Cirkuliuojančios MiRNR 2 tipo cukriniu diabetu sergantiems pacientams, sergantiems albuminurija ir be jos Malaizijoje

AbstraktusĮvadas: Diabetinė inkstų liga(DKD) išlieka pagrindine lėtinės inkstų ligos priežastimi. Buvo pranešta apie cirkuliuojančių miRNR reguliavimo sutrikimus, o tai rodo jų patologinį vaidmenį sergant DKD. Šiuo tyrimu buvo siekiama ištirti skirtingai išreikštas miRNR 2 tipo cukriniu diabetu (T2DM) sergančių pacientų, sergančių albuminurija ir be jos, serume pasirinktoje Malaizijos populiacijoje.Metodas:Keturiasdešimt vienas T2DM pacientas, stebimas bendruomenės klinikoje, buvo suskirstytas į normalias (NA), mikro (MIC) ir makroalbuminurijos (MAC) grupes. Skirtingi miRNR lygiai 12 mėginių buvo nustatyti naudojant į kelią orientuotą (žmogaus fibrozę) miScript miRNA qPCR masyvą ir buvo patvirtinti 33 mėginiuose, naudojant miScript tinkintą qPCR masyvą (CMIHS02742) (Qiagen GmbH, Hilden, Vokietija).Rezultatai:Serumo 3 miRNR, ty miR-874-3p, miR-101-3p ir miR-145-5p miR-145-5p padidėjimo tendencijos pacientams, sergantiems MAC, palyginti su pacientais, sergančiais NA. Statistiškai reikšmingas miR- 874-3p reguliavimas (p= 0.04) ir miR-101-3p (p= 0.01) buvo pastebėtas patvirtinimo grupėje. Reikšminga neigiama koreliacija tarp apskaičiuoto glomerulų filtracijos greičio (eGFR) ir miR-874-3p (p= 0.05), miR-101-3p (p= 0.03) ir miR-145-5p (p= 0.05), taip pat teigiama koreliacija tarp miR-874-3p ir amžiaus (p= 0.03) buvo parodytos Pirsono koreliacijos koeficiento analize.Išvada:Šio tyrimo metu buvo nustatytas anksčiau žinomų miRNR, būtent miR-145-5p ir galbūt naujų, būtent miR-874-3p ir miR-101-3p, reguliavimas T2DM pacientų serume. . Tarp eGFR ir šių miRNR buvo reikšminga koreliacija. Šio tyrimo išvados suteikė vilčių teikiančių įrodymų, leidžiančių toliau tirti numanomus šių skirtingai išreikštų miRNR vaidmenisDKD.

Spustelėkite, jei norite cistanche herba inkstų ligai gydyti

Įvadas

Diabetinė inkstų liga (DKD) sudaro 39% galutinės stadijos inkstų ligos atvejų JAV [1]. Taip pat DKD ir toliau yra pagrindinė lėtinės inkstų ligos (LIL) priežastis Malaizijoje, dėl kurios 2018 m. atsirado 69 % naujų dializės pacientų [2]. Manoma, kad DKD patologiją daugiausia lemia hiperglikemija, dėl kurios suaktyvėja intraląsteliniai signalizacijos keliai ir galiausiai atsiranda inkstų fibrozė [3]. Nepaisant pažangos valdymo srityje, dabartiniai biomarkeriai ir terapija nesugeba užkirsti kelio jo progresavimui iki paskutinės inkstų ligos stadijos [3]. Todėl skubiai reikia geriau suprasti DKD tarpininkus ir mechanizmus.

