Phellinus Vaninii antioksidacinis, anti-melanogeninis ir raukšles mažinantis poveikis

Susisiekite: ali.ma@wecistanche.com

1. Įvadas

Laisvieji radikalaiir reaktyviosios deguonies rūšys (ROS) paprastai yra nestabilios ir labai reaktyvios cheminės rūšys. Jie daugiausia gaunami iš fermentinių ir nefermentinių medžiagų apykaitos takų žmogaus kūno ląstelėse per mitochondrijų elektronų pernešimo kvėpavimo sistemą, fagocitozę, prostaglandinų sintezę ir endoplazminio tinklo sistemą [1]. Tačiau laisvieji radikalai ir ROS taip pat susidaro veikiant išoriniams šaltiniams, įskaitant sunkiuosius metalus, tabako dūmus, chemines medžiagas ir pramoninius teršalus [2]. Buvo pranešta, kad jie sukelia įvairius negalavimus, tokius kaip senėjimas, širdies ir kraujagyslių ligos, kvėpavimo sutrikimai, cukrinis diabetas, reumatas ir kepenų ligos [3].

Ksantino oksidazė (XO) katalizuoja hipoksantino oksidaciją į ksantiną ir toliau ksantiną paverčia šlapimo rūgštimi. Podagrai būdinga padidėjusi šlapimo rūgšties koncentracija kraujyje (hiperurikemija), dėl kurios sąnariuose nusėda šlapimo rūgšties kristalai, sukeliantys skausmingą uždegimą, o 5–30 procentų pasaulio gyventojų kenčia nuo podagra, kuri laikoma būti svarbus rizikos veiksnys žmonių sveikatai [4,5]. Podagrai gydyti paprastai naudojami XO inhibitoriai, kurie mažina šlapimo rūgšties koncentraciją plazmoje [6]. Nors alopurinolis, XO inhibitorius, buvo naudojamas podagrai gydyti, neseniai buvo sukurtas naujas XO inhibitorius – febuksostatas. Tačiau vaistas turi daug šalutinių poveikių, įskaitant hepatitą, nefropatiją ir alergines reakcijas [7]. Taigi buvo tęsiama naujų XO inhibitorių, pasižyminčių geru gydomuoju aktyvumu ir mažesniu šalutiniu poveikiu, paieška.

Tirozinazė yra greitį ribojantis vario turintis oksidacinis fermentas, dažniausiai esantis augaluose, mikroorganizmuose ir gyvūnuose. Tirozinazė dalyvauja melanino sintezės keliuose, nes L-tirozinas hidroksilinamas į 3,4-dihidroksifenilalaniną (DOPA) ir DOPA virsta dopakvinonu [8]. Melaniną gamina melanosomų melanocitai ir vaidina svarbų vaidmenį saugant epidermį nuo žalingo saulės spindulių ultravioletinės (UV) spinduliuotės poveikio. Odos hiperpigmentacija, atsirandanti dėl padidėjusio melanino sintetinio fermento aktyvumo dėl pernelyg didelio UV spinduliuotės poveikio, gali sukelti dermatologinius sutrikimus, įskaitant melazmą, vitiligo ir lentigo [9, 10]. Pastaruoju metu tirozinazės inhibitoriai tapo svarbūs siekiant užkirsti kelią pigmentacijos problemoms ir kitiems su melaninu susijusiems medicininiams sutrikimams. Kadangi daugelis moterų nori pašviesinti savo tamsias odos dėmeles, medicinos ir kosmetikos pramonė daugiausia dėmesio skyrė tirozinazės inhibitoriams odos hiperpigmentacijai gydyti [11]. Siekiant išspręsti šias problemas, kaip odą balinančios medžiagos buvo sukurti organiniai junginiai, kilę iš mikroorganizmų ir augalų, pavyzdžiui, kojo rūgštis, arbutinas, azelaino rūgštis, gentizino rūgštis ir kiti [12]. Balinamųjų junginių veiksmingumą lemia tirozinazės slopinimas sistemose, kuriose nėra ląstelių, arba ląstelių tirozinazės slopinimas, o nauji tirozino inhibitorių šaltiniai iš augalų ir mikroorganizmų yra nuolat tikrinami [13].

Odos senėjimas yra biologiškai neišvengiamas gyvų organizmų procesas, kurį skatina tiek vidiniai, tiek išoriniai veiksniai. Vidinį odos senėjimą, dar vadinamą nuo amžiaus priklausomu senėjimu arba chronologiniu senėjimu, sukelia vidiniai fiziologiniai organizmo veiksniai, o išorinį senėjimą sukelia daugybė išorinių veiksnių, įskaitant odos poveikį UV spinduliuotei, cigarečių rūkymą, oro taršą. tt Šie veiksniai gali sukelti raukšles, pigmentaciją ir odos storio pokyčius [14]. Oda yra minkštas išorinis audinys, susidedantis iš epidermio, dermos ir poodinio audinio. Tolimiausia odos dalis yra tarpląstelinė matrica (ECM), kurią sudaro kolagenas ir elastinas [15]. Kolagenas suteikia odai elastingumo, stiprumo ir lankstumo. Jis taip pat palaiko struktūrinį odos karkasą ir atlieka pagrindinį vaidmenį palaikant normalias ląstelių funkcijas odos morfogenezėje [16]. Elastinas yra pagrindinis baltymas, esantis ECM jungiamajame audinyje ir suteikia odai elastingumo. Kolagenazė, nuo cinko priklausoma endopeptidazė, gali suardyti ECM komponentus, ypač 1 tipo kolageną. Elastazė, proteazės fermentas, skaido elastiną ir kolageną bei lemia ECM jungiamojo audinio mechanines ir struktūrines savybes [17]. Todėl pageidautina sukurti farmakologinius inhibitorius, kurie apsaugotų nuo odos senėjimo, pvz., odos suglebimo ir raukšlių.

Grybai tūkstančius metų buvo naudojami kaip geras maisto šaltinis ir tradicinė liaudies medicina daugelyje skirtingų šalių. Jų vaisiakūniuose yra biologiškai aktyvių metabolitų, turinčių didelę vaistinę vertę, įskaitant b-gliukanus, polisacharidus, polifenolius, flavonoidus, terpenoidus ir kitus organinius junginius, kurie skatina imunitetą, priešnavikinius, antihiperglikeminius, antihiperglikeminius. cholesterolio, hepatoprotekcinė ir uždegimą slopinanti veikla [18–20].

