Cistanche gali apsaugoti nuo inkstų išemijos ir reperfuzijos pažeidimo

Kontaktai: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 El. paštas:audrey.hu@wecistanche.com

Jan H. Lindeman1, Leonie G. Wijermars1, Sarantos Kostidis2, Olegas A. Mayboroda2, Amy C. Harms3 ir kt.

Atidėto transplantato funkcija yraišemijos reperfuzijos pažeidimo pasireiškimasinkstų transplantacijos kontekste. Nors šimtai intervencijųsėkmingai sumažinti išemijos reperfuzijos pažeidimąeksperimentiniuose modeliuose visos klinikinės intervencijos buvo nesėkmingos. Šiame tiriamajame klinikiniame vertinime buvo ištirtos galimos klinikinės išemijos reperfuzijos pažeidimo metabolinės priežastys, sujungus 18 prieš ir po reperfuzijos audinių biopsijų su 36 nuosekliais arterioveninio kraujo mėginių ėmimais per transplantatą trijose tyrimų grupėse. Šios grupės apėmė gyvus ir mirusius donorų transplantatus su uždelsta transplantato funkcija ir be jos. Grupės paskirstymas buvo pagrįstas klinikiniais rezultatais. Stebuklingo kampo BMR buvo naudojamas audinių analizei, o masės spektrometrija pagrįstos platformos buvo naudojamos plazmos analizei. Visiinkstusveikė vienerius metus. Sujungus metabolominius duomenis, buvo nustatytas diskriminacinis profilis, kad būtų galima atpažinti būsimą uždelstą transplantato funkciją. Šiam profiliui buvo būdingas ATP/GTP katabolizmas po reperfuzijos (žymiai sutrikęs fosfokreatino atsigavimas ir reikšminga nuolatinė (hipo)ksantino gamyba) ir reikšmingas nuolatinis audinių pažeidimas. Nepavyko atkurti didelės energijos fosfato, nepaisant aktyvuotos glikolizės, riebalų rūgščių oksidacijos, glutaminolizės ir autofagijos, ir tai buvo susiję su oksoglutarato dehidrogenazės komplekso lygio defektu Krebso cikle. Klinikinė uždelsta transplantato funkcija dėl išemijos reperfuzijos pažeidimo, susijusio su metaboliniu kolapsu po reperfuzijos. Taigi pastangos numalšinti uždelstą transplantato funkciją dėl išemijos reperfuzijos pažeidimo turėtų būti sutelktos į metabolinės kompetencijos išsaugojimą, išsaugant Krebso ciklo vientisumą ir (arba) įdarbinant metabolinius gelbėjimo būdus. Kidney International (2020) 98, 1476–1488; https://doi.org/10.1016/ j.kint.2020.07.026

Raktažodžiai: ATP; uždelsta transplantato funkcija; glikolizė; išemijos reperfuzijos pažeidimas; metabolizmas; oksidacinis fosforilinimas

cistanche poveikis: užkirsti keliąišemijos-reperfuzijos pažeidimas

išemijos reperfuzijos pažeidimas (IRI)yra padidėjusio audinių pažeidimo reiškinys po anksčiau išeminio audinio reperfuzijos.1,2 Jis yra pagrindinis organų pažeidimo po miokardo ar smegenų infarkto3 ir transplantato pažeidimo po organų transplantacijos veiksnys.4 Nors ikiklinikiniuose modeliuose IRI numalšinama daugybė intervencijų, klinikinė sėkmė išlieka. 3,4 Taigi atsiranda transliacijos atotrūkis tarp ikiklinikinių modelių ir klinikinio konteksto.

Uždelsta transplantato funkcija (DGF) yra IRI pasireiškimas sergantinkstastransplantacija.5 DGF apibrėžiamas kaip dializės poreikis pirmą savaitę ar savaites po transplantacijos.6 Nors DGF yra labai retas gyvo donoro transplantacijos procedūrų kontekste, jis paveikia iki 90 procentų mirusių donorų transplantacijos.6 Ankstesnis darbas parodė ryšį tarp atsitiktinės DGF ir normoksinės glikolizės po reperfuzijos.7 Šis stebėjimas reiškia, kad DGF yra susijęs su transplantato energijos homeostazės defektu, atsiradusiu dėl mitochondrijų disfunkcijos reperfuzijos fazėje.7 Tuo remdamiesi iškėlėme hipotezę, kad klinikinis DGF apima ir gali būti nulemtas medžiagų apykaitos sutrikimo (ar defektų). Šio tyrimo tikslas buvo atlikti nuodugnią metabolinių reakcijų įišemija-reperfuzijasu IRI (DGF) ir be jo. Šis tiriamasis medžiagų apykaitos vertinimas yra pagrįstas integruotu, laiku išspręstu metodu, kuris apėmė nuoseklų arterioveninės koncentracijos (AV) skirtumų, palyginti su reperfuzuotų transplantatų, vertinimą ir lygiagretų transplantato (audinių) biopsijų profiliavimą. Buvo įtrauktos trys tyrimo grupės: skiepai iš mirusių donorų transplantatų su vėlesniu IRI ir be jo ir gyvų donorų transplantatai. Mirusių donorų transplantatų (atitinkamai þDGF ir –DGF) paskirstymas buvo atliktas retrospektyviai, remiantis jų klinikiniais rezultatais. Gyvų donorų transplantatai buvo įtraukti kaip nuoroda, nes šie transplantatai yra susiję su momentiniu funkciniu atsigavimu po reperfuzijos. Siekiant aprėpti pagrindinius metabolinės homeostazės aspektus, šiame tyrime dėmesys buvo sutelktas į šias bendrąsias medžiagų apykaitos grupes: nukleotidų trifosfatų metabolizmą, riebalų rūgščių (b) oksidaciją, glikolizę / glutaminolizę, autofagiją, Krebso ciklą (defektus) ir ląstelių pažeidimus. Duomenys pateikiami atitinkamai.

