Cistanche poveikis ATPazės pokyčiams septicemijos žiurkių kepenų mitochondrijose

Kontaktai: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 El. paštas:audrey.hu@wecistanche.com

Wang Zhiqiang Yin Gang

Santrauka: Tikslas:Norėdami ištirti kaitąKepenų mitochondrijų ATPazės aktyvumas sepsio metuir poveikisCistancheant jo.Metodai:40 SD žiurkių buvo atsitiktinai suskirstytos į fiktyvių operacijų grupes, 12-valandžių kontrolinę grupę, 12-valandžių administravimo grupę, 16-valandžių kontrolinę grupę ir 16-valandžių administravimo grupę. Thesepsismodelis buvo pakartotas aklosios žarnos perrišimu ir perforacija (C LP) ir palygintas. Grupės išgyvenamumas, vidutinis arterinis spaudimas (MAP), kepenysmitochondrijų ATPazėveiklos pokyčiai.Rezultatai:Žiurkėms pakartojus sepsio modelį,ATPazėkepenų veiklamitochondrijossumažėjo, o 24-valandžių išgyvenamumas labai sumažėjo. TheATPazėkepenų mitochondrijų aktyvumas po vartojimoCistanchebuvo žymiai pagerėjęs, palyginti su kontroline grupe (P<0.05), which="" was="" significantly="" positively="" correlated="" with="" the="" reduction="" of="" rat="" mortality.="">Išvada:Sumažėjęs mitochondrijų kiekisATPazės aktyvumas sergant sepsiu, ląstelių kalcio perteklius, edema ir nekrozė yra tiesioginės mirties priežastysseptinės žiurkės. Cistanche padidina ATPazės aktyvumąyra svarbus gydymo mechanizmassepsis.

Raktiniai žodžiai: Cistanche, cistanche sepsio mitochondrijos ATP fermentas

Sepsisyra kliniškai kritinė liga. Nors antibiotikai buvo atnaujinti per pastaruosius 30 metų, mirtingumas nuo sepsio reikšmingai nesumažėjo ir vis dar siekia 50 procentų [1]. Vakarietiškas antibakterinis „blogį šalinantis“ gydymas nepagerina prognozėssepsis.TCM patogenezėje sepsis priklauso „trūkumo teisumui ir blogiui“, gydymas turi būti pagrįstas „kūno stiprinimo“ ir „blogio pašalinimo“ principu. Tradicinė kinų medicina parodė didelį potencialą gydant sepsį.SepsisKomplikuotas daugybiniu organų nepakankamumu, yra pagrindinė didelio mirtingumo priežastis, o ląstelių struktūros pažeidimas yra mikroskopinis patologinis daugelio organų nepakankamumo pagrindas [2]. Cistanche yra tradicinė kinų medicina, skirta tonizuoti, tai parodė šiuolaikiniai farmakologiniai tyrimaiCistanchepasižymi atsparumu membranos esterio peroksidacijai ir apsaugo ląstelių funkciją [3]. Funkcijamitochondrijų energijametabolizmas yra viena iš pagrindinių ląstelių funkcijų ir jų aktyvumoATPazėyra svarbus rodiklis funkcijai įvertintimitochondrijų energijamedžiagų apykaitą. Šiame eksperimente stebėjome pokyčiusATPazėkepenų ląstelių aktyvumasseptinės žiurkėsir ryšį tarp poveikioCistancheapie tai ir žiurkių mirtingumą ir siekė sukurti teorinį pagrindą ir veiksmingą tyrimą, skirtą klinikiniam „stiprinamajam“ gydymui.sepsis.

Cistanche

1. Medžiagos ir metodai

1.1 Reagentai

Cistanchebuvo nupirktas iš Sindziango (nustatytas Trijų tarpeklių universiteto medicinos mokyklos profesoriaus Tan Defu). Buvo paimta 200 g džiovintos Cistanche ir du kartus išvirinta distiliuotame vandenyje. Filtratas išgarinamas ir sukoncentruotas iki 1 g/ml koncentracijos. Natrio pentobarbitalis (001104), Kinijos nacionalinė farmacijos grupė Shanghai ChemicalReagentasĮmonė;ATPazės reagentas(20030108), Nanjing Jiancheng bioinžinerijos tyrimų institutas.

1.2 Eksperimentinis gyvūnų modelis ir grupavimas

40 SD žiurkių patinų (pirktų iš Huazhongo mokslo ir technologijos universiteto Tongji medicinos koledžo Eksperimentinių gyvūnų centro) buvo atsitiktinai suskirstyti į 5 grupes: fiktyvių operacijų grupę (n=8), 12-valandžių kontrolę. grupė (n=8), 12-valandų administravimo grupė (n=8), 16-valandų valdymo grupė (n=8), 16-valanda administravimo grupė (n=8). Apgaulingos operacijos grupei ir kontrolinei grupei buvo duodama įprasto fiziologinio tirpalo per zondą, o vartojusioms grupėms buvo zonduojama 1 g/ml Cistanche du kartus per dieną iki 15 dienų. Thesepsio modelisbuvo pakartotas aklųjų žarnų perrišimu ir perforacija [4]. Prieš operaciją gyvūnai galėjo gerti vandenį ir nevalgė 12 valandų.

