Viso Cistanche saponinų antioksidacinis, senėjimą stabdantis ir organus apsaugantis poveikis

Išvada: TSAT yra aukštos kokybės natūralus produktas, turintis antioksidacinių ir senėjimą stabdančių savybių, galinčių sumažinti D-gal sukeltą senėjimo žalą žiurkėms.

Raktiniai žodžiai:Cistanche bendras saponinų kiekis, D-galaktozė, antioksidantas,anti-senėjimo

Spustelėkite čia norėdami gauti Cistanche papildų, skirtų senėjimui stabdyti

Įvadas

Nuo 21-ojo amžiaus, vyraujant pasaulinei senėjimo tendencijai ir gerėjant gyvenimo lygiui visame pasaulyje, senėjimo sukeltos sveikatos problemos ir su senėjimu susijusios ligos tampa vis ryškesnės.1 Taigi, kaip išlaikyti pagyvenusių žmonių sveikatą ir atidėti senėjimo ir su senėjimu susijusių ligų atsiradimas tapo populiaria tyrimų tema. Senėjimas yra negrįžtamas ir sudėtingas degeneracinis fiziologinis procesas, vykstantis visose kūno dalyse, sukeliantis audinių ir organų struktūrinį ir funkcinį pablogėjimą bei padidinantis įvairių lėtinių ligų, tokių kaip hipertenzija, diabetas, neurodegeneracinės ligos, odos melanozė, riziką. .2 Kelios ataskaitos parodė, kad laisvųjų radikalų senėjimo teorija, viena iš populiariausių teorijų, gali paaiškinti žalą organizmui, kurią sukelia senėjimo procesas.3 Aerobinio metabolizmo metu ląstelėse gaminasi reaktyviosios deguonies rūšys (ROS). įskaitant pavienį deguonį (1 O2), superoksido anijonus (•O2-), hidroksilo radikalus (HO•) ir vandenilio peroksidą (H2O2).4,5 Kai šie laisvieji radikalai, kuriuose yra nesuporuotų ir labai reaktyvių elektronų, susidaro per daug, jie tiesiogiai sukelia oksidacinį stresą ir priešuždegiminius atsakus, o po to – redokso disbalansą, sukeliantį baltymų ir lipidų peroksidaciją, taip pat mitochondrijų ir DNR pažeidimus, kurie galiausiai lemia pakitusias ląstelių ir audinių funkcijas bei patologines sąlygas, kurios pagreitina senėjimą. .6,7 Įdomu tai, kad žmogaus/žinduolių sistemoje egzistuoja natūralios endogeninės antioksidantų sistemos, įskaitant tas, kuriose dalyvauja SOD, CAT ir GSH-Px, taip pat nefermentiniai antioksidantai, tokie kaip askorbo rūgštis ir karotenoidai, sukurti tinkamai laisvųjų radikalų pusiausvyrai palaikyti. ir antioksidantų.8,9 Nepaisant to, antioksidacinės gynybos sistemos nepakanka, kad būtų visiškai užkirstas kelias oksidacinei žalai, kurią sukelia laisvųjų radikalų perteklius, o papildymas antioksidantais gali bent jau sumažinti senėjimo mastą ir su tuo susijusią oksidacinę žalą.10 Palyginti su natūraliais antioksidantais, sintetinis Įrodyta, kad antioksidantai (pvz., BHT ir BHA) sukelia endokrininės sistemos sutrikimus, reprodukcinius sutrikimus ir netgi kancerogenezę, kai jie naudojami ilgą laiką.11,12 Todėl natūralių, saugių ir veiksmingų laisvųjų radikalų valiklių paieška yra labai svarbi žmogaus sveikatai. apsauga.

Cistanche yra tos pačios genties augalų rūšis kaip Aralia elata (Miq.) Atrodo.13 Jis plačiai paplitęs Vakarų Kinijos Činbos kalnuose, yra vaistinis ir valgomasis augalas. Cistanche šaknų žievės ekstraktas Kinijoje jau seniai naudojamas kaip liaudies medicina diabetui gydyti, o pagrindinė jo veiklioji medžiaga yra triterpeno saponinas.14 Nustatyta, kad jis turi antioksidacinį, antihiperglikeminį ir antihiperlipideminį poveikį.14–16 Daugybė tyrimų parodė. kad triterpeno saponinai, tokie kaip asiaticozidas B, madecassoside ir parkside A, gali reaguoti su laisvaisiais radikalais ir užkirsti kelią tolesniam laisvųjų radikalų grandininių reakcijų vystymuisi, tokiu būdu darydami antioksidacinį poveikį.17,18 Ankstesnėse ataskaitose buvo aprašyta, kad TSAT pasižymėjo geresniu DPPH radikalų naikinimo aktyvumu nei vienas. saponinai, taip pat geras antioksidacinis gebėjimas prieš lipidų peroksidaciją žiurkių kepenų mikrosomose ir buvo įrodyta, kad antioksidacinis poveikis yra geresnis nei ženšenis, Schisandra ir kiti saponinai.14,15 Be to, TSAT taip pat sumažino D-gal sukeltą kepenų pažeidimą senstant. žiurkėms dėl savo antioksidacinio poveikio.19 Tolesnis struktūros ir poveikio santykio tyrimas parodė, kad struktūriniai skirtumai, tokie kaip oligosacharidų grandinės C-3 kategorija ir seka tokiuose saponinuose, vaidina svarbų vaidmenį kalbant apie su cukriniu diabetu susijusį antioksidacinė ir antiglikacinė veikla.20