(Susirašinėjimas: Jan H. Lindeman, Leideno universiteto medicinos centro Chirurgijos skyrius, PO Box 9600, 2300 RC Leiden, Nyderlandai. El. paštas: Lindeman@lumc.nl Gauta 2020 m. sausio 20 d.; peržiūrėta 2020 m. birželio 8 d.; priimta liepos 2 d. 2020 m.; paskelbta internete 2020 m. rugpjūčio 8 d.)

cistanche poveikis: užkirsti keliąišemijos-reperfuzijos pažeidimas

REZULTATAI

Tyrimo imtyje buvo 53 pacientai. Suporuotos audinių biopsijos buvo paimtos iš 18 pacientų, o nuoseklus AV mėginių ėmimas atliktas 36 pacientams. Vienam pacientui buvo paimtos abi biopsijos ir AV mėginiai. 3 tyrimo grupių klinikinė informacija parodyta papildomoje lentelėje S1A (audinių biopsijos) ir S1B (AV mėginių ėmimas). Visi DGF atvejai prireikė kelių dializių per mažiausiai 7 dienas ir visi parodė tinkamą funkcinį atsigavimą. Nė vienam iš mirusių donorų, neturinčių DGF, po transplantacijos dializės nereikėjo. Vienerių metų transplantato išgyvenamumas buvo 100 procentų.

Pirmiausia ištyrėme galimus metabolinių parašų skirtumus 3 donorų grupėse (gyvų [referencinių] donorų transplantatų, –DGF mirusių donorų transplantatų ir þDGF [IRI] mirusių donorų transplantatų), nustatydami plazmos metabolomą (AV skirtumus) { {1}} minučių po reperfuzijos (1a pav.) iraudinių metabolizmas(audinių biopsijos) 40-min. po reperfuzijos (1b pav.). Šie laiko taškai buvo parinkti siekiant išvengti trukdžių, susijusių su metabolitų, susikaupusių išemijos ar šaldymo metu, arba kurie buvo konservavimo skysčio sudedamosios dalys (pvz., histidino išplovimas iš gyvų donorų transplantatų; papildomas S1 paveikslas rodo selektyvų H [histidino) naudojimą, išplovimo trukdžius. TK konservavimo skystis šiuose transplantatuose).7 Šių laiko taškų rezultatai (z balai) yra apibendrinti šilumos žemėlapiuose 1a (AV skirtumai) ir 1b (audiniai). Duomenų grupavimas atliktas pagal 6 grupes, apimančias visus metabolinius duomenis: (i) nukleozidų trifosfatų katabolizmas, (ii) b-oksidacija, (iii) glikolizė / glutaminolizė, (iv) autofagija, (v) Krebso ciklo defektai, ir (vi) ląstelių pažeidimas.

AV skirtumų šilumos žemėlapiai rodo lygiagrečius metabolinius parašus gyvam donorui ir –DGF transplantatams ir aiškiai skiriamąjį þDGF transplantatų parašą (1a pav.). Panašus, nors ir ne toks ryškus, buvo pastebėtas audinių metabolitų modelis (1b pav.). Išskirtinis –DGF ir þDGF transplantatų žemėlapis (be gyvo donoro transplantato) padarė panašias išvadas (neparodyta), o tai rodo, kad gyvo donoro (referencinių) duomenų įtraukimas į analizę netrukdė analizės išvadoms. Visi duomenys pateikia bendrą metabolinį inkstų IRI požymį.

Aiškumo sumetimais atskirų metabolitų duomenys pateikiami pagal 6 medžiagų apykaitos grupes. Kad būtų išvengta trikdžių, atsirandančių dėl pirminio metabolitų, kurie susikaupė laikant šaltai, išplovimo per pirmąsias reperfuzijos minutes, grynojo išsiskyrimo ar įsisavinimo po perfuzijos apskaičiavimai yra pagrįsti AV skirtumų integravimu 10-į {{3 }}minučių laiko intervalai po reperfuzijos (plotas tarp kreivių).

Pirmoji metabolitų grupė („nukleozidų trifosfatų katabolizmas“) rodonuolatinis po reperfuzijosmedžiagų apykaitos nekompetencija ("maitinimo išjungimas") transplantatuose su vėlesniu DGF (þDGF). Ši išvada pagrįsta sutrikusiu didelės energijos fosfatinio buferio fosfokreatino atsigavimu po reperfuzijos þDGF transplantatuose (P < 0.001;="" 2a="" pav.)="" ir="" nuolatiniu="" postu.="" -reperfuzinis="" adenozino="" trifosfato/guanozintrifosfato="" (atp/gtp)="" katabolizmas.="" pastarasis="" atsispindi="" nuolatiniame="" hipoksantino="" ir="" ksantino="" išsiskyrime="" (av="" skirtumai)="" (2b="" ir="" c="" paveikslai,="" p="">< 0,0001="" ir="" 0,02="" atitinkamai),="" galutinių="" atp="" ir="" gtp="" skilimo="" produktų="" iš="" šių="" transplantatų.="" prieš="" reperfuziją="" atliktų="" audinių="" biopsijų="" duomenys="" parodė="" laipsnišką="" inozino="" ir="" hipoksantino="" kaupimosi="" laipsnį="" išeminio="" saugojimo="" laikotarpio="" pabaigoje,="" o="" mažiausias="" kiekis="" gyvuose="" ir="" didžiausias="" mirusių="" donorų="" transplantatuose="" (2d="" ir="" e="" paveikslai).="" po="" reperfuzijos="" (t="" ¼="" 40="" min.)="" hipoksantino="" ir="" inozino="" audinių="" kiekis="" buvo="" panašus="" ir="" mažas="" visose="" 3="" donorų="" grupėse="" (2d="" ir="" e="">

ATP katabolizmas po reperfuzijos þDGF transplantatuose įvyko nepaisant akivaizdaus riebalų rūgščių b oksidacijos atstatymo po reperfuzijos (papildomas S2 paveikslas), aktyvuotos glikolizės / glutaminolizės (3 pav.) ir autofagijos (4 pav.). Visi 3 transplantato tipai parodė vienodą audinių b-hidroksibutirato kiekio atkūrimą (papildomas S2A paveikslas) ir selektyvų vidutinės grandinės riebalų rūgščių (C8–C12) klirensą (susavinimą) iš kraujotakos (papildomi S1 ir S2B – E paveikslai), o tai rodo vienodą. b-oksidacijos atkūrimas. Tačiau acetilkarnitino kaupimasis audiniuose –DGF ir þDGF mirusių donorų transplantatuose (papildomas S2F paveikslas) ir acetilkarnitino išplovimas (AV skirtumai) iš þDGF transplantatų (papildomas S2G paveikslas, P < 0.03).="" metu="" susidariusių="" acetilo="" grupių="" šalinimo="" laipsniais="">