Phellinus vaninii, paprastai žinomas kaip „sanghuang“, priklauso Basidiomycota, Aphyllophorales, Hymenochaetacae ir yra paplitęs Rytų Azijoje ir Rusijoje [21]. Kai kurios Phellinus genties grybų rūšys, įskaitant Ph. baumi, Ph. gilvus, Ph. linteus, Ph. merrillii ir Ph. pini, buvo ištirtos dėl galimo vaistinio antioksidanto, antidiabetinio, antihiperlipideminio poveikio. antimikrobinis ir priešnavikinis aktyvumas [22,23].

Nors Ph. vaninii buvo prieinamas Korėjoje, yra tik keletas pranešimų apie jo gydomąjį poveikį [24]. Todėl šio tyrimo tikslas buvo įvertinti Ph. vaninii vaisiakūnių metanolio ir karšto vandens ekstraktų antioksidacinį, antiksantino oksidazės, anti-melanogeninį ir raukšles mažinantį poveikį.

2. Medžiagos ir metodai

2.1. Cheminės medžiagos ir reagentai

Butilintas hidroksitoluenas (BHT), 1,1-difenil-2- pikrilhidrazis (DPPH), dimetilsulfoksidas, (DMSO) ksantino oksidazė, tirozinazė, L-3, 4-dihidroksifenilas - lalaninas (DOPA), ksantino oksidazė, alopurinolis, kojinė rūgštis, arbutinas, kolagenazė ir kiaulių kasos elastazė buvo įsigyti iš Sigma-Aldrich Co. (St. Louis, MO, JAV) ir visos kitos cheminės medžiagos ir tirpikliai, naudojami tiriamieji eksperimentai buvo analitinio lygio.

2.2. Grybų ekstraktas

Ph. vaninii vaisiakūniai buvo gauti iš Gyeonggi žemės ūkio technologijų instituto Grybų tyrimų instituto Korėjoje. Vaisiakūniai džiovinami ore (45 laipsnių 48 val.) ir smulkiai sumalti. Norint paruošti metanolio ekstraktą (ME), 20 g miltelių 400 ml 80 procentų metanolio buvo laikomi orbitinėje purtyklėje (125 aps./min.) 24 valandas 25 laipsnių temperatūroje. Tirpalas filtruojamas per filtravimo popierių. Norint gauti karšto vandens ekstraktą (HE), toks pat miltelių kiekis virinamas 3 valandas su 400 ml dejonizuoto distiliuoto vandens ir filtruojamas per filtravimo popierių. Tada likusi liekana buvo ekstrahuota 400 ml 80 procentų metanolio arba karšto vandens du kartus, kaip aprašyta aukščiau. Tada sujungti ekstraktai buvo išgarinti iki sausumo 40 laipsnių temperatūroje, o likęs vanduo pašalintas džiovykle šaldant.

Cistanche ekstraktas

2.3. Bendras fenolio ir flavonoidų kiekis

Bendras fenolio kiekis ME ir HE buvo nustatytas naudojant nedidelę Folin-Ciocalteu tyrimo modifikaciją [25]. 1 ml ME ir HE alikvotinė dalis buvo pridėta į 1 ml 10 procentų Folin-Ciocalteu tirpalo. Tirpalas sumaišomas ir paliekamas 3 minutes 25 laipsnių temperatūroje. Tada 3 ml 2 procentų natrio karbonatoPridėta (Na2CO3) tirpalo ir palaikoma 2 valandas 25 C temperatūroje. Absorbcija matuojama spektrometru ties 760 nm. Bendras fenolio kiekis buvo išreikštas mg galo rūgšties ekvivalentų (GAE).

Bendras flavonoidų kiekis buvo matuojamas šiek tiek modifikuotu aliuminio chlorido (AlCl3) kolorimetriniu tyrimu [26]. Alikvotinė dalis (1 ml) ME ir HE buvo ištirpinta 1 ml dejonizuoto vandens. Šis tirpalas (1 ml) buvo įpiltas į 3.0 ml 95 procentų alkoholio, 0,2 ml 10 procentų aliuminio chlorido, 0,2 ml kalio acetato (1 M), ir 5,6 ml dejonizuoto vandens. Tada reakcijos mišinys buvo inkubuojamas 25 laipsnių temperatūroje 40 minučių, o absorbcija buvo matuojama spektrometru esant 415 nm. Bendras flavonoidų kiekis buvo išreikštas mg kvercetino ekvivalentų (QE).

2.4. Ląstelių gyvybingumo tyrimas

2.4.1. Ląstelių kultūros

Pelės melanomos B16-F10 ląstelių linija buvo gauta iš Korėjos ląstelių linijos tyrimų fondo Korėjos ląstelių linijų banko, Seulas, Korėja. Ląstelės buvo kultivuojamos Dulbecco modifikuotoje erelio terpėje (DMEM), papildytoje 10 procentų termiškai inaktyvuotu galvijų vaisiaus serumu (FBS) ir 1 procentu penicilino-streptomicino 37 laipsnių temperatūroje drėgname inkubatoriuje su 5 procentais atmosferos CO2.

2.4.2. Ląstelių gyvybingumas

ME ir HE poveikis B{{0}}F10 ląstelių gyvybingumui buvo įvertintas MTT tyrimu [27]. Ląstelės (5 104) buvo kultivuojamos 24-šulinėlių plokštelėje ir inkubuojamos 24 valandas 37 laipsnių temperatūroje. Tada ląstelės buvo apdorotos skirtingomis ME ir HE koncentracijomis (25–750 mg / ml) ir inkubuojamos 48 valandas. Tada kiekvienas šulinys buvo papildytas 200 ml MTT tirpalo (0, 5 mg / ml) ir inkubuojamas 4 valandas tamsoje. Gauti spalvoti formazano kristalai buvo ištirpinti 200 ml DMSO, o absorbcija buvo išmatuota mikroplokštelių skaitytuvu esant 570 nm.

2.5. Antioksidantų tyrimas

2.5.1. DPPH valymo veikla

ME ir HE radikalų pašalinimo iš Ph. vaninii vaisiakūnių poveikis buvo nustatytas naudojant DPPH tyrimą [28] su nedideliais pakeitimais. Trumpai tariant, 1 ml skirtingų koncentracijų ME ir HE (0,125–2{5}} mg/mL) buvo sumaišyta su 1 ml DPPH (0,1 mM) metanolyje. Mišinys suplakamas ir palaikomas 30 min 25 laipsnių temperatūroje. Absorbcija buvo matuojama spektrofotometru esant 517 nm. DPPH radikalų šalinimo efektas buvo apskaičiuotas pagal šią formulę:

DPPH radikalų šalinimo aktyvumo procentas=[ (Absc-Abss) / Absc ] × 100,

kur Absc reiškia nešiklio valdymo absorbciją, o Abss – mėginio absorbciją. BHT buvo naudojamas kaip atskaitos standartas.

