Lėtinė inkstų liga padidina pelių ir žmonių smegenų kraujavimą

Kontaktas:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Wei Ling Lau1,2 & Ane CF Nunes 1 & Vitaly Vasilevko3 & David Floriolli4 & Long Lertpanit 1 & Javad Savoj 1 & Maria Bangash 1 & Zhihui Yao 1,5 & Krunal Shah6 & Sameen Naqvi 1 & Annlia Paganini-Hill6 ir Nosratola D. Vaziri 1 ir David H Cribbs3 ir Mark Fisher6,7

Gauta: 2018 m. rugpjūčio 25 d. /Peržiūrėta: 2019 m. sausio 28 d. /Priimta: 2019 m. vasario 22 d. /Paskelbta internete: 2019 m. gegužės 4 d.

# Autorius (-ai) 2019 m

Cistanchegali palengvintiinkstų liga

Abstraktus

Padidėja smegenų mikrokraujavimaslėtinisinkstasliga(CKD) ir jų buvimas padidina kognityvinio susilpnėjimo ir insulto riziką. Mes ištyrėme CKD ir smegenų mikrohemoragijų (neuropatologinio mikrokraujavimo substrato) sąveiką pelių ir ląstelių kultūros modeliuose ir ištyrėme mikrokraujavimo naštos progresavimą serijiniuose smegenų vaizduose iš žmonių. Tyrimai su pelėmis: buvo ištirti du ŠKL modeliai: adenino sukeltas tubulointersticinis nefritas ir chirurginė 5/6 nefrektomija. Ląstelių kultūros tyrimai: bEnd.3 pelių smegenų endotelio ląstelės buvo auginamos iki susiliejimo, o vieno sluoksnio vientisumas buvo išmatuotas po 5–15 procentų žmogaus ureminio serumo arba padidinus karbamido koncentraciją. Tyrimai su žmonėmis: Smegenų mikrokraujavimo progresavimas buvo įvertintas atliekant kontrolinę, prieš dializę sergančių CKD ir dializuojamų pacientų MRT. 5/6 nefrektomijos modelyje mikrohemoragijos padidėjo 2–25- kartus pelėms, sergančioms CKD, nepriklausomai nuo aukštesnio kraujospūdžio. IgG dažymas padidėjo CKD gyvūnams, o tai atitinka padidėjusį kraujo ir smegenų barjero pralaidumą. Inkubuojant bEnd.3 ląsteles su ureminiu serumu arba padidėjusiu šlapalo kiekiu, sumažėjo nuo dozės priklausomas transendotelio elektrinis atsparumas. Padidėjęs karbamidas sukėlė aktino citoskeleto pakitimus ir sumažėjusią claudino{16}} ekspresiją. Žmonėms mikrokraujavimo paplitimas buvo 50 procentų abiejose CKD grupėse, palyginti su 10 procentų atitinkamo amžiaus kontrolinėse grupėse. Daugiau pacientų, kuriems buvo atliekama dializė, po 1,5 metų stebėjimo MRT metu padidėjo mikrokraujavimas. CKD pažeidžia kraujo ir smegenų barjerą ir padidina smegenų mikrohemoragijas pelėms ir mikrokraujavimą žmonėms. Padidėjęs karbamidas keičia aktino citoskeletą ir sandarius jungties baltymus kultivuojamose endotelio ląstelėse, o tai rodo, kad šis mechanizmas paaiškina (bent iš dalies) mikrohemoragijas ir mikrokraujavimus, pastebėtus gyvūnų ir žmonių tyrimuose.

Raktiniai žodžiai Lėtinė inkstų liga. Mikrokraujavimas. Pelės modelis. Endotelio ląstelių kultūra. Smegenų MRT

palengvintilėtinisinkstasliga sucistanche

Įvadas

Vienas reikšmingiausių pastarųjų metų insulto neurologijos atradimų yra atsiradimaslėtinisinkstasligaturėti poveikį, kuris gerokai viršija tradicinius rizikos veiksnius, tokius kaip hipertenzija ir diabetas [10, 11]. Atsižvelgiant į didelį smegenų mikrokraujavimo paplitimą (apie 50 proc.) ir pažinimo sutrikimus pacientams, sergantiems pažengusia LIL [2–4, 6, 7], šis ryšys nusipelno tolesnio tyrimo.