Cistanche žolė

Glikolizės / glutaminolizės tinklų kartografavimas (3 pav.) parodė vienodą gliukozės kiekį audiniuose (4a pav.) ir patvirtino nuolatinę poreperfuzijos normoksinę glikolizę kaip išskirtinę þDGF donorų transplantatų savybę (ty nuolatinį laktato ir piruvato išsiskyrimą (P3b ir c pav.)<0.0001 and=""><0.04, respectively)="" and="" release="" of="" the="" transamination="" products="" alanine="" and="" aspartate="" (figure="" 3e="" and="" f,="" p="" <="" 0.02="" and="" <="" 0.0001,="" respectively).="" serine="" (figure="" 4b)="" and="" phosphoserine="" (supplementary="" figure="" 3d)="" released="" from="" þdgf="" grafts="" may="" (partially)="" reflflect="" transamination="" of="" the="" glycolysis="" intermediate="" phosphoglycerate.="" persistent="" post-reperfusion="" glutamate="" release="" (figure="" 3k,="" p="" <="" 0.002),="" selective="" release="" of="" the="" transamination="" products="" alanine="" and="" aspartate="" (figure="" 3e="" and="" f),="" and="" exhaustion="" of="" the="" tissue="" asparagine="" pool="" (figure="" 3j,="" p="" <="" 0.03)="" in="" þdgf="" grafts="" imply="" continued="" post-reperfusion="" glutaminolysis="" (alanine)="" and="" glutamine="" shuttling="" (asparagine="" aspartate)8="" in="" the="" post-reperfusion="" phase="" of="" these="" grafts.="" moreover,="" the="" exclusive="" release="" of="" serine,="" methionine,="" and="" tyrosine="" (figure="" 4a–c,="" all="" ps="" <="" 0.0005),="" along="" with="" disposal="" of="" butyryl="" carnitine="" and="" isovaleryl="" carnitine="" (figure="" 4d="" and="" e,="" p=""><0.006 and=""><0.003, respectively),="" deamination="" products="" of="" the="" branched-chain="" amino="" acids9,10="" from="" þdgf="" grafts,="" but="" not="" from="" the="" other="" graft="" types="" (figure="" 4a–e),="" implies="">po reperfuzijosautofagija šiuose transplantatuose.11.

1 pav|Sugrupuoti šilumos žemėlapiai, skirti arterijų ir venų metabolitų koncentracijos skirtumams, palyginti su donoro transplantatu 30 minučių ir audinių metabolito kiekiui 40 minučių po reperfuzijos. a ) Arterinių ir venų metabolitų koncentracijų grupinis šilumos žemėlapis t ¼ 30 minučių po reperfuzijos. Stulpeliai vaizduoja 3 donorų grupes (gyvų donorų transplantatai [referencinė grupė, n ¼ 10]; mirusių donorų transplantatai be vėliau uždelstos transplantato funkcijos [DGF {–DGF, n ¼ 10}] ir mirusių donorų transplantatai su vėlesniu DGF [þDGF, n ¼ 16]). Junginiai suskirstyti į grupes pagal 5 metabolines grupes ir kiekvienoje klasteryje suskirstyti pagal gyvų donorų grupės z balą. Žalia atspindi grynąjį transplantato įsisavinimą, o raudona – grynąjį išsiskyrimą iš transplantato. (Tęsinys)

1 paveikslas (tęsinys) (b) Sugrupuotas audinių metabolitų šilumos žemėlapis, nustatytas atliekant transplantato biopsijų, paimtų praėjus 40 minučių po reperfuzijos, HR maginio kampo branduolinio magnetinio rezonanso analizę.. Stulpeliuose pavaizduotos 3 donorų grupės (gyvų donorų grupė [referencinė grupė, n ¼ 6, mirusių donorų transplantatai be vėlesnio DGF [–DGF, n ¼ 6], ir mirusių donorų transplantatai su vėlesniu DGF [þDGF, n ¼ 6]). Raudona atspindi audinio turinį, esantį aukščiau, o žalia – žemiau 3 grupių geometrinio vidurkio.

Acetilkarnitino kaupimasis po reperfuzijos (audinyje) –DGF ir þDGF transplantatuose (2f pav.) ir pradiniame (gyvo donoro ir –DGF transplantatuose) ir tęsiamas (þDGF transplantatai) acetilkarnitino išsiskyrimas (P < 0).{10="" }}3)="" nurodo="" trumpalaikį="" (–dgf="" transplantatų)="" arba="" nuolatinį="" (þdgf="" transplantatų)="" sutrikusį="" acetilkofermento="" a="" šalinimą="" po="" reperfuzijos="" (papildomas="" 2g="" paveikslas).="" nors="" šis="" kaupimasis="" gali="" atsirasti="" dėl="" perdėtos="" glikolizės="" ir="" b-oksidacijos,="" tai="" taip="" pat="" gali="" reikšti,="" kad="" dėl="" krebso="" ciklo="" defektų="" pablogėjo="" acetilo="" šalinimas.="" þdgf="" transplantatų="" atveju="" pastarąjį="" mechanizmą="" palaiko="" selektyvus="" ir="" nuolatinis="" krebso="" ciklo="" tarpinio="" a-ketoglutarato="" (5c="" pav.,="" p="">< 0,0005)="" išsiskyrimas,="" kaip="" išskirtinė="" šių="" transplantatų="" savybė,="" ir="" sutrikęs="" audinių="" sukcinato="" atsigavimas="" þdgf="" transplantatuose.="" (5e="">

Paskutinė diskriminacinių metabolitų grupė yra susijusi su nuolatiniu ląstelių pažeidimu. Šis klasteris apimapo reperfuzijosuracilo, nustatyto ląstelių pažeidimo žymeklio12,13 (papildomas paveikslas S3A, P < 0.0001)="" ir="" aminorūgščių="" darinių,="" susijusių="" su="" plazmogenų="" (pvz.,="" fosfoetanolamino,="" etanolamino="" ir="" fosfoserino;="" papildomas="" s3bd="" paveikslas,="" p="">< 0.001;="" papildomas="" s1="" paveikslas)="" hidrolizė.="" nors="" þdgf="" grupėje="" cholino="" av="" skirtumų="" nebuvo="" (p="" ¼="" 0,60),="" šis="" stebėjimas="" prieštarauja="" grynajam="" cholino="" įsisavinimui="" gyvo="" donoro="" ir="" –dgf="" grupėse="" (atitinkamai="" p="">< 0,0001="" ir="" 0,02).="" taigi="" þdgf="" transplantatuose="" cholino="" plazmogenų="" hidrolizė="" gali="" būti="" užmaskuota="" cholino="" įsisavinimo.="" tokį="" mechanizmą="" palaiko="" selektyvus="" ir="" laipsniškas="" betaino,="" cholino14="" oksidacijos="" produkto="" þdgf="" grupėje,="" išsiskyrimas="" (papildomi="" paveikslai="" s3g,="" p=""><0,>