Mikroribonukleino rūgštis (miRNR) yra mažų nekoduojančių RNR šeima, kuri tapo svarbia genų ekspresijos po transkripcijos reguliatoriais [4]. Buvo pastebėta nenormali miRNR ekspresija ir jų dalyvavimas DKD ląstelių mechanizme [3]. Šiuo tyrimu buvo siekiama nustatyti pasirinktų miRNR ekspresijos modelį 2 tipo cukriniu diabetu (T2DM) sergančių pacientų, sergančių albuminurija ir be jos, serume. Visame pasaulyje panašūs tyrimai buvo atlikti su įvairiomis populiacijomis, kaip buvo apžvelgta anksčiau [5–7]. Mes siekėme ištirti miRNR, kurios yra susijusios su fibrotiniais keliais T2DM pacientams, diferencinės ekspresijos modelį, kai kurie iš jų anksčiau buvo tiriami sergant DKD. Ankstesni tyrimai parodė, kad miRNR raiškos skirtumai yra etniniai [8, 9]. Todėl, be galimybės patvirtinti ankstesnes išvadas, šis tyrimas gali atskleisti naujas miRNR, galbūt unikaliai išreikštas Malaizijos populiacijoje.

Medžiagos ir metodai

Tyrimo populiacija

Šiame skerspjūvio tyrime dalyvavo 41 T2DM pacientas, kuris buvo stebimas bendruomenės klinikoje 2019 m. sausio–balandžio mėn. Šis tyrimas apėmė 2-žingsnio procedūrą: (1) miRNR 12 pacientų serume (atrankos kohorta). ) buvo profiliuoti ir (2) svarbiausios miRNR buvo patvirtintos naudojant 33 pacientų serumus (vadinamus patvirtinimo grupe). Tai apėmė 4 pacientus iš patikros grupės. Buvo gautas atskirų pacientų rašytinis sutikimas. Etinis patvirtinimas šiam tyrimui buvo gautas iš Malaizijos sveikatos ministerijos Medicininių tyrimų ir etikos komiteto (MREC). Įtraukimo kriterijai buvo T2DM pacientai ir turima klinikinė bei laboratorinė informacija. Pacientai, sergantys 1 tipo DM; ne DKD; gretutinės ligos, tokios kaip vėžys, ūminė karščiavimo liga arba neseniai užsikrėtusios infekcijos; nėštumas; ir po gimdymo buvo neįtraukti.

Iš paciento medicininių įrašų buvo paimta informacija apie: (1) demografinius duomenis, įskaitant amžių ir lytį; (2) klinikiniai duomenys, tokie kaip kraujospūdis, svoris, T2DM trukmė, gydymas ir kitos diabetinės komplikacijos; (3) laboratoriniai duomenys, įskaitant gliukozės kiekį plazmoje nevalgius, glikuotą hemoglobiną A1c (HbA1c), albumino ir kreatinino santykį ir kreatinino kiekį serume. Pacientai buvo suskirstyti į 3 grupes pagal albuminurijos lygį, normoalbuminuriją (NA), mikroalbuminuriją (MIC) ir makroalbuminuriją (MAC).

Apibrėžimas

Šiame tyrime,

NA, MIC ir MAC buvo apibrėžti kaip albumino ir kreatinino santykis<30, between 30 and 300 and >300 mg/g kreatinino, atitinkamai, bent 2 iš 3 taškinio šlapimo surinkimo [10]. Apskaičiuotas glomerulų filtracijos greitis (eGFR) buvo apskaičiuotas pagal lėtinės inkstų ligos ir epidemiologijos kreatinino lygtį.

Serumo paruošimas

Vacutainer Paimti nevalgiusio (mažiau nei 8 val.) viso kraujo mėginiai 10-mL BD ®SSTTM mėgintuvėliuose (Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ, JAV) buvo palikti kambario temperatūroje 30-min. krešėjimas prieš 10- min centrifugavimą esant 1,900 g. Viršutinė fazė buvo surinkta, filtruojama naudojant 022- μm Minisart®PES filtrą (Sartorius, Gottingen, Vokietija) ir suskirstyta į mikrocentrifugos mėgintuvėlius, kad būtų galima laikyti –80 laipsnių temperatūroje iki analizės.