Smegenų mikrokraujavimas yra nedideli hemosiderino ir geležies židiniai, atskleidžiami atliekant magnetinio rezonanso tomografiją (MRT), kurie, kaip manoma, atspindi pagrindinius smegenų mikrohemoragijas [12, 13] ir rodo padidėjusį insulto, tiek hemoraginio, tiek išeminio, riziką [9, 14]. Konkrečios MRT sekos (gradiento aidas ir jautrumo svertinis vaizdas) parodo šias židinio signalo praradimo sritis smegenų parenchimoje, kurių dydis yra mažesnis arba lygus 10 mm [12, 15]. Smegenų mikrokraujavimas priklauso nuo amžiaus, paplitimas artėja prie 20 procentų sulaukus 65 metų [16]. Be amžiaus, hipertenzija ir smegenų amiloidinė angiopatija yra geriausiai apibūdinami mikrokraujavimo rizikos veiksniai [13, 17]. Sergant vėlyvos LIL stadijos, mikrokraujavimas pasireiškia iki 50 procentų gyventojų [2–4].

Tuo pačiu metu pažinimo sutrikimas yra labiau paplitęs ir sunkesnis esant žemesniam lygiuiinkstasfunkcija[18], pasiekęs 30–70 procentų paplitimą tarp lėtinių dializės pacientų [6, 7]. Atliekant 338 hemodializuojamų 55 metų ir vyresnių pacientų, kurių amžius atitiko kontrolę, skerspjūvio analizę, 34 procentams dializuotų pacientų buvo sunkus pažinimo sutrikimas, palyginti su 12 procentų kontrolinių pacientų [6]. Dar 35 procentai dializės pacientų turėjo vidutinio sunkumo pažinimo sutrikimų [6].

Keletas tyrimų, kuriuose dalyvavo ne ŠKL kohortos, parodė stiprų ryšį tarp smegenų mikrokraujavimo ir susilpnėjusios pažinimo funkcijos [19–22]. Epidemiologiniai duomenys patvirtina MRT mikrokraujavimo naštą ir pažinimo sutrikimus pacientams, sergantiems galutinės stadijos inkstų liga [8, 23]. Be to, neseniai paskelbta ataskaita apie 28 lėtine dialize sergančius pacientus, kuriems buvo atliktas serijinis smegenų MRT, parodė ryšį tarp naujų mikrokraujavimo atvejų ir mažo psichikos būklės tyrimo (MMSE) balo sumažėjimo [4]. Be to, ESRD sergančių pacientų išeminių ir hemoraginių insultų dažnis yra 3-–4- kartus didesnis, palyginti su bendra populiacija [5]. Japonijos hemodializuojamų pacientų grupėje, kuriai iš pradžių nebuvo insulto, smegenų mikrokraujavimas buvo nepriklausomas intracerebrinio kraujavimo pranašas 5-metų stebėjimo laikotarpiu [9].

Pateikiame tyrimų su pelėmis ir CKD pacientais rezultatus. Mes nustatėme padidėjusį smegenų mikrohemoragiją CKD pelėms ir apibūdiname sutrikusią endotelio sandarų jungtį ir aktino citoskeleto sutrikimą kaip galimus mikrohemoragijos susidarymo mechanizmus CKD aplinkoje. Smegenų MRT retrospektyvinė analizė iš pacientų, kuriems nebuvo ŠKL, iki dializės ir lėtinės hemodializės, patvirtino ESRD kaip reikšmingą mikrokraujavimo naštos progresavimo rizikos veiksnį.

Metodai

Eksperimentai su pelėmis

Eksperimentiniai gyvūnai ir gydymo grupės

Buvo ištirti du CKD pelių modeliai. (1) Adenino tubulointersticinio nefrito modelis: C57BL/6J pelių patinams iš Jackson Laboratories (Bar Harbor, ME) 10–12 savaičių amžiaus buvo šeriami 18 dienų dieta, kurioje buvo 0,2 procento adenino, kad sukeltų lėtinę intersticinę nefropatiją. 2 savaites vėl vartojo įprastą maistą, o po to 1 savaitę vėl buvo laikomas adenino dieta, kad išlaikytų ŠKL (1a pav.). Kontrolinės pelės buvo nuolat maitinamos. (2) 5/6 nefrektomijos modelis: 10 savaičių amžiaus C57BL/6J pelių patinams Jackson Laboratories buvo atlikta dviejų etapų operacija, kurios metu buvo atlikta dalinė kairioji nefrektomija, o po savaitės – visa dešinė. Gyvūnai buvo pristatyti į laboratoriją praėjus 1 savaitei po

antra operacija. Šie du modeliai buvo naudojami hipertenzijos poveikiui nustatyti; hipertenzija yra 5/6 nefrektomijos modelio požymis, o adenino-CKD nėra hipertenzinė [24].

