Naudingas visos feniletanoido glikozido frakcijos, išskirtos iš Cistanche Deserticola, poveikis kaulų mikrostruktūrai žiurkių, kurių kiaušidės pašalintos

Lingling Yang, Shuqin Ding, Bo Zhang, Jingjing Liu, Yanhong Dong, Qiwen Tang, Pingping Yang ir Xueqin Ma

1 Farmacijos analizės skyrius, Ningxia medicinos universiteto Farmacijos mokykla, 1160 Shenli Street, Yinchuan 750004, Kinija

2 Klinikinės medicinos mokykla, Ningxia medicinos universitetas, 692 Shenli Street, Yinchuan 750004, Kinija

3 pagrindinė Hui etninės medicinos modernizavimo laboratorija, Švietimo ministerija, Ningxia medicinos universitetas, 1160 Shenli Street, Yinchuan 750004, Kinija

Tai yra atviros prieigos straipsnis, platinamas pagal Creative Commons Attribution License, kuri leidžia neribotai naudoti, platinti ir atgaminti bet kokioje laikmenoje, jei originalus darbas yra tinkamai cituojamas.

Kontaktas:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Abstraktus

Šis tyrimas buvo skirtas įvertinti visos feniletanoido glikozido frakcijos, išskirtos išCistanchedeserticola(CDP) žiurkėms, sukeltos kiaušidžių pašalinimo (OVX), taip pat susijusių mechanizmų. Po 3 mėnesių peroralinio vartojimo buvo atkurtas sumažėjęs kaulų mineralų tankis, serumo Ca ir P OVX žiurkėms, o pablogėjusi trabekulinio kaulo mikroarchitektūra iš dalies pagerinta Cistanche deserticola (60, 120 ir 240 mg/kg) intervencija. kaulų rezorbcijos žymenų reguliavimas buvo sumažintas, o kaulų formavimosi indekso bioaktyvumas buvo padidintas; tuo tarpu MDA kiekis sumažėjo, o GSH padidėjo gydant CDP. Pagal sudėtį buvo nustatyti 8 feniletanoido glikozidų junginiaiCistanchedeserticola(CDP), o bendras kiekis, naudojant HPLC metodą, yra 50,3 proc. Mechaniškai,Cistanchedeserticola(CDP) sumažino TRAF6, RANKL ir RANK lygius, taip slopindamas RANKL/RANK/TRAF6-sukeltą NF-κB ir PI3K/AKT signalizacijos takų aktyvavimą ir galiausiai užkirsdamas kelią pagrindinių osteoklastogeninių NFAT2 ir c baltymų veiklai. - Fos. Visi aukščiau pateikti duomenys reiškė, kad CDP turėjo teigiamą poveikį kaulų mikrostruktūrai žiurkių, kurių kiaušidės pašalintos, ir šis poveikis gali būti susijęs su NF-κB ir PI3K / AKT signalizacijos keliais, kuriuos sukėlė RANKL, RANK ir TRAF6 prisijungimas.

Cistanche tubulosaturi daug efektų, spustelėkite čia norėdami sužinoti daugiau

1. Įvadas

Osteoporozė po menopauzės, kuria serga 1 iš 3 vyresnių nei 50 metų moterų, tampa pagrindiniu pavojumi sveikatai, kamuojančia daugiau nei 200 milijonų moterų visame pasaulyje [1]. Menopauzės metu staigus estrogeno lygio sumažėjimas paprastai sukelia kaulų rezorbcijos padidėjimą, kurį sukelia sustiprėjusi osteoklastogenezė; tada buvo sutrikdyta pusiausvyra tarp osteoblastų sukelto kaulų formavimosi ir osteoklastų sukeltos kaulų rezorbcijos, o pagreitėjusi kaulų rezorbcija galiausiai sukėlė osteoporozę ir net klubo ar stuburo lūžius [2]. Buvo manoma, kad osteoklastų diferenciacija buvo suaktyvinta, kai branduolinio faktoriaus kappa B (RANK) receptorių aktyvatorius buvo prijungtas prie RANKL, RANK ligando. Tačiau RANK ir RANKL derinys negali būti suaktyvintas, nebent prie jo būtų prijungtas su baltymo naviko nekrozės faktoriaus receptoriais susijęs faktorius 6 (TRAF6) [3], o po to būtų stimuliuojami signalizacijos keliai, įskaitant PI3K/AKT ir NF-κB. Ir galiausiai, buvo reguliuojamos aktyvuotų T ląstelių c2 (NFAT2) ir c-Fos branduolinio faktoriaus ekspresijos [4], siekiant moduliuoti osteoklastų diferenciaciją ir kaulų rezorbciją. Taigi buvo manoma, kad veiksniai ir reguliatoriai, kurie yra tiesiogiai arba netiesiogiai susiję su osteoklastų aktyvavimu ir diferenciacija, yra esminiai kaulų retėjimo prevencijos tikslai.

Iš tiesų yra keletas klinikinių ir sintetinių pakaitinės hormonų terapijos vaistų, tokių kaip estradiolio valeratas, kurie yra veiksmingi gydant osteoporozę po menopauzės. Deja, kai kurie iš jų padidino rimtų vėžio formų, įskaitant krūties ir endometriumo vėžį, riziką [5], o tai ribojo jų klinikinį pritaikymą. Todėl būtina pasirinkti kitas alternatyvas, turinčias ir veiksmingumą, ir minimalų šalutinį poveikį. Įrodyta, kad tradiciniai kinų vaistai (TCM), taip pat izoliuoti biologiškai aktyvūs junginiai ir frakcijos [6–9] buvo veiksmingi gydant įvairius negalavimus, įskaitant osteoporozę po menopauzės. Manoma, kad tarp šių biologiškai aktyvių komponentų ir frakcijų feniletanoido glikozido (PhG) junginiai, turintys potencialų veiksmingumą, yra perspektyvūs vaistai osteoporozei gydyti [10–12]. PhG struktūras sudaro cinamono rūgšties aglikonas, hidroksilfeniletilo grupė, kuri glikozidine jungtimi sujungta su -gliukopiranoze, apioze, galaktoze, ramnoze arba ksiloze. Jie plačiai paplitę vaistinėse genties rūšyseCistanche[13]. CistanchedeserticolaYC Ma yra oficialus TCM, įrašytas į Kinijos farmakopėją, o C deserticola yra ne tik svarbus TCM [14], bet ir senėjimą stabdanti tonizuojanti žolė, turinti nedaug šalutinių poveikių, kuri buvo sukurta į vaistinį gėrimą ir maistinį skystį, patvirtintą Valstybinio maisto. ir Vaistų administracija. Remiantis Kinijos farmakopėjos įrašais, vietiniai gyventojai C. deserticola tradiciškai naudojo inkstų trūkumo problemoms, tokioms kaip raumenų silpnumas ir juosmens silpnumas, gydyti, o feniletanoidiniai glikozidų junginiai, įskaitant echinakozidą ir akteozidą, yra pagrindinės šios žolelės biologiškai aktyvios sudedamosios dalys. Remiantis TCM „inkstų valdomo kaulo“ teorija, kaulų sistemą valdo inkstų esmė [15], o su kaulais susijusias bėdas, tokias kaip osteoporozė, galima išgydyti žolelėmis ar junginiais, turinčiais inkstų esenciją maitinančią veiklą. Todėl iškėlėme hipotezę, kad bendra feniletanoido glikozido frakcija, išskirta iš C. deserticola, bent iš dalies buvo naudinga gydant osteoporozę. Todėl dabartinis eksperimentas buvo sukurtas siekiant patvirtinti mūsų hipotezę, naudojant žiurkių modelį, pašalintą kiaušidėse (OVX); be kaulų rezorbcijos ir formavimosi žymenų, kuriuos reikia įvertinti, pagrindiniams antiosteoporozinio biologinio aktyvumo mechanizmams ištirti taip pat buvo naudojamas antioksidacijos indeksas, taip pat RANKL/RANK/TRAF6- indukuoti PI3K/AKT ir NF-κB signalizacijos keliai. .

