Neapdorotų ir apdorotų Cistanche Deserticola cheminių savybių ir metabolitų tyrimas žiurkėse, UPLC-Q-TOF-MSE

Kontaktinis Elektroninis paštastina.xiang@wecistanche.comDaugiau informacijos

Abstraktus

Fonas: Kinijos materia medica apdorojimas yra išskirtinė ir unikali tradicinės kinų medicinos (TCM) farmacinė technika, naudojama siekiant sumažinti šalutinį poveikį ir padidinti ar net pakeisti žalių žolelių terapinį veiksmingumą. Pagrindinių komponentų pokyčiai, kuriuos sukelia optimizuota perdirbimo procedūra, pirmiausia lemia padidėjusį vaistinių augalų veiksmingumą. Inkstus-jang gaivinantis ryžių vyno poveikisCistanche deserticola(C.deserticola) buvo stipresnis nei žaliavinis C.deserticola (CD).

Metodai: Palyginimo analizė buvo atlikta naudojant UPLC-Q-TOF-MS' su UNIFl informatikos platforma, siekiant nustatyti apdorojimo įtaką. In vitro tyrimai buvo atlikti sudedamosioms dalims apibūdinti, taip patmetabolitaiin vivo. Cheminiai komponentai buvo nustatyti CD ir jo perdirbtuose produktuose. Daugiamatė statistinė analizė buvo atlikta siekiant įvertinti skirtumus tarp jų, o OPLS-DA buvo naudojamas poriniam palyginimui.

Rezultatai: Šio tyrimo rezultatai atskleidė didelius feniletanoidinių glikozidų (PhG) iriridoidaipo apdorojimo. CD ir jo perdirbto produkto ekstraktuose iš viso aptikti 97 junginiai. PhG, turinčių 4-O-kofeoilo grupę 8-O- -D-gliukopiranozilo dalyje, pvz., akteozidas, cistanozidas C, kampneozidas Il, osmantuzidas, po apdorojimo sumažėjo, o PhG su 6' -O-kofeoilo grupė 8-O- -D-gliukopiranozilo dalyje, pvz., izoacetozidas, izocistanosidas C, izokampneozidas l, izomartynozidas, ypač CD-NP grupėje. Taip pat padidėjo echinakozido ir cistanozido B, kurių struktūroje yra 6'-O- -D-gliukopiranozilo fragmentas, intensyvumas. In vivo tyrime žiurkės plazmoje, išmatose ir šlapime buvo aptikta 10 prototipų komponentų ir 44 metabolitai. Gauti rezultatai atskleidė, kad apdorojimas lemia didelius CD cheminių sudedamųjų dalių skirtumus ir turi įtakos junginių išsidėstymui in vivo, o Ⅱ fazės metaboliniai procesai yra pagrindinės kiekvieno junginio kaskados, o dauguma metabolitų yra susiję su echinakozidu arba akteozido.

Išvados: Tai pirmasis pasaulinis neapdorotų ir apdorotų kompaktinių diskų palyginimo tyrimas. Šios išvados papildo mūsų supratimą apie CD apdorojimo poveikį ir suteikia svarbių duomenų būsimiems veiksmingumo tyrimams.

Raktažodžiai: Cistanche deserticola, apdorojimas, UPLC-Q-TOF-MS5, cheminiai profiliai, metabolitai in vivo

Įvadas

Kinijos materia medica (CMM) apdorojimas įrodė reikšmingą pritaikomumą tradicinės kinų medicinos (TCM) klinikinėje praktikoje ir keletą šimtmečių buvo laikomas perspektyviu gydymo būdu. Tai unikali farmacinė technologija, sukurta remiantis TCM teorija. Po apdorojimo buvo nustatyti reikšmingi visų tipų TCM išvaizdos, cheminių sudedamųjų dalių, savybių ir medicininės reikšmės skirtumai, todėl daroma prielaida, kad apdorojimas gali pagerinti TCM veiksmingumą arba sumažinti toksinį poveikį.

Šimtus metų,Cistanche deserticola(Rou Cong Rong kinų kalba, CD) dažniausiai naudojamas TCM klinikinėje praktikoje inkstų funkcijoms papildyti. Tai taip pat padeda drėkinti žarnyną, todėl žarnynas atsipalaiduoja [1].Cistanchepirmą kartą buvo įrašytas ShenNongBencaoJing. Jis dažniausiai randamas sausose ir pusiau sausose buveinėse visoje Eurazijoje ir Šiaurės Afrikoje, įskaitant Iraną, Kiniją, Indiją ir Mongoliją [2]. CD apdorojimas buvo atliekamas garinant su ryžių vynu esant normaliam slėgiui, o tai yra Kinijos farmakopėjoje dokumentuotas paruošimo būdas (kinų kalba Jiucongrong, toliau vadinamas CD-NP). O CD garinimas su ryžių vynu aukštu slėgiu yra efektyvesnis paruošimo būdas (toliau – CD-HP) [3, 4]. Keli tyrimai atskleidė, kad CD farmakologinis poveikis skiriasi nuo jo perdirbtų produktų [5]. CD gali tonizuoti inkstų yang ir atpalaiduoti žarnyną, o po garinimo ryžių vynu, sustiprėtų inkstų yang papildymo efektas. Ankstesniame mūsų tyrime buvo nustatyta, kad CD-NP gali sustiprinti inkstų tonifikaciją ir palaikyti yang, taip pat sumažinti žarnyno drėkinimo ir tuštinimosi poveikį [6–8]. Klinikinėje praktikoje perdirbti produktai yra dažniausiai naudojama forma.

Iki šiol keliuose tyrimuose buvo analizuojami CD cheminiai komponentai, po to buvo išskirta ir identifikuota daugiau nei 100 junginių [9–11], tokių kaip feniletanolio glikozidai (PhG).iridoidai, lignanai ir oligosacharidai, kaip pagrindinės jo cheminės sudedamosios dalys. Taip pat buvo pranešta, kad PhG turi daug farmakologinių veiklų, įskaitant imunomoduliacinį, neuroprotekcinį, hepatoprotekcinį, priešuždegiminį, antioksidacinį ir kt. [12–14]. Iridoidai turi priešuždegiminį poveikį [15, 16]. Ankstesni tyrimai taip pat atskleidė, kad kai kurie cheminiai komponentai apdorojimo metu pasikeitė [17–20]. Remiantis šiomis ataskaitomis, galima daryti prielaidą, kad po apdorojimo cheminės sudėties svyravimai sukelia įvairius farmakologinius efektus, kuriuos reikia toliau tirti.