CKD gyvūnai buvo atsitiktinai suskirstyti į lipopolisacharidų (LPS) ar LPS injekcijas. (Atlikdami bandomuosius tyrimus nustatėme, kad reikia ilgesnės uremijos trukmės, kad būtų galima nustatyti didesnę spontaninių mikrohemoragijų naštą negydytiems LIL gyvūnams; pelėms, kurios laikosi adenino dietos tik 10 dienas po pirmųjų 18 dienų. ekspozicija turėjo 3.0 ± 0,4 mikrohemoragijos vienam cm2.)

Praėjus penkioms savaitėms po pradinės ŠKL indukcijos ir lygiaverčio amžiaus kontrolinės grupės pelėms buvo suleistos intraperitoninės (ip) LPS injekcijos (Salmonella enterica serotipas Typhimurium, L{{0}}MG, Sigma-Aldrich, St. Louis, MO ) smegenų mikrokraujavimui sukelti. LPS buvo skiriama trimis dozėmis – 1 mg/kg po 0, 6 ir 24 val. [25]. LPS gydytos pelės buvo hidratuojamos po oda fiziologinio tirpalo injekcijomis du ar tris kartus per dieną 3 dienas po gydymo LPS. Kraujospūdis (BP) buvo išmatuotas likus 2 dienoms iki LPS injekcijų naudojant uodegos manžetės pletizmografiją (CODA-S2 daugiakanalis, Kent Scientific). Visus eksperimentus patvirtino Kalifornijos universitetas, Irvino institucinis gyvūnų priežiūros ir naudojimo komitetas.

Audinių derliaus nuėmimas ir kraujo chemija

Pelės buvo eutanazuotos praėjus 1 savaitei po LPS injekcijų arba lygiaverčio amžiaus negydytiems gyvūnams nusausinant, naudojant širdies punkciją, taikant įkvepiamą izoflurano anesteziją. 26-matometro adata buvo naudojama kaip kaniulė ir įdėta į kairįjį skilvelį, o ledinis PBS tirpalas buvo naudojamas 7–8 ml/min. srauto greičiu. Po to

perfuziją 5 min., kairysis smegenų pusrutulis buvo užšaldytas Western blot. Dešinysis smegenų pusrutulis ir abu inkstai buvo fiksuoti per naktį 4% paraformaldehido tirpale, o po to prieš pjaustymą laikomi šaltame PBS. Serumas buvo padalytas į alikvotas kraujo chemijai. Kraujo karbamido azotas (BUN) buvo matuojamas naudojant BioAssay Systems (Hayward, CA) kolorimetrinį rinkinį. Kreatinino kiekis serume buvo matuojamas naudojant kapiliarinę elektroforezę O'Brien Kidney Research Core centre (UT Southwestern, Dalasas, Teksasas).

Mikrohemoragijų nustatymas

Smegenys buvo įdėtos į 1,5 procento agarozę ir supjaustytos vibratomu, kad būtų sukurtos vainikinės pjūviai (40 μm). Kas 5 pjūvis buvo renkamas dažymui Prūsijos mėlyna spalva, kad būtų galima nustatyti mikrohemoragijas [26]. Prūsijos mėlynos spalvos dažymas atliktas naudojant šviežiai paruoštą 5 procentų kalio heksacianoferato trihidratą ir 10 procentų druskos rūgštį. Po dvidešimties minučių pjūviai buvo nuplauti vandeniu ir nudažyti branduoline greitai raudona spalva, dehidratuoti ir uždengti. Mikrohemoragijos buvo nustatytos padidinus × 20, nes purpurinės ir mėlynos spalvos nuosėdos, suskaičiuotos trimis injekcijomis, buvo sušvirkštos 0, 6 ir 24 val. Po LPS injekcijų 3 dienas buvo suteikta poodinė fiziologinio tirpalo hidratacija. Uodegos kraujospūdis (BP) buvo matuojamas prieš LPS injekcijas. Pelės buvo nužudytos praėjus 1 savaitei po LPS injekcijų. b Reprezentatyvios H&E dažytos inkstų sekcijos, rodančios adenino sukeltą tubulointersticinį pažeidimą CKD pelėms (dešinysis skydelis), palyginti su normaliu CTL gyvūno inkstu (kairysis skydelis), × 20 padidinimas. Mastelio juosta=100 μm