Ankstesni stebėjimai sieja incidentą IRI su nuolatiniupo reperfuzijosATP katabolizmas ir vykstantis ląstelių pažeidimas mitochondrijų nepakankamumo ir glikolitinių bei lipolitinių takų aktyvavimo kontekste (6 pav.). Atsižvelgiant į gyvybiškai svarbų ATP vaidmenį ląstelių homeostazėje ir išgyvenime, buvo nuspręsta, kad būtų naudinga įdarbinti pagalbinius ATP regeneracinius kelius (ty nepriklausomus nuo mitochondrijų kvėpavimo). Šiame kontekste mes laikėme inoziną, nukleozidą, galintį generuoti ATP netradiciniais būdais. Kaip parodyta 7 paveiksle, nei prevencinis, nei gelbėjantis inozino tiekimas (koncentracijos iki 10 mMol/l) neišgelbėjo ATP išsekimo po chemiškai sukelto metabolinio paralyžiaus.

3 pav|Glikolizė po reperfuzijos ir glutaminolizė. Arterinių venų skirtumų kreivės (raudona kreivė yra arterinė, mėlyna - veninė). Audinių biopsijos (stulpelių diagramos): baltos juostos rodo biopsijas prieš reperfuziją; pilkos juostos rodo biopsijas po reperfuzijos (t ¼ 40 min. po reperfuzijos). *P < 0,05.="" a)="" gliukozės="" kiekis="" audiniuose.="" (b–i)="" glikolizės="" tarpiniai="" produktai:="" laktatas,="" piruvatas,="" alaninas,="" aspartatas="" ir="" asparaginas.="" (k,="" l).="" glutaminolizė="" yra="" tarpinis="" glutaminas="" ir="" glutamatas.="" audinių="" branduolinis="" magnetinis="" rezonansas="" (bmr;="" n="" ¼="" 6="" grupėje):="" a)="" gyvo="" donoro="" audinių="" gliukozės="" atstatymas.="" (d,="" f,="" h)="" stabilus="" laktato,="" alanino="" ir="" aspartato="" audinių="" turinys="" atspindi="" šių="" tarpinių="" produktų="" išplovimą="">

3 paveikslas (tęsinys) iš inksto. j) Neišmatuojamas audinių asparaginas þ uždelstos transplantato funkcijos (DFG) biopsijose po reperfuzijos. Arterinės-veninės (AV) koncentracijos skirtumai (n ¼ 10, 10 ir 16 atitinkamai gyvųjų, –DGF ir þDGF grupėse): (b, c) nuolatinis laktatas po reperfuzijos (P < 0.0001)="" ir="" piruvato="" (p="">< 0,04)="" išsiskyrimas="" iš="" šių="" skiepų.="" (e)="" alaninas="" (p="">< 0,02),="" (g)="" asparto="" rūgštis="" (p="">< 0,0001)="" ir="" (þk)="" glutamato="" išsiskyrimas="" (uždelsta="" transplantato="" funkcija="" (dgf="" transplantatai,="" rodantys="" normoksinę="" glikolizę,="" kai="" p="">< 0,002)="" iš="" þdgf="" transplantatų="" rodo="" vykstančią="" glutamino="" oksidaciją="" nebuvo="" pastebėta="" jokių="" reikšmingų="" av="" skirtumų="" vartojant="" glutaminą="">

cistanche poveikis: užkirsti keliąinkstų ligos

DISKUSIJA

Iš šio tyrimo, atlikto klinikinės inkstų transplantacijos kontekste, matyti, kad IRI (DGF) yra beveik momentinio ir nuolatinio oksidacinio fosforilinimo ir aktyvuotos normoksinės glikolizės, kuri negali palaikyti energijos homeostazės, po reperfuzijos nesėkmės pasekmė. Savo ruožtu didelės energijos fosfatų telkiniai palaipsniui išsenka, o ląstelių vientisumas negali būti išsaugotas, todėl audiniai nuolat pažeidžiami.

Šis klinikinis tyrimas pagrįstas medžiagų apykaitos duomenų, gautų iš audinių biopsijų, paimtų prieš pat reperfuziją ir 40 minučių po jos, integravimu ir nuosekliu AV skirtumų įvertinimu reperfuzuoto transplantato atžvilgiu. Šie AV skirtumai ne tik parodo metabolinių (netinkamų) adaptacijų tempą ir trukmę, bet ir leidžia nukreipti tendencijas, pastebėtas porinėse audinių biopsijose ir įvertinti metabolitų (pvz., laktato) klirensą arba pasisavinimą iš (pvz., terpės). -grandinės riebalų rūgštys). elgiasi panašiai kaip vidutinės grandinės riebalų rūgštys (papildomi duomenys S1) ir gali nepasikliauti konkrečiais riebalų rūgščių pernešėjais.17 Tiesą sakant, duomenų analizės procese buvo pastebėta, kad vien tik pasikliovimas audinių biopsijomis būtų užtemdęs daugumą šio tyrimo išvadų. nes dauguma susidariusių metabolitų efektyviai pašalinami į kraujotaką. Stabilios arterinio kraujo koncentracijos rodo, kad palaikoma kraujo homeostazė, todėl išsiskyrę ar absorbuoti metabolitai efektyviai pašalinami arba papildomi kitur.15,16 Stebėtas stabilus audinių turinys, tačiau aiškūs AV skirtumai ginčija audinių metabolominių vertinimų pagrįstumą. Atminkite, kad atsižvelgiant į mirusių donorų inkstus ir tyrimo laikotarpį, šlapimo išsiskyrimas nėra trukdantis veiksnys, nes visi mirusių donorų transplantatai buvo anuriniai 40- minučių matavimo intervalą.