Šiame tyrime lyginamajai analizei buvo atliktas jautrus ir efektyvus metodas, ty itin didelio efektyvumo skysčių chromatografija kartu su TOF-MSE (UPLC-Q-TOF-MSE), o ekstraktų kokybinei analizei atlikti in vitro tyrimai. CD, CD-NP ir CD-HP, siekiant išsiaiškinti jų cheminius profilius. Paprastai egzogeninės cheminės medžiagos, turinčios didelį poveikį tiksliniams organams, buvo laikomos veiksmingais komponentais. Todėl žiurkėms CD ir jo perdirbti produktai buvo atitinkamai vartojami per burną, o po to buvo apibūdinti. Esamas tyrimas atskleidžia pirmą kartą palyginamąjį neapdoroto ir apdoroto CD tyrimą (tiek in vitro, tiek in vivo). Gauti rezultatai išplėstų mūsų supratimą apie CD apdorojimo poveikį, o tai gali būti naudinga tolesniems tyrimams.

medžiagos ir metodai

Medžiagos

Standartinius ajugolio (180120) ir 2'-acetilacetozido (M0601AS) junginius pateikė Chendu Pure Chem-Standard Co., Ltd (Čengdu, Kinija). Cistanosidą F (MUST-17022620), echinakozidą (D1105AS), cistano pusę A (M0906AS) ir izoakteozidą (M0106AS) pateikė Must kompanija (Sičuanas, Kinija); akteozidas (O0618AS), salidrosidas (J0526AS), katalpolas (S0728AS), genipozidas (A0407AS) ir genipozido rūgštis (MB6001-S) buvo įsigyti iš Dalian Meilun Bio.Co.,Ltd (Dalian, Kinija).8-Epide oksilogano rūgštis (B31123) buvo gautas iš Shanghai Yuanye Biological Technology Co., Ltd, Kinija. Metanolis ir acetonitrilas buvo MS klasės ir buvo gauti iš Merck KGaA, Darmštatas, Vokietija. HPLC kokybės metano rūgštį (CH, O,) pateikė Merck KGaA (Darmštatas, Vokietija). Esamame tyrime naudojamas vanduo buvo apdorotas naudojant Milli-Q sistemą (18,2 MQ, Millipore, Ma, JAV). Ryžių vyną tiekė Brand Tower Shaoxing Wine Co., Ltd. (Džedziangas, Kinija).

Cistanch deserticola buvo surinkta iš Neimenggu wangyedi cistanche Co.Ltd. Mėginius identifikavo prof. Yanjun Zhai (farmacijos mokykla, Liaoningo universitetas TCM). Mėginiai buvo pateikti Liaoningo tradicinės kinų medicinos universitetui.

Gyvūnai

Sprague–Dawley žiurkių patinus (SPF klasės), kurių bendras kūno svoris 180–220 g, parūpino Liaoning Changsheng biotechnology Co. Ltd. (Liaoningo provincijos laboratorinių gyvūnų išteklių centras, licencijos numeris: SCXK-2015–0001). Šios žiurkės vieną savaitę buvo laikomos veisimosi patalpoje, kurioje gerai palaikoma temperatūra ir drėgmė, ty 20–26 laipsniai, 50–70 proc. Prieš eksperimentą žiurkės buvo šeriamos įprastu laboratoriniu maistu ir vandeniu. Gyvūnai nevalgė per naktį, tačiau vanduo ad libitum buvo tiekiamas prieš eksperimentą. Te žiurkėms buvo nubaustas 10 procentų chloro hidrato anestetikas. Liaoningo provincijos kinų medicinos ligoninės institucinis gyvūnų etikos komitetas patvirtino visus eksperimentinius protokolus (2019.03.25, 2019015).

CD, CD-NP ir CD-HP ekstrakto paruošimas

CD-NP, CD-HP buvo apdoroti iš tos pačios Cistanch deserticola partijos. Norint paruošti CD-NP, sausi CD gabalai (5 mm storio, 100 g) buvo sudrėkinti ryžių vynu (30 ml) ir 16 valandų garinami 100 laipsnių temperatūroje, po to džiovinami 55 laipsnių temperatūroje džiovinimo krosnyje. Tuo tarpu CD-HP buvo paruoštas infiltruojant sausus CD gabalus (5 mm storio, 100 g) ryžių vynu (30 ml), po to 4 valandas garinant 1, 25 atmosferos slėgyje. ir tada džiovinama džiovinimo krosnyje 55 laipsnių temperatūroje.

100 ml matavimo kolboje vienas gramas miltelių buvo persijotas per sietelį Nr. 4, po to įpilama 50 procentų metanolio (50 ml), tada sandariai uždengta ir išmaišoma. Šis mišinys buvo pasvertas, po to pusvalandį. maceravimas. Po maceracijos mišinys buvo ultragarsu (galia 250 W, dažnis 35 kHz) 40 min., po to atšaldomas ir vėl sveriamas. Svorio praradimas buvo papildytas 50 procentų metanolio, tinkamai sumaišytas ir leistas pastovėti, po to supernatantas filtruojamas ir gautas filtratas naudojamas kaip tiriamasis tirpalas.

Aktyvių komponentų MSE analizė

Standartinių medžiagų paruošimas: tubulozidas-A (302 mg), echinakozidas (300 mg), 2'-acetilaktezidas (2,34 mg), akteozidas (2,45 mg), izoakteozidas (0,61). mg), cistanozido-F (2,14 mg), salidrozido (3,39 mg), genipozido (2,84 mg), ajugolio (1,58 mg), katalpolio (2,39 mg), genipozido rūgšties (2,56 mg) ir 8-epideoksilogano rūgštis (2,34 mg) buvo įpilta į 10 ml tūrio matavimo indą, įpilama pastovaus tūrio metanolio iki skalės, sukonfigūruota į atitinkamos koncentracijos etaloninį tirpalą. Kiekvienas iš 100 μL buvo sukonfigūruotas į mišrų etaloninį tirpalą.

MS analizės sąlyga: Te masės vertė buvo pataisyta prieš eksperimentą ir buvo naudojamas neigiamų jonų režimas. Masės diapazonas buvo 50–1200 Da, o mėginys buvo įpurškiamas per srauto įpurškimo siurblį. Kūgio greitis buvo 100 l/val., tirpiklio srauto greitis nustatytas 800 l/h. Kapiliarinė ir kūgio įtampa buvo atitinkamai fiksuota ties 2500 ir 40 V. Jonų šaltinio ir tirpiųjų dujų temperatūra buvo atitinkamai 100 laipsnių ir 400 laipsnių, o signalo gavimo dažnis – 0,5 S−1.