nepriklausomi stebėtojai, o tada buvo apskaičiuotas vidurkis. Stebėtų teigiamai dažytų sekcijų vaizdai buvo užfiksuoti naudojant fotomikroskopą (Nikon Eclipse, Japonija) trims gyvūnams vienoje grupėje, kad būtų galima apskaičiuoti mikrohemoragijos plotą. Buvo nuskaityti visi skaidrių vaizdai ir buvo naudojama nemokama „ImageJ“ programinė įranga (10.2 versija) iš Nacionalinių sveikatos institutų (www.imagej.nih.gov/ij/).

apskaičiuokite bendrą smegenų paviršiaus plotą. Mikrohemoragijų skaičius buvo normalizuotas pagal bendrą smegenų paviršiaus plotą vienam gyvūnui.

Western blotavimas

Smegenų pusrutuliai baltymų analizei audinių surinkimo metu buvo užšaldyti ir homogenizuoti lediniame audinių ekstrahavimo reagente I (Thermo Fisher Scientific), papildytu proteazės inhibitorių kokteiliu (Roche Applied Science, Indianapolis, IN). Baltymų koncentracija buvo matuojama naudojant BCA baltymų tyrimo rinkinį (Thermo Fisher Scientific). SDS-PAGE gelio elektroforezė buvo atlikta su 100 ug baltymų vienam mėginiui. Baltymai buvo perkelti ant PVDF membranų ir tada užblokuoti

1 val. 5 proc. neriebiame sausame nugriebtame piene, paruoštame TBS-T buferyje (10 mM Tris-HCl, 150 mM NaCl ir 0,1 proc. Tween-20) ​​ir inkubuojamas su pirminiais antikūnais, nukreiptais į claudiną. -5 (atskiestas santykiu 1:200, Sigma-Aldrich SAB4502981), okludinas (atskiestas santykiu 1:200, Invitrogen 711500, Thermo Fisher Scientific) ir normalizuotas pagal GAPDH vidinę kontrolę (atskiestas santykiu 1:10,{19}}, Abcam, Kembridžas, MA) 5 procentų neriebiame piene TBS-T per naktį 4 laipsnių temperatūroje. Tada blotai buvo inkubuojami su atitinkamais anti-triušio arba anti-pelės antriniais antikūnais 2 valandas kambario temperatūroje. Nuplovus TBS-T, juostos buvo aptiktos naudojant liuminescencinį vaizdo analizatorių LAS-3000 (Fujifilm Life Science, Stamford, CT).

Imunohistochemija

Norint nustatyti kraujo ir smegenų barjero (BBB) ​​nutekėjimą, sekcijos buvo inkubuojamos su biotiniluotu anti-pelės IgG antriniu antikūnu 1:100 santykiu 1 valandą kambario temperatūroje (Vector Laboratories, Burlingame, CA, JAV). Po plovimo PBS, sekcijos buvo inkubuojamos 30 minučių su avidino-biotino-peroksidazės kompleksu (Vector Laboratories), praskiedus 1:200. Dažymas buvo sukurtas naudojant 3′,3′-diaminobenzidiną (DAB, Vector Laboratories) kaip chromogeną. Procentinis plotas, nudažytas IgG, buvo analizuojamas naudojant ImageJ programinę įrangą ne LPS CTL ir CKD smegenyse. Teigiamo IgG dažymo slenkstis buvo pasirinktas rankiniu būdu įvertinus kontrolinį gyvūną, ar nėra IgG dažymo, ir tada ši riba buvo vienoda visiems įtrauktiems gyvūnams [27].

Cistanche deserticola apsaugo nuo inkstų ligų

Ląstelių kultūros eksperimentai

Smegenų endotelio ląstelių kultūra ir serumo gydymas

Įamžintos pelės bEnd.3 ląstelės buvo įsigytos iš Amerikos tipo kultūrų kolekcijos (ATCC, Manassas, VA). Endotelio ląstelių fenotipas buvo patvirtintas imuniniu dažymu von Willebrand faktoriui.

