuosius radikalus sulaikančių savybių [22]. Mūsų išvados atitinka kitų tyrėjų, kurie įrodė, kad įvairūs augalų dariniai turi farmakologinį poveikį, pašalindami piktnaudžiavimą CCl4 ir sugrąžindami normalumą [6].

5. Išvados

Šio tyrimo rezultatai aiškiai parodė, kad A. hierophantiniame augale gausu polinių ir nepolinių fenolinių junginių, pasižyminčių geresnėmis antioksidacinėmis savybėmis, o tai tiesiogiai priklauso nuo fitocheminių medžiagų kiekio. A. hierofantinis (ypač vandeninis ekstraktas) apsaugo žiurkes nuo CCl{0}}sukeliamo oksidacinio streso ir ūminioinkstassužalojimas, kurį liudija reikšmingas MDA lygio sumažėjimas ir padidėjęs GSH bei SOD aktyvumas, taip pat biocheminių ir histologinių pakitimų inkstuose nutrūkimas. Apsauginis veiksmingumas gali atsirasti dėl fenolio junginių, esančių A. hierofhantic ekstraktuose, antioksidacinių ir laisvuosius radikalus sulaikančių savybių. Šios savybės padeda paaiškinti augalo kaip vaistažolių vaistinio preparato veiksmingumą. Reikia atlikti daugiau tyrimų, kad būtų galima visiškai apibūdinti A. hierophantic aktyviuosius principus, o šis tyrimas yra skirtas paskatinti išsamesnius susijusius tyrimus, kad būtų pateikta pakankamai duomenų ir rekomendacijų, kaip apibrėžti jo mechanizmus ir saugias dozes.

Autoriaus indėlis:Konceptualizavimas, TIA, YMA ir HB; metodika, tyrimas, HB ir HAA-R.; duomenų tvarkymas, TIA ir YMA; rašymas – originalaus projekto rengimas, peržiūra ir redagavimas; HB ir HAA-R. Visi autoriai perskaitė ir sutiko su paskelbta rankraščio versija.

Finansavimas:Tyrėjai norėtų padėkoti Qassim universiteto Mokslinių tyrimų dekanatui už šio projekto publikavimo finansavimą.

Duomenų prieinamumo pareiškimas:Šiame tyrime pateiktus duomenis galima gauti atitinkamo autoriaus prašymu.

Santrumpos ABTS:2,2'-azino-bis(3-etilbenzentiazolino-6-sulfonrūgštis); AOA:antioksidacinis aktyvumas; BHA: butilintas hidroksianizolas; BHA: butilintas hidroksianizolas; DPPH: 1,1-difenil-2-pikrilhidrazinas; DW: sausas svoris; GA: galo rūgštis; GAE: galo rūgšties ekvivalentas; GSH: redukuotas glutationas; HPLC-DAD: didelio efektyvumo skysčių chromatografijos diodų matricos aptikimas; KAE: A. hierofantinis vandeninis ekstraktas; KEE: A. hierofantinis etanolinis ekstraktas; MDA: malonaldehidas; QE: kvercetino ekvivalentas; RAA: santykinis antioksidacinis aktyvumas; ROS: reaktyviosios deguonies rūšys; RSA: radikalų šalinimo veikla; Se: selenas; SE: standartinė klaida; SOD: superoksido dismutazė; TC: bendras karotinoidų kiekis; TC: bendras karotinoidų kiekis; TF: bendras flavonoidų kiekis; TE: Trolox ekvivalentai; TFL: bendras flavonolių kiekis; TPC: bendras fenolio junginių kiekis.

References

1. Statistics, KD Chronic Kidney Disease Jungtinėse Amerikos Valstijose. 2021. Prieiga per internetą:(žiūrėta 2021 m. liepos 20 d.).

2. Ku, E.; Glidden, DV; Johansenas, KL; Sarnakas, M.; Tighiouart, H.; Grimes, B.; Hsu, CY Ryšys tarp griežtos kraujospūdžio kontrolės lėtinės inkstų ligos metu ir mažesnio mirtingumo prasidėjus galutinės inkstų ligos stadijai. Kidney Int. 2015, 87, 1055–1060.

