Fenilpropanoidų glikozidų antioksidacinis ir antikoaguliantinis poveikis

Norėdami gauti daugiau informacijos:ali.ma@wecistanche.com

Bartosz Skalski ir kt

Abstraktus

Holoparazitiniai Orobanchaceae augalai, įskaitant Cistanche, Orobanche ir Phelipanche spp, yra žinomi dėl savo turtingumofenilpropanoidasglikozidai(PPG). Nustatyta, kad daugelis PPG junginių turi platų spektrą veiklų, tokių kaip antimikrobinis, priešuždegiminis, antioksidacinis ir atmintį gerinantis. Siekdami geriau ištirti europinių šluotelių (O. Caryophyllaceae – OC, P. Arenaria – PA, P. ramosa – PR) ir dešimties atskirų fenilpropanoidinių sudedamųjų dalių bioaktyvumo potencialą, ištyrėme jų antiradikalinį poveikį, apsauginį poveikį nuo oksidacijos plazmoje in vitro sistemoje. ir įtaką krešėjimo parametrams. Išbandyti ekstraktai parodė 50–70 procentų „Trolox“ galios šalinimo aktyvumą. OC ekstraktas, kuriame gausu akteozido, turėjo daugiau nei 20 procentų geresnį antiradikalinį potencialą nei PR ekstraktas, kuris buvo vienintelis PPG, kurio acilo vienete trūko B žiedo katecholio dalies. Be to, buvo nustatyta, kad tik aštuoni buvo išbandyti PPG(pfenilpropanoidasglikozidai)įrodytas antioksidacinis potencialas žmogaus plazmoje, apdorotoje H2O2/Fe; tačiau trys išbandyti PPG(pfenilpropanoidasglikozidai)Be antioksidacinių savybių, turėjo antikoaguliacinį potencialą. Atrodo, kad PPG struktūra, ypač acilo ir katecholio dalių buvimas, daugiausia yra susijusi su jų antioksidacinėmis savybėmis. Šių junginių antikoaguliantinis potencialas taip pat susijęs su jų chemine struktūra. Atrinkti PPG gali gydyti širdies ir kraujagyslių ligas, susijusias suoksidacinisstreso.

Raktiniai žodžiai:Broomrape, fenilpropanoidiniai glikozidai, oksidacinis stresas, plazmos hemostazė

CistancheturiFenilpropanoidasglikozidai

Spustelėkite norėdami pamatyti Cistanche produktus

1. Įvadas

Oksidacinisstresoyra plačiai žinomas dėl savo neigiamo poveikio gyvų organizmų sveikatai, įskaitant pagreitintą senėjimą ir kai kurias vėžio formas. Atsiradimasoksidacinisstresoyra susijęs su sutrikusia pusiausvyra tarp oksidacinių ir antioksidacinių mechanizmų (įskaitant fermentinę (katalazės, glutationo peroksidazės) ir nefermentinę (glutationo) apsaugą) organizmo ląstelėse [1]. Reaktyviųjų deguonies rūšių (ROS), įskaitant oksiduojančius radikalus ir uždaro apvalkalo rūšis, perprodukcija yra vienas iš pagrindinių oksidacinio streso susidarymo mechanizmų. Tačiau ROS sukeliamas biologinis poveikis labai priklauso nuo koncentracijos, poveikio laiko ir vietos. Normaliomis sąlygomis (maža koncentracija) deguonies/azoto radikalai gali atlikti antrinių pasiuntinių vaidmenį, tačiau aukštesniame lygyje jie gali pradėti reaguoti su biologinėmis struktūromis, pavyzdžiui, ląstelių membranomis [2]. Tarp visų ROS rūšių hidroksilo radikalas (HO.) sukeliaOksidacinispabrėžiažinoma, kad jis vaidina svarbų vaidmenį sergant įvairiomis ligomis, įskaitant širdies ir kraujagyslių ligas. Kraujo sistemos sutrikimai buvo koreliuojami ir (arba) prieš tai pasikeitę įvairūs hemostazės ir plazmos biomarkerių parametrai [1,3].

Kita vertus, daugelis natūralių medžiagų, tokių kaip polifenoliai ir polinesočiosios riebalų rūgštys, buvo identifikuotos kaip stiprūs antioksidantai, galintys užkirsti kelią reaktyviųjų deguonies rūšių susidarymui ir (arba) mažinti jų kiekį. Tokių savybių turinčių junginių yra daugelyje augalinės kilmės maisto produktų ir farmacijos preparatų. Todėl labai rekomenduojama dieta, praturtinta šviežiomis daržovėmis ir vaisiais bei antioksidacinė terapija, pagrįsta natūraliais antioksidantais, nes jos gali sumažintioksidacinisstresoir užkirsti kelią įvairiems patofiziologiniams procesams [4,5]. Augaliniai polifenoliai yra įvairi antrinių metabolitų grupė, tarp kurių svarbią vietą užima fenolio rūgštys, nes jie yra plačiai paplitę ir pasižymi įvairiu biologiniu poveikiu, pavyzdžiui, antimikrobiniu, antioksidaciniu ir priešuždegiminiu poveikiu.Fenilpropanoidasglikozidai(PPG) yra hidroksicinamono rūgšties esterių dariniai ir jie yra pagrindinė / vienintelė antrinių metabolitų klasė, esanti holoparazitiniuose Orobanchaceae augaluose, įskaitant Cistanche, Orobanche ir Phelipanche spp. Keletas šios šeimos rūšių yra rimti pasėlių kenkėjai, kurių ūkininkai nori atsikratyti laukuose (Phelipanche ramosa pavyzdys), nedaug naudojamos farmakologijoje, o dauguma jų yra mažai svarbios žmonėms. Herba Cistanche plačiai naudojama Azijos tradicinėje medicinoje inkstų nepakankamumui gydyti ir kaip imunitetą bei atmintį stiprinanti, senėjimą stabdanti ir nuovargį stabdanti priemonė [6]. Tai parodė įvairių tyrimų grupių fitocheminės analizėsfenilpropanoidasglikozidai, pavyzdžiui, akteozidas, echinakozidas ir podiumo pusė, yra viena iš pagrindinių Herba Cistanche veikliųjų medžiagų [7]. Neseniai atliktas kelių Lenkijoje rastų šluotinių roplių rūšių tyrimas, kurį atliko Jedrejekas ir kt. [8] parodė, kad šios augalinės medžiagos kokybinė sudėtis yra panaši (dominuoja PPG).(pfenilpropanoidasglikozidai), be to, jis prilygsta arba net viršija Cistanche spp. pagal veikliųjų medžiagų kiekį [8]