CD ekstrakto UPLC-Q-TOF-MS analizė (15–16 min.), nuo 65 procentų iki 55 procentų A (16–18 min.). Srauto greitis buvo 0,3 mL min-1, o automatinio mėginių ėmimo patalpos ir kolonėlės temperatūra buvo 30 laipsniai ir 8 laipsniai atskirai. Įpurškimo tūris buvo 1,0 μl.

Masių spektrometrinis įvertinimas buvo atliktas naudojant Waters XEVO G{{0}}XS QTOF MS (Waters Corporation, Milford, MA, JAV), apimantį ESI šaltinį. Azoto dujų srautas buvo nustatytas ties 800 L·val.–1, kai temperatūra 400 laipsnių, šaltinio temperatūra – 100 laipsnių, o kūginių dujų – 50 Lh–1. Kūgio ir kapiliaro įtampa buvo atitinkamai sureguliuota ties 40 ir 2000 V. Rampos susidūrimo energija buvo naudojama 20–30 V diapazone. Visų mėginių centroidiniai duomenys buvo gauti nuo 50 iki 1200 Da, o 5-nuskaitymo laikas buvo 0,5 s per 10 min. analizės laiką. . Masės tikslumui patvirtinti buvo naudojamas LockSpray TM. Kaip užrakto masė buvo naudojamas te [M–H]– leucino enkefalino jonas (200 pg·μL–1 infuzijos srauto greitis 10 μL min–1), esant m/z 554,2615. Te MassLynx V4.1 programinė įranga (Waters Co., Milford, JAV) buvo naudojama tiksliai masei, pirmtakų jonų sudėčiai ir fragmentų jonų skaičiavimui.

Duomenų analizė Masslynx platformoje

Be to, remiantis literatūra, buvo sukurta vidinė biblioteka, apimanti junginio pavadinimą, jo struktūrą ir molekulinę formulę (mol.). Visi junginiai buvo pažymėti specialiame šablone, sukurtame „Excel“. Be to, vietiniame kompiuteryje buvo išsaugoti visų atskirų sudėtinių struktūrų mol failai (Chemdraw Ultra 8.0, Cam-bridge soft, JAV) ir Excel failai. Sukurtas Excel lapas su svarbiais duomenimis buvo tiesiogiai importuotas į UNIFI mokslinę biblioteką

UNIFI 1.8.2, Waters, Manchester, UK, buvo naudojamas struktūrinėms charakteristikoms įvertinti, ypač būdingiems fragmentams ir MS suskaidymui. 2D smailės aptikimui nustatytas minimalus 500 smailės plotas. Atskleidžiant 3D smailes, buvo pasirinktas mažas energijos smailės intensyvumas – daugiau nei 300 įskaitų, o didesnis – daugiau nei 80 smailių energijos smailės intensyvumas. Nustatyta, kad žinomų junginių masės paklaida yra iki ± 10 ppm, o sulaikymo laiko tolerancija nustatyta ± 0, 1 min. Mes pasirinkome neigiamus aduktus, kuriuose yra -H ir HCOOH. Neapdoroti duomenys, gauti iš MS, buvo apdoroti naudojant supaprastintą UNIFI programinę įrangą, kad būtų galima greitai nustatyti cheminius komponentus, kurie atitiko standartus, naudojant savarankiškai sukurtą duomenų bazę ir vidaus tradicinės medicinos biblioteką.

Toliau, norint patikrinti kiekvieno tikslinio junginio cheminę struktūrą, izomerai buvo išskirti pagal jiems būdingus MS fragmentacijos modelius, kurie buvo atskleisti praneštuose tyrimuose, ir palyginus etaloninių standartų sulaikymo laiką.

Metabolizmo analizė, pagrįsta daugiamatine statistine analize

Prieš apdorojant neapdorotus duomenis, buvo nustatyti parametrai, pvz., masė nuo 150 iki 1200 Da, sulaikymo trukmės diapazonas (0–20 min.), slenksčio intensyvumas ( 2000 skaičiavimų), masės tolerancija, ty 5 MDA, o masės ir sulaikymo laiko langas buvo atitinkamai 0,20 min. ir 0,05 Da. Tolesniame duomenų bazės sąraše jonų identifikatorius buvo RT-m / poros, atsižvelgiant į jų eliuavimo laiką. Tos pačios RT ir m/z vertės įvairiose mėginių partijose buvo laikomos tuo pačiu junginiu.

Daugiamatė statistinė analizė buvo atlikta siekiant įvertinti efektyvius biomarkerius, kurie labai prisidėjo prie skirtumų tarp skirtingų grupių. Atliekant analizę, buvo naudojama pagrindinių komponentų analizė (PCA), siekiant nurodyti didžiausius skirtumus ir modelio atpažinimą, kad būtų galima gauti apžvalgą ir klasifikaciją. OPLS-DA yra modeliavimo įrankis, leidžiantis vizualizuoti OPLS-DA nuspėjamojo komponento įkėlimą, kad būtų lengviau įvertinti modelį. Kintamoji svarba projekcijai (VIP) buvo naudojama vertinant įvairių komponentų vertinimą irmetabolitaiwith VIP values>1.{1}} ir P reikšmė<0.05 were="" regarded="" as="" effective="" markers.="" furthermore,="" a="" permutation="" test="" was="" conducted="" for="" providing="" reference="" distributions="" for="" the="" r²/o²values="" that="" could="" show="" the="" statistical="">

Eksperimentai su gyvūnais žiurkės buvo atsitiktinai suskirstytos į keturias grupes (n=6 kiekvienai grupei), po to buvo duodami įvairūs ekstraktai: (1) Tuščia kontrolinė grupė: žiurkėms buvo duotas normalus fiziologinis tirpalas (2 ml/100 g). ; (2) CD grupė: žiurkėms buvo duotas CD ekstraktas (2 ml/100 g); (3) CD-NP grupė: žiurkėms buvo duotas CD-NP ekstraktas (2 ml/100 g); (4) CD-HP grupė: žiurkėms buvo duotas CD-HP ekstraktas (2 ml/100 g). Toliau visos grupės buvo suskirstytos į tris pogrupius atitinkamai plazmai, šlapimui ir išmatoms. Po dviejų valandų kiekvienai žiurkei buvo skiriamas toks pat ir vienodas ekstraktų kiekis.

Po vartojimo kraujo mėginiai buvo paimti po 1.{1}} val., 20 val. ir 40 val. heparinizuotuose 1,5 ml polietileno mėgintuvėliuose (iš orbitinių venų). , po to visi mėginiai centrifuguojami (4500 aps./min.) 15 min.