2.5.2. Lipidų peroksidacijos slopinimas

Ph. vaninii vaisiakūnių ME ir HE lipidų peroksidaciją slopinantis aktyvumas buvo įvertintas taikant anksčiau aprašytą metodą [29] su nedideliais pakeitimais. Trumpai tariant, į mėgintuvėlį įpilta 250 ml kiaušinio trynio homogenato (10 proc. distiliuotame vandenyje), 50 ml kiekvieno ME ir HE ir 200 ml distiliuoto vandens. . Pridedama 25 mililitrai FeSO4 (0,07 M) ir inkubuojama 30 minučių 25 C temperatūroje. Tada 750 ml 20 procentų acto rūgšties (pH 3,5) ir 750 ml 0,8 procento tiobarbitūro rūgšties (TB) 1,1 procento natrio dodecilo tirpale. buvo pridėta sulfato (SDS) su 25 ml 20 procentų trichloracto rūgšties (TCA), mišinys maišomas ir inkubuojamas vandens vonioje 60 min. 100 C temperatūroje. Atšaldžius iki 25 C, 3,0 ml 1- Į kiekvieną mėgintuvėlį buvo pridėta butanolio ir jie centrifuguojami 10 minučių 3000 aps./min. Tirpalo absorbcija buvo matuojama spektrofotometru esant 532 nm. Lipidų peroksidaciją slopinantis poveikis buvo apskaičiuotas pagal šią formulę:

Lipidų peroksidacijos slopinimas (procentais)=[(Absc – Abss)/Absc] × 100,

kur Absc reiškia nešiklio kontrolinės medžiagos absorbciją, o Abss – bandomojo mėginio absorbciją. BHT buvo naudojamas kaip atskaitos standartas.

2.5.3. Hidroksilo radikalų šalinimo aktyvumas

ME ir HE hidroksilo radikalų šalinimo efektas iš Ph. vaninii vaisiakūnių buvo išmatuotas naudojant paskelbtą metodą [30] su nedideliais pakeitimais. Trumpai tariant, tirpale, kuriame yra 10{ {34}}mL 2,8 mM 2-dezoksiribozės fosfatiniame buferyje (10 mM, pH 7,4), 200 ml FeCl3 (200 mikroM)-EDTA (1,04 mikroM) (1:1 t/v), 100 ml H2O2 (1,0 mM) ir 100 ml askorbo rūgšties (1,0 mM). Dezoksiribozės skilimo kiekis buvo matuojamas įpylus 1,0 ml 1 procento TBA, po to inkubavus 100 °C temperatūroje 20 min. Absorbcija buvo matuojama spektrofotometru, esant 532 nm. Hidroksilo radikalų pašalinimo slopinamasis poveikis buvo apskaičiuotas pagal šią formulę:

Hidroksilo radikalų pašalinimas (procentais)=[(Absc – Abss) / Absc] × 100

kur Absc reiškia nešiklio kontrolinės medžiagos absorbciją, o Abss – bandomojo mėginio absorbciją. BHT buvo naudojamas kaip atskaitos standartas.

2.6. Ksantino oksidazės slopinimas

Ksantino oksidazę (XO) slopinantis ME ir HE iš Ph. vaninii vaisiakūnių aktyvumas buvo išmatuotas naudojant ksantiną kaip substratą pagal paskelbtą metodą su nedideliais pakeitimais [31]. Įvairių koncentracijų ME ir HE (0,5–8.{6}} mg/mL) 1 ml alikvotinė dalis buvo įpilta į 2,9 ml fosfatinio buferio (pH 7,5) ir 0 .1mL ksantino oksidazės fermento tirpalo (0.1 vnt./mL fosfatiniame buferyje, pH 7,5) ir iš anksto inkubuojamas 25 C temperatūroje 15 min. Tada reakcija buvo inicijuota pridedant 2 ml substrato tirpalo (150 mM ksantino buferyje). Mišinys inkubuojamas 30 min 25 C temperatūroje ir reakcija buvo nutraukta pridedant 1 ml 1 N HCl. Absorbcija buvo matuojama spektrofotometru esant 290 nm. Alopurinolis buvo naudojamas kaip etaloninis standartas. Ksantino oksidazės slopinimas buvo apskaičiuotas pagal šią formulę:

Ksantino oksidazės slopinimas (procentais)=[(A–B)–(C–D) / (A–B) ] × 100,

kur A yra fermento aktyvumas be ekstrakto, B yra A kontrolė be ekstrakto ir fermento; C – ekstrakto su XO aktyvumas, D – ekstrakto be XO aktyvumas.

2.7. Anti-melanogeninis poveikis

2.7.1. Tirozinazės slopinimas in vitro

Grybų ekstraktų tirozinazę slopinantis aktyvumas buvo nustatytas naudojant paskelbtą metodą [32] su nedideliais pakeitimais. Trumpai tariant, reakcijos mišiniai buvo paruošti pridedant 40mL tirozinazės (31 vnt./ml) į 40 ml įvairios koncentracijos ME ir HE (0). 125–2,0 mg/ml), 40 ml 1,5 mM L-tirozino ir 80 ml 0,1 M fosfatinio buferio (pH 6,8). Tada mišinys buvo inkubuojamas 10 minučių 37 C temperatūroje. Absorbcija buvo matuojama mikroplokštelių skaitytuvu esant 475 nm. Tirozinazės slopinimas buvo apskaičiuotas pagal šią formulę:

Tirozinazės slopinimas (procentais)=[(Absc – Abss) / Absc] × 100,

kur Absc reiškia nešiklio kontrolinės medžiagos absorbciją, o Abss – bandomojo mėginio absorbciją. BHT buvo naudojamas kaip atskaitos standartas.

Cistanche yra tirozinazės inhibitorius.