Bendra miRNR

Išskyrimas Bendra miRNR buvo išskirta naudojant miRNeasy Serum/Plasma Kit (Qiagen GmbH) pagal gamintojo protokolą. Trumpai tariant, Qiazol Lis Reagent buvo pridėta prie 200 μL serumo alikvotinės dalies denatūravimui, po to miRNeasy Serum/Plasma Spike-In Control C. elegans miR-39 miRNR imitacija (Qiagen GmbH), kad būtų galima stebėti RNR atkūrimą ir atstatymą. transkripcijos efektyvumas. Fazėms atskirti buvo pridėta chloroformo, po to į viršutinę vandeninę fazę įpilta 100 % etanolio. Skalavimo etapai buvo atlikti naudojant buferį RWT, buferį RPE ir 80% etanolį. RNR buvo išplauta į RNeasy MinElute sukimosi kolonėlės membraną pridedant 14 μL vandens be RNazės. RNR kiekis ir kokybė buvo nustatyti NanoDrop 1000 spektrofotometru (Thermo Fisher Scientific, Inc., Vilmingtonas, DE, JAV), prieš laikant –80 laipsnių temperatūroje iki panaudojimo. Atvirkštinė miRNR transkripcija (RT) į cDNR ir išankstinis amplifikavimas buvo atliktas naudojant miScript RTII rinkinį (Qiagen GmbH) ir miScript PreAMP PCR rinkinį (Qiagen GmbH), atitinkamai pagal gamintojo protokolą, naudojant 6 μL šabloninės RNR ir 5 μL praskiestos. cDNR, atitinkamai

Kiekybinė polimerazės grandininės reakcijos realiuoju laiku analizė

Atrankos grupės serume cirkuliuojančios miRNR buvo identifikuotos pagal į kelią orientuotą (žmogaus fibrozę) miScript miRNA qPCR masyvą (Qiagen GmbH), o pasirinktos miRNR vėliau buvo patvirtintos patvirtinimo grupėje naudojant tinkintą miScript miRNA qPCR masyvą (CMIHS02742) ( Qiagen GmbH) pagal gamintojo instrukcijas. Kiekvienoje reakcijoje buvo cDNR šablonas, 2x QuantiTect SYBR Green PCR Master Mix, 10x miScript Universal Primer, 10x miScript Primer Assay ir vanduo be RNazės ir praskiesta šabloninė cDNR, kad bendras tūris būtų 25 μL. Kiekybinė realaus laiko PGR buvo atlikta naudojant Eppendorf Mastercycler ep realplex 4, kuris buvo užprogramuotas taip: 15 min 95 laipsnių kampu, 15 s 94 laipsnių kampu, 30 s 55 laipsnių kampu ir 30 s 70 laipsnių kampu su 40 ciklų.

Santykinis miRNR kiekybinis nustatymas

Realaus laiko PGR duomenų analizė buvo atlikta naudojant Qiagen Gene Globe Data Analysis Center programinę įrangą (https://geneglobe.qiagen. com/analyze/). Santykinė ekspresija (RE) buvo gauta taikant 2−∆Ct metodą, kai kiekvienos miRNR ekspresija buvo normalizuota pagal namų tvarkymo geno SNORD95 arba Global Ct Mean ekspresiją. Sulenkimo pokytis buvo apskaičiuotas pagal normalizuotą miRNR ekspresiją kiekvienoje grupėje (MIC arba MAC), padalijus iš normalizuotos miRNR ekspresijos kontrolinėje grupėje (NA). p reikšmės buvo apskaičiuotos remiantis nepriklausomų mėginių t-testu, skirtu pasikartojančių RE (2−∆Ct) reikšmių kiekvienam genui kontrolinėje ir bandomojoje grupėje. Tolesnis qPCR duomenų analizės patikrinimas buvo atliktas rankiniu būdu naudojant Microsoft Excel ir IBM SPSS (socialinių mokslų statistinis paketas; IBM Corp, Ar monk, NY, JAV) 25 leidimą, skirtą Microsoft Windows programinei įrangai.