2. Medžiagos ir metodas

2.1. Augalinės medžiagos ir paruošimas.

Iš viso 30 kg stiebųCistanchedeserticolaY.C. Ma buvo paimti iš Yongning apygardos 2015 rugsėjo mėn. koordinatėmis 106.026597 ir 38.262816, Ningxia provincija, Kinija. Žolelę identifikavo daktaras Linas Dongas (Ningxia medicinos universiteto Farmakognozijos skyrius) ir atitinkamą pavyzdį (nr. 201509{{40}}1) buvo išsaugotas Farmacinės analizės katedroje. Pirma, 30,0 kg C. deserticola miltelių buvo ekstrahuota naudojant grįžtamąjį šaldytuvą naudojant 70 % etanolio tirpiklį; Medžiagos ir tirpiklio santykis buvo nustatytas kaip 1:10, o virimo laikas buvo 2 valandos 3 kartus. Tada visi filtratai buvo sujungti ir kondensuoti sumažintame slėgyje 60 laipsnių C temperatūroje. Antra, pirminiam atskyrimui naudotos AB-8 makroporinės dervos kolonėlės ir skirtingi etanolio santykiai vandenyje (0 proc., 20 proc., Eliuavimui buvo panaudota 30 proc., 40 proc., 50 proc. ir 60 proc., kiekvienas po 60 l. Trečia, 40 procentų ir 50 procentų eliuentai buvo sujungti ir toliau gryninami naudojant pakartotines AB-8 makroporingos dervos kolonėles, kurių eliuentai yra 0 procentų, 20 procentų, 30 procentų, 40 procentų ir 50 procentų etanolio vandenyje ir kiekvienas eliuentas buvo 12 l. Galiausiai, 40 procentų frakcija buvo surinkta ir kondensuota sumažintame slėgyje, kad gautų 150 g šviesiai geltonos nuosėdų feniletanoido glikozido C. deserticola frakcijos (CDP, išeiga 0,5 proc.). In vivo eksperimentams CDP ištirpinti buvo naudojamas 0,5 % CMC-Na tirpiklis; peroraliniam vartojimui gyvūnams nustatytas 1 ml/100 g kūno svorio; in vitro Western blot analizei CDP buvo ištirpintas DMSO ir po to praskiestas DMEM, kad gautų galutinę koncentraciją 0,1 mg/ml, 0,01 mg/ml ir 0,001 mg/ml.

2.2. Cheminės medžiagos ir tirpikliai.

Estradiolio valeratas (EV) buvo iš Delpharm Lille SAS, Prancūzija; šarminės fosfatazės (ALP), kaulo gla-baltymo (BGP), tartratui atsparios rūgštinės fosfatazės (TRAP) ir deoksipiridinolino (DPD) kryžminio ryšio ELISA rinkiniai iš Xinyu Biological Engineering Co. Ltd., Šanchajus, Kinija, 201605; malondialdehido (MDA, 20181221), superoksido dismutazės (SOD, 20121218) ir glutationo (GSH, 20181221) reagentų rinkiniai iš Nanjing Jiancheng biologinės inžinerijos instituto, Nankinas, Kinija; lntact parathormono (l-PTH, NEWASHE7UZ), kalcitonino (2L9ISN7AIU) ir su estrogenu susijusių receptorių alfa (ERR, Y3AY8QEWB3) kryžminio ryšio ELISA rinkiniai iš Elabscience Biotechnology Co. Ltd., Uhanas, Kinija; katepsino K ELISA reagentų rinkinys iš BioVision, Amerika, 1l300141; pirminiai antikūnai RANKL (GR3193842-5), RANK (AA02113656), TRAF6 (2), c-Fos (AG12059411), NFAT2 (AO11015648), NF-κB p65 (AH04138226), PI3 alfa1AC95 (p26638226) , AKT 1 (AF05173234), -aktinas (17AV0411) ir krienų peroksidaze konjuguoto ožkos anti-triušio IgG antriniai antikūnai iš ZSGB-BIO, Kinija, 136080; viso BCA baltymo tyrimo rinkinys ir komercinis rinkinys kaulų oklastų susidarymui ir galvijų vaisiaus serumui aptikti bei Dulbecco modifikuota Erelio terpė (DMEM) iš HyClone, Logan, UT, JAV; polivinilideno flfluorido (PVDF) membrana iš Millipore Life Sciences, Billerica, MA, JAV; penicilinas ir streptomicinas iš Gibco, Rockville, MD, JAV. Visos kitos naudojamos cheminės medžiagos buvo AR klasės.

2.3. HPLC kiekybinis Cistanche Deserticola P.

CDP sudėčiai nustatyti ir kiekybiškai įvertinti buvo naudojamas Agilent 1220 HPLC instrumentas. Chromatografijos sąlygos buvo tokios: C18 kolonėlė (TSK-GEL, 4 6 I d × 250 mm, 5 μm); gradiento eliuavimo metu buvo tirpikliai A (acetonitrilas) ir B (vanduo, kuriame yra 0,5 proc. acto rūgšties) (0-10 min.: 17-20 proc. A; 10-30 min.: 20-25 proc. A; ir 30-40 min.: 25-30 proc. A); aptikimo bangos ilgis buvo 333 nm; aplinkos temperatūra; srauto greitis buvo 1,0 ml/min.; mėginio injekcijos tūris buvo 5 μL. Buvo nustatyti aštuoni PhG junginiai, būtent cistanosidas F, echinakozidas, 6′-acetillakteozidas, cistanosidas C, cistanosidas A, akteozidas, 2′-acetillakteozidas ir izoakteozidas; naudojant atitinkamas etalonines medžiagas ir išorinį standartinį metodą, aukščiau minėtų 8 PhG kiekis buvo kiekybiškai įvertintas HPLC analize (1 pav.).