Ląstelių kultūros buvo inkubuojamos pilnoje daug gliukozės turinčioje Dulbecco modifikuotoje Eagle terpėje (DMEM, ATCC 30-2002), turinčioje 25 mM gliukozės, papildytos 10 proc. galvijų vaisiaus serumu (FBS) ir 1 proc. penicilino-streptomicino. sudrėkintas inkubatorius 37 laipsnių temperatūroje 5 procentų CO2 ir 95 procentų oro atmosferoje. Visiems eksperimentams ląstelės buvo naudojamos 5 pasėjime. Ląstelės buvo pasėtos 5 × 106 tankiu ant 12-šulinėlių poliesterio Transwell intarpų (0,4 μm poros, Costar) ir susiliejimas buvo pasiektas 24–48 val. Tada auginimo terpė buvo pakeista, kad ląstelės būtų paveiktos skirtingos koncentracijos FBS, normalaus žmogaus serumo (HNS) arba ureminio serumo (CKD) iš dializuotų pacientų. TEER rodmenys buvo išmatuoti naudojant EVOM2 voltų / omų matuoklį (World Precision Instruments, Sarasota, FL) trijose vietose, kad būtų gautas vidurkis. Eksperimentai tęsėsi 21 dieną, o auginimo terpė buvo atnaujinama kas 3–4 dienas. NHS ir ureminis serumas buvo iš anksčiau sukauptų mėginių, gautų po IRB patvirtinimo ir informuoto sutikimo.

Karbamido ląstelių kultūros eksperimentai

Norint ištirti karbamido (labiausiai sulaikyto toksino sergant CKD) poveikį, bEnd.3 ląstelės buvo inkubuojamos didelės gliukozės DMEM su 10 procentų vien FBS arba terpėje, papildytoje 42 arba 72 mg/dL (70 arba 120 μm) karbamido. Sigma- Aldrichas). Šios karbamido koncentracijos apytiksliai atitinka reikšmes prieš ir po hemodializės, paprastai nustatytas NSRD sergantiems pacientams, ir yra laikomos kliniškai reikšmingomis [28]. Pasibaigus 24-h inkubaciniam laikotarpiui, buvo išmatuotas TEER, ląstelės buvo surinktos ir apdorotos Western blot analizei. Aktino citoskeleto vizualizavimui bEnd.3 ląstelės buvo auginamos ant stiklinių dengiamųjų stiklelių ir 24 valandas veikiamos aukščiau nurodytomis karbamido koncentracijomis, fiksuojamos 10 minučių atšaldytame 4 procentų formalino/PBS tirpale, o po to apdorotos imunofluorescenciniam dažymui, naudojant fluorescencinį actistain 488. faloidinas su DAPI branduolio dėme (katalogo Nr. PHDG1-A, Cytoskeleton Inc., Denveris, CO). Kiekvienai grupei buvo padarytos trys skaidrės, o vienoje skaidrėje „ImageJ“ programinėje įrangoje buvo pavaizduoti trys kadrai, kad būtų galima apskaičiuoti faloidino dažymo plotą, normalizuotą pagal DAPI sritį.

Western blotavimas

bEnd.3 ląstelės iš karbamido eksperimentų buvo susmulkintos, po to lizuojamos I audinių ekstrahavimo reagentu (Thermo Fisher Scientific), papildytu proteazės inhibitorių kokteiliu (Roche Applied Science). Baltymų koncentracija buvo matuojama naudojant BCA baltymų tyrimo rinkinį, o Western blot buvo atliktas, kaip aprašyta aukščiau, naudojant claudiną -5 (atskiestą santykiu 1:500) ir okludiną (atskiestą santykiu 1:500), normalizuotus pagal GAPDH vidinę kontrolę (atskiestą santykiu 1:20). ,000). Kiekvienam mėginiui Western blot buvo pakartotas bent tris kartus.