Šlapimo ir išmatų mėginiams žiurkės buvo laikomos metabolizmo narvuose, o šlapimo ir išmatų mėginiai buvo imami 24 valandas po vartojimo. Šlapimo mėginiai centrifuguojami esant 4500 aps./min. 15 min., o išmatų mėginiai džiovinami pavėsyje, sumalami į miltelius, po to paimama 0,2 g ir supilama į 0,5 ml fiziologinio tirpalo. tirpalu, ultragarsu 5 min. ir centrifuguojama 12,000 aps./min. greičiu 15 min. Visi biologiniai mėginiai buvo laikomi –80 laipsnių temperatūroje iki analizės.

Biologinių mėginių ruošimas. Plazmos, šlapimo ir išmatų mėginiai buvo pridėti su 3 tūriais metanolio, po to maišant 3 minutes. Tada mišiniai centrifuguojami (12, 000 aps./min.) 10 min., po to supernatantas perkeliamas į EP mėgintuvėlį ir džiovinamas azotu 37 laipsnių temperatūroje. Be to, buvo įpilta 200 μL HCN-H2O (50 proc.) tirpalo. Dešimt, sūkurys buvo naudojamas maišymui (1 min.), po to centrifuguojamas (12, 000 aps./min.) 5 min. Apdorotų mėginių supernatantas (5 μL) buvo įšvirkščiamas į UPLC-Q-TOF-MSE sistemą.

Skysčių chromatografinė ir masės spektrometrinė būklėmetabolitaitaip pat buvo atlikta Waters UPLC instrumentu per ESI sąsają. Atskyrimai buvo atlikti naudojant Acquity UPLC HSS T3 kolonėlę (100 mm × 2,1 mm, 1,8 µm), judrioji fazė buvo 0,1 procento skruzdžių rūgšties (A): acetonitrilo (B), gradiento eliuavimo sąlyga buvo 0-3 min (99,8 proc. →98 proc. A).3-5 min(98 proc. →95 proc. A),5-8 min(95 proc. →90 proc. A), { {18}} min (90 proc. → 85 proc. A),12-17 min (85 proc. → 70 proc. A), 17-22 min (70 proc. → 60 proc. A), 22-23 min. (60 proc. → 58 proc. A), 23-25 min (58 proc. A),25-32 min (58 proc. → 45 proc. A) ir 32-37 min (45 proc. → 35 proc. A) ), 0,4 ml min-1 buvo srauto greitis. Kolonėlės ir mėginių kambario temperatūra buvo nustatyta atitinkamai 40 laipsnių ir 8 laipsnių. Buvo naudojamos aukščiau nurodytos masės spektrometrijos sąlygos.

Sisteminės metabolitų analizės biologiniuose mėginiuose strategija Duomenų apdorojimui buvo naudojama UNIFI (1.8.2) programinė įranga. Funkcija Binary Compare buvo naudojama efektyviems metabolitams nustatyti. Įvertintų metabolitų nebuvo lygiaverte kontroliniame mėginyje arba jie egzistuoja esant mažam jonų intensyvumui. Santykinė intensyvumo riba buvo nustatyta 3 arba 5, o metabolitai, kurie atitiko pabrauktus kriterijus, gali būti įvertinti. Tada EIC nustatė įprastus ir nuspėjamus metabolitus. Dviejų fazių metabolitų paieškai buvo pritaikyta NLF funkcija. Pavyzdžiui, UNIFI programinėje įrangoje parametrai gali būti nustatyti 176.0321 ieškant galimų gliukurono rūgšties konjugatų. Po apdorojimo metodu galima nustatyti neutralius nuostolius arba nustatyti. MassFragment buvo naudojamas aptiktų metabolitų struktūroms nustatyti arba apibūdinti, UNIFI spektrinės interpretacijos funkcija yra pagrindinė funkcija, naudojama analizuojant antrinį pirminių komponentų fragmentaciją. Ši funkcija gali būti naudojama norint greitai patikrinti suskaidymo kelią, ar tai pagrįsta.

Rezultatai

Feniletanoidinių glikozidų ir iridoidų masės suskaidymo taisyklė

Feniletanoidiniai glikozidai yra pagrindinė CD cheminė sudedamoji dalis. standartiniai izoakteozido tirpalai,

buvo paimti cistanosidas F, tubulozidas A, echinakozidas, akteozidas ir 2'-acetil-akteozidas, po to buvo nustatytas skirtingas susidūrimo energijos lygis (1 lentelė), o tada gauti atitinkami MS2 žemėlapiai (1 pav.).

Masių spektrometrinė analizė atskleidė, kad feniletanoidiniai glikozidai turi panašius masės spektro suskaidymo modelius, skilimo būdai neigiamų jonų režimu daugiausia apima (1) esterio jungčių skilimą: neutralios kofeilo grupės (C, H, O162.03) ir neutralaus acetilo praradimą. grupė (C, H, O,42.00);(2) Glikozidinis skilimas: neutralių ramnozės likučių (C.HIO, 146,05) ir neutralios gliukozės liekanos (CgHO, 162,05) praradimas. Iš didelės skiriamosios gebos masių spektrometrijos galima išskirti kafeoilą (162,03) ir gliukozės likučius (162,05).

Buvo paimti iridoidų ajugolio, katalpolio, genipozido rūgšties, genipozido ir 8-epide oksilogano rūgšties etaloniniai tirpalai, po to pateikiamos skirtingos susidūrimo energijos ir gauti atitinkami MS žemėlapiai (2 pav.).

Iridoidiniai glikozidai turi panašius masės spektro suskaidymo modelius, skilimo būdai neigiamų jonų režimu daugiausia apima (1) glikozidinį skilimą: neutralios gliukozės likučio (CHoO, 162,05) praradimą; (2) neutralaus CO (43,99) ir H praradimą. , O(18.01).

Junginių identifikavimas CD, CD-NP ir CD-HP ekstraktuose

UPLC-QTOF-MSE analizė

Atliktas chromatografinių sąlygų optimizavimas. Tada CistancheHerba junginiai buvo įvertinti tiek neigiamu, tiek teigiamu jonų režimu su dideliu ir mažu CE. Gauti rezultatai atskleidė, kad šių junginių neigiamo režimo suderinamumas buvo didesnis, palyginti su teigiamu režimu. 3 paveiksle parodyta MS bazinio piko jonų (BPI) chromatograma su sunumeruotomis smailėmis. Kiekvieno aptikto jono intensyvumas UPLC-Q-TOF-MS analizėje buvo normalizuotas atsižvelgiant į visą jonų skaičių, kad būtų sukurta duomenų matrica, kurią sudaro m/z vertė, normalizuotas smailės plotas ir sulaikymo laikas.