2.4. Eksperimento su gyvūnais protokolas.

Iš Ningxia medicinos universiteto bandymų su gyvūnais centro buvo paimtos iš viso 6 0 suaugusios 3 mėnesių Sprague-Dawley žiurkių patelės, kurių vidutinis pradinis kūno svoris buvo apie 234 ± 25 g. Žiurkės buvo laikomos standartinėje specifinėje patogenų neturinčioje aplinkoje, kad aklimatizuotųsi 1 savaitę. Tada visos žiurkės buvo anestezuotos (chloro hidratas, 100 mg/kg, ip) arba fiktyviai pašalintos kiaušidės (SHAM), arba pašalintos dvi kiaušidės ir atsitiktinai suskirstytos į 5 pogrupius: per burną gydomos nešikliu (0,5 proc. CMC- Na) buvo nustatyta kaip pavyzdinė grupė (OVX), estradiolio valeratas (1 mg/kg per dieną) kaip teigiama grupė (EV), o 60, 120 ir 240 mg/kg per dieną CDP – kaip mažas (CDPL), vidutinės (CDPM) ir didelės (CDPH) dozių grupės. Visos žiurkės buvo vartojamos per burną kasdien ir truko 3 mėnesius, dozė koreguojama kas 2 savaites, atsižvelgiant į viso kūno svorio pokyčius. Paskutinę eksperimento su gyvūnais dieną 24-valanda šlapimas buvo paimtas naudojant metabolinius narvus; serumas buvo paimtas iš anestezuotų žiurkių šlaunikaulio arterijos; dešinė šlaunikaulis, blauzdikaulis ir visi organai buvo išpjaustyti ir laikomi -80 C laipsnių temperatūroje tolesnei analizei. Mūsų atlikti eksperimentai su gyvūnais buvo patvirtinti Ningxia medicinos universiteto institucinio gyvūnų priežiūros ir naudojimo komiteto.

2.5. Kaulų mineralinio tankio nustatymas ir mikro-KT analizė.

Pirma, kiekvienos žiurkės dešiniojo šlaunikaulio bendram kaulų mineraliniam tankiui įvertinti buvo naudojamas dvigubos energijos rentgeno spindulių absorbcijos aparatas (Lunar, JAV); antra, tas pats šlaunikaulis buvo naudojamas 3D trabekulinio kaulo mikroarchitektūros vaizdui įvertinti naudojant mikro-KT skaitytuvo aparatą (GE, Amerika). Izotropinė skiriamoji geba buvo nustatyta kaip 14 μm, kad būtų gautas idealus 3D vaizdas; dominantis regionas (ROI) buvo pasirinktas nustatant tas pačias koordinates kiekvieno mėginio šlaunikaulio augimo plokštelėje; ir kaulų morfometriniai parametrai, įskaitant trabekulinį atskyrimą (Tb. Sp), trabekulinį skaičių (Tb. N), trabekulinį storį (Tb. Th), kaulų mineralų kiekį (BMC), audinių mineralinį tankį (TMD) ir audinių mineralų kiekį (TMC). ) buvo gauti analizuojant IG.

2.6. Serumo ir šlapimo biocheminis tyrimas.

Serumo katepsino K, TRAP, SOD ir GSH aktyvumas, taip pat serumo PTH, kalcitonino, ERR, MDA, BGP ir šlapimo DPD kiekis buvo nustatytas naudojant atitinkamus reagentų rinkinius pagal gamintojo instrukcijas ir šarminės fosfatazės (ALP) lygis ir kalcio (Ca) bei fosforo (P) kiekis serume ir šlapime buvo įvertintas automatiniu aparatu (Ciba-Corning 550 Diagnostics Corp., Oberlin, OH, JAV).

2.7. Western blot analizė.

Osteoklastai buvo sukelti naudojant RAW 264.7 ląsteles, pridėtas su makrofagų kolonijas stimuliuojančiu faktoriumi (MCSF) ir RANKL. Trumpai tariant, 1 × 107 RAW 264.7 ląstelės buvo kultivuojamos 6-šulinėlių plokštelėje, esant 30 ng/mL MCSF ir 25 ng/mL RANKL. Po 6 dienų indukcijos subrendusios osteoklastų ląstelės buvo identifikuotos naudojant TRAP dažytą metodą su atitinkamu rinkiniu, po to apdorotos CDP (0,1, 0,01 ir 0,001 mg/ml). atitinkamai) 24 val.; tada ląstelės buvo lizuojamos lizės buferiu, kuriame yra 0,5 mmol fenilmetilsulfonilfluorido, proteazės ir fosfatazės inhibitorių. Tada lizatas buvo atskirtas naudojant 10 procentų SDS-PAGE ir perkeltas į PVDF membraną, kuri buvo tiriama AKT1, NF-κB-p65, RANKL, PI3K-p85, RANK, NFAT2, TRAF6, c-Fos ir -aktinu. (1: 400) užblokavus 5 procentų neriebiu pienu 2 val. Tos pačios membranos buvo nuimtos ir vėl zonduotos atitinkamai aukščiau nurodytais 9 atitinkamais antikūnais, o pabaigoje aptiktos „Image Lab“ programine įranga. Eksperimentai buvo kartojami tris kartus.

2.8. Statistinė analizė.

Visi duomenys, gauti iš in vivo ir in vitro eksperimentų, apibūdinti kaip vidurkis ± SD, buvo išanalizuoti naudojant vienkryptį ANOVA, po to Dunnett testą (SPSS 22.0 programinė įranga, SPSS, JAV); p < 0="" 05="" buvo="" statistiškai="">

Rezultatai

3.1. Cheminė Cistanche Deserticola P. sudėtis.

Naudojant HPLC metodą, aštuonifeniletanoido glikozidasŠioje frakcijoje buvo rasta junginių, kaip parodyta 1 paveiksle. Naudojant standartines nuorodas ir išorinį standartinį metodą, junginiai ir jų kiekis buvo identifikuoti ir kiekybiškai įvertinti taip: (1) akteozidas F (3,6 proc.), (2) echinakozidas (8,8 proc.), (3) cistanosidas A (5). {9}} proc.), (4) akteozidas (13,3 proc.), (5) izoakteozidas (3,3 proc.), (6) akteozidas C (3,6 proc.), (7) 2′-acetilakteozidas (9,9 proc.) ir (8) ) 6′-acetillakteozidas (3,2 proc.). Bendras šių aštuonių komponentų kiekis buvo įvertintas kaip 50,7 proc.

