Aspergillus Favus "jojobos endofito" taksolio priešvėžinio aktyvumo didinimas per konjugaciją su aukso nanodalelėmis, tarpininkaujančiomis švitinant
May 30, 2023
Taxol alternatyvios kiniškos žolės Cistanche
Raktiniai žodžiai:Aspergillus favus · Jojoba · Endofitiniai grybai · Aukso nanodalelės · Taksolis · -Švitinimas · Mitybos optimizavimas
Įvadas
Taxol yra vienas iš labiausiai komercializuotų plataus spektrovaistai nuo vėžio[1]. Taksolio aktyvumas išryškėja dėl jo unikalaus specifiškumo jungiantis su ląstelių tubulino subvienetų heterodimeru, skatinančiu tubulino polimerizaciją ir taip sutrikdant mitozinį naviko ląstelių dalijimąsi [2]. Taksolis buvo stiprus prieš krūties, plaučių, galvos ir kaklo vėžį, gimdos vėžį ir pažengusias Kapoši sarkomos formas [3]. Taksolis pirmiausia buvo gaminamas iš kukmedžių Taxus brevifolia "Taxaceae šeimos" žievės [4, 5]; tačiau mažesnis Taxol derlius<0.001%, i.e., to produce 1 g Taxol, it requires~10 kg of plant bark that collected from 3 to 5 trees [6], is the main challenge. In addition, the vulnerability of this plant to unpredicted fluctuations with the environmental conditions strongly influences the Taxol yield, heterogeneity, and reproducibility [7–9]. Exploring the Taxol producing potency of the endophytic fungi inhabiting medicinal plants raises the hope for overcoming the low yield by the above-mentioned method [10, 11], due to their fast growth, cost-effectiveness, independence on climatic changes, and feasibility for genetic manipulation [12, 13]. Subsequently, a plethora of endophytic fungi with metabolic potency to produce Taxol has been reported as reviewed [1, 14–25]. However, the anticipation of these fungi for industrial production of Taxol has been challenged by the attenuation and loss of Taxol productivity by the fungal storage and multiple subculturing [21, 22, 26–28]. Thus, searching for a novel fungal isolate with affordable metabolic stability and sustainability for Taxol production is the challenge. Medicinal plants of well-known ethnopharmacological relevance and traditional pharmaceutical applications could be the repertoire of novel fungal isolates with unique features of metabolic stability for Taxol biosynthesis. Among the most common medicinal plants, jojoba "Simmondsia chinensis" is a monogenetic dioecious grey-green shrub belonging to the Simmondsiaceae family. Jojoba seeds contain up to 65% of light golden and odorless high-viscosity oily metabolites [29]. Jojoba oil has been frequently used for the relief of headaches, throat inflammation, and wound treatment [30, 31]. As well as Jojoba oil has been used as an anti-inflammatory and antimicrobial agent [30, 31]. The leaves of jojoba are rich with antioxidant flavonoid compounds that are traditionally used for treating of various disorders such as astma,uždegimas, irvėžys[32]. Taigi pagrindinis šio darbo tikslas buvo ištirti naują grybelio izoliatą iš jojobos augalo, turintį unikalų metabolinį stabilumą taksolio gamybai, įvertinti skirtingus būdus, kaip maksimaliai padidinti taksolio išeigą, taip pat sustiprinti ekstrahuotų taksolio junginių antiproliferacinį aktyvumą. per konjugaciją su aukso nanodalelėmis, tarpininkaujant gama spinduliuotei.
Medžiaga ir metodai
Endofitinių grybų išskyrimas ir kultivavimas
Įvairios jojobos (Simmondsia chinensis) dalys, kaip lapai, žievės, šakelės ir pumpurai, buvo surinktos iš Kairo universiteto Žemės ūkio fakulteto ir naudojamos kaip endofitinių grybų šaltinis. Augalo dalys buvo surenkamos ir nuplaunamos po tekančiu vandeniu iš čiaupo, paviršius sterilizuojamas 70 procentų etanoliu 1 min., o po to nuplaunamas steriliu vandeniu [28]. Paviršiuje sterilizuotos augalų dalys steriliomis sąlygomis supjaustomos į mažus gabalėlius ir dedamos ant bulvių dekstrozės agaro (PDA) terpės, Czapek's-Dox ir salyklo ekstrakto agaro terpės [33–36], o plokštelės buvo inkubuojamos 30 laipsnių temperatūroje. 10 dienų. Augalų dalių paviršiaus sterilizavimo efektyvumas buvo įvertintas centrifuguojant skalavimo vandenį, po to į nuosėdas įpilama 500 ul sterilaus vandens ir dedama į PDA terpę [37]. Išgryninti endofitinių grybelių izoliatai buvo inokuliuoti ant PDA įstrižai 7 dienas ir laikomi 4 laipsnių temperatūroje.