Duomenų atvaizdavimas nustato medžiagų apykaitos pėdsaką, kuris visiškai diskriminuoja IRI. Tiksliau, transplantatų su būsimu DGF reperfuzijos fazei vienodai ir išskirtinai būdingas labai sutrikęs oksidacinis fosforilinimas (histotoksinė hipoksija)18 ir kompensacinė normoksinė glikolizė, kuri negali palaikyti ATP regeneracijos. Pastaroji išvada pagrįsta nepilnu didelės energijos fosfato buferio fosfokreatino atkūrimu ir nuolatiniu poreperfuzijos ATP/GTP katabolizmu, kurį atspindi nuolatinis (hipo)ksantino išsiskyrimas. Tiesą sakant, apytikslis adenozino nuostolių kiekis þDGF transplantatuose, pagrįstas hipoksantino išsiskyrimu (AV skirtumai) per 30 minučių po reperfuzijos (apytikslis, remiantis praneštais srauto greitis po reperfuzijos, 20 vidurkisinkstų audinysmasė,21 ir inkstų ATP kiekis22) rodo, kad transplantato ATP baseinas beveik išsekęs 30 min.po reperfuzijos. Dėl kritinio ATP telkinio išsekimo gali atsirasti katabolinis blokavimas, dėl kurio ląstelė nereaguoja į protonų varomųjų jėgų, skatinančių ATP generavimą, atkūrimą, todėl ląstelė nereaguoja į gelbėjimo strategijas.

ATP trūkumas po reperfuzijos ir histotoksinė hipoksija þDGF transplantatuose gali būti selektyvaus aminorūgščių, susijusių su fosfolipidų (plazmalogenų) hidrolize, išsiskyrimu þDGF transplantatuose. Eksperimentiniais tyrimais nustatyta, kad plazmogenų ir fosfolipidų hidrolizė yra ankstyva audinių hipoksijos ypatybė23, o plazmogenų hidrolizė buvo aprašyta išeminio inkstų pažeidimo kontekste.24 Mechaniškai šis reiškinys buvo susijęs su membranos perkėlimu ir citozolinio kalcio aktyvacija. nepriklausoma fosfolipazė A2, atsirandanti dėl hipoksijos sukelto komplekso susidarymo tarp fosfolipazės ir fosfofruktokinazės reguliavimo elemento.25,26 Atšaukus hipoksijos ar ATP gydymą, fosfolipazės-fosfofruktokinazės kompleksas atsiskiria ir fosfolipazės aktyvumas panaikinamas. Atkreipkite dėmesį, kad (fosfo) etanolamino išsiskyrimo iš gyvų donorų ir –DGF transplantatų po reperfuzijos, taip pat nuolatinis išsiskyrimas þDGF transplantatuose, dinamika gali atspindėti skirtingą metabolinio atsigavimo laipsnį ir greitį. Tačiau, nors ankstesnėse ataskaitose teigiama, kad citozolinės kalcio nepriklausomos fosfolipazės A2, 25, 26 pastebėti betaino ir (fosfo-)etanolamino AV skirtumai, reiškia išsamesnį fosfolipazių aktyvavimą, kuris taip pat apima C tipo fosfolipazes (fosfo-etanolaminą). ir D-fosfolipazės (etanolaminas/cholinas). Panašiai audinių asparagino išeikvojimas (4j pav.) ir aspartato išsiskyrimas (4g pav.) iš þDGF transplantatų gali atspindėti sumažėjusį asparagino sintazės aktyvumą dėl ATP išeikvojimo.

4 pav|Suaktyvinta autofagija po reperfuzijos D uždelstos transplantato funkcijos (DGF) transplantatuose. Arterinių ir venų skirtumų kreivės (raudona kreivė yra arterinė, mėlyna - veninė). Audinių biopsijos (stulpelių diagramos): baltos juostos rodo biopsijas prieš reperfuziją; pilkos juostos rodo biopsijas po reperfuzijos (t ¼ 40 min. po reperfuzijos). *P < 0,05.="" (a–c)="" metionino,="" serino="" ir="" tirozino="" išsiskyrimas="" po="" reperfuzijos="">

5 pav|Krebso ciklo defektas po reperfuzijos transplantatuose su būsima uždelsta transplantato funkcija (DGF). Arterinės-veninės koncentracijos (AV) skirtumų kreivės (raudona kreivė yra arterinė, mėlyna - veninė). Audinių biopsijos (stulpelių diagramos): baltos juostos rodo biopsijas prieš reperfuziją; pilkos juostos rodo biopsijas po reperfuzijos (t ¼ 40 min. po reperfuzijos). *P < {{10}}.05.="" (a–h)="" av="" skirtumai="" tarp="" krebso="" ciklo="" produktų="" (n="" ¼="" 10,="" 10="" ir="" 16="" atitinkamai="" gyvosiose,="" –dgf="" ir="" þdgf="" grupėse):="" nuolatinis="" a-ketoglutarato="" išsiskyrimas="" (iš="" þdgf="" transplantatų;="" p="">< 0,001)="" .="" (e,="" g)="" nėra="" poreperfuzijos="" audinių="" sukcinato="" atsigavimo="" þdgf="" transplantatuose="" (p=""><>

ATP katabolizmas po reperfuzijos þDGF transplantatuose įvyko nepaisant visapusiško katabolinių takų aktyvavimo: glikolizės, vidutinės grandinės riebalų rūgščių b-oksidacijos (vienodai aktyvuotų visų tipų transplantatuose), glutaminolizės (taip pat laikinai suaktyvinama po reperfuzijos gyviems transplantato donorams ir –DGF). ) ir aktyvuota autofagija. Tiesą sakant, izovalerilo ir butirilo karnitino, šakotosios grandinės aminorūgščių izoleucino ir leucino deaminacijos produktų išsiskyrimas po reperfuzijos buvo identifikuoti kaip diskriminaciniai būsimojo DGF biomarkeriai.

Nuolatinis acetilkarnitino ir piruvato išsiskyrimas iš þDGF transplantatų rodo, kad aktyvuotų katabolinių takų sukurti srautai viršijo oksidacinį pajėgumą. Ketoglutarato išsiskyrimas po reperfuzijos, grynasis jo pirmtako citrato ir izocitrato įsisavinimas iš kraujotakos ir nesėkmingas audinių sukcinato atsigavimas reiškia, kad sutrikęs oksidacinis fosforilinimas yra susijęs su oksoglutarato dehidrogenazės komplekso lygio defektu. Konkrečiai, pastebėtas metabolinis pėdsakas ir medžiagų apykaitos sutrikimų trukmė nerodo, kad Krebso ciklas27, 28 būtų nukreiptas atvirkščiai, esant nuolatiniam medžiagų apykaitos sutrikimui, o tai suteikia papildomų įrodymų, kad pastebėtas IRI mechanizmas graužikams28 nėra visiškai pritaikytas žmogui. kontekste.29.