3.2. Cistanche Deserticola P poveikis kaulų mineralų tankiui ir trabekulių mikroarchitektūrai.

Bendras skirtingų pogrupių žiurkių kaulų mineralų tankis parodytas 2 paveiksle. OVX modelio grupės žiurkėms pastebėta kaulų mineralinio tankio mažėjimo tendencija, kuri sumažėjo beveik 12.0 proc. 12 operacijos savaičių, palyginti su SHAM grupės žiurkėmis (p < 0="" 001).="" visų="" cdp="" gydytų="" žiurkių="" kaulų="" mineralinis="" tankis="" žymiai="" padidėjo="" atitinkamai="" 11,2="" proc.,="" 120="" proc.="" ir="" 10,7="" proc.="" (p="">< 0="" 01),="" palyginti="" su="" ovx="" modelio="" žiurkėmis.="" grupė.="" be="" to,="" remiantis="" bendro="" kaulų="" mineralinio="" tankio="" duomenimis,="" mikro-kt="" rekonstrukcija="" ir="" šlaunikaulio="" histomorfometrinis="" nustatymas="" parodė,="" kad="" ovx="" grupės="" žiurkėms="" akivaizdžiai="" pablogėjo="" trabekulinė="" architektūra,="" kurią="" liudija="" ir="" žymiai="" sumažėjęs="" trabekulių="" skaičius="" ir="" plotas.="" kaip="" žymiai="" padidėjo="" tb.="" sp="" lyginant="" su="" sham="" grupės="" žiurkėmis.="" gydymas="" cdp="" apsaugojo="" nuo="" ovx="" sukelto="" trabekulinės="" architektūros="" pablogėjimo;="" kaip="" parodyta="" 3="" paveiksle,="" bmc,="" tmc="" ir="" tb.="" n="" reikšmės="" buvo="" žymiai="" padidintos="" ir="" tb="" plotas.="" sp="" žymiai="" sumažėjo,="" o="" tmd="" ir="" tb="" reikšmės.="" atrodė,="" kad="" ovx="" operacija="" ir="" mūsų="" cdp="" intervencija="" neturėjo="" reikšmingos="">

3.3. Cistanche Deserticola P poveikis šlapimo ir serumo biocheminiams parametrams.

Kaip parodyta 4 paveiksle, OVX modelio grupės žiurkėms buvo aptiktos reikšmingos P kiekio šlapime ir kalcitonino kiekio serume mažėjimo tendencijos, kurios buvo beveik 30 procentų ir 60 procentų mažesnės nei SHAM žiurkėms (p < 0="" 001="" ),="" tuo="" tarpu="" tarp="" ovx="" ir="" sham="" grupių="" nepastebėta="" jokių="" akivaizdžių="" ca="" ir="" serumo="" ca="" kiekio="" šlapime="" didėjimo="" ar="" mažėjimo="" tendencijų,="" taip="" pat="" serumo="" p="" ir="" serumo="" pth.="" gydymas="" cdp="" reikšmingai="" užkirto="" kelią="" ovx="" žiurkių="" serumo="" p="" ir="" ca="" praradimui,="" o="" tai="" rodo,="" kad="" p="" ir="" ca="" kiekis="" serume="" buvo="" žymiai="" padidintas="" (p="">< 0="" 05),="" palyginti="" su="" ovx="" modelio="" grupės="" žiurkėmis.="" be="" to,="" tiek="" mažų,="" tiek="" didelių="" cdp="" dozių="" grupėse="" buvo="" pastebėtos="" padidėjusios,="" bet="" nestatistiškai="" reikšmingos="" kalcitonino="" tendencijos,="" palyginti="" su="" ovx="" modelio="">

3.4. Cistanche Deserticola P poveikis kaulų formavimuisi ir kaulų rezorbcijos žymenims.

Teigiamas CDP poveikis kaulų formavimosi indeksui, taip pat slopinamasis poveikis kaulų rezorbcijos žymenims, aprašytas 5 paveiksle. Kalbant apie kaulų formavimosi žymenis, BGP koncentracija serume beveik neturėjo įtakos kiaušidžių pašalinimo operacijai, kurią patvirtino ne reikšmingi pokyčiai pastebėti visose gydytose grupėse, tuo tarpu statistiškai reikšmingas serumo ALP pagerėjimas buvo pasiektas tiek mažomis (60 mg/kg), tiek vidutinėmis (120 mg/kg) CDP intervencijos grupių dozėmis. palyginti su SHAM grupės žiurkėmis (p < 0="" 01).="" kalbant="" apie="" kaulų="" rezorbcijos="" indeksą,="" katepsino="" k="" ir="" dpd,="" taip="" pat="" trap="" koncentracija="" serume="" ovx="" modelių="" grupės="" žiurkėms="" buvo="" žymiai="" padidinta="" atitinkamai="" maždaug="" 75,0="" proc.,="" 41,4="" proc.="" ir="" 21,0="" proc.,="" palyginti="" su="" sham="" žiurkėmis.="" ,="" o="" gydant="" cdp,="" ypač="" maža="" 60="" mg/kg="" doze,="" katepsino="" k="" ir="" dpd="" bei="" trap="" savybės="" ovx="" modelių="" grupėje="" buvo="" žymiai="" slopinamos="" atitinkamai="" 67,3="" proc.,="" 41,4="" proc.="" ir="" 25,9="" proc.="" palyginti="" su="" ovx="" modelių="" grupės="">

3.5. Cistanche Deserticola P poveikis makštiui ir gimdai, taip pat viso kūno svoriui.

Prieš gydymą šešiose grupėse buvo pastebėti nereikšmingi pradinio viso žiurkių kūno svorio skirtumai (6 pav.). Tačiau atlikus kiaušidžių pašalinimo operaciją OVX modelio grupės žiurkių galutinis kūno svoris labai padidėjo, ty beveik 36.{2}} proc. , o gimdos ir makšties šlapias svoris smarkiai sumažėjo beveik 9{{4 }}.{6}} proc. ir 60,0 proc. atitinkamai, palyginti su SHAM žiurkėmis (p < 0="" 001).="" nors="" err="" turinys="" reikšmingo="" skirtumo="" tarp="" ovx="" ir="" sham="" grupių="" neturėjo,="" visos="" gydymo="" grupės,="" įskaitant="" cdp="" ir="" ev,="" žymiai="" padidino="" err="" lygį.="" be="" to,="" gydant="" ev,="" ovx="" žiurkėms="" priaugo="" viso="" kūno="" svoris,="" taip="" pat="" makšties="" ir="" gimdos="" masės="" praradimas="" buvo="" iš="" dalies="" panaikintas="" (p="">< 0="" 001),="" bet="" cdp="" intervencija="" neturėjo="">