Šiuo tyrimu buvo siekiama įvertinti trijų įvairių fenilpropanoidų turtingų šeivamedžių ekstraktų (Orobanche caryophyllacea – OC, Phelipanche Arenaria – PA ir P. ramosa – PR) antiradikalinį ir antioksidacinį potencialą, taip pat įtaką hemostazės parametrams. taip pat jų atskiros PPG sudedamosios dalys. Antiradikalinis pajėgumas buvo matuojamas naudojant 2,2'-azinobis-3-etilbenztiazolino-6-sulfono rūgštį/trolokso ekvivalentą (ABTS/TE) ir 2,2-difenil-1-pikrilhidrazilą (DPPH). ) testai. Theoksidacinisstresoplazmos tyrimo sistemoje buvo sukeltas hidroksilo radikalu (H2O2/Fe), po to lipidų peroksidacija (su tiobarbitūro rūgštimi reaguojančių rūšių (TBARS) tyrimas) ir išmatuotas baltymų karbonilo ir tiolio grupių lygis. Tarp nustatytų hemostazės parametrų buvo šie: aktyvuoto dalinio tromboplastino laikas (APTT), protrombino laikas (PT) ir trombino laikas (TT).

CistancheturiFenilpropanoidasglikozidai

2. Medžiagos ir metodai

2.1. Chemikalai

2,2-difenil-1-pikrilhidrazilo radikalas (DPPH), 2,2′-azinobis-3-etilbenztiazolino-6-sulforūgštis (ABTS), kalio persulfatas, 6- hidroksi-2,5,7,8-tetrametilchromano-2-karboksirūgštis (Trolox), dimetilsulfoksidas (DMSO), tiobarbitūro rūgštis (TBA), skruzdžių rūgštis (LC-MS klasės) ir H2O2 buvo įsigyti iš Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, JAV). Metanolis (HPLC gradiento klasė) ir acetonitrilas (LC-MS klasė) buvo įsigyti iš Merck (Darmstadt, Vokietija). Dešimt šiame darbe išbandytų fenilpropanoidų junginių, įskaitant 2′-O-acetillakteozidą (97 proc.), 2'-O-acetilpoliumosidą (98 proc.), 3-O-metilpoliumosidą (96 proc.), akteozidą (99 proc.), arena viduje (97 proc.), krenatozidas (98 proc.), tenipozidas (99 proc.), poliumosidas (99 proc.), tubulozidas A (96 proc.) ir wiede maniniozidas D (96 proc.) anksčiau buvo išskirtas iš žemiau nurodyto augalo. medžiaga [8]. Junginių grynumas buvo įvertintas naudojant UHPLC-PDA-MS analizę. Itin grynas vanduo buvo paruoštas namuose, naudojant Milli-Q vandens valymo sistemą (Millipore Co.). Kiti reagentai buvo analitinės kokybės ir tiekiami iš vietinių komercinių tiekėjų.

2.2. Augalinė medžiaga

Žydinčius trijų šluotinių roplių rūšių augalus, tarp jų Orobanche Caryophyllaceae Sm., Phelipanche Arenaria Pomel ir P. ramosa (L.) Pomel, identifikavo prof. Renata Piwowarczyk (Jan Kochanowski Uni versity, Kielce, Lenkija) ir surinkta iš natūralaus šaltinio Lenkijoje. Kuponiniai egzemplioriai (O. Caryophyllaceae – Chomentowek ´ (50.3349◦N, 20.4000◦E), kseroterminė pieva, parazituoja Galium boreale, 2014 m. gegužė; P. Arenaria – Zwierzyniec (50.3652◦paras. Artemisia campestris, 2014 m. birželis; P. ramosa – Szewce (50.3553◦N, 22.3038◦E), laukas, parazituoja Solanum Lycopersicum, 2014 m. rugsėjis) yra saugomi Jano Kochanovskio universiteto Herbariume Kielce (KTC). Prieš ekstrahuojant augalinė medžiaga buvo liofilizuota ir smulkiai sumalta.

2.3. Šluostelių ekstraktų ruošimas

Miltelių pavidalo augalinė medžiaga (O. Caryophyllaceae (OC) – 2 g, P. Arenaria (PA) – 3 g ir P. ramosa (PR) – 3 g) buvo ekstrahuota 80 procentų MeOH 40 ◦ C temperatūroje ir 1500 psi (tirpiklio slėgis) ) naudojant ASE 200 pagreitintą tirpiklio ekstraktorių (Dionex, Sunnyvale, CA, JAV). Ekstraktai buvo išgarinti ir liofilizuoti (Gamma 2–16 LSC šaldymo džiovintuvas, Kristus, Vokietija). OC, PA ir PR ekstrahavimo efektyvumas buvo atitinkamai 55%, 37% ir 43% augalinės medžiagos masės. Dėl didelio angliavandenių kiekio (duomenys nerodomi), žaliaviniai ekstraktai buvo toliau gryninami kietosios fazės ekstrakcija (SPE) ant Oasis HLB mikrokolonėlės (500 mg; Waters, Milford, MA, JAV). Cukrus pašalintas 1 procentu MeOH, tada dominantys junginiai eliuuojami 80 procentų MeOH. Pašalinus tirpiklį, OC, PA ir PR ekstraktai buvo liofilizuoti (Gamma 2–16 LSC šaldymo džiovintuvas), o SPE gryninimo išeiga buvo 53 procentai (OC), 67 procentai (PA) ir 51 procentas (PR). .