2.7.2. DOPA autooksidacijos slopinimas in vitro

L-DOPA autooksidaciją slopinantis grybų ekstraktų aktyvumas buvo nustatytas šiek tiek modifikuotu metodu [33]. Trumpai tariant, reakcijos mišiniai buvo paruošti pridedant 40mL tirozinazės (31 vnt/ml) į 4{{10}} mL įvairios koncentracijos ME ir HE (0,125– 2,0 mg/mL) ir iš anksto inkubuojama 10 min 37 C temperatūroje. Tada reakcija buvo inicijuota pridedant 40 ml 2,5 mM L-DOPA tirpalo (fosfatiniame buferyje) ir 80 ml fosfatinio buferio (0,1 M, pH). 6.8) ir inkubuojamas 10 min 37 C temperatūroje tamsoje. Absorbcija buvo matuojama mikroplokštelių skaitytuvu esant 475 nm. L-DOPA autooksidacijos slopinimo procentas buvo apskaičiuotas pagal šią formulę:

DOPA automatinės oksidacijos slopinimas (procentais)=[(Absc – Abss)/Absc] × 100,

kur Absc reiškia nešiklio kontrolinės medžiagos absorbciją, o Abss – bandomojo mėginio absorbciją. Kojic rūgštis buvo naudojama kaip atskaitos standartas.

2.7.3. Ląstelių tirozinazės aktyvumas

Ląstelių tirozinazės aktyvumas B{0}}F10 ląstelėse buvo matuojamas naudojant nedidelę paskelbto metodo modifikaciją [34]. Ląstelės (5 x 105 ląstelės šulinėlyje) buvo kultivuojamos 96-šulinėlių plokštelėse. Po 24 valandų apdorojimo įvairios koncentracijos mėginiais (25–500 mg/ml), melanomos ląstelės buvo plaunamos PBS ir lizuojamos 0,1 M fosfatiniu buferiu (pH 6,8), turinčiu 1 proc. Triton X-100. Ląstelės buvo laikomos ant ledo 10 minučių, o lizatai centrifuguojami 10, 000 g greičiu 10 minučių. Tada baltymų kiekis supernatante buvo nustatytas Brafordo metodu, naudojant galvijų serumo albuminą (BSA) kaip standartą. Tirozinazės aktyvumui išmatuoti į kiekvieną 96-šulinėlio plokštelės šulinį buvo įdėta 100 ml ląstelių lizato tirpalo ir 100 ml 2,5 mM L-DOPA (tame pačiame fosfatiniame buferyje). Po 1 valandos inkubacijos 37 C temperatūroje, naudojant mikroplokštelių skaitytuvą, absorbcija buvo išmatuota esant 475 nm. Ląstelių tirozinazės aktyvumas buvo apskaičiuotas pagal šią formulę:

Ląstelių tirozinazės aktyvumas (procentais)=(Abss/Absc) × 100,

kur Abss reiškia mėginio absorbciją, o Absc – kontrolinės medžiagos absorbciją. Arbutinas buvo naudojamas kaip atskaitos standartas.

2.7.4. Ląstelių melanino sintezė

Melanino kiekis B{0}}F10 melanomos ląstelėse, apdorotose skirtingomis grybų ekstraktų koncentracijomis, buvo matuojamas naudojant Hosoi ir kt. paskelbtą metodą. [35]. Ląstelės (4 × 104 ląstelės duobutėje) buvo kultivuojamos 96-šulinėlių plokštelėje DMEM. Po 24 valandų inkubacijos ląstelės buvo apdorotos ME ir HE (25–500 mg / ml) 72 valandas, kuriose buvo 0, 4 mM melanocitus stimuliuojančio hormono (MSH). Ląstelės buvo surinktos pridedant 300 ml Triton 100 (1 proc., PBS), centrifuguojamos 5 minutes 3000 aps./min., o supernatantas pašalinamas. Tada į ląstelių nuosėdas buvo įpilta 100 ml 1 N NaOH ir 200 ml DMSO (10 proc.) ir 1 valandą laikomos 60 C temperatūroje. Tirpalo absorbcija buvo išmatuota naudojant mikroplokštelių skaitytuvą esant 405 nm. Nustatyta ME ir HE įtaka melanino sintezei. Arbutinas buvo naudojamas kaip atskaitos standartas.

Cistanche slopina melaniną.

2.8. Poveikis nuo raukšlių

2.8.1. Elastazės slopinimas

ME ir HE elastazę slopinantis poveikis buvo įvertintas anksčiau aprašytais metodais [36]. Kiaulių kasos elastazė (PE-EC. 3.4.21.36) buvo ištirpinta steriliame vandenyje, kad būtų gautas 3,33 mg/ml pradinis tirpalas. Substratas N-sukcinil-Ala-Ala-Ala-p-nitroanilidas (AAAPVN) buvo ištirpintas 0,2M Tris-HCl buferyje (pH 8.{17}}). Reakcija buvo atlikta 96-šulinėlių mikroplokštelėje. Kiekviename šulinyje buvo 120mL 0,2M Tris-HCl buferio, 50mL grybų ekstrakto (0,125–2,0 mg/mL) Tris-HCl buferyje, 30 ml PE ir 50 ml 1,6 mM AAAPVN. Bandomasis ekstraktas buvo iš anksto inkubuotas 25 ° C temperatūroje 15 minučių prieš pridedant substrato. Absorbcija buvo matuojama mikroplokštelių skaitytuvu esant 402 nm. Esterazės slopinimo procentas buvo apskaičiuotas taip:

Esterazės slopinimas (procentais)=[(Absc – Abss)/Absc] × 100,

kur Absc reiškia nešiklio kontrolinės medžiagos absorbciją, o Abss – bandomojo mėginio absorbciją. EGCG buvo naudojamas kaip etaloninis standartas, o distiliuotas vanduo buvo naudojamas kaip neigiama kontrolė.

2.8.2. Kolagenazės slopinimas

Ph. vaninii vaisiakūnių ME ir HE kolagenazę slopinantis poveikis buvo tiriamas naudojant anksčiau aprašytus metodus [37] su tam tikromis modifikacijomis. Kolagenazė iš Clostridium histolyticum (ChC-EC.3.4.23.3) buvo ištirpinta 50mM 1,44 U/mL tricino buferio (pH 7,8). Substratas, 4-fenilazobenziloksikarbonil-Pro-Leu-Gly-Pro-D-Arg trifluoracetato druska (PZ-peptidas), buvo ištirpintas 2,5 mM tricino buferyje. Dvidešimt penki mikrolitrai grybų ekstraktų (0.125–2,0 mg/ml) buvo inkubuojami su 20 ml fermento 155 ml buferio 15 minučių 37 C temperatūroje, prieš pridėdami 50 ml PZ-peptido, kad būtų pradėtas reakcija 60 min. 37 C temperatūroje. Reakcija buvo sustabdyta pridedant 1 ml citrinos rūgšties (3 proc.). Tada įpilama 5 ml etilo acetato, tirpalas stipriai suplakamas ir leidžiama 10 min. Supernatanto absorbcija buvo matuojama esant 320 nm, naudojant mikroplokštelių skaitytuvą. EGCG buvo naudojamas kaip atskaitos standartas. Kolagenazės slopinimas buvo apskaičiuotas pagal šią formulę:

Kolagenazės slopinimas (procentais)=[(Absc – Abss)/Absc] × 100,

kur Absc reiškia nešiklio kontrolinės medžiagos absorbciją, o Abss – bandomojo mėginio absorbciją. EGCG buvo naudojamas kaip atskaitos standartas.