3.6. Cistanche DeserticolaP poveikis serumo MDA, SOD ir GSH lygiams.

Statistiškai reikšmingo serumo SOD ir GSH savybių skirtumo tarp SHAM ir OVX modelių grupių nebuvo; kaip aprašyta 7 paveiksle, tarp minėtų dviejų grupių galima pastebėti GSH didėjimo tendenciją. Be to, OVX modelio grupės žiurkėms MDA lygis serume buvo smarkiai padidintas beveik 50 procentų, palyginti su SHAM žiurkėmis. Gydymas CDP neturėjo įtakos SOD aktyvumui, tuo tarpu GSH savybė reikšmingai pagerino CDP intervenciją, o CDP žymiai sumažino MDA lygį atitinkamai 33,9 ir 42,4 proc., vartojant atitinkamai 60 ir 240 mg/kg dozes. p < 0="">

3.7. Cistanche deserticola P poveikis baltymų ekspresijos lygiams.

Mūsų duomenys, parodyti 8 paveiksle, rodo, kad CDP gydymas žymiai sumažino TRAF6, RANK ir RANKL baltymų kiekį, palyginti su kontrole. Pasroviui esantys signalo keliai, įskaitant NF-κB, buvo slopinami, o PI3K / AKT buvo stimuliuojamas CDP intervencija, o tai patvirtina NF-κB-p65 sumažinimo ekspresija, o PI3K-p85 ir AKT1 buvo sureguliuoti. Vadinasi, NFAT2 ekspresija žymiai sumažėjo, o c-Fos padidėjo po gydymo CDP, kai koncentracija buvo 0.001-0,1 mg/ml. Siūlomas mechanizmas aprašytas 9 paveiksle, kur CDP sumažino RANKL ir RANK lygius, todėl sumažėjo šio ligando surišimo su jo receptoriais kiekis, o RANKL ryšys su RANK buvo dar labiau sumažintas sumažinus TRAF6 reguliavimą. po to buvo slopinami pasroviui esantys keliai, įskaitant NF-κB kelią, tuo tarpu buvo stimuliuojamas PI3K / AKT signalo kelias, dėl kurio galiausiai sumažėjo NFAT2 ekspresija ir padidėjo c-Fos lygis.

4. Diskusija

Feniletanoidiniai glikozidai yra natūraliai randami vandenyje tirpūs komponentai, plačiai paplitę vaistinių augalų karalystėje [11]. Iki šiol feniletanoidinių glikozidų junginiai pritraukdavo vis daugiau tyrėjų dėl akivaizdaus jų vaidmens sprendžiant įvairius žmogaus negalavimus ir anomalijas [13]. Daugybė antiosteoporozinių bioaktyvių frakcijų ir junginių, įskaitant polifenolius ir feniletanoidinius glikozidus, buvo nustatyti ir išskirti iš dešimčių natūralių vaistinių žolelių [5, 10, 12, 16, 17]. C. deserticola yra gerai žinomas kaip „dykumos ženšenis“, o tai reiškia šio valgomojo TCM saugumo profilį [18, 19]. Kaip bendras tonizuojantis augalas ir natūralus sveikas maistas, ilgą laiką naudojamas Azijos šalyse, C. deserticola pasižymėjo naudingomis inkstų jėgų stiprinimo funkcija. Nustatyta, kad TCM, tradiciškai naudojamas inkstų esencijai pagyvinti ir išlaikyti, dažniausiai buvo naudojamas osteoporozei gydyti. Tiek in vitro, tiek in vivo paskelbti duomenys įrodė C. deserticola [20–23] antiosteoporozinį aktyvumą ir feniletanoido glikozidų sudedamąsias dalis, įskaitant echinakozidas ir akteozidas yra pagrindiniai šio valgomojo vaistinio augalo biologiškai aktyvūs komponentai; visa tai rodo, kad ne tik pats echinakozidas ir akteozidas, bet ir kiti feniletanoido glikozido komponentai, esantys C. deserticola, buvo laikomi atsakingais už šios žolės antiosteoporozines savybes. Mūsų dabartiniame tyrime buvo naudojama palanki saugi makroporinga derva, skirta išskirti ir praturtinti feniletanoido glikozido frakciją iš C. deserticola, o naudojant HPLC metodą, aštuoni pagrindiniai feniletanoido glikozido komponentai, ty akteozidas F, echinakozidas, cistanosidas A, akteozidas, Izoakteozido, akteozido C, 2′-acetillakteozido ir 6′-acetillakteozido rasta feniletanoido glikozido frakcijoje, kurių kiekis buvo 3,6 proc., 8,8 proc., 5,0 proc., 13,3 proc., 3,3,9 proc. ir atitinkamai 3,2 proc. Įrodyta, kad echinakozidas, vienas iš pagrindinių C. deserticola [14] aktyvių junginių, pasižymi antiosteoporoziniu poveikiu; tačiau 270 mg/kg dozė buvo tokia didelė, kad ribojo tolesnį jos klinikinį taikymą [24]. Dabartiniuose eksperimentuose OVX žiurkėms buvo naudojama bendra feniletanoido glikozido frakcija su mažesne 60-240 mg/kg kūno svorio per dieną doze, o identifikuotų sudedamųjų dalių turinys šioje frakcijoje buvo beveik 50 proc. HPLC metodas.

Buvo gerai žinoma, kad OVX gali sukelti osteoporozę, ir buvo manoma, kad OVX žiurkė yra klasikinis ir tinkamas modelis, imituojantis žmogaus osteoporozę po menopauzės. Tuo pačiu metu po kiaušidžių pašalinimo operacijos buvo pastebėtas reikšmingas kaulų mineralinio tankio, trabekulinio kaulo mikroarchitektūros, šlapio gimdos ir makšties svorio ir estrogenų lygio sumažėjimas, taip pat akivaizdus kaulų rezorbcijos ir kūno svorio padidėjimas. dalis dėl estrogenų praradimo [25]. Iki šiol mūsų duomenys aiškiai parodė, kad OVX iš tikrųjų sukėlė osteoporozę po menopauzės ir ją visada lydi staigus kaulų kokybės, kaulų mikroarchitektūros ir gimdos bei makšties šlapio svorio sumažėjimas. Kadangi EV yra bendras hormonų pakeitimo agentas, kuris buvo naudojamas klinikinėje praktikoje, jis buvo naudojamas kaip teigiama kontrolė mūsų in vivo eksperimente ir padidino kūno svorį bei atrofuojasi gimdos svoris, taip pat pablogėjo kaulų mineralinis tankis ir trabekulinio kaulo mikroarchitektūra. , buvo tikimasi pakeisti papildžius EV. Skirtingai nuo teigiamos kontrolės, sumažėjęs makšties ir gimdos svoris, taip pat padidėjęs viso kūno svoris OVX modelių grupėje, CDP gydymas neturėjo įtakos, o tai reiškė, kad CDP gali sustiprinti kaulų formavimąsi nesukeldamas šalutinio poveikio. ant kūno ir gimdos organinių audinių. Nors CDP gydymas buvo žymiai padidintas ERR lygis, tai buvo kaip fitoestrogeno poveikis, kad nepastebėta jokio šalutinio poveikio gimdos ir makšties organiniams audiniams. Be to, CDP gydymas žymiai sustiprino OVX žiurkių, kurioms pablogėjo kiaušidžių pašalinimo operacija, kaulų kokybę.