Komponentų iš kompaktinio disko ir jo apdorotų produktų įvertinimas UNIFl platformoje

Iš viso 97 junginiai buvo identifikuoti su -SEM (n=6) režimu iš CD ir jo perdirbto produkto (2 lentelė), įskaitant feniletanoidinius glikozidus (PhG), iridoidus, lignanus ir oligosacharidus. 95, 91 ir 94 komponentai buvo atitinkamai aptikti CD, CD-NP ir CD-HP. Iš jų 64 buvo feniletanoidai, 13 buvo iridoidai ir 20 kitų rūšių junginių. CD ir jo perdirbto produkto cheminė sudėtis buvo panaši, tačiau nustatyta, kad CD ir jo perdirbtame produkte komponentų kiekis skiriasi.

Apdorotų produktų cheminių komponentų svyravimai Daugiamatėms duomenų matricoms analizuoti buvo naudojama Simca-P 13.0 programinė įranga. Prieš PCA visi kintamieji buvo orientuoti į vidurkį ir Pareto skalę, po to buvo nustatyti galimi diskriminuojantys kintamieji. PCA balų diagramoje kiekvienas taškas rodė atskirą pavyzdį. Mėginiai, kurių cheminiai komponentai buvo panašūs, buvo išsklaidyti vienas šalia kito, o tie, kurių komponentai skiriasi, buvo padalinti. Kaip matyti iš PCA (4 pav.), CD-HP grupė buvo atskirta nuo CD ir CD-NP grupių.

To distinguish CD from CD-HP and CD-NP, OPLS-DA, permutation test, S-plot, and VIP value were developed. (Figs.5, 6,7)The obtained results revealed that many components were key characteristic components of each product. The screening condition was the VIP>1 ir P<0.05. from="" the="" date="" of="" the="" s-plot,="" the="" characteristic="" components="" were="" evaluated,="" which="" were="" commonly="" existing="" in="" the="" three="">

Iš 8 pav. mes nustatėme akteozido (54), cistanozido C (74), kampneozido I (43), osmantusido (75) ir 2'-aktilakteozido (80), turinčio 4'-O-kofeoilo grupę, intensyvumą. 8-O- -D-gliukopiranozilo dalis (žr. 9 pav.) sumažėjo po apdorojimo ryžių vynu, o izoacetozido(60) intensyvumas yra kastanozidas (71), izokampneozidas I (69), izomartynozido (86), turinčio 6'-O-kofeoilo grupę (žr. 9 pav.), padidėjo, ypač CD-NP grupėje. Nors tubulozidas B (72) turi 6'-O-kofeoilo grupę, tokią pačią kaip izoakteozidas, jo intensyvumas sumažėjo dėl jo 2'-acetilo grupės. Echinakozido(38) ir cistanozido B, turinčio 6'-O- -D-gliukopiranozilo fragmentų grupes, intensyvumas padidėjo, tačiau tubulozido A (55) intensyvumas sumažėjo ir dėl jo 2'-acetilo grupės.

Mūsų tyrimų grupė taip pat ištyrė akteozido ir izoakteozido terminį stabilumą ir nustatė, kad akteozidas buvo nestabilus vandenyje, metanolyje ir geltonojo ryžių vyno tirpale ir gali būti paverstas izoakteozidu iš dalies kaitinant. Tačiau izoakteozido termostabilumas buvo geresnis, ypač geltonojo ryžių vyno tirpale. 10 paveiksle parodyti galimi PhG pokyčiai CD apdorojimo metu:

Metabolitų identifikavimas žiurkėse Remiantis didelės skiriamosios gebos masės spektrometrijos duomenimis, buvo išanalizuota ir palyginta tiksli metabolitų ir proto molekulių junginių molekulinė masė ir elementų sudėtis. Kadangi tos pačios rūšies junginiai TCM parodė metabolinių modifikacijų panašumą, fitocheminių sudedamųjų dalių koreliacijos in vitro gali apimti ir jų metabolitus in vivo . Tuo tarpu, remiantis įprastais biotransformacijos būdais, buvo padaryta išvada apie pagrįstą molekulinės masės pokytį. Galiausiai, metabolitai buvo nustatyti analizuojant metabolitų MSE masės spektrus ir proto junginių fragmentacijos kelią masių spektre [21, 22]. Palyginti su tuščiuoju mėginiu, jo komponentai buvo identifikuoti in vivo, remiantis chromatogramos-masių spektro pateikta informacija, metabolinės reakcijos galimybe, junginio struktūros ypatybėmis ir jo masių spektro suskaidymo taisykle. Žr. 3 lentelę.

Su feniletanolio glikozidais susijusių metabolitų identifikavimas

Apdorojimui buvo naudojama UNIFI platforma. 11 paveiksle parodytas šlapimo, išmatų ir plazmos TIC chromatografas, skirtas CD ir jo perdirbtiems produktams. Palyginti su tuščiaisiais mėginiais, žiurkėms iš viso buvo nustatyti 54 metabolitai, įskaitant 10 prototipų komponentų ir 44 metabolitus, iš kurių 24, 49 ir ​​6 buvo atitinkamai išmatose, šlapime ir plazmoje.

Remiantis tikslia mase, suskaidymo kaskada ir numatomais neutraliais biotransformacijos nuostoliais, iš viso buvo preliminariai įvertinti 35 su feniletanoidiniais glikozidais susiję metabolitai. Susiję feniletanoidinių glikozidų metabolitai turi panašius masių spektro fragmentacijos modelius, kaip tipiškas dekafeoilo fragmentas m/z 461,1605, vėliau toliau hidrolizuojami glikozidinėmis ir esteriinėmis jungtimis in vivo ir metabolizuojami į hidroksitirozolį (HT) (m/). z153,0504, C.HO.4,73 min.) ir kavos rūgštį (CA) (m/z179,0389, CH, O0,77 min.), žr. 12A pav.

M11 nurodyta [MH]~ esant m/153,0504 formule, ty, C.HO, ir identifikuojama kaip HT. M16 parodė [MH]-, esant m/z 329,0851, kuris buvo 176 Da didesnis nei HT, o tai rodo, kad tai gali būti HT gliukuronizuotas metabolitas. M26 [MH]-m/z buvo 343,1037, 14 Da didesnis nei HT-gliukuronido. Todėl M26 buvo identifikuotas kaip HT-metilintas gliukuronidas. M17 buvo identifikuotas kaip HT-sulfatas, remiantis jo [MH]-m/z 233,0112,80 Da virš HT, kuris gali būti toliau metilintas, tada buvo gautas M22, kurio m/z buvo 247,0278, o tai rodo, kad tai buvo HT- metilintas sulfatuotas metabolitas. M7 (m/167,0335) ir M5 (m/z 167,0762) buvo atitinkamai laikomi oksidacijos produktais ir metilintu HT (12B pav.).