2.9. Statistinė analizė

Visi duomenys buvo išreikšti kaip vidurkiai ± standartiniai nuokrypiai (SD), o statistinei analizei buvo naudojamas SPSS V.13 (SPSS Inc., Čikaga, IL, JAV). Grupių vidurkiams palyginti buvo naudojama vienpusė dispersijos analizė, po kurios buvo atlikti Dunkano kelių diapazonų testai. Skirtumai tarp vidurkių ties 5 procentais (p<.05) level="" were="" considered="" statistically="">

3. Rezultatai ir diskusija

3.1. Bendras fenolių ir flavonoidų kiekis

Bendras ME ir HE fenolio ir flavonoidų kiekis pateiktas 1 lentelėje. Rezultatai parodė, kad bendras fenolio ir flavonoidų kiekis ME buvo atitinkamai 31,67 mg GAE/g ir 6,83 mg QE/g, o HE – 16,33 mg. GAE/g ir 4,50 mg QE/g atitinkamai. Vamanu ir Nita [38] pranešė, kad bendras fenolio kiekis metanolio ir karšto vandens ekstraktuose iš Boletus edulis vaisiakūnių buvo atitinkamai 18,96 mg GAE/g ir 17,22 mg GAE/g, o flavonoidų kiekis metanolio ekstrakte iš Boletus aestivalis. ir Leccinum carpini vaisiakūniai buvo atitinkamai 1,53 mg CE/g ir 1,48 mg CE/g [39]. Mūsų rezultatai rodo, kad bendras fenolio ir flavonoidų kiekis grybų ekstraktuose buvo didesnis nei aukščiau paminėtuose grybuose ir galėjo prisidėti prie su antioksidantais susijusios antiksantino oksidazės, anti-melanogeninio ir odos antioksidanto pagerėjimo. - raukšlių mažinimo veikla.

3.2. Ląstelių gyvybingumas

Norint nustatyti, ar Ph. vaninii vaisiakūnių ekstraktai turėjo citotoksinį poveikį B16- F10 pelių melanomos ląstelėms, ląstelės buvo apdorotos skirtingomis ME ir HE koncentracijomis 72 valandas, o ląstelių gyvybingumas buvo nustatytas MTT metodu. tyrimas. ME ir HE apdorotų ląstelių gyvybingumas atitinkamai svyravo nuo 99,74 iki 85,33 proc. ir nuo 100,67 iki 88,33 proc., kai dozė yra 50-750 mg/ml (1 pav.). Ląstelių gyvybingumas sumažėjo didėjant grybų ekstraktų koncentracijai. Kadangi ląstelių, apdorotų 500 mg/mL ME ir HE, gyvybingumas buvo atitinkamai didesnis nei 90,33 proc. ir 91 proc., o ME ir HE IC50 vertės buvo atitinkamai 4 410 mg/ml ir 5 385 mg/mL, ME ir HE nebuvo atitinkamai citotoksiškas B16-F10 melanomos ląstelėms tirtomis koncentracijomis. Todėl buvo atliktas B16-F10 melanomos ląstelių, apdorotų skirtingomis grybų ekstraktų koncentracijomis, ląstelių tirozinazės ir melanino sintezės aktyvumas.

3.3. Antioksidacinis aktyvumas

3.3.1. DPPH radikalų šalinimo efektas

DPPH radikalų šalinimo ME ir HE poveikis iš Ph. vaninii vaisiakūnių stiprėjo didėjant ekstrakto koncentracijai. ME ir HE radikalų šalinimo aktyvumas esant {{0}},125–2.0 mg/ml svyravo atitinkamai nuo 75,83 iki 95,17 proc. ir 73,33 proc. iki 94,33 proc. , teigiama kontrolė, parodė gerą skalbimo aktyvumą (96,19–96,97 proc.) (2 paveikslas (A)). Nors ME ir HE DPPH pašalinimo aktyvumas buvo mažesnis nei BHT, kai koncentracija svyravo nuo 0,125 iki 0,5 mg/mL, slopinimo procentas, pastebėtas ME ir HE, esant 1.{{ 24}}–2,0 mg/mL buvo statistiškai nereikšmingas, lyginant su BHT. Šie rezultatai rodo, kad metanolio ir karšto vandens ekstraktai pasižymėjo geru radikalų šalinimo aktyvumu esant didesnėms tirtoms koncentracijoms.

Pranešama, kad metanolio ekstrakto iš Pleurotus pulmonarius vaisiakūnių DPPH sugeriantis aktyvumas svyruoja nuo 25,67 proc. iki 92,73 proc., esant 0,125-2.{7}}mg/mL [40] . Mau ir kt. [41] nustatė, kad metanolio ekstraktų iš Tricholoma giganteum, Grifola frondosa ir Hericium erinaceus grybų radikalų šalinimo poveikis svyravo nuo 63,2 iki 67,8 proc., kai koncentracija yra 6,4 mg/ml. Todėl mūsų eksperimentiniai rezultatai rodo, kad ME ir HE (0,125–2,0 mg/mL) iš Ph. vaninii vaisiakūnių DPPH pašalinimo aktyvumas gali užtikrinti tinkamą apsaugą nuo laisvųjų radikalų ir ROS pažeidimų.

2 pav.Metanolio ir karšto vandens ekstraktų iš vaisiakūnių antioksidacinė veiklaPhellinus vaninii.