Taksolio atranka, ekstrahavimas ir kiekybinis nustatymas iš endofitinių grybų
Atsigauti endofitiniai grybai, gyvenantys jojoboje, buvo tikrinami dėl taksolio gamybos, auginant bulvių dekstrozės sultinyje (PDB) [38]. Vienas 7 dienų senumo fungal izoliato kamštis buvo pasėtas į 100 ml PDB/250 ml Erlenmeyer užduočių, inkubuojamas 15 dienų 30 ± 1 laipsnio temperatūroje, purtant (120 aps./min.). Po inkubacijos kultūros buvo filtruojamos, o filtratas buvo pakeistas 0,2 procento natrio bikarbonatu, kad nusodintų riebalų rūgštis. Taksolis buvo ekstrahuotas dichlormetanu, organinė fazė surenkama ir išgarinama iki sausumo, o likučiai vėl ištirpinami metanolyje [17, 39]. Taksolis buvo atskirtas ir identifikuotas TLC, naudojant Merck 1 mm (20 × 20 cm) iš anksto padengtas silikagelio plokšteles (TLC Silica gel 60 F254, Darmstadt, Vokietija), aptiktas UV apšvietimu 254 nm [39]. Tariamos Taxol dėmės buvo nubrauktos iš TLC silikagelio plokštelių ir ištirpintos metanolyje, intensyviai maišomos 10 minučių ir centrifuguojamos 1000 aps./min. greičiu 5 minutes. Nusodintos silicio dioksido dalelės buvo pašalintos, o supernatantas buvo paimtas taksolio kiekiui nustatyti ir grynumui patikrinti naudojant C18 atvirkštinės fazės kolonėlės (Eclipse Plus C18 4) HPLC (YOUNG In, Chromass, 9110 plus Quater nary Pump, Korėja). × 150 mm, 3,5 μm, kat. Nr. 959 963–902). Naudota judrioji fazė buvo metanolis/acetonitrilas/vanduo (25:35:40, t/v/v), esant 1,0 ml/min srauto greičiui 20 min [40], o taksolio frakcijos buvo išmatuotos ties 227 nm, cheminė tapatybė ir koncentracijos buvo patvirtintos pagal sulaikymo laiką ir absorbcijos smailės plotą, lyginant su autentišku mėginiu.
Morfologinis ir molekulinis atsigavusių endofitinių grybų identifikavimas
Endofitinių grybų izoliatai buvo identifikuoti pagal jų rūšių lygį pagal jų makro ir mikromorfologines savybes, auginant PDA, Czapek's-Dox ir salyklo ekstrakto terpėse pagal nuorodos raktus [33–36]. Stipriausių taksolį gaminančių grybų izoliatų tapatybė buvo toliau molekuliškai patvirtinta remiantis vidinio transkribuoto tarpiklio (ITS) seka [41, 42]. Grybelinė genominė DNR (gDNR) buvo išskirta susmulkinant grybieną (~0,2 g) skystame azote, tada įpilant 1 ml CTAB ekstrahavimo buferio (2 proc. CTAB, 2 proc. PVP40, { {21}},2 proc. 2-merkaptoetanolio, 20 mM EDTA, 1,4 M NaCl 100 mM Tris-HCl, pH 8,0). PGR pradmenų rinkiniai buvo ITS4 5′-GGAAGTAAAAGTCGT AACAAGG-3′ ir ITS5 5′-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3′. PGR reakcijoje yra 10 ul 2 × PGR pagrindinio mišinio (i-Taq™, kat. Nr. 25027), 2 ul gDNR, 1 ul kiekvieno pradmens (10 pmol/ul) ir užpildyta iki 20 ul steriliu distiliuotu vandens. PGR buvo suprogramuotas iki pradinės denatūracijos 94 laipsniais 2 min., denatūravimo 94 laipsniais 30 s, atkaitinimo 55 laipsniais 10 s, pratęsimo 72 laipsniais 30 s per 35 ciklus ir galutinį pratęsimą 72 laipsnių 2 kartus. min. PGR amplikonai buvo analizuojami naudojant 1,5 procento agarozės gelį 1 × TBE buferyje (Ambion Cat# AM9864), naudojant 1 kb DNR kopėčias (kat. Nr. PG010-55DI) ir vizualizuoti gelio dokumentavimo sistema. Amplikonai buvo išgryninti ir sekvenuoti naudojant Applied Biosystems Sequencer, HiSQV Bases, 6.0 versiją su tais pačiais pradmenų rinkiniais. Gautos sekos buvo neperteklinės BLAST paieškos NCBI duomenų bazėje, importuotos į MEGA 6.0 programinę įrangą ir suderintos su Clustal W raumenų algoritmu [43], o filogenetinis medis buvo sukurtas naudojant MEGA 6.0 kaimyninio sujungimo metodą [44].