MiRNR pasirinkimas atrankos kohortoje patvirtinimui

Initially, the relative quantification of miRNAs in the screening cohort was based on the global Ct mean normalization method, and Ct >30 buvo laikoma neigiama išraiška, kaip rekomendavo Qiagen GeneGlobe duomenų analizės centras (https://geneglobe.qiagen. com/analyze/). 1 papildomoje internetinėje lentelėje (visą internetinę tiekimo medžiagą žr. www.karger.com/doi/10.1159/000518866) parodytas 84 miRNR RE atrankos grupėje, normalizuotas pagal pasaulinį Ct vidurkį. Patvirtinimui buvo pasirinktos MiRNR su reikšmingais ±2.{7}}kartų pokyčiais ir geros kokybės, kaip apibrėžta programinėje įrangoje. Be to, buvo pasirinktos kitos miRNR, atsižvelgiant į jų p reikšmių reitingą ir jų dalyvavimą ankstesniuose DKD ir su DKD susijusių takų tyrimuose, kai buvo pasirinktos miRNR, turinčios didžiausią numanomų pasiuntinio RNR taikinių skaičių. Papildomoje 2 lentelėje pateikiami papildomi kriterijai, naudojami atrenkant miRNR patvirtinimui. Atliekant patvirtinimo analizę, miRNR ekspresija buvo normalizuota iki SNORD95, nes visuotinis Ct vidurkio metodas nebuvo tinkamas, o Ct > 35 buvo laikomas neigiama išraiška. Norėdami standartizuoti, mes iš naujo išanalizavome pasirinktos miRNR RE atrankos grupėje, remdamiesi SNORD95 normalizavimu, ir tai buvo naudojama tolesnei analizei, palyginti su patvirtinimo grupe.

Statistinė analizė

Normality check of continuous variables was done using both statistical tests (Shapiro-Wilk, Kolmogrov-Smimov, skewness, and kurtosis) and visual inspection of plots (histogram, normal Q-Q, and detrended normal Q-Q). Continuous data were presented as either mean ± standard deviation or median (interquartile range). A comparison of 2 independent groups was done using an independent samples t-test (Tables 2–4). Comparison of >2 nepriklausomos grupės buvo sudarytos naudojant nepriklausomų mėginių Kruskal-Wallis testą (1 lentelė). Kategoriniai kintamieji buvo lyginami naudojant χ2 nenumatytų atvejų testą arba Fišerio tikslų testą (1 lentelė). Koreliacija tarp pasirinktų miRNA RE ir nuolatinių kintamųjų (demografinių ir klinikinių duomenų) buvo atlikta naudojant Pearsono koreliacijos koeficientą. Daugkartinis regresijos testas buvo naudojamas linijiniam ryšiui tarp pasirinkto miRNA RE ir reikšmingų prognozių analizuoti. Statistiniai skaičiavimai buvo atlikti naudojant IBM SPSS (Statistical Package for the Social Science; IBM Corp) 25 laidą, skirtą Microsoft Windows, ir statistinės programinės įrangos paketą Prism 8 (GraphPad, San Diego, CA, JAV). Statistinis reikšmingumas buvo apibrėžtas kaip p < 0.05.

„Wecistanche“ – didžiausio cistansų eksportuotojo Kinijoje – pagalbinė tarnyba:

El. paštas:wallence.suen@wecistanche.com

WhatsApp / Tel.:+86 15292862950

Įsigykite daugiau specifikacijų:

https://www.xjcistanche.com/cistanche-shop

GAUKITE NATŪRALIŲ EKOLOGIŠKŲ CISTANČŲ EKSTRAKTO SU 25% ECHINAKOZIDU IR 9% AKTEOZIDU NAUDOJANT INKŠTŲ INFEKCIJĄ