2.4. Šluotų ekstraktų fitocheminės savybės

Kokybinė ir kiekybinė šluotų ekstraktų analizė buvo atlikta naudojant ACQUITY UPLC sistemą (Waters), prijungtą prie fotodiodų matricos detektoriaus (PDA) ir tandeminio kvadrupolio masės spektrometro (TQD-MS/MS). Liofilizuoti OC, PA ir PR ekstraktai buvo ištirpinti 50 procentų metanolyje, kurio koncentracija buvo 0,50 mg/ml, ir tada chromatografuoti BEH C18 kolonėlėje (1{ {21}}0 × 2,1 mm, 1,7 µm, Votersas). Chromatografinės sąlygos buvo tokios: krosnies temperatūra – 25 ◦C, linijinis gradientas 10 → 25 procentai judriosios fazės B (0,1 proc. skruzdžių rūgšties acetonitrile) judrioje fazėje A (0,1 proc. skruzdžių rūgštis H2O) per 12 min, srauto greitis – 0,4 mL/min., įpurškimo tūris – 2 μL, UV diapazonas – 190–490 nm (3,6 nm skiriamoji geba). MS analizė atlikta neigiamų jonų režimu su elektropurškimo jonizacija (ESI), naudojant šiuos nustatymus: skenavimo diapazonas 100–1200 m/z; kapiliarinė įtampa 2,8 kV; kūgio įtampa 35 V; šaltinio temperatūra 150 ◦C; desolvatacijos temperatūra 450 ◦C; desolvacijos dujų srautas 900 l/h, o kūgio dujų srautas 100 l/h. Duomenų surinkimas ir apdorojimas buvo atliktas naudojant Waters MassLynx 4.1 programinę įrangą.

Fenilpropanoido glikozido (PPG) smailės buvo nustatytos palyginus gautus LC-MS duomenis su anksčiau išskirtų junginių duomenimis [8]. PPG kiekybinis nustatymas(pfenilpropanoidasglikozidai)šluotelės ekstraktuose buvo pagrįstas UPLC-UV metodu su aptikimu esant 33{7}} nm, ir išoriniu standartiniu kalibravimu, naudojant akteozidą (Sigma-Aldrich, didesnis arba lygus 99 proc., HPLC) kaip grupės standartą. Linijinė kalibravimo kreivė buvo sudaryta šešiomis koncentracijomis 1–200 ug/mL diapazone ir parodė gerą tiesiškumą (R2 didesnis arba lygus 0,999). Kiekybiniai rezultatai rodo trijų injekcijų vidutinę ± SD vertę ir buvo išreikšti miligramais akteozido ekvivalentų (ekv.) vienam gramui ekstrakto (mg akteozido ekv/g).

CistancheturiFenilpropanoidasglikozidai

2.5. Antiradikalinis aktyvumas in vitro

2.5.1. ABTS radikalų pašalinimo tyrimas

ABTS antiradikalinis testas buvo atliktas naudojant metodą, aprašytą Kontek ir kt. [9], su nedideliais pakeitimais: reagentams paruošti buvo naudojamas 20 procentų MeOH (7 mM ABTS ir 4,9 mM kalio persulfato); OC, PA ir PR ekstraktų tirpalai, kurių keturių koncentracijų lygiai 100–400 ug/mL, ir Trolox tirpalai, kurių šešių koncentracijų lygiai 10–250 ug/mL, buvo paruošti su 50 proc. MeOH. Mėginio ir ABTS plius darbinio tirpalo santykis buvo 1:25 (t/v). Absorbcija ties 734 nm buvo išmatuota po 30 minučių inkubacijos tamsoje, naudojant UV-vis spektrofotometrą (Evolution 260 Bio, Thermo Fisher Scientific Inc., Waltham, MA, JAV).

Absorbcijos slopinimas (procentais) buvo apskaičiuotas taip: [(Abscontrol–Abssample)/Abscontrol] × 100.

Trolokso ekvivalentai (TE) buvo apskaičiuoti pagal formulę TE {{0}} mėginys/standartas, kur m yra tiesių kreivių nuolydis (absorbcijos slopinimas ir koncentracija). Mėginio TE reikšmė apibūdina normalizuotą jo aktyvumą prieš Trolox (TEstandartas =1.0). OC, PA ir PR ekstraktų bei Trolox IC50 vertės buvo gautos eksperimentiškai, tada buvo apskaičiuotos pagal jų tiesias kreives (absorbcijos slopinimas ir koncentracija) ir išreiškiamos ug/mL.

Tyrimas buvo atliktas trimis egzemplioriais, o rezultatai pateikiami kaip vidurkiai ± standartiniai nuokrypiai (SD).

2.5.2. DPPH radikalų pašalinimo tyrimas

DPPH antiradikalinis testas buvo atliktas naudojant metodą, aprašytą Jedrejek ir kt. [8] ir Brand-Williams et al. [10], su nedideliais pakeitimais: OC, PA ir PR ekstraktų tirpalai keturiais koncentracijos lygiais 50–250 ug/mL diapazone ir Trolox tirpalai, šešių koncentracijų lygiai 10–10– 250 ug/ml, buvo paruošti su 50 procentų MeOH. Mėginio ir DPPH santykis buvo 1:19 (t/v). Absorbcija ties 517 nm buvo išmatuota po 30 minučių inkubacijos tamsoje, naudojant UV-vis spektrofotometrą (Evolution 260 Bio).