Ekstrahuoto taksolio cheminė struktūra
Tariamos Taxol dėmės buvo nubrauktos nuo TLC silikagelio plokštelių ir išgrynintos, o grynumas ir koncentracija buvo nustatyti UV-Vis analize esant λ 227 nm (RIGOL, Ultra-3000 Series), lyginant su autentišku Taxol. [39]. Tuščia terpė tomis pačiomis sąlygomis buvo naudojama kaip neigiama bazinė spektrofotometrinės analizės linija. Išgrynintų Taxol mėginių FT-IR spektras buvo analizuojamas JASCO FT-IR 3600 spektrofotometru. Taxol mėginys buvo sumaltas KBr granulėmis, vakuume supresuotas į diskus, o absorbcija buvo išmatuota 400–4000 cm−1 srityje [3], lyginant su autentišku. Ekstrahuoto taksolio cheminė struktūra buvo patvirtinta naudojant HBMR spektroskopiją (JEOL, ECA-500II, 500 MHz BMR), palyginti su autentišku taksoliu. Mėginiai buvo ištirpinti CDCl3, cheminiai poslinkiai pateikiami ppm (δ skalė), o sujungimo konstantos išreiškiamos hercais (Hz).
Įvairių tipų terpių poveikis taksolio gamybai
Du agaro kamšteliai (9 mm) iš 7 dienų senumo kiekvieno grybelio izoliato kultūrų buvo pasėti trimis egzemplioriais į 100 ml terpės/250 ml Erlenmejerio bulvių dekstrozės (PDB), Czapekʼs-Dox (CZD), M1D ir salyklo ekstrakto (ME) kolbą. ) sultinio terpės. Kaip neigiama kontrolė buvo naudojamos nesokuliuotos kiekvienos terpės, kurioje nėra grybelių sporų, kontrolinės medžiagos, inkubuojamos 30 laipsnių temperatūroje 15 dienų tomis pačiomis sąlygomis. Po inkubacijos grybų kultūros buvo filtruojamos, o taksolis ekstrahuotas ir nustatytas, kaip minėta aukščiau.
Biologinis mitybos sąlygų optimizavimas, siekiant maksimaliai padidinti taksolio išeigą
Vidutinės sudėties optimizavimas, siekiant maksimaliai padidinti taksolio išeigą naudojant stiprų grybų izoliatą, buvo atliktas taikant atsako paviršiaus metodiką, naudojant Placket-Burman dizainą, o po to centrinį kompozicinį dizainą [17–2{6}}, 45]. Iš RSM konstrukcijų teigiami ir reikšmingi kintamieji, turintys įtakos taksolio gamybai, naudojant galingą grybelio izoliatą, buvo įvertinti naudojant statistinės programinės įrangos paketą Design-Expert 7.0 (Stat Ease Inc., Mineapolis, JAV). Kiekvienas eksperimentas buvo atliktas trimis biologiniais pakartojimais ir buvo atsižvelgta į vidutines vertes. Po inkubacijos norimomis sąlygomis grybelio biomasė buvo filtruojama, o taksolis ekstrahuotas ir kiekybiškai įvertintas TLC ir HPLC, kaip aprašyta aukščiau.
Placket-Burman dizainas
Placket-Burman dizainas buvo dažnai naudojamas siekiant optimizuoti terpės komponentą grybelių augimui ir bioaktyvių antrinių metabolitų gamybai, įvertinant reikšmingus kintamuosius, turinčius įtakos taksolio gamybai [18, 2{6}}, 46]. Veiksnio pasirinkimas buvo pagrįstas kokybinėje ir kiekybinėje atrankoje naudojamomis terpėmis. Buvo įtraukta vienuolika veiksnių; salyklo ekstrakto, peptono, sacharozės, soitono, glutamino, jautienos ekstrakto ir temperatūros, pH, inkubacijos laiko ir kratymo greičio vertės bei faktoriai buvo keičiami dviem lygiais, buvo pasirinktas minimalus ir didžiausias lygių diapazonas. Statistinis Design-Expert 7.0 buvo naudojamas 12 eksperimentų rinkiniui sukurti. Kiekvienam eksperimentui taksolio gamyba buvo nustatyta trimis biologiniais pakartojimais ir buvo atsižvelgta į vidutinį taksolio išeigą.