D-gal yra dažniausiai naudojamas eksperimentinis senėjimo induktorius. Vis daugiau įrodymų rodo, kad su senėjimu susiję fenotipai, tokie kaip per didelis laisvųjų radikalų susidarymas, kognityvinės funkcijos sutrikimas, sumažėjęs imuninis atsakas ir organų pažeidimai, gali būti stebimi ilgai stimuliuojant D-gal.21 Elgsenos požiūriu D-gal vartojimas sukelia erdvės trūkumą. ir žiurkių atpažinimo atmintis, kaip rodo prastas našumas, susijęs su sunkumais ieškant tikslinių platformų ir sumažėjusiu tikslinių platformų kirtimo kartų skaičiumi Morriso vandens labirinto eksperimente.22 Todėl lėtinė D-gal stimuliacija buvo naudojama tiriant organizmo senėjimą. ir su senėjimu susijęs atminties praradimas, redokso disbalansas ir organų pažeidimai.

Remiantis ankstesniais TSAT biologinio aktyvumo tyrimais, yra pagrindo manyti, kad šis vaistinis ir dietinis augalas turi didelį panaudojimo potencialą kovos su senėjimu srityje. Tačiau yra tik vienas šio triterpenoidinio saponino ekstrakto laisvųjų radikalų pašalinimo in vitro tyrimas, o kitų fiziologiškai svarbių laisvųjų radikalų pašalinimo apibūdinimų trūksta. Be to, žinios apie apsauginį TSAT poveikį nuo atminties praradimo, redokso disbalanso ir organų sužalojimo D-gal sukelto poūmio senėjimo modelyje yra ribotos. Todėl šis tyrimas sustiprino antioksidacines TSAT savybes in vitro, pašalindamas DPPH, ABTS, HO•, •O2- ir slopindamas tirozinazės aktyvumą. Be to, buvo įvertinti elgsenos eksperimentai, oksidacinio streso parametrų matavimas ir pagrindinių žiurkių organų histopatologinės būklės, siekiant suteikti papildomos informacijos apie TSAT gebėjimą pagerinti D-gal sukeltą poūmį oksidacinį ir senėjimo pažeidimą, įtvirtinant jo numatomas farmakologines savybes.

Medžiagos ir metodai

Cistanche šaknies žievė buvo surinkta iš Qinba kalnų, Shaanxi provincijoje, Kinijoje, ir ją botaniškai identifikavo daktaras Jitao Wangas (Šansi kinų medicinos universitetas). Kupono pavyzdys (SUCM, Nr. 20201003) buvo deponuotas Shaanxi kinų medicinos universiteto herbariume. Tarasaponinas IV

DPPH (Sigma-Aldrich, Sent Luisas, MO, JAV), ABTS (Maclin Biochemical Co., Ltd, Šanchajus, Kinija), grybų tirozinazė (Yuan Ye Biotechnology Co., Ltd, Šanchajus, Kinija), L{{1} }, 4-dihidroksifenilalaninas (L-DOPA) ir D-gal (Yuan Ye Biotechnology Co., Ltd, Šanchajus, Kinija). Superoksido anijonas (Prekės numeris: A052-1-1), Hidroksilo laisvasis radikalas (Prekės numeris: A018-1-1), BCA (Prekės numeris: A045-4-2), SOD (Prekės numeris: A{{ 8}}), GSH-Px (Prekės numeris: A005-1-1), CAT (Prekės numeris: A007-1-1), MDA (Prekės numeris: A003-1-2), T-AOC ( Elemento numeris: A015-2-1), AST (Prekės numeris: C010-2-1) ir ALT (Prekės numeris: C009-2-1) tyrimo rinkiniai buvo gauti iš Nanjing JianCheng Bioinžinerijos instituto (Nandzingas, Kinija). . Visos naudojamos cheminės medžiagos ir kiti reagentai buvo analitinės kokybės.

Cistanche šaknies žievė nuplaunama dvigubai distiliuotu vandeniu, išdžiovinta ir susmulkinta 60 laipsnių temperatūroje. Prieš eksperimentą milteliai buvo patalpinti vėsioje ir sausoje vietoje. Milteliai (3 kg) tris kartus ekstrahuojami 70 procentų etanoliu su grįžtamu šaldytuvu. Tirpalai buvo sujungti, o supernatantas buvo gautas centrifuguojant ir filtruojant dideliu greičiu. Supernatantas buvo išgrynintas įkeliant į HPD300 makroporingos dervos kolonėlę ir eliuuojant 70 procentų etanoliu. Tirpalas, kuris eliuuotas 70 procentų etanoliu, buvo išgarinamas ir gaunama liekana (356 g) po tirpiklio pašalinimo vakuume. TSAT išeiga buvo 11,87 procento (m/m) ir buvo laikoma šaldytuve tolesniam naudojimui.