Absorbcijos slopinimas (procentais) buvo apskaičiuotas taip: [(Abscontrol–Abssample)/Abscontrol] × 100.

Trolox Equivalent (TE) ir IC50 tiriamųjų mėginių reikšmės buvo apskaičiuotos taip pat, kaip ir atliekant ABTS testą (2.5.1 skirsnis). Tyrimas buvo atliktas trimis egzemplioriais, o rezultatai pateikiami kaip vidurkiai ± SD.

2.6. Išbandytų augalų junginių ir ekstraktų pradiniai tirpalai eksperimentams su žmogaus plazma

Tirtų junginių ir augalų ekstraktų pradiniai tirpalai buvo paruošti 50 procentų DMSO. Galutinė DMSO koncentracija tirtuose mėginiuose buvo mažesnė nei 0,05 proc. ir jos poveikis nustatytas visuose eksperimentuose.

2.7. Žmogaus plazmos izoliacija

Žmogaus kraujas arba plazma buvo paimtas iš šešių nuolatinių donorų (nerūkančių vyrų ir moterų) į kraujo banką (Lodzė, Lenkija) ir medicinos centrą (Lodzė, Lenkija). Kraujas buvo paimtas kaip CPD tirpalas (citratas / fosfatas / dekstrozė; 9: 1; kraujas / t Donorai mažiausiai dvi savaites iki donorystės nevartojo jokių vaistų ar priklausomybę sukeliančių medžiagų (įskaitant tabaką, alkoholį ir antioksidantų papildus). Mūsų kraujo mėginių analizė buvo atlikta pagal Helsinkio deklaracijos dėl žmogaus tyrimų gaires ir patvirtinta Lodzės universiteto Tyrimų su žmonėmis etikos komiteto. Plazma buvo paruošta centrifuguojant šviežią žmogaus kraują 4500x g 25 minutes kambario temperatūroje. Baltymų koncentracija buvo apskaičiuota išmatuojant tiriamų mėginių absorbciją esant 280 nm, pagal Whitaker ir Granum metodiką [11].

CistancheturiFenilpropanoidasglikozidai

2.8. Oksidacinio streso žymenys žmogaus plazmoje

2.8.1. Lipidų peroksidacijos matavimas

Plazmos lipidų peroksidacija buvo kiekybiškai įvertinta matuojant su tiobarbitūro rūgštimi reaguojančių medžiagų (TBARS) koncentraciją. TBARS koncentracija buvo apskaičiuota naudojant molinį ekstinkcijos koeficientą (ε =156, 000 M− 1cm− 1). Metodas išsamiau aprašytas kitur [12,13].

2.8.2. Karbonilo grupės matavimas

Karbonilo grupių lygis buvo apskaičiuotas naudojant molinį ekstinkcijos koeficientą (ε=22, 000 M− 1 cm−1) ir buvo išreikštas nmol karbonilo grupių/mg plazmos baltymo, pagal Bartoszą [13]. ] ir Levine et al. [14].

2.8.3. Tiolių grupės nustatymas

Tiolio grupės kiekis plazmos baltymuose buvo matuojamas spektrofotometriškai naudojant SPECTROstar Nano Microplate Reader (BMG LABTECH, Vokietija) pagal absorbciją prie 412 nm su 5,5′-ditiol-bis-(2- nitrobenzenkarboksirūgštimi). Metodas plačiau aprašytas kitur [15–17].

2.9. Hemostazės parametrai

2.9.1. Protrombino laiko (PT) matavimas

PT buvo nustatytas koagulometriniu būdu naudojant optinį koaguliacijos analizatorių (modelis K-3002, Kselmedas, Grudziadz, Lenkija) pagal Malinowska ir kt. [18].

2.9.2. Trombino laiko (TT) matavimas

TT buvo nustatytas koagulometriškai naudojant optinį koaguliacijos analizatorių (modelis K-3002, Kselmedas, Grudziadz, Lenkija), pagal Malinowska ir kt. aprašytą metodą. [18].

2.9.3. Aktyvuoto dalinio tromboplastino laiko (APTT) matavimas

APTT buvo nustatytas koagulometriniu būdu, naudojant K-3002 optinį koaguliacijos analizatorių (Kselmed, Grudziadz, Lenkija), remiantis Malinowska ir kt. [18].

2.10. Duomenų analizė

Q-Dixon testas buvo atliktas siekiant pašalinti neapibrėžtus duomenis. Duomenys buvo tikrinami normaliam pasiskirstymui naudojant Shapiro-Wilk testą ir dispersijos lygybę su Levene testu. Statistiškai reikšmingi skirtumai buvo nustatyti naudojant ANOVA, po to Tukey daugkartinio palyginimo testą arba Kruskal-Wallis testą. Palyginimai buvo laikomi reikšmingais, kai p < 0.05.="" reikšmės="" pateikiamos="" kaip="" vidurkiai="">

3. Rezultatai ir diskusija

Dešimt anksčiau mūsų izoliuotųfenilpropanoidasglikozidai[8], įskaitant 2′-O-acetillakteozidą, 2′-O-acetilpoliumosidą, 3-O-metilpoliumosidą, akteozidą, areną viduje, krenatosidą, felipozidą, podiumo pusę, tubulozidą A ir viedemaniozidą D kartu su trimis Šiuo metu buvo tiriami šluotinių ropių ekstraktai (Orobanche Caryophyllaceae (OC), Phelipanche are naria (PA) ir P. ramosa (PR))).oksidacinisstresoir antikoaguliantų savybės žmogaus plazmos sistemoje. Išbandytų fenilpropanoidų cheminės struktūros pateiktos 1 pav., ir, kaip matyti, jie visi sukurti pagal panašų modelį su tais pačiais/panašiais subvienetais: hidroksitirozoliu, monosacharidais (gliukoze, ramnoze ir/arba). ksilozė) ir hidroksicinamono rūgštis. Dauguma tirtų PPG junginių yra pakeisti kavos rūgštimi, tačiau ji gali būti pakeista kumarino arba ferulo rūgštimi.