M1 nurodė [MH]- esant m/z 179,0389, išaiškinta molekulinė formulė buvo CH-O ir identifikuojama kaip kavos rūgštis (CA). M25 atskleidė [MH]- esant m/ 355,0704, kurie buvo 176 Da didesni nei CA. kad tai gali būti gliukuronizuotas CA metabolitas. M27 m/z buvo 258,994, kuris buvo 80 Da didesnis nei CA, todėl išsiaiškinome jį kaip CA sulfatą ir jis galėjo gaminti M35 (m/z 273,0064). Kadangi M4 suteikia [MH]7, kai m/z yra 193,0524,14 Da didesnis nei CA, jis buvo identifikuotas kaip CA metilintas metabolitas. M39 buvo CA dehidroksilinimo metabolitas, kurio m/z 163,04, ir jis galėjo būti sulfatuotas į M32 (m/z 242,9951).

M33 (m/z 181.0491, C.HO, 9,06 min.) buvo CA redukcijos produktas, tai yra 3,4-dihidroksibenzenpropiono rūgštis, kurią buvo galima metilinti į M19 (m /z 195,0623, C10H12O4, 0,93 min.). M33 būtų galima dehidratuoti į M43, tai yra 3-HPP (m/z 165,0558, C9H10O3, 11,29 min.) ir M31 (m/z 341,0942, C15H17O9, 8,90 min.) ir M29 (m/z, C,9,0,0,25,25, 25,05, 10,05, 1000 min. 8,52 min.) buvo gliukuronizuoti ir sulfatuoti produktai (12C pav.).

Su feniletanoidiniais glikozidais susijusių metabolitų pagrindinės metabolinės kaskados buvo II fazės metabolinės reakcijos, ty gliukuronizacija, metilinimas ir sulfatacija. Siūlomos feniletanoidų metabolinės kaskados pavaizduotos 13 pav.

Su iridoidais susijusių metabolitų identifikavimas

Analizuojant elementinę metabolitų sudėtį, MSE fragmentaciją ir susijusią literatūrą, iš viso buvo preliminariai įvertinta 19 su iridoidais susijusių metabolitų. Iridoidiniai glikozidai buvo hidrolizuoti glikozidinėmis jungtimis, kad susidarytų atitinkami aglikonai. M/z 185,117 buvo M8, 162 Da mažiau nei ajugolio, kuris buvo gautas praradus gliukozės likutį.

M40 (m/z 199,0641, Rt 10,91 min.) buvo deglikozilintas katalpolio produktas. M45 m/z 169,0487, Rt 12,15 min) buvo mažesnis nei 30 Da katalpolio deglikozilinto metabolito ir buvo nustatytas kaip CH, O metabolito molekulės pašalinimas. M34 (m/z 151,0352, Rt 9,08 min.), toliau buvo prarastas H, O metabolitas.

M44 (m/z 211,0665, Rt 11,31 min.) buvo deglikozilintas genipozido metabolitas, o M37 (m/z 197,0833, Rt 15,03 min.) buvo 8-epideoksilogano rūgšties deglikozilinimas. Iridoidų metabolinės reakcijos gali būti atskleistos kaip deglikozilinimo I fazės metabolizmas (12D pav.).

CD ir jo perdirbtų produktų metabolizmo profiliavimo palyginimas plazmoje, šlapime ir išmatose

Palyginti 2 prototipai plazmoje, 7 šlapime ir 3 išmatose. 7 prototipai buvo absorbuoti CD, 7 prototipai absorbuoti CD-NP ir 8 prototipai CD-HP. M21 buvo aptiktas tik CD-NP išmatų grupėje, o M38 ir M51 buvo aptiktos tik CD-HP šlapimo grupėse. Lyginant su metabolitais, identiški metabolitai plazmoje, šlapime ir išmatose buvo atitinkamai 4, 42 ir 21. CD grupėje buvo absorbuoti 34 metabolitai, 39 CD-NP ir 40 CD-HP grupėje. M5, M7, M40 ir M52 buvo aptikti tik CD-NP grupėse, o M24, M4l ir M48 buvo tik aptikti CD-HP grupėse.

Įvairiuose perdirbtuose CD produktuose buvo pastebėti aktyvių junginių absorbcijos ir metabolizmo pokyčiai. Iš 14 pav. mes nustatėme, kad HT-sulfato konjugacijos (M17) intensyvumas buvo didžiausias šlapime, po to seka 3-HPP sulfato konjugacija (M29), metilinto HT sulfato konjugacija (M22), dehidroksilinto CA sulfato konjugacija (M32) ir 3,4-dihidroksibenzeno propiono rūgšties sulfato konjugacija (M19). Metabolizmo produktų kiekis perdirbtoje grupėje buvo didesnis nei CD grupėje, ypač M22, M29, M27, M16, M19, M1, M2. Jų pirmtakas 6'-O-kofeoilo grupė 8-O- -D-gliukopiranozilo dalyje, junginiai, tokie kaip hidroksitirozolis, turi priešnavikinių, priešuždegiminių, antibakterinių, antivirusinių ir priešgrybelinių savybių [ 23]. Kofeino rūgštis turi priešuždegiminį, priešvėžinį ir antivirusinį poveikį [24]. Tai atitiko klinikinį CD ir jo perdirbtų produktų naudojimą.

Diskusija

CD yra TCM, o pagrindiniai jo biologiškai aktyvūs komponentai, įskaitant PhG, iridoidus, polisacharidus, buvo dokumentuoti įvairiais tyrimais. TCM klinikinėje praktikoje perdirbti CD produktai buvo plačiai naudojami, palyginti su neapdorotais. Apdorojimo metu pasikeis cheminė sudėtis, todėl gali pasikeisti gydomasis poveikis (14 pav.).

PhG yra fenolio junginių tipas, kuriam būdinga -gliukopiranozido struktūra, turinti hidroksifeniletilo fragmentą kaip aglikoną. Šiuos junginius dažnai sudaro kavos rūgštis ir ramnozė, atitinkamai prijungtos prie gliukozės liekanos per esterius arba glikozidinius ryšius. Šiame tyrime atlikta kokybinė CD, CD-NP analizė. buvo atlikti ir CD-HP, iš viso buvo nustatyti 97 junginiai, įskaitant feniletanoidinius glikozidus (PhG), iridoidus ir kt. Gauti rezultatai parodė cheminės sudėties skirtumus prieš ir po apdorojimo. PhG, turinčių 4'-O-kofeoilo grupę 8-O- -D-gliukopiranozilo dalyje, pvz., akteozido, cistanozido C, kampneozido II, osmantuso pusės, po apdorojimo sumažėjo, o PhGs. su

pvz., izoacetozido, izocistanozido, izokampneozido I, izomartynozido padidėjimas, ypač CD-NP grupėje. Taip pat padidėjo echinakozido ir cistanozido B, kurių struktūroje yra 6'-O- -D-gliukopiranozilo fragmentas, intensyvumas. PhG, turintis 2'-acetilo grupę, dažnai sumažėjo dėl hidrolizės reakcijos proceso metu, pvz., tubulozidas B, 2-acetilakteozidas.