3. Tumlinas, JA; Madaio, parlamentaras; Hennigar, R. Idiopatinė IgA nefropatija: patogenezė, histopatologija ir gydymo galimybės. Clin. J. Am. Soc. Nefrolis. 2007, 2, 1054–1061.

4. Olah, G.; Reddy, VP; Prakašas, GS; Reakcijos, FC Kirk-Othmer cheminių technologijų enciklopedija. Kontaktiniai lęšiai 1978, 720–742.

5. Ozturkas, F.; Ucar, M.; Ozturkas, IC; Vardi, N.; Batcioglu, K. Anglies tetrachlorido sukeltas nefrotoksiškumas ir betaino apsauginis poveikis Sprague-Dawley žiurkėms. Urology 2003, 62, 353–356.

6. Ogeturkas, M.; Kus, I.; Colakoglu, N.; Zarašis, I.; Ilhanas, N.; Sarsilmaz, M. Kofeino rūgšties fenetilo esteris apsaugo inkstus nuo anglies tetrachlorido toksiškumo žiurkėms. J. Ethnopharmacol. 2005, 97, 273–280.

7. Slater, TF Laisvųjų radikalų mechanizmai audinių pažeidime. Ląstelių funkcija ir ligos; Cañedo, LE, Todd, LE, Packer, L., Jaz, J., red.; Springeris: Bostonas, MA, JAV, 1988 m.; 209–218 p.

8. Chanas, MR; Rižvi, W.; Chanas, GN; Chanas, RA; Shaheen, S. Anglies tetrachlorido sukeltas nefrotoksiškumas žiurkėms: Digerati muricata apsauginis vaidmuo. J. Ethnopharmacol. 2009, 122, 91–99.

9. Afsaras, T.; Chanas, MR; Razakas, S.; Ullah, S.; Mirza, B. Acacia hydaspica R. Parker karščiavimą mažinantis, priešuždegiminis ir analgetinis aktyvumas ir jo fitocheminė analizė. BMC papildymas. Altern. Med. 2015, 15, 1–12.

10. Al-Qabba, MM; El-Mowafy, MA; Althwab, SA; Alfheeaid, HA; Aljutaily, T.; Barakat, H. Chenopodium quinoa daigų fenolio profilis, antioksidacinis aktyvumas ir gerinantis veiksmingumas prieš CCl4 sukeltą oksidacinį stresą žiurkėms. Maistinės medžiagos 2020, 12, 2904.

11. Al Zhrani, MM; Althwab, SA; Aljutaily, T.; Alfheeaid, HA; Ashish, IS; Barakat, H. Moringos pagrindu pagamintų gėrimų apsauginis poveikis nuo hiperlipidemijos ir hiperglikemijos 2 tipo diabeto sukeltoms žiurkėms. Food Res. 2021, 5, 279–289.

12. Khalifa, I.; Navazas, A.; Sobhy, R.; Althwab, SA; Barakat, H. Poliacilinti antocianinai konstruktyviai susijungia su katalizinėmis 2019-nCoV 3CLpro diadų liekanomis nei monomeriniai antocianinai: struktūrinio ryšio aktyvumo tyrimas su 10 antocianinų, naudojant in-silico metodus. J. Mol. Grafikas. Modelis. 2020, 100, 107690.

13. Jusofas, J.; Mahdy, ZA; Noor, RM Papildomos ir alternatyvios medicinos naudojimas nėštumo metu ir jos įtaka akušerijos rezultatams. Papildyti. Ten. Clin. Praktika. 2016, 25, 155–163.

14. Sala, SH; Abdou, HS; Abd El-Azeem, A.; Abdel-Rahim, E. Kai kurių vaistinių augalų, kaip hipoglikeminių medžiagų, antioksidacinis poveikis chromosomų aberacijai ir nenormaliam nukleorūgščių metabolizmui, kurį sukelia diabeto stresas suaugusiems albinosų patinams. Cukrinis diabetas. 2011, 1, 6–14.

15. Daur, I. Vaistinės žolės Kaff Maryam (Anastatica hierochuntica L.) cheminės savybės ir jos sąsajos su vartojimu liaudies medicinoje. Afr. J. Microbiol. Res. 2012, 6, 5048–5051.