1.3 Vidutinio arterinio slėgio nustatymas

Galvos adata buvo įvesta jungo vena, antikoaguliacijai buvo naudojamas heparinas, kairioji bendroji miego arterija kaniuliuota į aortos lanką, o savadarbis kateteris prijungtas prie biologinio daugiakanalio instrumento, o vid.arterinis spaudimas(MAP) buvo įrašytas. Eksperimentuokite, kai MAP stabilizuosis.

1.4 Mitochondrijų ATPazės aktyvumo nustatymas

Paimkite 6 g žiurkės kepenų ir greitai įdėkite į 0 laipsnio atskyrimo terpę [250 mmol sacharozės, 2 mmol etoksietilpiperazino 2-etilsulfonrūgšties, 0,1 mmol etilendiamintetraacto rūgšties, pH7,4], atidarykite ir nuplaukite nešvarumus. Atskirkite terpės suspensiją (1:10), homogenizuokite tefloniniu elektriniu homogenizatoriumi (1200 r/min.), centrifuguokite 2000 aps./min. greičiu 10 minučių, sulaikykite supernatantą, centrifuguokite 10 000 r. /min 15 minučių, supernatantą išmeskite, paimkite nuosėdas ir suspenduokite jas 2 ml atskyrimo terpės, kad gautumėtemitochondrijų suspensija. Visas procesas atliekamas nuo 0 iki 4 laipsnių. Matuoti naudotas fosforo nustatymo metodas [5]ATPazės aktyvumas(rinkinys buvo įsigytas iš Nanjing Jiancheng biologinės inžinerijos instituto).

1.5 Statistinis apdorojimas

Visi eksperimentiniai duomenys išreiškiami kaip vidurkis±standartinis nuokrypis (X±S), o SPSS programinė įranga atlieka vienpusę dispersijos ir koreliacijos analizę.

Cistanche ekstraktas

2. rezultatai

2.1 Cistanche poveikis vidutiniam arteriniam slėgiui ir 24-valandžių žiurkių mirtingumui

Kontrolinės grupės kraujospūdis reikšmingai sumažėjo praėjus 12 valandų po aklųjų žarnų perrišimo ir perforacijos, o 16 val. Palyginti su fiktyvių operacijų grupe, buvo didelis skirtumas. Kraujospūdis išCistanche gydymasgrupė buvo patobulinta. Kontrolinės grupės mirtingumas buvo žymiai didesnis nei fiktyvių operacijų grupės, o administravimo grupės mirtingumas buvo žymiai mažesnis nei atitinkamos kontrolinės grupės.

2.2 Cistanche poveikis mitochondrijų ATPazės aktyvumui

Veiklanatrio-kalio ATPazė, kalcio ATPazė, magnio ATPazė ir kalcio-magnio ATPazėadministravimo grupėje buvo žymiai didesni nei atitinkamos kontrolinės grupės, pasiekę fiktyvių operacijų grupės lygį, o tai reikšmingai teigiamai koreliavo su mažėjimu.žiurkių mirtingumas (r=0.834) ).

Cistanche

3. Diskusija

Na plius -K plius -ATPazė, dar žinomas kaip natrio-kalio pompa, atlieka svarbų fiziologinį vaidmenį palaikant ląstelių fiziologinę veiklą, kūno temperatūrą ir normalią medžiagų apykaitą bei reguliuojant jonų pusiausvyrą ląstelės viduje ir išorėje.Sergant sepsiu, vidinėje mitochondrijų membranoje yra sunkus natrio siurblio funkcijos sutrikimas, sukeliantismitochondrijųedema. TheNa plius -K plius -ATPfermentas yra pažeistas, sutrinka pusiausvyramitochondrijųpadidėja jonų koncentracija, slopinamas energijos apykaitos fermentų aktyvumas, išsenka ląstelių aprūpinimas energija, atsiranda citotoksinė edema. Tuo pačiu metu padidėja membranos pralaidumas, o tai galiausiai sukelia ląstelių mirtį. Eksperimento metu mes nustatėme, kad mitochondrijųNa plius -K plius -ATPazėseptinių hepatocitų aktyvumas žymiai sumažėjo (P<0.01), indicating="" that="" the="" liver="" tissue="" is="" seriously="" damaged.="" after="" administration="" of="" cistanche,="" the="">Na plius -K plius -ATPazėveiklakepenų mitochondrijosžymiai padidėjo (P<0.05), and="" the="" mortality="" of="">septinės žiurkėsbuvo žymiai sumažintas. Eksperimentiniai rezultatai rodo, kad sumažėjoNa plius -K plius -ATPazės aktyvumasreikšmingai teigiamai koreliuoja su vystymusisepsis žiurkėms. SlopinimasNa plius -K plius -ATPazės aktyvumas, ląstelių edema ir mirtis, sukelianti daugelio organų nepakankamumą, gali būti greitas sepsio vystymasis. Vienas iš svarbiausių mechanizmų. Pastaraisiais metais buvo daug pranešimų apieNa plius -K plius -ATPazėir daug ligų, kurios patraukė klinikinių ir pagrindinių darbuotojų dėmesį. Labai svarbu ištirti veiklos kitimo dėsnįNa plius -K plius -ATPazėir jos reglamentas [6]. Mažai žinoma apie konkretų mechanizmąNa plius -K plius -ATPazėkuriant ir baigiantsepsis,ir reikalingi tolesni tyrimai.