In vivo absorbuotų metabolitų tyrimas atliktas po geriamojo CD ir jo perdirbtų produktų vartojimo. II fazės metaboliniai procesai buvo pagrindinės kaskados, o dauguma metabolitų buvo sulfatas, gliukuronidas ir metilinti konjugatai. Feniletanolio glikozidai per burną absorbuojami ir panaudojami mažai. Jie sunkiai absorbuojami į kraują ir veikia kaip pirmtakai, kurie atlieka savo vaidmenį po metabolinės aktyvacijos in vivo. Feniletanoidai, pagaminti į feniletanolaglikoną, pavyzdžiui, hidroksitirozolis (HT) ir kavos rūgštis (CA) bei jos darinys 3-hidroksifenilpropiono rūgštis (3-HPP), šie metabolitai gali būti lengviau absorbuojami į plazmą ir turi geresnis gydomasis poveikis.

CD ir jo perdirbti produktai. Didžiausias HT-sulfato konjugacijos (M17) intensyvumas šlapime, po to seka 3-HPP sulfato konjugacija (M29), metilinto HT sulfato konjugacija (M22), dehidroksilinto CA sulfato konjugacija (M32) ir 3,{{ 7}}dihidroksibenzenpropiono rūgšties sulfato konjugacija (M19). Metabolizmo produktų kiekis perdirbtoje grupėje buvo didesnis nei CD grupėje, ypač M22, M29, M27, M16, M19, M1, M2.

Paprastai komponentai, turintys didelį poveikį tiksliniams organams, gali būti veiksmingi. In vitro buvo įvertintas ir nustatytas pakankamas feniletanoidų ir jų darinių kiekis. Akteozidas yra būdingas junginys, kurio kiekis sumažėjo apdorojant ryžių vynu ir atitinkamai padidėjo izoakteozido, izocistanosido C, izokampneozido I kiekis. PhG skilimo produktai, tokie kaip CA ir HT dariniai, gali būti įvertinti biologiniuose mėginiuose, o ryžių ir vyno apdorojimas gali pagerinti metabolitų absorbciją in vivo .

Išvada

Šio tyrimo metu CD ir jo perdirbto produkto ekstraktuose buvo aptikti 97 junginiai. Kai kurie glikozidai suskaidė aukštesnėje temperatūroje, todėl buvo susintetinti kai kurie nauji izomerai ir kompleksai. In vivo tyrimas, prototipo komponentai (10) ir metabolitai (44) buvo nustatyti arba preliminariai įvertinti žiurkės plazmoje, išmatose ir šlapime. II fazės metaboliniai procesai buvo pagrindinės kaskados, dauguma metabolitų buvo susiję su echinakozidu arba akteozidu, pvz., HT, CA ir jų dariniais 3-hidroksifenilpropiono rūgštimi 3-HPP. Šie metabolitai gali būti lengviau absorbuojami į plazmą ir turi geresnį gydomąjį poveikį. Gauti rezultatai parodė, kad CD cheminė sudėtis buvo skirtinga ir turėjo įtakos junginio išsidėstymui in vitro ir in vivo.

Santrumpos

PhGs: feniletanoidiniai glikozidai; CD: Cistanche deserticola; CMM: Kinijos Materia Medica; TCM: tradicinė kinų medicina; CD-NP: Gistanche deserticola Perdirbtas garuose su ryžių vynu esant normaliam slėgiui; CD-HP: Cistanche deserticola Apdorota garinant su ryžių vynu esant aukštam slėgiui; UPLC-Q-TOF-MS: itin didelio efektyvumo skysčių chromatografija kartu su TOF-MS; PCA: pagrindinių komponentų analizė; VIP: kintama projekcijos svarba;CA: Caffeicacid; HA: hidroksitirozolis.

Padėkos

Netaikoma.

Autorių indėlis

LZ, LBN, SJ dalyvavo rengiant, rašant rankraštį. RJ, LPP padėjo atlikti eksperimentus su gyvūnais ir parengė bei užbaigė visas figūras ir lenteles. ZC, HY. ITZ padėjo suplanuoti ir atlikti šį tyrimą bei peržiūrėjo rankraštį. Visi autoriai perskaitė ir patvirtino galutinį rankraštį.

Finansavimas

Šį darbą rėmė Kinijos nacionalinis gamtos mokslų fondas (subsidijos Nr. 81874345) ir Liaoningo provincijos gamtos mokslų fondas (grantos Nr.: 2020-MS-223).

Duomenų ir medžiagų prieinamumas

Dabartinio tyrimo metu naudotus ir (arba) analizuotus duomenų rinkinius pagrįstu prašymu gali gauti atitinkamas autorius.

Deklaracijos

Etikos patvirtinimas ir sutikimas dalyvauti

Liaoningo tradicinės kinų medicinos universiteto medicinos etikos komiteto (patvirtinimo numeris: 2018YS(DW)-044-01) etinis patvirtinimas naudoti eksperimentinius gyvūnus šiame tyrime buvo gautas. Visos šio tyrimo eksperimentinės procedūros atitiko etikos standartus. Liaoningo tradicinės kinų medicinos universiteto medicinos etikos komitetas.

Sutikimas publikuoti

Netaikoma.

Konkuruojantys interesai

Autoriai pareiškia, kad neturi atskleisti interesų konfliktų.

Išsami informacija apie autorių

Liaoningo tradicinės kinų medicinos universiteto Farmacijos skyrius, Dalianas, Liaoningas, Kinija. Monos grupės vaistų tyrimų institutas, Ulan Batoras 14250, Mongolija.

Gauta: 2021 m. gegužės 31 d. Priimta: 2021 m. rugsėjo 17 d. Paskelbta internete: 2021 m. rugsėjo 28 d.