Be to, P ir Ca kiekiai OVX žiurkių šlapime ir serume taip pat buvo naudojami antiosteoporoziniam poveikiui atspindėti, o Ca ir neorganinio P koncentracijos paprastai priklausė nuo kalcitonino ir PTH kiekio [26]. Šiame tyrime, nors OVX modelio grupės žiurkių Ca, serumo P, Ca ir PTH išsiskyrimo su šlapimu reikšmingų mažėjimo ar didėjimo tendencijų nenustatyta, reikšmingi P ir kalcitonino kiekiai šlapime (p < {="" {1}})="" buvo="" pastebėti.="" remiantis="" paskelbtais="" duomenimis,="" kad="" dėl="" kiaušidžių="" pašalinimo="" operacijos="" sukeltas="" estrogenų="" trūkumas="" visada="" sumažino="" kalcitonino="" kiekį="" kraujyje,="" šis="" sumažėjęs="" kalcitonino="" kiekis="" serume="" galiausiai="" padidino="" pth="" lygį,="" kur="" ca="" buvo="" manoma="" kaip="" pagrindinis="" pth="" sekrecijos="" reguliatorius.="" kadangi="" šiame="" tyrime="" pth="" koncentracija="" neparodė="" reikšmingo="" skirtumo="" tarp="" ovx="" ir="" sham="" grupių,="" ca="" lygis="" tiek="" serume,="" tiek="" šlapime="" taip="" pat="" neparodė="" jokių="" akivaizdžių="" pokyčių="" tarp="" minėtų="" dviejų="" grupių.="" tačiau="" buvo="" gauta="" žymiai="" sumažėjusi="" kalcitonino="" lygio="" tendencija="" tarp="" ovx="" ir="" sham="" grupių,="" todėl="" p="" kiekis="" ovx="" šlapime="" smarkiai="" sumažėjo.="" manome,="" kad="" aukščiau="" pateikti="" duomenys="" gali="" paaiškinti="" prieštaringą="" reiškinį,="" kodėl="" ovx="" žiurkių="" ca="" išskyrimas="" su="" šlapimu="" neparodė="" akivaizdžių="" pokyčių,="" palyginti="" su="" sham="" žiurkėmis,="" ir="" šis="" reiškinys="" taip="" pat="" gali="" būti="" susijęs="" su="" padidėjusiu="" kaulų="" apykaitos="" greičiu="" [27].="" .="" po="" gydymo="" cdp="" p="" ir="" ca="" kiekis="" serume="" buvo="" žymiai="" padidintas,="" o="" p="" kiekis="" šlapime="" buvo="" sumažintas="" ovx="" žiurkėms,="" o="" tai="" rodo,="" kad="" cdp="" gali="" ne="" tik="" užkirsti="" kelią="" kaulų="" mineralų="" elementų="" išsiskyrimui,="" bet="" ir="" padidinti="" tų="" žiurkių="" kiekį="" serume.="" elementais,="" taip="" netiesiogiai="" slopinant="" kaulų="">

Be to, kaulų formavimosi ir rezorbcijos žymenys, taip pat antioksidaciniai fermentai, įskaitant SOD ir GSH, taip pat buvo naudojami siekiant paaiškinti pagrindinius CDP antiosteoporozinius mechanizmus. Panašiai kaip ir paskelbti duomenys, OVX modelio grupės žiurkių ALP lygis rodė statistiškai nereikšmingą didėjimo tendenciją, o tai rodo pagreitėjusį kaulų apykaitos greitį sergant osteoporoze po menopauzės [10]. Tačiau po gydymo CDP (60, 120 ir 240 mg/kg per parą) ALP savybės žymiai pagerėjo. Buvo gerai žinoma, kad OVX sukėlė staigų estrogenų kiekio sumažėjimą, dėl kurio paprastai padidėja kaulų rezorbcija ir oksidacinis stresas [28], o tai patvirtina TRAP, katepsino K ir DPD, taip pat MDA lygis, ypač padidėjęs žiurkėms. OVX modelių grupė. Tačiau šiuos pablogėjimus iš dalies pagerino CDP intervencija. Be to, OVX žiurkės gydymas CDP (60 ir 240 mg/kg) parodė reikšmingą GSH aktyvumo padidėjimą (p < 0="" 05).="" aukščiau="" pateikti="" rezultatai="" reiškė,="" kad="" cdp="" turėjo="" terapinį="" poveikį="" ovx="" sukeltai="" osteoporozei,="" ir="" šis="" poveikis="" buvo="" tiek="" stiprinant="" kaulų="" formavimąsi,="" tiek="" slopinant="" kaulų="" rezorbciją,="" taip="" pat="" pagerinant="" kaulų="" antioksidantų="">

RANK aktyvinimas jo ligandu RANKL stimuliavo NFAT2 ir c-Fos ekspresiją per PI3K/AKT ir NF-κB signalizaciją [29]. Įrodyta, kad NF-κB yra būtinas osteoklastogenezei, nes NF-κB sutrikimas gali sutrikdyti osteoklastų diferenciaciją su osteoporoziniu fenotipu, o NF-κB padidino c-Fos ir sumažino NFAT2 ekspresiją RANKL / RANK / TRAF sukeltos osteoklastogenezės metu. Norint įvertinti teigiamą CDP įtaką NFAT2 ir c-Fos sukeltai osteoklastogenezei, buvo analizuojami RANKL ir RANK ekspresijos lygiai. Tikimasi, kad CDP žymiai slopino NFAT2 ir stimuliavo c-Fos lygį, sumažindamas RANKL ir RANK išraiškas. Tuo tarpu pačiam RANK trūko vidinės kinazės savybės, nebent ji būtų sujungta TRAF6, kad suaktyvintų signalizaciją pasroviui [3]. CDP taip pat sumažino TRAF6 ekspresiją, dėl ko žymiai sumažėjo RANKL ir RANK surišimo kiekiai. Hipotezinis antiosteoporozinis CDP mechanizmas OVX žiurkėms apėmė aukščiau nurodytus signalizacijos kelius, o reguliatoriai aprašyti 9 paveiksle. Trumpai tariant, CDP sumažino TRAF6, RANKL ir RANK lygius, taip slopindamas pasroviui skirtus signalizacijos kelius, įskaitant PI3K/AKT ir NF-κB. yra suaktyvinami RANKL / RANK ir galiausiai sumažino pagrindinių osteoklastogeninių baltymų NFAT2 ir c-Fos ekspresiją ir aktyvumą. Todėl daugybė duomenų reiškė teigiamą CDP poveikį OVX žiurkių kaulų metabolizmui daugiausia per RANKL/RANK/TRAF{25}}tarpininkaujamus PI3K/AKT ir NF-κB kelius.