Duomenų regresinė analizė atlikta naudojant statistinę programinę įrangą. Kiekvieno kintamojo poveikis buvo apskaičiuotas (Biometrika, 2020), naudojant šią lygtį:
kur E yra bandymo kintamojo poveikis, M plius ir M− yra Taxol koncentracija bandymuose, kai parametras buvo atitinkamai aukštesniame ir žemesniame lygyje, o N yra atliktų eksperimentų skaičius. Kiekvieno kintamojo poveikis gamybai buvo nustatytas apskaičiuojant atitinkamas jų E reikšmes.
Kur Tot high yra bendras atsakymų skaičius aukštu lygiu, Tot low yra bendras atsakymų skaičius žemu lygiu, o Ne yra bandymų skaičius.
Centrinis sudėtinis dizainas ir veiksnių, turinčių įtakos taksolio gamybai, sąveika
Svarbiausi teigiami veiksniai, turintys įtakos taksolio gamybai pasirinktoje grybelio izoliacijoje, buvo optimizuoti naudojant atsako paviršiaus tipo CCD modelio eksperimentinį projektą [47]. Naudojant CCD, buvo optimizuotos terpės komponentų koncentracijos, o jų ištirtos sąveikos buvo naudojamos iš viso 20 eksperimentų su trimis kintamaisiais. Norint nustatyti optimalius taksolio gamybos iš stipraus grybelio izoliato kintamųjų lygius, buvo nubraižytos trimatės (3D) atsako paviršiaus kreivės, siekiant ištirti įvairių veiksnių sąveiką ir nustatyti kiekvieno faktoriaus, turinčio įtakos taksolio gamybai, kintamą būklę. 3D grafikai buvo atlikti laikant trijų faktorių konstantas idealiame lygyje ir nubraižant gautą Taxol derliaus atsaką skirtingiems kitų dviejų veiksnių lygiams.
Gama švitinimo poveikis taksolio išeigai
Stiprūs endofitiniai izoliatai, gaminantys taksolį, buvo apšvitinti 60kobalto šaltiniu (gama ląstelė 4000-A-Indija) skirtingomis gama spinduliuotės dozėmis (0.25–3,0 kGy), palyginti neapšvitintos kultūros kontrolei; dozės galia 1,2 kGy/h eksperimento metu. Optimizuotos terpės buvo inokuliuotos apšvitinta kultūra standartinėmis auginimo sąlygomis, palyginti su nešvitintos sporos inokuliu kaip kontroline medžiaga. Kultūros buvo inkubuojamos 30 ± 2 laipsnių temperatūroje 15 dienų sukamojoje purtyklėje (120 aps./min.). Po inkubacijos kultūros buvo filtruojamos, o taksolis ekstrahuotas, išgrynintas ir kiekybiškai įvertintas TLC ir HPLC, kaip aprašyta aukščiau.
Aukso nanodalelių (AuNP) sintezė ir apibūdinimas; Konjugacija su taksoliu
Taksolio priešvėžinė veikla
Išgrynintų Taxol ir Taxol-PVP-AuNP konjugatų aktyvumas prieš kepenų karcinomą (HPG2) ir krūties karcinomą (MCF7) buvo nustatytas 3- (4,5-dimetiltiazol- 2-yl) -2,5-difeniltetrazolio bromido (MTT) tyrimas [48]. Į 96-šulinėlių plokštelę buvo pasėta po 103 ląsteles viename šulinyje ir inkubuojama per naktį 37 laipsnių temperatūroje, tada buvo pridėta skirtingų koncentracijų vaisto ir plokštelės pakartotinai inkubuojamos 48 valandas. Buvo pridėtas MTT reagentas (25 ul) ir inkubuojamas 2 valandas, o išsivysčiusio formazano komplekso purpurinė spalva buvo išmatuota esant λ570 nm. IC50 vertė buvo išreikšta vaisto kiekiu, sumažinančiu 50 procentų pradinio auglio ląstelių skaičiaus, normalizuojančio iki teigiamos kontrolės, augimą.