Sumažėjusį oksoglutarato dehidrogenazės aktyvumą gali sukelti su išemija susijęs komplekso pažeidimas30, tačiau jis taip pat gali būti sutrikęs arba gali būti perdėtas.po reperfuzijosSumažėjusį oksoglutarato dehidrogenazės aktyvumą gali sukelti su išemija susijęs komplekso pažeidimas30, bet taip pat gali būti arba perdėtas jo kofaktorių acetilkofermento A, FADþ ir NADþ prieinamumas po reperfuzijos. 31 þDGF transplantatų atveju tokie trūkumai gali atsirasti dėl acetilkofermento A išplovimo po reperfuzijos ir pažeistos ląstelių redokso būsenos (redukcinis stresas su sutrikusiu NADþ prieinamumu), o tai patvirtina mažas laktato ir piruvato santykis þDGF transplantatuose. 32.

Šis metabolinis metodas neleidžia įvertinti kvėpavimo grandinės įsitraukimo. Tačiau anksčiau nustatėme su išemija reperfuzija susijusius I ir II kvėpavimo kompleksų defektus.7,29 Remiantis šio tyrimo duomenimis ir ankstesniu mitochondrijų darbu, susidaro vaizdas, kad klinikinis inkstų IRI yra pirminio (arba sukeliantis mitochondrijų Krebso ciklo redokso šaudyklės įžeidimą (-us), kuris įvyksta prieš arba per pirmąsias reperfuzijos minutes. Nesugebėjimas atstatyti ATP lygio lemia ilgalaikį ir visapusišką katabolinių kelių suaktyvėjimą, o tai tęsia energijos krizę, nes palaipsniui išeikvoja ląstelių NADþ ir FADþ baseiną (redukcinis stresas).33 Šiame specifiniame mitochondrijų kvėpavimo nepakankamumo kontekste purino inozinas gali būti naudingas. . Skirtingai nuo adenozino,34 inozinas plazmoje yra stabilus; buvo nustatytas kaip alternatyvus ATP šaltinis privalomose glikolitinėse ląstelėse (ty ląstelėse, kuriose nėra mitochondrijų), pvz., eritrocituose35 ir hipoksinėse inkstų ląstelėse36, ir po reperfuzijos išsenka. Deja, inozino papildymas neišgelbėjo ląstelių ATP išeikvojimo po priverstinio medžiagų apykaitos sustabdymo, todėl liko mažai vietos metabolinėms gelbėjimo strategijoms, skirtoms IRI numalšinti, pabrėžiant, kad IRI ribojant reikia naudoti prevencines strategijas.

Tonizuoja inkstų cistanką

Šiam tyrimui yra apribojimų. Dėl daugybės palyginimų, daugkartinių palyginimų nustatymo metu dėl atsitiktinės atsitiktinumo galimybė gauti reikšmingų išvadų yra didelė. Nors mūsų išvadas patvirtina patikimi biologiniai ryšiai, rezultatus gali supainioti su daugybe palyginimų susijusios problemos.

Kitas apribojimas yra tas, kad tyrimas pagrįstas klinikiniais mėginiais; iš esmės nebuvo įmanoma užšaldyti spaustuko, reikalingo tiesioginiam ATP ir redokso būsenos įvertinimui. Kadangi pastebėtas metabolizmas aiškiai skiriasi nuo pranešimo apie gyvūnų modelius ir atspindi sistemos gedimą, negalėjome atlikti išsamesnių gyvūnų modelių ar ex vivo sistemų, tokių kaip respirometrijos sistema, vertinimų. Šio tyrimo rezultatai yra skirtiinkstas; todėl išvados dėl kitų organų gali būti skirtingos. Santykinai aukštas donoro amžius šiame tyrime yra Nyderlandų donorų populiacijos atspindys. Svarbu tai, kad 10-metų transplantacijos rezultatai Nyderlanduose yra bent jau tokie patys kaip šalyse, kuriose donorai jaunesni, pvz., JAV.37 Kaip ir tikėtasi, dauguma þDGF atvejų buvo DCD transplantacijos. Panašiai pastebėjomemedžiagų apykaitos profiliaiDBD ir DCD skiepams; tačiau šio tiriamojo tyrimo galia akivaizdžiai per maža, kad būtų galima nustatyti subtilius šių dviejų donorų tipų skirtumus.

7 pav|Tiek prevencinis, tiek gelbėjimo gydymas inozinu neatkuria adenozino trifosfato (ATP) lygio. PK-1 inkstų ląstelių linija buvo stabiliai transfekuota ATP ir adenozino difosfato (ADP) santykio PercevalHR flfluorescenciniu biojutikliu.

Chemiškai sukeltas metabolinis paralyžius buvo sukeltas pridedant rotenono / aktinomicino / 2- deoksigliukozės, ir buvo stebimas ATP ir ADP santykis (santykinė fluorescencija). Ruda, kontrolė; juoda, medžiagų apykaitos paralyžiaus kontrolė; žalias, profilaktinis gydymas inozinu (10 mMol/l); raudona, inozino gelbėjimas t ¼ 15 minučių po metabolinio paralyžiaus sukėlimo.

Apibendrinant galima pasakyti, kad šis tyrimas rodo, kad prieš klinikinį inkstų IRI įvyksta beveik momentinis metabolinis kolapsas ir kartu su didelės energijos fosfatų krizė. Šis gilus ir nuolatinis medžiagų apykaitos trūkumas ir jo momentinis pobūdis (ir dėl to minimalus gydymo galimybių langas) trukdys bet kokiai farmacinei intervencijai, kuri priklauso nuo ATP prieinamumo. Tai gali paaiškinti prastą ikiklinikinių išvadų perkėlimą į klinikinę aplinką.2–4 Stebėtas klinikinio DGF metabolizmas smarkiai skiriasi nuo praneštų žiurkių, 28 pelių 38 ir kiaulių metabolinių atsakų, 39, 40 o tai rodo, kad oksidacinis fosforilinimas atsinaujina organizme. reperfuzijos minučių. Tai gali būti susiję su esminiais graužikų ir didesnių žinduolių mitochondrijų ar metabolinės fiziologijos skirtumais (pvz., išemijos sukeltas sukcinatas nesikaupia žmogaus donoro inkstuose).29 Šiame kontekste svarbu pažymėti, kad visi persodinti inkstai yra veikiami. įišemijos reperfuzijair kad tik pogrupis transplantatų de velops IRI (DGF). Grupės paskirstymas (þDGF arba –DGF) šiame tyrime buvo atliktas retrospektyviai, todėl išemijos reperfuzija skiriasi nuo IRI. Negalima atmesti galimybės, kad išemijos reperfuzija eksperimentiniuose modeliuose 28, 38–40 yra nepakankama, kad sukeltų IRI.