3.3.2. Lipidų peroksidacijos slopinimas

P. vaninii vaisiakūnių ME ir HE lipidų peroksidaciją slopinantis aktyvumas svyravo nuo 44,99 iki 66.08 proc. ir nuo 41,26 iki 64.00 proc., esant {{1{{16} }}}.125-2.0mg/mL (2 (B) pav.), tai rodo, kad didėjanti grybų ekstraktų koncentracija padidino lipidų peroksidacijos slopinimą. Tačiau lipidų peroksidaciją slopinantis BHT poveikis buvo 90,30 proc., kai 2,0 mg/ml, o tai buvo žymiai didesnis (p.<.001) than="" those="" of="" me="" and="" he.="" the="" ic50="" values="" of="" me="" against="" lipid="" peroxidation="" from="" wild="" and="" cultivated="" mushrooms="" including="" pleurotus="" ostreatus,="" termitomyces="" robustus,="" pleurotus="" sajor-caju,="" and="" auricularia="" auricula="" were="" 0.15,="" 0.43,="" 0.75,="" and="" 1.51mg/ml,="" respectively="" [42].="" the="" inhibi-="" tory="" effects="" of="" hot="" water="" extracts="" on="" lipid="" peroxida-="" tion="" of="" 14="" different="" edible="" and="" medicinal="" mushroom="" species="" collected="" from="" malaysia="" ranged="" from="" 33.33%="" to="" 57.18%="" at="" the="" concentration="" of="" 10="" mg/ml="" [43].="" in="" this="" study,="" the="" lipid="" peroxidation="" inhibitory="" activity="" of="" me="" and="" he="" from="" ph.="" vaninii="" ranged="" from="" 65.87%="" to="" 78%="" at="" 2.0mg/ml="" and="" their="" ic50="" values="" were="" 0.19="" mg/ml="" and="" 0.17="" mg/ml,="" respectively.="" these="" results="" suggest="" that="" me="" and="" he="" from="" ph.="" vaninii="" fruiting="" bodies="" possessed="" good="" inhibitory="" activity="" toward="" lipid="" peroxidation="" compared="" to="" the="" mushrooms="" described="" above.="" therefore,="" p.="" vaninii="" fruiting="" bodies="" could="" be="" a="" valuable="" antioxidant="">

3.3.3. Hidroksilo radikalų šalinimo efektas

Ph. vaninii ME ir HE hidroksilo radikalų šalinimo poveikis svyravo nuo 75,60 iki 98,19 proc. ir nuo 65,21 iki 97,55 proc. atitinkamai, o BHT – nuo ​​79,89 iki 92,66 proc. (2 (C) pav.). Tačiau Ph. vaninii ME ir HE IC50 vertės buvo atitinkamai 0,115 mg/mL ir 0,119, o IC5{{4{{46} }}} BHT vertė buvo 0,111 mg/mL, o tai rodo, kad ME ir HE hidroksilo radikalų šalinimo poveikis buvo šiek tiek mažesnis nei BHT. Taigi, ME ir HE iš Ph. vaninii pasižymėjo palyginti geru ir palyginamu hidroksilo radikalų šalinimo aktyvumu tirtomis koncentracijomis. Didesnis hidroksilo radikalų pašalinimo aktyvumas, nustatytas ME ir HE šiame eksperimente, parodė, kad ekstraktai veiksmingai užkirto kelią 2-dezoksiribozės skilimui, pašalindami hidroksilo radikalus tiriamajame tirpale. Pranešama, kad metanolio ekstraktas iš Pleurotus pulmonarius vaisiakūnių turi 95,13 procentų hidroksilo radikalų naikinamąjį poveikį esant 2,0 mg/ml [40], kuris buvo mažesnis nei ME (98,18 proc.) ir HE (97,55 proc.) iš Ph. vaninii tirtoje koncentracijoje. Pranešama, kad Hypsizigus ulmarius grybų vaisiakūnių metanolio ekstrakto hidroksilą sugeriantis poveikis yra 76,67 proc. esant 1,0 mg/ml [44], o ME ir HE – 83.00 proc. ir 77,17 proc. 0,25 mg/ml. Apibendrinant, mūsų rezultatai rodo, kad Ph. vaninii ME ir HE hidroksilo radikalų šalinimo poveikis buvo geresnis nei aukščiau paminėtų grybų ekstraktų. Todėl ME ir HE iš Ph. vaninii yra stiprūs hidroksilo radikalų gaudytojai, kurie gali būti naudojami siekiant išvengti su ROS susijusių problemų.

3.4. Ksantino oksidazės slopinimas

Ksantino oksidazę slopinantis Ph. vaninii ME ir HE aktyvumas didėjo didėjant koncentracijai. ME ir HE ksantino oksidazės slopinimas, esant {{0}},5–8.0mg/ml, svyravo atitinkamai nuo 61,15 iki 88,99 proc. ir nuo 34,13 proc. iki 84,56 proc. Tačiau alopurinolis, etaloninis standartas, parodė puikų XO slopinamąjį aktyvumą nuo 89,73 iki 97,23 proc., esant toms pačioms tirtoms koncentracijoms (3 pav.). Nors ME ir HE parodė vidutinį XO slopinamąjį poveikį mažesnėmis koncentracijomis, grybų ekstraktai žymiai slopino XO esant didesnėms koncentracijoms. Pranešama, kad Ph. gilvus vaisiakūnių metanolio ir karšto vandens ekstraktų XO slopinimas svyruoja nuo 28,6 0 proc. iki 86,20 proc. ir nuo 36,53 proc. iki 97,07 proc., kai yra 0,5-8,0 mg /mL, atitinkamai [45], o tai rodo, kad ME ir HE slopinamasis poveikis XO atžvilgiu buvo panašus į Ph. gilvus.

Flavonoidai, polifenolinių junginių klasė, yra dažniausiai pasitaikantys antriniai augalų ir grybų metabolitai, ir buvo pranešta, kad jie slopina ksantino oksidazę [46]. Taigi ME ir HE aptiktos didesnės fenolio ir flavonoidų koncentracijos galėjo prisidėti prie ksantino oksidazės slopinimo.

3.5. Odą balinantis poveikis

3.5.1. Tirozinazės slopinimas in vitro

ME ir HE tirozinazę slopinantis aktyvumas iš Ph. vaninii vaisiakūnių svyravo nuo 55,83 proc. iki 96,16 proc. ir nuo 30,29 proc. iki 92,74 proc. ties 0,125–2.{{ 17}} mg/ml, atitinkamai (4 paveikslas (A)), ir padidėjo didėjant koncentracijai. Tačiau kojo rūgštis, etaloninis standartas, parodė puikų tirozinazę slopinantį aktyvumą nuo 98,74 iki 99,61 proc., esant {{2{{30}}}},125-2,0 mg/ml. Rezultatai rodo, kad tirtomis koncentracijomis ME rodė gerą, o HE – vidutinį poveikį. Alamas ir kt. [47] pranešė, kad tirozinazės slopinimas metanoliu ir karšto vandens ekstraktais iš P. salmoneostramineus vaisiakūnių svyravo nuo 20,90 proc. iki 63,29 proc. ir nuo 15,25 proc. iki 49,25 proc., esant atitinkamai 0,125-1,0 mg/mL. Ph. vaninii aktyvumas tirozinazei buvo didesnis nei P. salmoneostramineus vaisiakūnių.