grafinis stulpelis (4,6 ID × 25 0 mm). Mobiliąją fazę sudarė acetonitrilas (tirpiklis A) ir 0,1 proc. fosforo rūgšties vandeninis tirpalas (V/V) (tirpiklis B). Gradiento programa buvo tokia: 0–10 min., 5–20 proc. A; 10–25 min 20–28 procentai A; 25–35 min., 28–33 procentai A; 35–45 min., 33–38 procentai A; 45–55 min., 38–46 procentai A; 55–60 min., 46–60 procentų A; 60–70 min. 60–75 procentai A; 70–80 min., 75–45 procentai A; 80–90 min., 45–5 proc. A. Prietaiso veikimo sąlygos buvo 30 laipsnių temperatūra ir 0,8 mL/min srautas. Įpurškiamas etalonų ir mėginių tūris buvo 10 μL. Aptikimo bangos ilgis yra 203 nm. Prieš injekciją visi mėginiai buvo praleisti per 0, 22 μm filtrą. Suderinus su standartu, smailė nustatoma pagal sulaikymo laiką. Kiekybiniam įvertinimui buvo naudojama standarto linijinė kalibravimo kreivė.

Antioksidacinis aktyvumas in vitro

DPPH tyrimas DPPH tyrimas buvo šiek tiek pakeistas, palyginti su ankstesne ataskaita.23 Bevandenio etanolio (100 μL), DPPH tirpalo (100 μL, 0,2 mM) ir mėginio (100 μL, 0,01) mišinys. – 1 mg/L) buvo stipriai sukratytas ir laikomas (25 laipsnių, 30 min.) tamsoje. VC buvo naudojamas kaip teigiama kontrolė. Išmatuota absorbcija (517 nm). DPPH radija

kalčių pašalinimo greitis buvo apskaičiuotas taip:

kur A0 reiškia neigiamos kontrolės absorbciją (DPPH plius absoliutus etanolis); A1 reiškia bandymo sistemą, kurioje yra mėginys (DPPH ir TSAT); ir A2 yra tuščiojo bandymo sistemos absorbcija (TSAT plius absoliutus etanolis). Apskaičiuota DPPH laisvųjų radikalų pašalinimo greičio 50 procentų slopinimo koncentracijos vertė (IC50), kuri parodo TSAT antioksidacinį pajėgumą. Visos operacijos atliekamos lygiagrečiai tris kartus.

ABTS plius tyrimas ABTS buvo nustatytas naudojant Rafique ir kt. metodą su nedideliais pakeitimais.24 Pirmiausia buvo paruošta serija TSAT (0.01–1 mg/mL) tirpalų. Buvo paruoštas 7 mM ABTS tirpalas ir 2,45 mM K2S2O8 tirpalas. Sumaišius tame pačiame tūryje, ABTS plus buvo gautas reaguojant (12–16 val.) tamsoje. Paruoštas ABTS plus buvo atskiestas dvigubai distiliuotu vandeniu iki 0,7 ± 0,05 absorbcijos esant 734 nm. Tada 180 μL atskiesto ABTS plius tirpalo ir 20 μL mėginio mišinys buvo sureaguotas (25 laipsnių, 10 min.) tamsoje. VC buvo naudojamas kaip teigiama kontrolė. Išmatuota absorbcija (734 nm). ABTS plius valymo pajėgumas buvo apskaičiuotas pagal šią formulę:

kur A0 reiškia neigiamos kontrolės absorbciją (ABTS plius plius dvigubai distiliuotas vanduo); A1 reiškia bandymo sistemą, kurioje yra mėginys (ABTS plius plius TSAT); ir A2 yra tuščiojo mėginio sistemos absorbcija (TSAT ir dvigubai distiliuotas vanduo). Tada buvo apskaičiuota ABTS IC50 vertė plius valymo greitis. Visos operacijos buvo atliekamos lygiagrečiai tris kartus.

Grybų tirozinazės slopinimo aktyvumo nustatymas Tirozinazę slopinantis aktyvumas buvo nustatytas pagal šiek tiek patobulintą metodo versiją, apie kurią anksčiau pranešė Morais ir kt.25 50 μL TSAT serija (0.01–1). mg/ml, 50 procentų DMSO) tirpalai buvo įpilami į reakcijos sistemą, kurioje yra atitinkamai 100 μL PBS buferio (0,1 M, pH 6,8) ir 50 μL tirozinazės (100 U/mL), ir 15 min reagavo 25 laipsnių temperatūroje. . Tada į reakcijos sistemą buvo pridėta 50 μL L L-DOPA (3, 5 mM) tirpalo ir inkubuojama 37 laipsnių temperatūroje 10 min. Nustatyta absorbcija (475 nm). VC buvo naudojamas kaip teigiama kontrolė. Buvo apskaičiuotas TSAT slopinimo aktyvumaspagal šią formulę:

rodo tirozinazę slopinantį TSAT aktyvumą. Visos operacijos buvo atliekamos lygiagrečiai tris kartus.