5. Išvada

Apibendrinant galima pasakyti, kad bendri feniletanoidiniai glikozidai, išskirti iš C. deserticola, turėjo reikšmingą teigiamą poveikį OVX žiurkių osteoporozei po menopauzės, o terapinis potencialas slopinti kaulų retėjimą daugiausia buvo kaulų formavimosi stimuliavimas ir kaulų rezorbcijos slopinimas, taip pat kaulų antioksidanto gerinimas. sistema; mechanizmai gali būti susiję su RANKL/RANK/TRAF{0}}sukelta NF-κB aktyvacija ir PI3K/AKT inaktyvacija, taip pat c-Fos stimuliacija ir NFAT2 slopinimu, galiausiai buvo slopinama osteoklastų diferenciacija.

Santrumpos

AKT: baltymų kinazė B

ALP: šarminė fosfatazė

BGP: kaulų GLA baltymas

BMC: kaulų mineralų kiekis

CDP: C. deserticola feniletanoido glikozido frakcija

CK: Katepsinas K

CT: kalcitoninas

DPD: deoksipiridinolinas

ERR: su estrogenais susijęs alfa receptorius

EV: estradiolio valeratas

GSH: Glutationas l-PTH: nepažeistas parathormonas

MCSF: makrofagų kolonijas stimuliuojantis faktorius

MDA: Malondialdehidas

NFAT2: aktyvuotų T ląstelių branduolinis faktorius c2

NF-κB: Branduolinis faktorius-kappa B

OPG: Osteoprotegerinas

OVX: pašalintos kiaušidės

PhGs: feniletanoidiniai glikozidai

PI3K: fosfoinozitido 3-kinazė

RANK: branduolinio faktoriaus-kappa B receptorių aktyvatorius

RANKL: Branduolinio faktoriaus-kappa receptorių aktyvatorius

B ligando ROI: dominantis regionas

SOD: superoksido dismutazė

Tb. N: Trabekulinis skaičius

Tb.Sp: Trabekulinis atskyrimas

Tb.Th: Trabekulinis storis

TCM: tradicinė kinų medicina

TMC: audinių mineralų kiekis

TMD: audinių mineralinis tankis

TNF: naviko nekrozės faktorius

TRAF6: su naviko nekrozės faktoriaus receptoriais susijęs 6 faktorius

TRAP: Tartratui atspari rūgštinė fosfatazė.

Duomenų prieinamumas

Duomenis, naudojamus šio tyrimo išvadoms pagrįsti, paprašius gali gauti atitinkamas autorius.

Interesų konfliktai

Autoriai neturėjo interesų konflikto.

Autorių įnašai

XM projektavo ir prižiūrėjo eksperimentus; SD ir LY atliko daugumą eksperimentų ir parengė rankraščio projektą; BZ ir JL atliko Western blot analizę ir dalyvavo eksperimentuose su gyvūnais; YD analizavo duomenis; QT ir PY peržiūrėjo rankraštį. Visi autoriai peržiūrėjo rankraštį. Lingling Yang ir Shuqin Ding vienodai prisidėjo prie rankraščio.

Padėkos

Šis darbas buvo paremtas Ningxia aukštojo mokslo mokslo technologijų fondo (NGY2017090), Kinijos nacionalinio gamtos mokslų fondo (Nr. 81560684), Ningxia pagrindinių tyrimų ir plėtros programos (2018BHF2001), Ningxia pagrindinių mokslinių tyrimų ir Rytų ir Vakarų mokslo ir technologijų bendradarbiavimo išradimų programa (Nr. 2017BY084 ir 2017BY079) ir Kinijos mokslų akademijos Vakarų šviesos fondas – jaunieji Vakarų mokslininkai 2017 m.

Nuorodos

[1] LJ Melton III, EA Christchilles, C. Cooper, AW Lane ir BL Riggs, „Perspektyva. Kiek moterų serga osteoporoze?“, „Journal of Bone and Mineral Research“, t. 7, Nr. 9, 1005–1010 p., 1992 m.

[2] S. Schnell, SM Friedman, DA Mendelson, KW Bingham ir SL Kates, „Pacientų, gydytų pagal klubo lūžių programą vyresnio amžiaus žmonėms, 1-metų mirtingumas“, Geriatric Orthopedic Surgery & Rehabilitation, t. 1, Nr. 1, 2010 m. 6–14 p.

[3] EM Tan, L. Li, IR Indran, N. Chew ir EL Yong, „TRAF6 tarpininkauja osteoklastogenezės slopinimui ir kiaušidžių pašalinimo sukelto kaulų retėjimo prevencijai nauju prenilflavonoidu“, „Journal of Bone and Mineral Research“, t. 32, Nr. 4, p. 846–860, 2017 m.

[4] JH Kim ir N. Kim, „NFATc1 reguliavimas osteoklastų diferenciacijoje“, „Journal of Bone Metabolism“, t. 21, Nr. 4, 233–241 p., 2014 m.

[5] Q. Ye, XQ Ma, CL Hu ir kt., "Antiosteoporozinis aktyvumas ir Podocarpium podocarpus sudedamosios dalys", Phytomedicine, t. 22, Nr. 1, p. 94–102, 2015 m.

[6] SA Jang, HS Song, JE Kwon ir kt., „Protokatechuinė rūgštis sumažina trabekulinį kaulų nykimą pelėms, kurioms atlikta ovariektomija“, Oxidative Medicine and Cellular Longevity, vol. 2018 m., Straipsnio ID 7280342, 11 puslapių, 2018 m.

[7] AB Abdel-Naim, AA Alghamdi, MM Algandaby ir kt., „Rutinas, išskirtas iš Chrozophora tinctoria, pagerina kaulų ląstelių proliferaciją ir kaulėjimo žymenis“, Oxidative Medicine and Cellular Longevity, vol. 2018 m., Straipsnio ID 5106469, 10 puslapių, 2018 m.