Fenoliniai junginiai yra aromatinių rūgščių junginiai, kurių sudėtyje yra fenolio žiedų ir karboksirūgšties. Flavonoidai yra polifenolinių junginių grupė. Jie randami daugelyje augalų ir grybų rūšių. Polifenoliai laikomi tirozinazės substratais ir yra didžiausia tirozinazės inhibitorių grupė. Buvo pranešta, kad keli polifenoliai slopina tirozinazę, prisijungdami prie aktyviosios tirozinazės fermento vietos, todėl fermentas negrįžtamai inaktyvuojamas dėl į substratą panašios sąveikos [48]. Kai kurie flavonoidai taip pat įrodė slopinamąjį poveikį tirozinazei, nes chelatuoja tirozinazės vario jonus [49].

Todėl ME ir HE slopinamąjį poveikį tirozinazei gali lemti grybų ekstraktuose esantys polifenoliniai junginiai ir flavonoidai. Antioksidacinis ME ir HE poveikis taip pat gali prisidėti prie tirozinazės aktyvumo slopinimo.

3.5.2. DOPA autooksidacijos slopinimas

L-DOPA yra vienas iš melanino pirmtakų melanogenezės metu. L-DOPA sintetina iš L-tirozino tirozinazės hidroksilazės būdu. Tirozinazė taip pat gali paversti L-DOPA į dopachinoną, galiausiai sukeldama melaniną. In vitro, L-DOPA autooksidaciją slopinantis P. vaninii aktyvumas apibendrintas 4(B) paveiksle. L-DOPA autooksidacijos slopinimas ME ir HE svyravo atitinkamai nuo 38,25 iki 78,46 proc. ir nuo 29,68 proc. iki 44,77 proc. , tuo tarpu kojo rūgštis parodė puikų L-DOPA slopinamąjį aktyvumą nuo 86,14 iki 98,72 proc., esant ištirtai koncentracijai. Rezultatai parodė, kad ME ir HE vidutiniškai slopina L-DOPA autooksidaciją. Tačiau ME ir HE parodė mažiau slopinamąjį aktyvumą L-DOPA autooksidacijai, kai L-DOPA buvo naudojamas kaip substratas, nei tada, kai L-tirozinazė buvo naudojama kaip tirozinazės substratas. Kadangi tirozinazė naudoja dvi skirtingas tirozino hidroksilazės ir L-DOPA oksidazės surišimo vietas, mūsų eksperimentiniai rezultatai rodo, kad selektyvus tirozinazės veiksmingumas ant dviejų skirtingų substratų melanogenezės metu.

3.5.3. Ląstelių tirozinazės aktyvumas

Intraląstelinis tirozinazės aktyvumas buvo nustatytas apdorojus Ph. vaninii vaisiakūnių ląsteles skirtingomis ME ir HE koncentracijomis. ME ir HE poveikis B10-F10 melanomos ląstelių tirozinazės aktyvumui svyravo atitinkamai nuo 96,94 iki 61,14 proc. ir nuo 98,12 proc. iki 84,16 proc., kai 25–500 ug/ml, o arbutinas parodė 98,52–58,12 proc., esant tirtai koncentracijai (5 (A) pav.), o tai rodo, kad arbutino tirozinazės slopinimas buvo didesnis nei ME ir HE. Rezultatai taip pat parodė, kad ME tirozinazės aktyvumas buvo didesnis nei HE ir kad didėjančios ME ir HE koncentracijos sumažino intracelulinį tirozinazės aktyvumą. Nors in vitro tirozinazę slopinantis ME ir HE poveikis 500 ug/ml buvo atitinkamai 84,39 proc. ir 45,64 proc., ląstelių tirozinazės slopinimas B16-F10 melanomos ląstelėse buvo 3886 proc. ir 15,24 proc. atitinkamai ta pačia tirta koncentracija, o tai rodo, kad grybų ekstrakto faktoriai, atsakingi už tirozinazės slopinimą, negalėjo veiksmingai prasiskverbti į ląsteles. Huang ir kt. [50] pranešė, kad metanolio ekstrakto iš Agaricus brasiliensis vaisiakūnių ląstelinis tirozinazės aktyvumas buvo 95,75–67,12 proc., kai 100–500 ug/ml B16-F10 melanomos ląstelėse, o tai rodo, kad ląstelių tirozinazės aktyvumas. Ph. vaninii buvo šiek tiek didesni nei A. brasiliensis, esant tokiai pačiai tirtai koncentracijai.

Siekiant įvertinti, ar sumažėjęs intracelulinis tirozinazės aktyvumas ir sumažėjusi melanino gamyba, pastebėta B16-F10 melanomos ląstelėse, atsirado dėl grybų ekstraktų citotoksiškumo, buvo atliktas MTT tyrimas. Atliekant MTT tyrimą, B16-F10 melanomos ląstelės, apdorotos ME ir HE, parodė 105–90,33 proc. ląstelių gyvybingumą ir atitinkamai 107–91 proc. esant 50–500 mg/ml, o tai rodo, kad grybų ekstraktai. nebuvo toksiški B16-F10 melanomos ląstelėms tirtomis koncentracijomis (1 pav.).