Be atskirų PPG junginių, trys šluotelės ekstraktai – OC, PA ir PR, kurie yra kelių PPG mišiniai.(pfenilpropanoidasglikozidai)ir anksčiau buvo pradinė medžiaga junginių išskyrimui, taip pat buvo įtraukti į biologinį tyrimą. Kita priežastis, dėl kurios buvo pasirinktos trys skirtingos rūšys, buvo didelis fitocheminio profilio skirtumas tarp jų, kaip matyti 2 pav. Išsamesnis OC, PA ir PR ekstraktų palyginimas, įskaitant kiekybinius duomenis, pateiktas lentelėje. 1. Akteozidas buvo pagrindinė O. Caryophyllaceae ekstrakto (690 mg/g) sudedamoji dalis, P. Arenaria dominuoja tenipozidas ir arena viduje (kartu 550 mg/g), o poliumosidas ir jo acetilintas darinys buvo svarbiausi metabolitai. P. ramosa ekstraktas (kartu 640 mg/g). Tirti ekstraktai skyrėsi ir bendru fenilpropanoidų kiekiu, didžiausias kiekis nustatytas OC (810 mg/g), šiek tiek mažesnis PR (795 mg/g), mažesnis PA (685 mg/g). Be to, verta pažymėti, kad PPG su kitomis nei kofeoilinėmis dalimis, pvz., kumaroilas arba feruloilas, buvo aptiktas tik P. ramosa ekstrakte, kur šie junginiai sudarė apie šeštadalį visų PPG (apie 120 mg/ml). g) (1 lentelė).

Ankstesni antiradikalinio aktyvumo tyrimaifenilpropanoidasglikozidaiHeilman ir kt. [19] ir Jedrejek ir kt. [8], įskaitant apie 30 skirtingų PPG(pfenilpropanoidasglikozidai)pavyzdžiui, akteozidas, izoakteozidas ir krenatozidas, atskleidė stiprų ryšį su acilo fragmentų (fenolio rūgšties ir tirozolio) struktūra. Apskritai, acilo vieneto katecholinės dalies modifikavimas arba pakeitimas žymiai sumažino reaktyviųjų deguonies rūšių (ROS) ir DPPH radikalų pašalinimo aktyvumą. Šiame tyrime buvo tiriamas trijų šluotelių ekstraktų (OC, PA ir PR) antiradikalinis potencialas in vitro naudojant ABTS ir DPPH tyrimus, o rezultatai buvo lyginami tiek tarpusavyje, tiek su atskirų fenilpropanoido komponentų aktyvumu, išmatuotu mūsų ankstesnis tyrimas [8]. Rezultatai buvo išreikšti Trolox ekvivalentais (TE) ir IC50 reikšmėmis (2 lentelė). Apskritai visi trys ekstraktai buvo geri tiek ABTS, tiek DPPH radikalų šalintojai, tačiau taip pat buvo pastebėti skirtumai tarp tirtų mėginių (apskaičiuotas TE buvo 0,5–0,7; 1,0 buvo Trolox atitikmuo). Mėginių antiradikalinis aktyvumas buvo tokia tvarka: Trolox > OC > PA > PR. Orobanche Caryophyllaceae ekstraktas (IC50=155–275 µg/mL) turėjo daugiau nei 20 procentų didesnį aktyvumą nei Phelipanche ramosa ekstraktas (IC50=200–320 µg/mL).

Didžiausias OC ekstrakto radikalų šalinimo aktyvumas gali būti paaiškintas didžiausiais PPG(pfenilpropanoidasglikozidai)kiekis šiame mėginyje, taip pat akteozido, jo dominuojančios sudedamosios dalies, įvedimui, kuris, remiantis ankstesniais tyrimais [8,19], yra vienas stipriausių laisvųjų radikalų gaudytojų tarp šios grupės metabolitų (TEDPPH=0). .87; [4]). Tačiau, atsižvelgiant į abipusį antiradikalinio aktyvumo ir fenilpropanoidų kiekio santykį OC, PA ir PR ekstraktuose, paprastos koreliacijos tarp šių dviejų veiksnių nerasta (r < 0.5),="" o="" tai="" rodo="" reikšmingą="" kokybinis="" profilis.="" tai="" daugiausia="" susiję="" su="" p.="" ramosa="" ekstraktu,="" kuris="" nepaisant="" didelio="" ppg="">(pfenilpropanoidasglikozidai)({0}},8 g/g) pasižymėjo mažiausiu biologiniu aktyvumu tarp tirtų mėginių (TE ~ 0.5). PR ekstraktas, kaip minėta pirmiau, buvo vienintelis mėginys, kuriame buvo fenilpropanoidų su kumaro arba ferulo rūgštimis, medžiagomis, neturinčiomis B žiedo katecholio dalies, kurios, kaip pranešta, turi sumažėjusį antioksidacinį potencialą. Anksčiau mūsų išbandytų keturių PPG junginių, turinčių modifikuotą kavos rūgštį, įskaitant 3-O-metilpoliumosidą, ramozę A ir viedemaniozidą D, TEDPPH buvo maždaug 0,3 [8]. Taigi dabartiniai rezultatai atitinka ir patvirtina ankstesnių antiradikalinių in vitro eksperimentų su fenilpropanoidais išvadas.