Žmogaus studijos

Retrospektyvi smegenų MRT diagramos apžvalga

Elektroniniai medicininiai įrašai nuo 2008 m. sausio 1 d. iki 2014 m. gruodžio 31 d. Kalifornijos universiteto Irvino medicinos centre buvo tikrinami naudojant Honest Broker sistemą ir UCReX (Kalifornijos universiteto tyrimų birža), gavus IRB patvirtinimą. Nustatyti priešdializuojami ŠKL (n =8) ir lėtinės hemodializės pacientai (n =9), kuriems buvo atlikti bent du smegenų MRT tyrimai atskirais laiko momentais (iš 10 iš pradžių nustatytų hemodializuojamų pacientų 1 buvo pašalintas iš galutinė analizė dėl trūkstamų vaizdų radiologijos PACS sistemoje). Kontrolinės grupės, kurių inkstų funkcija normali (n=10), buvo rankiniu būdu suderinta su hemodializuojamais lėtine inkstų liga sergančiais pacientais pagal lytį ir amžių ± 5 metai.

MRT apžvalga smegenų mikrokraujavimui

Mikrokraujavimus suskaičiavo gydantis neuroradiologas (DF) ir išanalizavo progresavimą laikui bėgant. Smegenų MRT su T2* svertiniu ir jautrumo svertiniu vaizdavimu (SWI) ir FLAIR (skysčiu susilpninto inversijos atkūrimo) vaizdais buvo atliktas 1,5T ir 3T MRT skaitytuvais. SWI sekų sluoksnio storis buvo 2 mm, o tarpsluoksnių intervalas buvo 0. Mikrokraujavimas buvo skaičiuojamas pagal 2-mm ašinį SWI. FLAIR buvo per

suformuotas baltosios medžiagos pažeidimams aptikti esant 3 mm pjūvio storiui, taip pat su tarpsluoksnių intervalu 0.

Statistinė analizė

Atliekant Grubbso testą (ekstremalus studentiškas nukrypimo metodas, http://graphpad.com/quick calls/grubbs1/) duomenų nukrypimų nebuvo. Skirtumai tarp pelių ir žmonių grupių buvo lyginami chi kvadrato (Fišerio tikslaus) testu kategoriniams kintamiesiems ir t-testais bei ANOVA ištisiniams kintamiesiems. Nuolatiniai duomenys pateikiami kaip vidurkis ± SEM. Pelės duomenims mes atlikome ir Kruskal – Wallis neparametrinę, ir vienpusę ANOVA su Tukey HSD testais. Dvipusė ANOVA (CKD-taip/ne ir LPS-taip/ne) buvo naudojama CKD sąveikai patikrinti. Skirtumai tarp grupių buvo laikomi reikšmingais, jei P < 0.05.="" skaičiai="" buvo="" sukurti="" naudojant="" graphpad="" prism="" 4="" programinę="" įrangą="" (graphpad="" software,="" san="" diego="">

Rezultatai

Išgyvenimas gydant LPS

CKD pelių, gydytų LPS, išgyvenamumas buvo 80 proc. Buvo tik tos pelės, kurios išgyveno 1 savaitę po gydymo LPS

įtraukta į galutines analizes. Visos kitų grupių pelės išgyveno iki eksperimento pabaigos.

CKD Žymiai padidėjęs smegenų mikrohemoragijas

Našta po LPS gydymo

Gyvūnams, kuriems buvo atlikta adenino sukelta ir 5/6 nefrektomija, nustatyta žymiai padidėjusi šlapalo azoto (BUN) kraujyje ir kreatinino koncentracija serume, palyginti su CTL gyvūnais (1 lentelė). Uodegos kraujospūdis buvo reikšmingai didesnis nefrektomijos sergančių LIL gyvūnų, palyginti su CTL ir adenino CKD gyvūnais (1 lentelė); tačiau mikrokraujavimo skaičius dviejose CKD grupėse buvo panašus. H&E dažymas patvirtino adenino sukeltą tubulointersticinį pažeidimą CKD pelių inkstuose (1b pav.).

Vidutinis smegenų mikrohemoragijos krūvis ne LPS CTL pelėms buvo 2.{1}} ± 0,5/cm2, o ne LPS LPS gyvūnams (adenino- CKD pelėms 4,5 ± 0,9 cm2;

nefrektomijos-CKD pelėms 4,2 ± 1,1 vienam cm2) (1 lentelė; 2a pav.). Ne LPS grupėse mikrohemoragijų padidėjimas buvo reikšmingas adenino-CKD, palyginti su CTL, bet ne nefrektomijos-CKD. Gydymas LPS padidino mikrohemoragijos susidarymą tokiu pat laipsniu CTL ir CKD gyvūnams