Nepaisant patirtos didelės žalos, visi þDGF transplantatai galiausiai atsigavo, o tai reiškia puikų atsigavimo potencialą, jei yra jungiamųjų intervencijų (pvz., Dializės). Pažymėtina, kad nors panašios DGF metabolomos transplantatuose, gautuose iš donorų, mirusių po smegenų mirties ar širdies mirties, reiškia vienodą mechanizmą, DGF poveikis ilgalaikiam transplantato išgyvenimui dviejų tipų donorams yra priešingas.41 Tiesą sakant, nors DGF neabejotinai įtakoja transplantatų iš donorų, mirusių po smegenų mirties, išgyvenamumą, tai neturi tokių transplantatų iš širdies donorų. Atrodo, kad šis kontrastas atspindi puikų transplantatų iš širdies mirties donorų atsigavimo potencialą.41

METODAI

Leideno universiteto medicinos centro medicinos etikos komitetas patvirtino tyrimo protokolą. Iš kiekvieno paciento buvo gautas raštiškas informuotas sutikimas. Šiame vieno centro tyrime dalyvavo 53 pacientaiinkstastransplantacija: 37 buvo atliktos mirusio donoro transplantacijos procedūros ir 16 – gyvo donoro procedūra. Remiantis klinikiniais rezultatais (DGF), mirusių donorų transplantatų recipientai buvo priskirti þDGF grupei (n ¼ 16) arba –DGF grupei (n ¼ 10). DGF buvo apibrėžiamas pagal dializės poreikį pirmą savaitę po transplantacijos.6

Tyrimas pagrįstas metabolomikos duomenų, gautų iš nuoseklaus arterioveninio (AV) kraujo mėginių ėmimo per pirmąjį reperfuzijos pusvalandį, ir iš porinių audinių biopsijų, paimtų prieš pat ir 40 minučių po jos, integravimu.

reperfuzija.

Nuoseklus AV kraujo mėginių ėmimas per transplantatą buvo atliktas 36 pacientams (papildoma lentelė S1A). Inkstų venų kraujo mėginiai buvo paimti po 30 s ir 3, 5, 10, 20 ir 30 minučių, o arterijų mėginiai - po 0, 10 ir 30 minučių po reperfuzijos.42 Suporuotas inkstų tyrimas prieš ir po reperfuzijos biopsijos buvo paimtos prieš pat ir 40 minučių po reperfuzijos iš 6 gyvų ir 12 mirusių donorų transplantatų (papildoma lentelė S1B; 1 pacientui buvo paimtos ir biopsijos, ir AV mėginiai).

Tikslinės metabolomikos analizės buvo atliekamos naudojant standartines darbo procedūras, naudojant nustatytas masės spektrometrijos pagrindu sukurtas platformas arba magiško kampo branduolinį magnetinį rezonansą (audinių biopsijas). 43 Platformų apimami metabolitai yra apibendrinti papildomoje S1 lentelėje.

Inozino potencialas gelbėti medžiagų apykaitos trūkumą metabolinio kolapso metu buvo ištirtas proksimalinėje kanalėlių ląstelių linijoje (LLC PK1), stabiliai transfekuotoje PercevalHR flfluorescenciniu ATP adenozino difosfato biojutikliu.44.

Kalbant apie statistiką, šilumos žemėlapiai buvo sudaryti remiantis kiekvienos z balaismetabolitas. Audinių metabolitų kiekio pokyčiai grupės viduje buvo ištirti Mann-Whitney testu, o skirtumai tarp grupių - Wilcoxon testu. AV skirtumai buvo įvertinti naudojant linijinį mišrų modelį. Daugkartinio testavimo korekcija nebuvo atlikta, nes visi stebėjimai buvo teorinių tinklų dalis. Išsami informacija apie pacientus ir metodus pateikiama papildomuose metoduose.

cistanche ekstraktas

ATSKLEIDIMAS

Visi autoriai nedeklaravo konkuruojančių interesų.

PADĖKA

Magnetinio rezonanso branduolį finansuoja NTNU Trondheimo, Norvegijos, medicinos fakultetas. Šį tyrimą iš dalies finansavo Olandijos inkstų fondas (Metabolic Salvage Strategies to Improve Transplant Outcome, project17O/11).

PAPILDOMA MEDŽIAGA

Papildomas failas (PDF)

Papildomi pacientai ir metodai.

S1 lentelė. Procedūrų, kurių metu buvo paimtos porinės audinių biopsijos (A) ir AV mėginiai (B), paciento ir transplantacijos charakteristikos.

S2 lentelė. AV mėginiams naudojamos platformos ir jų metabolitai.

S1 paveikslas. Visi metabolominiai duomenys.

S2 paveikslas. B-oksidacijos (vidutinės grandinės riebalų rūgščių) atkūrimas po reperfuzijos.

S3 pav. Selektyvus ir nuolatinis uracilo ir su fosfolipidu (plazmalogenu) susijusių aminorūgščių išplovimas po reperfuzijos iš transplantatų su būsimu DGF.

Duomenų priedas 1. Neapdoroti AV duomenys apie acetilkarnitiną, organines rūgštis ir aminorūgščių platformas.

2 duomenų papildymas. Neapdoroti purino ir pirimidino platformos AV duomenys.

NUORODOS

1. Gutteridge JMC, Halliwell B. Reaktyvios ligos rūšys: draugai ar priešai? In: Halliwell B, Gutteridge JMC, red. Laisvieji radikalai biologijoje ir medicinoje. Oksfordas, JK: Oxford University Press; 2015:511–638.

2. Davidsonas SM, Ferdinandy P, Andreou I ir kt. Daugiaplanės strategijos, skirtos sumažinti miokardo išemiją / reperfuzijos pažeidimą: JACC apžvalgos savaitės tema. J Am Coll Cardiol. 2019;73:89–99.

3. Lefer DJ, Bolli R. NIH konsorciumo kūrimas ikiklinikiniam CARdioprotective Therapies (CAESAR) įvertinimui: infarkto dydžio apribojimo tyrimų paradigmos pokytis. J Cardiovasc Pharmacol Ther. 2011;16:332–339.