3.5.4. Melanino sintezės aktyvumas

Siekiant patvirtinti, ar ankstesniame eksperimente nustatytas geras ląstelių tirozinazės slopinimo aktyvumas buvo susijęs su melanino sintezės slopinimu B16-F10 melanomos ląstelėse, buvo toliau tiriama melanino gamyba melanomos ląstelėse. B16-F10 melanomos ląstelių, apdorotų ME ir HE, melanino sintezė svyravo atitinkamai nuo 71,18 iki 27,61 proc. ir nuo 78,54 iki 50,53 proc., esant 25-500 mg/ml. o melanino sintezė arbutinu tirtoje koncentracijoje svyravo nuo 73,50 iki 35,16 procentų (5 (B) pav.). Tyrimo rezultatai rodo, kad arbutino melanino sintezės slopinimas buvo didesnis nei HE, bet mažesnis nei ME. Padidėjus grybų ekstraktų koncentracijai, sumažėjo melanino sintezė B16-F10 melanomos ląstelėse. Rezultatai rodo, kad melanino sintezės slopinimas B16-F10 melanomos ląstelėse ME buvo žymiai didesnis nei arbutino, o melanino gamybos slopinimas HE buvo žymiai mažesnis nei arbutino. Cha ir Kim [51] parodė, kad fermentuotas Cordyceps militaris ekstraktas, esant 1,0–3,0 mg/ml, B16-F10 melanomos ląstelėse pasižymi 66–47 proc. vaisiakūnių ekstraktų Ph. vaninii buvo didesnis nei fermentuoto Cordyceps militaris ekstrakto. Todėl tyrimo rezultatai parodė, kad grybų ekstraktai ne tik slopina tirozinazės aktyvumą in vitro ir L-DOPA autooksidaciją, bet ir sumažino tirozinazės aktyvumą bei melanino gamybą B16- F10 melanomos ląstelėse. Apibendrinant, mūsų išvados rodo, kad ME ir HE iš Ph. vaninii vaisiakūnių gali būti laikomi potencialiais naujais anti-melanogeniniais apsaugos nuo odos pigmentacijos dėl saulės ultravioletinės spinduliuotės šaltiniais.

3.6. Odos raukšlių aktyvumas

3.6.1. Elastazės slopinimas

Elastazė, proteazė, yra atsakinga už elastino, esančio ECM, skaidymą.

Elastazės gali skaidyti elastiną, taip pat kitus substratus, tokius kaip kolagenas, fibronektinas ir ECM baltymai. Tačiau natūraliomis sąlygomis elastazės aktyvumas yra būtinas svetimų baltymų skaidymui po sužeidimo [52]. Norint atitolinti odos senėjimą, pvz., raukšles, suglebimą ir strazdanų atsiradimą, būtina užkirsti kelią su ECM susijusių baltymų skilimui ir taip apsaugoti nuo odos elastingumo praradimo. ME ir HE esterazės slopinimo dažnis iš Ph. vaninii vaisiakūnių svyravo nuo 37,23 iki 71,24 proc. ir nuo 28,99 proc. iki 64,65 proc. atitinkamai, o EGCG parodė esterazės slopinimą nuo 17,93 iki 45,31 proc., esant ištirtai koncentracijai (6 paveikslas (A)). ME ir HE elastazės slopinimo greitis gali būti laikomas puikiu, palyginti su EGCG. Kim ir kt. [53] pranešė, kad Tricholoma matsu take grybienos ekstraktas parodė, kad elastazę slopinantis aktyvumas 81,4 proc. esant 100mg/mL, o tai rodo, kad Ph. vaninii ME ir HE slopinamasis poveikis elastazės buvo mažesnės nei T. matsutake ekstrakto. Choi ir Lee [54] parodė, kad metanolio ir karšto vandens ekstraktai iš Coriolus versicolor vaisiakūnių elastazės slopinimo svyravo nuo 21,5 iki 35,47 proc. ir nuo 17,57 proc. iki 25.{37}} proc. , o tai rodo, kad ME ir HE elastazės slopinimas buvo didesnis nei C. versi-color vaisiakūnių. Rezultatai rodo, kad grybų ekstraktai turi raukšlių mažinimo potencialą, neleidžiantį elastinui ir kolagenui skaidytis.

3.6.2. Kolagenazės slopinimas

Kolagenazės yra metaloproteinazės, galinčios skaidyti įvairias ląstelėse ir ECM esančias molekules, tokias kaip kolagenas, elastinas, fibronektinas, želatina ir lamininas. Šiame eksperimente naudojama kolagenazė, bakterinė kolagenazė (Clostridium histolyticum, ChC), taip pat ardo ECM [55]. Todėl bakterinė kolagenazė buvo naudojama grybų ekstraktų antikolagenazės aktyvumui patikrinti. ME ir HE kolagenazę slopinantis aktyvumas iš Ph. vaninii vaisiakūnių svyravo nuo 41.04 proc. iki 63.02 proc. ir nuo 26,4 0 proc. iki 47,33 procentų atitinkamai 0,125–2,0 mg/mL (6 pav. B), o EGCG slopino kolagenazę nuo 17,93 iki 45,31 proc. tirtoje koncentracijoje. Rezultatai rodo, kad ME buvo puikus inhibitorius, o HE atskleidė vidutinį slopinamąjį poveikį tirtoms koncentracijoms. Cheon ir kt. [56] pranešė, kad kolagenazės slopinimas etanoliu ir karšto vandens ekstraktais iš Phellinus linteus vaisiakūnių svyravo atitinkamai nuo 3,4 iki 6,8 procento ir nuo 33,4 procento iki 89,6 procento atitinkamai esant 0,05–1,0 mg/ml, o tai rodo, kad kolagenazės slopinimas ME iš Ph. vaninii buvo didesnis nei iš Ph. linteus vaisiakūnių karšto vandens ekstrakto Kadangi ME ir HE gerai slopina kolagenazę, ekstraktai gali apsaugoti ECM ir kolageną nuo fotosenėjimo sukelto skilimo. Nors dauguma elastazę ir kolagenazę slopinančių veiklų buvo įrodyta augaluose, įskaitant baltąją arbatą, žaliąją arbatą, šilkmedžio žievę ir ginkmedžio vaisius [57, 58], tai yra pirmasis pranešimas apie elastazę ir kolagenazę slopinantį poveikį vaisiakūnių ekstraktuose. iš Ph. vaninii ir gali būti naujas priešraukšlinės medžiagos šaltinis.

Apibendrinant galima pasakyti, kad Ph. vaninii vaisiakūnių ekstraktai pasižymi geru antioksidaciniu, antiksantino oksidazės, tirozinazės, melanino sintezės, elastazės ir kolagenazės slopinimo aktyvumu. Ksantino oksidazės, tirozinazės ir melanino sintezę slopinančios medžiagos gali būti naudojamos kaip natūralūs šaltiniai podagrai ir odos pigmentacijai kontroliuoti, o elastazės ir kolagenazės slopinimas gali būti geras šaltinis gydant su odos raukšlėmis susijusius sutrikimus. Reikia atlikti tolesnius tyrimus, siekiant nustatyti Ph. vaninii vaisiakūnių ekstraktų antiksantino oksidazę, antitirozinazę ir raukšles mažinančius veiksnius.

Cistanche yra odą balinantis ingredientas.

Norėdami gauti daugiau informacijos, spustelėkite paveikslėlį.