Kaip Chen ir kt. [20] aprašyta, ji yra susijusi su didesniu H donorystės gebėjimu arba radikalo stabilizavimu įvairiomis junginių mišinio funkcinėmis grupėmis. Nustatyta, kad keli struktūriniai elementai sustiprina tiesioginį polifenolių antioksidacinį aktyvumą, ypač susijusių su hidroksilo grupių skaičiumi ir padėtimi. Manoma, kad laisvųjų radikalų šalinimo aktyvumas didėja didėjant –OH grupių skaičiui. Tačiau šių grupių padėtis molekulėje turi dar didesnę įtaką daromam aktyvumui. Santykinai stabilūs stiprūs junginiai yra tie, kurių struktūrose yra 3,4-dihidroksi fragmentas, taip pat tie, kurie turi daugiau nei dvi hidroksilo grupes [21]. Antioksidacinės medžiagos cheminė struktūra leidžia suprasti antioksidacinės reakcijos mechanizmą. Lopez-Munguía ir kt. [22] remiantis tankio funkcinės teorijos (DFT) skaičiavimais nustatyta, kad PPG(pfenilpropanoidasglikozidai)antioksidacinis mechanizmas vyksta per nuoseklų protonų praradimo vieno elektrono perdavimą (SPLET). Tačiau Li ir kt. [23] bandymas ištirti fenolinių fenilpropanoidinių antioksidantų mechanizmus, padarė išvadą, kad PPG (akteozidas, forsitozidas B ir poliumosidas) gali dalyvauti įvairiuose antioksidacinio poveikio keliuose, sustiprino cukraus likučių vaidmenį.

Tyrimai parodė, kad augalinės kilmės antioksidantai yra veiksmingi hemostazės moduliatoriai sergant širdies ir kraujagyslių ligomis [24–26]. Įvairiuose tradicinėje medicinoje naudojamuose augaluose yra daug PPG [27,28]. Be to, PPG(pfenilpropanoidasglikozidai)Yra žinoma, kad jie turi daugybę biologinių savybių, įskaitant priešuždegimines, antinefritines ir antihepatoksines savybes [29–33].

Neseniai atliktame tyrime Jedrejek ir kt. [8] aprašė PPG izoliaciją(pfenilpropanoidasglikozidai)iš trijų lenkiškų šluotelių ir įvertino jų antioksidacinį aktyvumą DPPH testu. Remiantis tuo, šiame tyrime vertinama, ar dešimt atrinktų PPG, išskirtų iš šių augalų, galėtų sumažintioksidacinisstresožmogaus plazmoje, apdorotoje stipriu biologiniu oksidatoriumi, ty hidroksilo radikalo donoru H2O2/Fe, ir moduliuoja plazmos krešėjimo savybes in vitro. Dešimties izoliuotų PPG antioksidacinės savybės buvo nustatytos pagal pasirinktus parametrusoksidacinisstreso: TBARS lygis kaip lipidų peroksidacijos žymuo, kartu su karbonilo grupės ir tiolio grupių lygiais, kaip oksidacinio baltymų pažeidimo žymenys.

Tiek plazmos lipidų peroksidacijos, tiek baltymų karbonilinimo lygis plazmoje, sukeltas H2O2/Fe, reikšmingai sumažėjo, esant aštuoniems tirtiems junginiams, t. akteozidas, krenatozidas, 2′-O-acetillakteozidas, felipozidas, arena viduje, tubulozidas A, poliumosidas ir 3- O-metilpolimuozidas, visomis tirtomis koncentracijomis (1, 5 ir 50 µg/mL); tačiau nė vienas poveikis nebuvo pastebėtas dviem iš tirtų junginių, t. 2′-O-acetilpoliumosido ir wiedemaniozido D arba bet kurio iš tirtų ekstraktų bet kokia koncentracija (1, 5 ir 50 µg/mL). Be to, nė vienas iš tirtų junginių ar tirtų ekstraktų neapsaugotų plazmos nuo H2O2/Fe – sukeltos tiolio grupės oksidacijos baltymuose (3–5 pav.). Tačiau išbandyti ekstraktai gali būti įvairių biologinių savybių junginių šaltinis.

Pirmą kartą šio tyrimo rezultatai rodo, kad aštuoni iš išbandytų PPG(pfenilpropanoidasglikozidai)demonstruoti antioksidacinį potencialą žmogaus plazmoje, esant egzogeninėms reaktyviosioms deguonies rūšims, slopindami lipidų peroksidaciją ir baltymų karbonilinimą plazmoje, apdorotoje H2O2/Fe. Be to, 2′-O-acetilpoliumosidas ir wiedemaniozidas D nesukėlė tokio poveikio. Apskritai, mūsų išvados atitinka ankstesnius in vitro eksperimentus su PPG. Heilmanas ir kt. [19] ir Jedrejek ir kt. [8] praneša apie ryšį tarp PPG cheminės struktūros ir jų veiklos. PPG antioksidacinės savybės(pfenilpropanoidasglikozidai)atrodo, visų pirma susiję su jų acilo fragmentų struktūra, ty fenolio rūgšties ir fenilpropanoido vienetu, įskaitant katecholio dalies buvimą ir (arba) modifikaciją. Pavyzdžiui, buvo nustatyta, kad wiedemaniozidas D praranda savo antioksidacinį potencialą plazmoje, apdorotoje H2O2/Fe, po to, kai jo kafeoilo dalis buvo pakeista feruloilo dalimi.

Krešėjimo proceso pokyčiai dažnai atsiranda dėloksidacinisstreso; šie pokyčiai gali moduliuoti širdies ir kraujagyslių sistemos funkcijas ir sukelti širdies ir kraujagyslių ligų vystymąsi [1]. Iš dešimties šiame tyrime ištirtų augalų junginių ir trijų augalų ekstraktų tubulozidas, podiumo pusė ir 3-O-metilpoliumosidas bei visi išbandyti ekstraktai žymiai pailgina trombino laiką esant visoms tirtoms koncentracijoms, t. 1, 5 ir 50 µg/mL (6B pav.). Tačiau nei vienas iš šių ekstraktų, nei jokie tirti junginiai nepakeitė PT ar APTT (6A ir C pav.).