Viduląstelinio kalcio ir magnio stabilumas yra būtinas materialus pagrindas palaikyti ląstelinio išsiskyrimo atsaką ir informacijos perdavimą [7]. Eksperimente sumažėjoCa2 plius -ATPazės aktyvumaskontrolinėje grupėje tiesiogiai veikia kalcio pompos veiklą, o kalcio siurblio aktyvumo sumažėjimas silpnina jo vaidmenįmitochondrijųkalcio siurblys, kad pašalintų Ca2 plius iš ląstelės ir Ca2 plius perteklius į vidųmitochondrijos. Kalcio perteklius mitochondrijose yra svarbi priežastismitochondrijųoksidacinio fosforilinimo sutrikimas, struktūriniai pažeidimai ir ląstelių nekrozė [8, 9]. Ca2 plius perkrova mažina mitochondrijų membranos potencialą ir ATP kiekį audiniuose [10], sutrinka audinių ląstelių energijos panaudojimas. Ca2 plus gali suaktyvinti mitochondrijų fosfolipazę, pakenkti mitochondrijomsmitochondrijų membrana, sunaikina normalią mitochondrijų ATP sintezės funkciją ir trukdo mitochondrijų energijos gamybai [11]. Sutrikimai dėlmitochondrijų kalcio metabolizmasgali tiesiogiai paveiktimitochondrijų kvėpavimo funkcija, sukeliamitochondrijų deguonispasisavinimo ir protonų oksidacijos sutrikimai elektronų transportavimo grandinėje [12]. Tuo pačiu metu Ca2 plius padidėjimas gali sustiprinti esterių peroksidacijos žalą mitochondrijoms [13]. Visa tai tiesiogiai ar netiesiogiai lemia ląstelių energijos tiekimo sutrikimą ir audinių bei organų mirtį bei pagreitina patologinių sepsio pokyčių vystymąsi. Eksperimento metu mes taip pat nustatėme, kad veiklaM g2 plius -ATPazė ir Ca2 plius -M g2 plius -ATPazė septinėse žiurkėsetaip pat gerokai sumažėjo.Mg2 plius -ATPazė ir Ca2 plius -M g2 plius -ATPazėyra svarbios medžiagos, palaikančios tarpląstelinį kalcio ir magnio balansą. Widner pranešė, kad intracelulinio magnio jonų sumažėjimas yra negrįžtamo ląstelių pažeidimo veiksnys, o Mg 2 plius /Ca2 plius santykis yra svarbus rodiklis, atspindintis negrįžtamą ląstelių pažeidimą [14]. TheMg2 plius -ATPazė ir Ca2 plius -M g2 plius -ATPazėveikląCistanche-vartojama grupė buvo sustiprinta, A TPazė yra sulfhidrilazė irCistancheturi antimembraninį esterio peroksidacinį poveikį, kuris gali būti dėl sustiprėjimoATPazėveikla pagal Cistanche Chemijos pagrindai ir Farmakologijos pagrindai [15].

Sergant sepsiu, mitochondrijųenergijos apykaitos sutrikimas, sumažėjęsATP fermento aktyvumas, mitochondrijų edema, intracelulinis kalcio perteklius ir kalcio ir magnio pusiausvyros sutrikimas yra tiesioginės sepsio ląstelių mirties ir daugelio organų nepakankamumo priežastys.Cistancheantagonizuoja membranos esterio peroksidaciją, stiprina ATPazės aktyvumą, palaiko intracelulinę kalcio ir magnio homeostazę ir apsaugo normalią ląstelių funkcijų veiklą.Cistancheyra svarbus mirtingumo mažinimo mechanizmasseptinės žiurkės. Tai rodo geras perspektyvasCistanche gydant sepsį