Zhe Li1, Lkhaasuren Ryenchindorj2, Bonan Liu1, Ji Shi1* , Chao Zhang1, Yue Hua1, Pengpeng Liu1, Guoshun Shan1 ir Tianzhu Jia1

Nuorodos

1. Kinijos farmakopėjos komisija. Kinijos Liaudies Respublikos farmakopėja, t. I. Pekinas: Kinijos medicinos mokslų spauda; 2020. p. 140.
2. Li Z, Lin H, Gu L, Gao J, Tzeng CM. Herba Cistanche (Rou Cong-Rong): viena geriausių tradicinės kinų medicinos farmacijos dovanų. Front Pharmacol. 2016;7:41.
3. Liu BN, Shi J, Zhang C, Li Z, Hua Y, Liu PP, Jia TZ. Įvairių Fresh Cistanche deserticola džiovinimo apdorojimo metodų įtaka sudedamųjų dalių turiniui. J Chin Med Mater. 2020;10:2414–8.
4. Liu BN, Shi J, Jia TZ, Lv TT, Li Z. Cistanches Herba aukšto slėgio garinimo proceso optimizavimas. Chin Trad Patent Med. 2019;11:2576–80.
5. Fan YN, Huang YQ, Jia TZ, Wang J, La-Sika, Shi J. Cistanches herba poveikis prieš ir po apdorojimo anti-senėjimo funkcijai ir D-galaktozės sukeltų senstančių žiurkių imuninei funkcijai. Chin Arch Trad Chin Med, 2017; 11:2882–2885.
6. Gao YJ, Jiang Y, Dai F, Han ZL, Liu HY, Bao Z, Zhang TM, Tu PF. Cistanche deserticola YMCA vidurius laisvinančių sudedamųjų dalių tyrimas. Šiuolaikinis Chin Med. 2015;17(4):307–10.
7. Liu BN, Shi J, Li Z, Zhang C, Liu P, Yao W, Jia T. Cistanche deserticola ir jos ryžių vyno garinimo produktų neuroendokrininės-imuninės funkcijos tyrimas gliukokortikoidų sukeltų žiurkių modelyje. Evid Based Complement Alternatyvus Med. 2020;22:5321976.
8. Guo Y, Wang L, Li Q, Zhao C, He P, Ma X. Inkstų gaivinančios funkcijos pagerinimas pelės modelyje, naudojant Cistanches herba, greitai išdžiovinta vidutinėje ir aukštoje temperatūroje. J Med maistas. 2019;22(12):1246–53.
9. Wang T, Zhang X, Xie W. Cistanche deserticola YC Ma, "Dykumos ženšenis": apžvalga. Am J Chin Med. 2012;40(6):1123–41.
10. Fu Z, Fan X, Wang X, Gao X. Cistanches Herba: jo chemijos, farmakologijos ir farmakokinetikos savybių apžvalga. J Etnopharmacol kol. 2018;219:233–47.
11. Lei H, Wang X, Zhang Y, Cheng T, Mi R, Xu X, Zu X, Zhang W. Herba Cistanche (Rou Cong Rong): jos fitochemijos ir farmakologijos apžvalga. Chem Pharm Bull. 2020;68(8):694–712.
12. Geng X, Tian X, Tu P, Pu X. Echinakozido neuroprotekcinis poveikis Parkinsono ligos pelių MPTP modelyje. Eur J Pharmacol. 2007;564:66–74.

13. Deng M, Zhao JY, Ju XD, Tu PF, Jiang Y, Li ZB. Apsauginis tubulozido B poveikis TNF alfa sukeltai apoptozei neuronų ląstelėse. Acta Pharmacol Sin. 2004;25(10):1276–84.
14. Nan ZD, Zhao MB, Zeng KW, Tian SH, Wang WN, Jiang Y, Tu PF. Priešuždegiminiai iridoidai iš Cistanche deserticola stiebų, auginamų Tarimo dykumoje. Chin J Nat Med. 2016;14(1):61–5.
15. Nan ZD, Zeng KW, Shi SP, Zhao MB, Jiang Y, Tu PF. Feniletanoidiniai glikozidai, turintys priešuždegiminį poveikį, iš Cistanche deserticola stiebų, auginamų Tarimo dykumoje. Fitoterapija. 2013;89:167–74.
16. Morikawa T, Pan Y, Ninomiya K, Imura K, Yuan D, Yoshikawa M, Hayakawa T, Muraoka O. Iridoidiniai ir acikliniai monoterpeno glikozidai, kankanosidai L, M, N, O ir P iš Cistanche tubulosa. Chem Pharm Bull. 2010;58(10):1403–7.
17. Li SL, Song JZ, Qiao CF ir kt. Nauja strategija, skirta greitai ištirti galimus cheminius žymenis, skirtus UHPLC-TOF-MS atskirti neapdorotą ir apdorotą Radix Rehmanniae, naudojant daugiamatę statistinę analizę. J Pharm Biomed Anal. 2010;51(4):812–23.
18. Peng F, Chen J, Wang X, Xu CQ, Liu TN, Xu R. Feniletanoidinių glikozidų lygio, antioksidacinio aktyvumo ir kitų kokybės savybių pokyčiai Cistanche deserticola griežinėliais apdorojant garais. Chem Pharm Bull. 2016;64:1024–30.
19. Ma ZG, Tan YX. Šešių feniletanoidinių glikozidų turinys keičiasi garinant vynu Desertliving Cistanche. Chin Trad Pat ent Med. 2011;33(11):1951–4.
20. Peng F, Xu R, Wang X, Xu C, Liu T, Chen J. Garinimo proceso poveikis po derliaus nuėmimo cistanche deserticola, skirto medicininiam naudojimui džiovinant saulėje. Biol Pharm Bull. 2016;39(12):2066–70.
21. Cui Q, Pan Y, Zhang W, Zhang Y, Ren S, Wang D, Wang Z, Liu X, Xiao W. Dietinio akteozido metabolitai: profiliai, izoliacija, identifikavimas ir hepatoprotekcinės galimybės. J Agric Food Chem. 2018;66(11):2660–8.
22. Cui Q, Pan Y, Bai X, Zhang W, Chen L, Liu X. Echinakozido ir akteozido metabolitų iš Cistanche tubulosa sisteminis apibūdinimas žiurkės plazmoje, tulžyje, šlapime ir išmatose, remiantis UPLC-ESI-Q-TOF -MS. Biomed Chromatogr. 2016;30(9):1406–15.
23. Bertelli M, Kiani AK, Paolacci S, Manara E, Kurti D, Dhuli K, Bushati V, Miertus J, Pangallo D, Baglivo M, Beccari T, Michelini S. Hidroksitirozolis: natūralus junginys, turintis daug žadančios farmakologinės veiklos. J Biotechnol. 2020 m.;309:29–33.
24. Touaibia M, Jean-François J, Doiron J. Cafeic Acid, universalus farmakoforas: apžvalga. Mini Rev Med Chem. 2011;11(8):695–713.

Leidėjo pastaba

„Springer Nature“ išlieka neutralus paskelbtų žemėlapių ir institucinių ryšių atžvilgiu.