Taxol ir Taxol-AuNPs konjugatų antimikrobinis aktyvumas
Buvo įvertintas Taxol ir Taxol-AuNPs konjugatų antimikrobinis aktyvumas prieš skirtingus bakterijų izoliatus; Bacillus subtilis ATCC 6633 ir Staphylococcus epidermidis, Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli ir Enterobacter agglomerans, be Candida albicans. Išbandytos bakterijų ląstelės buvo suspenduotos steriliame peptono vandenyje, kad būtų gautas standartinis ~0,5 McFarland (1–1,5) × 1{{10}}8 KSV/ml inokuliantas, esant λ6{{18 }}0 nm. Mikrobų patogenų augimo augimo slopinimas (mm) buvo įvertintas agaro disko difuzijos metodu. Kaip teigiami kontroliniai mėginiai buvo naudojami sterilūs standartiniai antibiotikų diskai, kurių skersmuo 6,0 mm. Sterilūs antibiotikų diskai (6,0 mm) buvo pakrauti su 20 ul metanolio ir amoksicilino-klavulano rūgšties (AMC) kaip neigiama ir teigiama kontrolė. Diskai buvo apkrauti ta pačia Taxol, Taxol-PVP-AuNP ir AuNP koncentracija (1,0 ug/ml). Buvo paruošti trys biologiniai pakartojimai. Plokštelės buvo inkubuojamos 37 laipsnių temperatūroje 24 valandas ir buvo išmatuotos slopinimo zonos. Amoksicilino klavulano rūgštis (AMC) ir nistatinas buvo naudojami Taxol antimikrobiniam aktyvumui normalizuoti. Augimo slopinimo zona buvo nustatyta nonijaus slankmačiu (mm).
Statistinės analizės
Fišerio mažiausiai reikšmingas post hoc testo skirtumas.
Grybelinis nusėdimas
Rezultatai
Endofitinių grybų išskyrimas iš simondsijų; Taksolio gamybos patikrinimas
Dvidešimt keturi endofitinių grybų izoliatai buvo gauti iš simondsijų žievės, šakelių, lapų ir pumpurų, pakrautų į PDA, CZD ir ME terpę. Šie grybų izoliatai buvo gauti iš žievės (6 izoliatai), šakelių (7 izoliatai), lapų (4 izoliatai) ir pumpurų (7 izoliatai), kaip nurodyta 1 lentelėje. Iš pradžių šie grybų izoliatai buvo identifikuoti pagal jų rūšies lygį, remiantis jų morfologiniais duomenimis. bruožai pagal universalius raktus, priklausančius trims gentims, būtent Aspergillus, Penicillium ir Fusarium. Tarp šių izoliatų buvo pranešta apie Aspergillus genties paplitimą (83,4 proc.), o Fusarium ir Penicillium – 8,3 proc. Aspergillus genčiai atstovavo penkios rūšys, būtent A. favus (3 izoliatai), Aspergillus oryzae (5 izoliatai), A. niger (5 izoliatai), A. fumigatus (4 izoliatai) ir A. terreus (3 izoliatai). Taksolio produktyvumas iš regeneruotų grybų izoliatų buvo įvertintas auginant PDB, inkubuojant standartinėmis sąlygomis, ekstrahuojant ir kiekybiškai įvertinant taksolį TLC ir HPLC (1 pav.). Remiantis rezultatais, didžiausias Taxol produktyvumas buvo nustatytas A. favus Bd1 (88,65 µg/l), po to P. polonium Br1 (54,42 µg/l), A. niger Lv1 (43,95 µg/l), A. oryzae Bd1. (38,87 µg/l), F. oxysporum Tw1 (26,80 µg/l), A. niger Lv2 (23.01 µg/l) ir A. fumigatus Bd2 (17,62 µg/l). l). Didžiausių grybų gamintojų taksolio struktūrinė cheminė tapatybė buvo atskleista pagal jų UV-Vis spektrus, palyginti su autentiško taksolio cheminiu spektru. Be to, cheminė taksolio, ekstrahuoto iš keturių galingiausių grybų izoliatų, struktūra buvo patvirtinta FT-IR analizėmis (1 pav.). Pažymėtina, kad ekstrahuotas taksolis iš stiprių grybų izoliatų parodė tą pačią autentiško taksolio spektrinę paradigmą. Hidroksilui (OH) buvo priskirta smailė ties 3393,3 cm-1. Nors smailės ties 2923,5 buvo priskirtos alifatiniam CH ruožui, smailės ties 1661.0 cm−1 atitinka C=O tempimo dažnį. Stebėta smailė ties 1452,0–1404,0 cm−1 atsirado dėl NH tempimo dažnio. Karbonilo grupės-deguonies tempimo dažnis buvo stebimas ties 1109 cm−1. Stebėtos smailės 1020–979,7 cm-1 diapazone atsirado dėl aromatinių C ir H lenkimų. Iš chromatografinės ir spektrinės analizės galima daryti išvadą, kad ekstrahuotas taksolis yra identiškas autentiškam. Matyt, tų pačių grybų rūšių metabolinis aktyvumas labai svyravo su skirtingais augalais, užtikrinant unikalią biologinę sąveiką ir specifinių signalų išsiskyrimą iš augalo dalies, kad suaktyvintų taksolio biosintezės mechanizmų sistemos ekspresiją. Įdomu tai, kad medžiagų apykaitos sistemos svyravimai priklauso ne tik nuo augalo dalių, bet ir nuo izoliato ir izoliato sąveikos, pavyzdžiui, A. niger izoliatų, gyvenančių simondsijų lapuose, Taxol derlius buvo 43,9 µg/l, tuo tarpu Taksolis buvo nulinis A. niger izoliatui, gautam iš augalo žievės.