4. Cavaillé-Coll M, Bala S, Velidedeoglu E ir kt. FDA seminaro apie išemijos reperfuzijos pažeidimą persodinant inkstus santrauka. Am J transplantacija. 2013;13:1134–1148.

5. Schröppel B, Legendre C. Uždelsta inkstų transplantato funkcija: nuo mechanizmo iki vertimo. Kidney Int. 2014 m.;86:251–258.

6. Mallon DH, Summers DM, Bradley JA ir kt. Uždelstos transplantato funkcijos nustatymas po inksto transplantacijos: geriausia yra paprasčiausia. Transplantacija. 2013;96:885–889.

7. Wijermars LG, Schaapherder AF, de Vries DK ir kt. Netinkamas metabolinis atsigavimas po reperfuzijos tiesiogiai susijęs su uždelsta transplantato funkcija. Kidney Int. 2016;90:181–191.

8. Zhang J, Fan J, Venneti S ir kt. Asparaginas atlieka svarbų vaidmenį reguliuojant ląstelių prisitaikymą prie glutamino išeikvojimo. Mol Cell. 2014;56: 205–218.

9. Holecek M. Glutamino, šakotosios grandinės aminorūgščių ir baltymų apykaitos ryšys. Mityba. 2002;18:130–133.

10. Newgard CB, An J, Bain JR ir kt. Su šakotos grandinės aminorūgštimis susijęs metabolinis požymis, kuris išskiria nutukusius ir liesus žmones ir prisideda prie atsparumo insulinui. Ląstelės metab. 2009;9:311–326.

11. Drake'as KJ, Sidorov VY, McGuinness OP ir kt. Amino rūgštys kaip metaboliniai substratai širdies išemijos metu. Exp Biol Med (Maywood). 2012; 237: 1369–1378.

12. De Jong JW, Huizer T, Janssenas M ir kt. Didelės energijos fosfatai ir jų katabolitai. In: Piper HM, Preusse CJ, red. Išemija-reperfuzija širdies chirurgijoje. Dordrechtas, Nyderlandai: Springer; 1993:295–315.

13. van Os S, de Abreu R, Hopman J ir kt. Purino ir pirimidino metabolizmas ir elektrokortikinė smegenų veikla hipoksemijos metu trumpalaikiams ėriukams. Pediatr Res. 2004;55:1018–1025.

14. Blom HJ, De Vriese AS. Kodėl sergant inkstų nepakankamumu padidėja homocisteino kiekis? Metabolinis metodas. J Lab Clin Med. 2002; 139:262–268.

15. Ivanisevic J, Elias D, Deguchi H ir kt. Arterioveninio kraujo metabolomika: audinių metabostazės rodmuo. Sci Rep. 2015;5:12757.

16. Jang C, Hui S, Zeng X ir kt. Metabolitų mainai tarp žinduolių organų, kiekybiškai įvertinti kiaulėse. Ląstelės metab. 2019;30:594–606.

17. Bremer J. Karnitinas-metabolizmas ir funkcijos. Physiol Rev. 1983;63: 1420–1466.

18. Siggaard-Andersen O, Fogh-Andersen N, Gøthgen IH, Larsen VH. Arterinio ir mišraus veninio kraujo deguonies būklė. Crit Care Med. 1995;23:1284–1293.

19. Stoica SC. Didelės energijos fosfatai ir žmogaus donoro širdis. J Širdies plaučių transplantacija. 2004;23:S244–S246.

20. Lisik W, Gontarczyk G, Kosieradzki M ir kt. Intraoperaciniai kraujo srauto matavimai organų allografuose gali numatyti pooperacinę funkciją. Transplantacijos proc. 2007;39:371–372.

21. Molina DK, DiMaio VJ. Normalus vyrų organų svoris: II dalis – smegenys, plaučiai, kepenys, blužnis ir inkstai. Am J Forensic Med Pathol. 2012; 33:368–372.

22. Hemsas, DA, Brosnan JT. Išemijos poveikis metabolitų kiekiui žiurkių kepenyse ir inkstuose in vivo. Biochem J. 1970;120:105–111.

23. De Medio GE, Goracci G, Horrocks LA ir kt. Laikinos išemijos poveikis riebalų rūgščių ir lipidų metabolizmui smilčių smegenyse. Ital J Biochem. 1980;29:412–432.

24. Rao S, Walters KB, Wilson L ir kt. Ankstyvieji lipidų pokyčiai esant ūminiam inkstų pažeidimui, naudojant SWATH lipidomiką kartu su MALDI audinių vaizdavimu. Am J Physiol Renal Physiol. 2016;310:F1136–F1147.

25. Portilla D, Shah SV, Lehman PA ir kt. Nuo citozolinio kalcio nepriklausomos plazmogeno selektyvios fosfolipazės A2 vaidmuo hipoksiniam triušio proksimalinių kanalėlių pažeidimui. J Clin Invest. 1994;93:1609–1615.

26. Hazen SL, Wolf MJ, Ford DA, Gross RW. Greitas ir grįžtamas fosfofruktokinazės susiejimas su miokardo membranomis miokardo išemijos metu. FEBS Lett. 1994;339:213–216.

27. Chinopoulos C. Kokia kryptimi pasisuka citrinų rūgšties ciklas hipoksijos metu? Kritinis a-ketoglutarato dehidrogenazės komplekso vaidmuo. J Neurosci Res. 2013;91:1030–1043.

28. Chouchani ET, Pell VR, Gaude E ir kt. Išeminis sukcinato kaupimasis kontroliuoja reperfuzijos pažeidimą per mitochondrijų ROS. Gamta. 2014;515:431–435.

29. Wijermars LG, Schaapherder AF, Kostidis S ir kt. Sukcinato kaupimasis ir išemijos-reperfuzijos pažeidimas: pelių, bet ne vyrų, inkstų išemijos-reperfuzijos tyrimas. Am J transplantacija. 2016;16:2741–2746.

30. Tretter L, Adam-Vizi V. Alfa-ketoglutarato dehidrogenazė: oksidacinio streso tikslas ir generatorius. Philos Trans R Soc Lond B Biol Sci. 2005; 360: 2335–2345.

31. Heikal AA. Intraląsteliniai kofermentai kaip natūralūs medžiagų apykaitos veiklos ir mitochondrijų anomalijų biomarkeriai. Biomark Med. 2010;4:241–263.

32. Sun F, Dai C, Xie J ir kt. Biocheminės problemos, susijusios su laisvo citozolinio NAD/NADH santykio įvertinimu. PLoS One. 2012;7:e34525.

    ---