6 pav. Išbandytų junginių (akteozido, krenatozido, 2′-O-acetillakteozido, felipozido, arenariozido, tubulozido A, poliumosido, 3-O-metilpoliumosido, 2′-O-cetilpolimuozido, wiedemanniozido D) ir augalų poveikio. ekstraktai (P. arenaria ekstraktas - PA, P. ramosa ekstraktas - PR ir O. caryophyllacea ekstraktas - OC) (1–50 µg/mL) pagal pasirinktus hemostazinius plazmos parametrus: PT (A), TTn (B) ir APTT (C). Duomenys atspindi šešių nepriklausomų eksperimentų vidurkius ± SEM.n* p < 0,05="" (palyginti="" su="" kontrole),="" ns="" –="" p=""> 0,05 (palyginti su kontrole).

3 lentelėje palyginamas PPG (5 µg/mL) poveikis biomarkeriams.oksidacinisstresoplazmoje, apdorotoje H2O2/Fe, ir jų įtaka krešėjimui. Aštuonios iš išbandytų PPG(pfenilpropanoidasglikozidai)įrodytas antioksidacinis potencialas tik apdorotoje žmogaus plazmoje; tačiau buvo nustatyta, kad trys išbandyti PPG turi ir antioksidacinių savybių, ir antikoaguliantų. Įdomu tai, kad DPPH tyrimo rezultatai nesutapo su gautais biologiniame modelyje naudojant žmogaus plazmą, apdorotą H2O2/Fe: tirtų ekstraktų antioksidacinį potencialą gali blokuoti tam tikri plazmoje esantys junginiai.

Apibendrinant galima pasakyti, kad mūsų dabartiniai atradimai atskleidžia naują PPG antioksidacinį potencialą ir antikoaguliantų savybes.(pfenilpropanoidasglikozidai). Atrodo, kad PPG struktūra(pfenilpropanoidasglikozidai), ypač acilo ir katecholio fragmentų buvimas, daugiausia susijęs su jų antioksidacinėmis ir antikoaguliantinėmis savybėmis. Atrinkti PPG gali turėti potencialą gydyti širdies ir kraujagyslių ligas, susijusias suoksidacinisstreso. Tačiau norint nustatyti šių junginių koncentracijas, reikalingas in vivo modeliams, reikia atlikti papildomus eksperimentus.

Interesų konflikto pareiškimas

Autoriai pareiškia, kad neturi žinomų konkuruojančių finansinių interesų ar asmeninių santykių, kurie galėjo turėti įtakos šiame darbe aprašytam darbui.