Stiprių taksolio gamintojų morfologinis ir molekulinis identifikavimas
Stipraus grybelio izoliato, gaminančio taksolį, morfologinės savybės buvo ištirtos pagal makroskopinius ir mikroskopinius aprašomuosius raktus, kaip aprašyta skyriuje Medžiagos ir metodai, ir atskleidė jo morfologinį artumą A. favus (2 pav.). Grybelio izoliatas buvo auginamas PDA 30 laipsnių temperatūroje 10 dienų, o makroskopinės ir mikroskopinės savybės atskleidė jo tapatybę, pavyzdžiui, konidijų galvutes, išsišakojimą, stigmos tapatumą ir konidijų ontologiją bei vaisiakūnių formavimąsi pagal universalųjį metodą. morfologinius raktus [33], ir buvo nustatyta, kad jie yra identiški Aspergillus favus. Stiprus taksolį gaminantis A. favus izoliatas buvo toliau identifikuotas pagal jų ITS sekas, naudojant gDNR kaip šabloną. A. favus PGR amplikonai (~550 bp) buvo atskirti, išgryninti ir sekvenuoti (2 pav.). A. favus ITS seka buvo neperteklinė blastinė paieška NCBI duomenų bazėje, rodanti 99 procentų panašumą su A. favus, nulinės E. reikšmės ir 95 procentų užklausos aprėptis. Taigi, atlikus mikroskopinę ir molekulinę analizę, tikslinis izoliatas buvo patvirtintas kaip A. favus ir deponuotas GenBank su registracijos numeriu MW485934.1, taip pat izoliatas buvo deponuotas Assiut universiteto mikologijos centre (AUMC), Egipte su deponavimo numeris AUMC13892. Dabartinis izoliatas turėjo 99 procentų panašumą su A. favus izoliatais MW485934, MT446145, KJ863514, MW522551,
1 pav. Morfologinis jojobos augalo vaizdas. B Galingų taksolį gaminančių endofitinių grybų kultūros plokštelėse; A. favus Bd1 (13), A. niger Lv1 (21), Penicillium polonium (23) ir A. oryzae Bd (25) ant PDA po 8 dienų inkubacijos 30 laipsnių temperatūroje. Grybelio izoliatai buvo auginami PDB ir inkubuojami standartinėmis sąlygomis, o taksolis buvo ekstrahuotas ir patikrintas TLC (C). D Taxol HPLC chromatograma iš stiprių grybelio izoliatų. E Taksolio išeiga, kiekybiškai įvertinta HPLC. F, iš grybų izoliatų ekstrahuoto taksolio UV-Vis spektrinė analizė. G FT-IR ekstrahuoto taksolio analizė, palyginti su autentišku
2 pav. A. favus, jojobos endofito, makromorfologinės savybės po 3, 5 ir 8 augimo PDA. Mikromorfologiniai požymiai, konidinė A. favus galva 400X padidinimu. 500 bp A. favus ITS srities C PGR amplikonas, normalizuojantis iki 1 kb kopėčios (Kat. Nr. SM0312). D ITS A. favus filogenetinė analizė didžiausios tikimybės metodu [44]
Paprašyk daugiau:
El. paštas:wallence.suen@wecistanche.com whatsapp: plius 86 15292862950