[8] J. Wattanathorn, C. Thipkaew, W. Thukham-mee, S. Muchimapura, P. Wannanon ir T. Tong-unas, "Morindacitrifolia L. lapų ekstraktas apsaugo nuo smegenų išemijos ir osteoporozės pagal in vivo eksperimentinį modelį menopauzės“, Oksidacinė medicina ir ląstelių ilgaamžiškumas, t. 2018 m., Straipsnio ID 1039364, 13 puslapių, 2018 m.

[9] S. Sungkamanee, J. Wattanathorn, S. Muchimapura ir W. Thukham-mee, „Antiosteoporotic Effect of a Combined Extract of Morus alba and Polygonum odoratum“, Oxidative Medicine and Cellular Longevity, t. 2014 m., Straipsnio ID 579305, 9 puslapiai, 2014 m.

[10] J. Liu, Z. Zhang, Q. Guo, Y. Dong, Q. Zhao ir X. Ma, "Syringin apsaugo nuo kaulų nykimo pelėms, kurioms buvo pašalintos kiaušidės, nes slopina NF-κB TRAF6 ir stimuliuoja PI3K/AKT "Fitomedicina, t. 42, p. 43–50, 2018 m.

[11] CW Lu, SK Huang, TY Lin ir SJ Wang, „Echinakozidas, aktyvi Herba Cistanche sudedamoji dalis, slopina epileptiforminį aktyvumą hipokampo CA3 piramidiniuose neuronuose“, „The Korean Journal of Physiology & Pharmacology“, t. 22, Nr. 3, 249–255 p., 2018 m.

[12] X. Xu, Z. Zhang, W. Wang, H. Yao ir X. Ma, "Terapinis cistanozido A poveikis kaulų metabolizmui pelių, kurioms atlikta ovariektomija", Molecules, vol. 22, Nr. 2, p. 197, 2017 m.

[13] K. Alipieva, L. Korkina, IE Orhan ir MI Georgiev, „Verbascoside – a review of iturence, (bio)sintezė ir farmakologinė reikšmė“, Biotechnology Advances, t. 32, Nr. 6, 1065–1076 p., 2014 m.

[14] Kinijos farmakopėjos redakcinis komitetas, Kinijos Liaudies Respublikos farmakopėja, Kinijos medicinos mokslo ir technologijų leidykla, Pekinas, Kinija, 10-asis leidimas, 2015 m.

[15] H. Zhang, WW Xing, YS Li ir kt., „Tradicinio kiniško augalinio preparato poveikis osteoblastams ir osteoklastams“, Maturitas, t. 61, Nr. 4, 334–339 p., 2008 m.

[16] X. Ma, J. Liu, L. Yang, B. Zhang, Y. Dong ir Q. Zhao: „Cynomorium songaricum apsaugo nuo kaulų rezorbcijos žiurkių, kurių kiaušialąstės pašalintos, per RANKL/RANK/TRAF6 sukeltą PI3K/AKT slopinimą ir NF-κB keliai“, Life Sciences, t. 209, 140–148 p., 2018 m.

[17] XQ Ma, T. Han, X. Zhang ir kt., "Kaempferitrin apsaugo nuo kaulų nykimo žiurkėms, kurioms atlikta ovariektomija", Phytomedicine, vol. 22, Nr. 13, 1159–1162 p., 2015 m.

[18] PL Liao, CH Li, LS Tse, JJ Kang ir YW Cheng, „Cistanche tubulosa sveiko maisto produkto Memoregain® saugos įvertinimas: genotoksiškumo ir 28-dienos kartotinės dozės toksiškumo testas“, Maisto ir cheminė toksikologija. , t. 118, 581–588 p., 2018 m.

[19] CC Wong, HB Li, KW Cheng ir F. Chen, "Sisteminis 30 Kinijos vaistinių augalų antioksidacinio aktyvumo tyrimas, naudojant geležies redukuojančios antioksidacinės galios tyrimą", Food Chemistry, t. 97, Nr. 4, 705–711 p., 2006 m.

[20] D. Song, Z. Cao, Z. Liu ir kt., „Cistanche deserticola polisacharidas silpnina osteoklastogenezę ir kaulų rezorbciją slopindamas RANKL signalizaciją ir reaktyviųjų deguonies rūšių gamybą“, Journal of Cellular Physiology, vol. 233, Nr. 12, p. 9674–9684, 2018 m.

[21] HD Liang, F. Yu, ZH Tong, HQ Zhang ir W. Liang, „Cistanches Herba vandeninis ekstraktas, veikiantis serumo BGP ir TRAP bei kaulų čiulpų Smad1 mRNR, Smad5 mRNR, TGF- 1 mRNR ir TIEG1 mRNR ekspresijos lygiai sergant osteoporozės liga", Molecular Biology Reports, vol. 40, Nr. 2, 757–763 p., 2013 m.

[22] TM Li, HC Huang, CM Su ir kt., „Cistanche deserticola ekstraktas padidina kaulų susidarymą osteoblastuose“, Journal of Pharmacy and Pharmacology, vol. 64, Nr. 6, p. 897–907, 2012 m.

[23] H. Liang, F. Yu, Z. Tong ir Z. Huang, "Cistanches Herba vandeninio ekstrakto poveikis kaulų nykimui žiurkėms, kurių ovariektomija pašalinta", International Journal of Molecular Sciences, t. 12, Nr. 8, 5060–5069 p., 2011 m.

[24] F. Li, X. Yang, Y. Yang ir kt., "Echinakozido antiosteoporozinis aktyvumas žiurkių kiaušialąstėse, kuriems atlikta ovariektomija", Phytomedicine, t. 20, Nr. 6, 549–557 p., 2013 m.

[25] H. Nian, MH Ma, SS Nian ir LL Xu, "Antiosteoporozinis icariin aktyvumas in ovariectomized rats", Phytomedicine, vol. 16, Nr. 4, p. 320–326, 2009 m.

[26] SR Fahmy, AM Soliman, AA Sayed ir M. Marzouk, "Galimas antiosteoporozinis Cicer arietinum ekstrakto mechanizmas žiurkių kiaušialąstėse", International Journal of Clinical and Experimental Pathology, t. 8, Nr. 4, 3477–3490 p., 2015 m.

[27] R. Swaminathan, "Kaulų apykaitos biocheminiai žymenys", Clinica Chimica Acta, t. 313, Nr. 1-2, p. 95–105, 2001 m.

[28] S. Muthusamy, I. Ramachandran, B. Muthusamy ir kt., "Ovariektomija sukelia oksidacinį stresą ir pažeidžia kaulų antioksidacinę sistemą suaugusioms žiurkėms", Clinica Chimica Acta, vol. 360, Nr. 1-2, p. 81–86, 2005 m.

[29] WJ Boyle, WS Simonet ir DL Lacey, "Osteoclast diferenciacija ir aktyvinimas", Nature, t. 423, Nr. 6937, 337–342 p., 2003 m.