Nuorodos

[1] A. Daiber, S. Chlopicki, Revisiting pharmacology ofoksidacinisstresoir endotelio disfunkcija sergant širdies ir kraujagyslių ligomis: redokso terapijos įrodymai, „Free Radic“. Biol. Med. 157 (2020) 15–37.
[2] J.-J. Sauvain, A. Setyan, P. Wild, P. Tacchini, G. Lagger, F. Storti, S. Deslarzes, MJ Guillemin, M. Rossi, M. Riediker, Biomarkers ofoksidacinisstresoir jo sąsaja su autobusų techninės priežiūros darbuotojų šlapimo mažinimo pajėgumu, J. Occupat. Med. Toksikolis. 6 (2011) 18–23.
[3] P. Nowak, B. Olas, B. Wachowicz,Oksidacinisstresoir hemostazė, Post. Biochem. 56 (2010) 239–247.
[4] M. Martinez-Huelamo, J. Rodriguez-Morato, A. Boronat, R. de la Torre, Nrf2 moduliavimas alyvuogių aliejaus ir vyno polifenoliais ir neuroprotection, Antioxidants 6 (2017) 73.
[5] S. Amor, P. Chalons, V. Aires, D. Delmas, Polifenolio ekstraktai iš raudonojo vyno ir vynuogių: galimas poveikis vėžiui, Diseases 6 (2018) 1–12.
[6] Z. Li, H. Lin, L. Gu, J. Gao, CM Tzeng, Herba Cistanche (Rou Cong-Rong): viena geriausių tradicinės kinų medicinos farmacijos dovanų, Front. Pharmacol. 7 (2016) 41–49.
[7] Y. Jiang, P.-F. Tu, Apžvalga: Cistanche rūšių cheminių sudedamųjų dalių analizė, J. Chromatogr. 1216 (2009) 1970–1979.
[8] D. Jedrejekas, S. Pawelecas, R. Piwowarczyk, L. Precio, A. Stochmal, feniletanoidų ir iridoidinių glikozidų identifikavimas ir atsiradimas šešiuose lenkiškuose šluotelėse (Orobanche spp. ir Phelipanche spp., Orobanchaceae), Phytocheae (170). 2020), 112189.
[9] B. Kontek, D. Jedrejek, W. Oleszek, B. Olas, Antiradikalinis ir antioksidacinis apynių ekstraktų, turinčių daug karčiųjų rūgščių ir ksantohumolio, aktyvumas in vitro, Ind. Crops Prod. 161 (2021) 1–9.
[10] W. Brand-Williams, ME Cuvelier, C. Berset, Laisvųjų radikalų metodo naudojimas antioksidaciniam aktyvumui įvertinti, Lebensm. Wiss. Techn. 28 (1995) 25–30.
[11] JR Whitaker, PE Granum, Absoliutus baltymų nustatymo metodas, pagrįstas absorbcijos skirtumu prie 235 ir 280 nm, Anal. Biochem. 109 (1980) 156–159.
[12] B. Wachowicz, Adenino nukleotidai paukščių trombocituose, Cell Biochem. Funkcija. 2 (1984) 167–170.
[13] G. Bartosz, Druga twarz tlenu, Warsz. PWN 1 (2008) 7.
[14] RL Levine, D. Garland, CN Oliver, A. Amici, I. Climent, AG Lenz, BW Ahu, S. Shaltier, ER Stadtman, Karbonilo kiekio nustatymas oksidaciniu būdu modifikuotuose baltymuose, Methods Enzym. 186 (1990) 464–478.
[15] DM Joel, J. Gressel, LJ (red.), Musselman, Parasitic Orobanchaceae: Parasitic Mechanisms and Control Strategies, Springer, Heidelberg, Vokietija, 2013, p. 1–10.
[16] Y. Ando, ​​M. Steiner, Trombocitų membranų sulfhidrilo ir disulfido grupės: disulfidinių grupių nustatymas, Biochim. Biofizė. Acta 311 (1973) 26–37.
[17] Y. Ando, ​​M. Steiner, Trombocitų membranų sulfhidrilo ir disulfido grupės: sulfhidrilo grupių nustatymas, Biochim. Biofizė. Acta 311 (1973) 38–44.
[18] J. Malinowska, J. Kołodziejczyk-Czepas, M. Moniuszko-Szajwaj, I. Kowalska, W. Oleszek, A. Stochmal, B. Olas, fenolio frakcijos iš Trifolium pallidum ir Trifolium scabrum antenų dalių žmogaus plazmoje apsaugo nuo hiperhomocisteinemijos sukelti pokyčiai, Food Chem. Toksikolis. 50 (2012) 4023–4027.
[19] J. Heilman, I. Calis, H. Kirmizibekmez, W. Schuhly, S. Harput, O. Stiher, Radical scavenger activity offenilpropanoidasglikozidaiFMLP stimuliuojamuose polimorfonukleariniuose leukocituose: struktūros ir aktyvumo ryšiai, Planta Med. 66 (2000) 746–748.
[20] H. Chen, Y. Zhou, Y. Shao, F. Chen, Laisvosios fenolio rūgštys Shanxi sendintame acte: pokyčiai senėjimo metu ir sinergetinė antioksidacinė veikla, Tarpt. J. Food Prop. 19 (2015) 1183–1193.
[21] CA Rice-Evans, NJ Miller, G. Paganga, Flavonoidų ir fenolio rūgščių struktūros ir antioksidacinio aktyvumo santykiai, laisvasis radikas. Biol. Med. 20 (1996) 933–956.
[22] A. Lopez-Munguía, ´ Y. Hernandez-Romero, ´ J. Pedraza-Chaverri, A. MirandaMolina, I. Regla, A. Martínez, E. Castillo, Fenilpropanoido glikozido analogai: fermentinė sintezė, antioksidacinis aktyvumas ir teorinis jų laisvųjų radikalų šalinimo mechanizmo tyrimas, PloS One 6 (2011) 20115.
[23] X. Li, Y. Xie, K. Li, A. Wu, H. Xie, Q. Guo, P. Xue, Y. Maleshibek, W. Zhao, J. Guo, D. Chen, antioksidacija ir citoprotekcija Akteozido ir jo darinių: palyginimas ir mechaninė chemija, Molecules 23 (2018) 498.
[24] SE Kulling, HM Rawel, Aronijos (Aronia melanocarpa) – būdingų komponentų ir galimo poveikio sveikatai apžvalga, Planta Med. 74 (2008) 1625–1634.
[25] BJ Mc Even, Dietos ir maistinių medžiagų įtaka trombocitų funkcijai, Semin. Trombas. Hemostas. 40 (2008) 214–226.
[26] B. Olas, Uogų daugiafunkciškumas kraujo trombocitų atžvilgiu ir uogų fenolių vaidmuo sergant širdies ir kraujagyslių sistemos sutrikimais, Trombocitai 5 (2016) 1–10.
[27] UB Ismailoglu, I. Saracoglu, US Harput, I. Sahin-Eredemli, Phenylpropanoid and iridoid glikozidų poveikis laisvųjų radikalų sukeltam endotelio priklausomo atsipalaidavimo sutrikimui žiurkės aortos žieduose, J. Ethnopharmacol. 79 (2002) 193–197.
[28] ZF Bai, Y. Liu, XQ Wang, Etninių vaistinių augalų Orobanche, Cistanche ir Boschniakia tyrimas, Zhongguo Zhong Yao Zhi 93 (2014) 4548–4552.
[29] K. Hayashi, T. Nagamatsu, M. Ito, H. Yagita, Y. Suzuki, Acteoside, Stachys sieboldii MIQ komponentas, gali būti daug žadantis antinefritinis agentas (3): acetonido poveikis ekspresijai tarpląstelėje adhezijos molekulė-1 eksperimentiniuose nefritiniuose žiurkių glomeruluose ir kultivuotose endotelio ląstelėse, Jpn. J. Pharmacol. 70 (1996) 157–168.
[30] Q. Xiong, K. Hase, Y. Tezuka, T. Tani, T. Namba, S. Kadota, Hepatoprotective activity of phenylpropanoids from Cistanche deserticola, Planta Med. 64 (1998) 120–125.
[31] WF Chiou, LC Lin, CF Chen, Acteoside apsaugo endotelio ląsteles nuo laisvųjų radikalų sukeltųoksidacinisstreso, J. Pharm. Pharm. 56 (2004) 743–748.
[32] S. Sahpaz, N. Garbacki, M. Tits, F. Bailleul, Fenilpropanoido esterių išskyrimas ir farmakologinis aktyvumas iš Marrubium vulgare, J. Ethnopharmacol. 79 (2002) 389–392.
[33] L. Lie-Chwen, W. Yea-Hwey, H. Yu-Chang, Ch Shiou, L. Kuo-Tong, Ch Yueh-Ching, W. Wen-Yen, S. Yoh-Chiang, Slopinantis poveikis apiefenilpropanoidasglikozidaiir iridoidiniai gliukozidai dėl laisvųjų radikalų gamybos ir 2 integrino ekspresijos žmogaus leukocituose, J. Pharm. Pharmacol. 58 (2006) 129–135.