Cistanche Tubulosa apsaugo dopaminerginius neuronus reguliuodama apoptozę ir gliulinių ląstelių kilmės neurotrofinį faktorių: in vivo ir in vitro-Ⅱ

Elgesio testai

Plaukimo testas (Zhu ir kt., 2014 m.)

Pelių kūno judėjimo koordinavimas buvo matuojamas plaukimo testu. Pelės buvo atskirai patalpintos į vandens rezervuarą (25 cm aukščio ir 10 cm skersmens), kuriame buvo 10 cm vandens, ir išbandytos ramioje aplinkoje, kad būtų užfiksuota jų nejudėjimo trukmė per 5 minutes.

Atvirojo lauko testas (Kawai ir kt., 1998)

Lokomotorinis aktyvumas buvo matuojamas naudojant atvirojo lauko testą. Pelės buvo išbandytos tylioje ir silpnai apšviestoje aplinkoje ir atskirai įdėtos į 30 cm × 30 cm × 15 cm permatomą akrilo talpyklą su 6 cm × 6 cm atskyrimo tinkleliu apačioje. Pelėms buvo suteikta 10 minučių, kad jos prisitaikytų prie aplinkos, o tada penkis kartus iš eilės buvo matuojamas tinklelio skaičiaus judėjimas ir atskirų pelių auginimo dažnis, kad būtų gautos vidutinės vertės.

NATŪRALUS CISTANCHE TUBULOSA LYTINEI FUNKCIJAI GERINTI PHGS75% ECH 30% ACT 12%

Smegenų audinių mėginių ėmimas

Prieš imant audinių mėginius, pelės buvo šeriamos ad libitum su laisva prieiga prie vandens ir 14 dienų iš eilės buvo gydomos vaistais. Kiekvienoje grupėje buvo atrinktos keturios pelės ir greitai nupjautos galvos. Kiekvieno gyvūno SN (Bregma: –2,75 mm –2,92 mm) buvo izoliuotas ir padėtas ant ledo. Smegenų audiniai buvo nuplauti 0,9% lediniu natrio chlorido tirpalu, kad būtų pašalintas kraujas, ir išdžiovinti ant filtravimo popieriaus prieš laikant –80 ◦C temperatūroje. Keturios pelės iš kiekvienos grupės buvo anestezuotos intraperitoniniu būdu, o jų krūtinės atidarytos. Tada į kiekvieno gyvūno kairįjį skilvelį buvo įdėta infuzijos adata. Kad būtų pašalintas kraujas iš kraujotakos sistemos, buvo perpjautas dešiniojo prieširdžio priedas ir gyvūnui buvo lašinamas 4 ◦C normalus fiziologinis tirpalas, kol kepenys pasidarė blyškios, kad būtų užtikrinta nuosekli perfuzija. Kai paaiškėjo dešiniojo prieširdžio nuotekos, kiekvienas gyvūnas buvo perfuzuojamas 4% paraformaldehido fiksatoriumi. Po perfuzijos kiekvieno gyvūno smegenų audinys buvo kruopščiai išpjaustytas ir 24 valandas fiksuotas 4% paraformaldehidu. Fiksuoti smegenų audiniai buvo nuplauti po tekančiu vandeniu, dehidratuoti etanolio tirpalų serijoje ir išvalyti ksileno tirpale. Po to sekė parafino panardinimas ir įterpimas.

DA kiekio pokyčiai, išmatuoti HPLC

Kiekvienos grupės nanomiltelių pavidalo SN buvo patalpintas į ledo vonią, kurioje yra 0,9% natrio chlorido tirpalo (santykis 1:9). Smegenų audinys buvo homogenizuotas naudojant ultragarsinį ląstelių ardiklį ir centrifuguojamas 1200 aps./min. greičiu 20 minučių 4 °C temperatūroje, kad būtų gautas supernatantas. HPLC naudota Hypersil AA-ODS kolonėlė (2,1 mm × 200 mm, 5 µm) 30 °C kolonėlės temperatūroje. Fluorescencinis aptikimas buvo atliktas esant 280 nm λex ir 340 nm λem. Įpurškimo tūris buvo 10 µl.

Imunohistochemijos būdu aptikta TH, GDNF, GFR 1 ir Ret ekspresija

Iš kiekvieno gyvūno atskiro smegenų audinio parafino pjūviai (5 µm storio) buvo atskirti ir patalpinti į 40◦C šilto vandens vonią, kad išlygintų ir priliptų prie stiklelių. Visos audinių skaidrės buvo inkubuojamos 60 ◦ C orkaitėje 3–6 valandas, po to buvo pašalintas ksilenas, dehidratacija gradientu etanoliu ir antigenas buvo paimtas inkubuojant citrinos rūgšties buferyje ir kaitinant mikrobangų krosnelėje 20 min. Tada audinių stikleliai buvo inkubuojami 3% H2O2 tirpale kambario temperatūroje 10 min. Tris kartus nuplauti PBS, audinių stikleliai buvo inkubuojami su normaliu serumu uždaroje kameroje kambario temperatūroje 20 min. Imunohistocheminis dažymas buvo atliktas pagal gamintojo instrukcijas. Norint apskaičiuoti integruoto optinio tankio vertę teigiamai nudažytose ląstelėse, buvo naudojamas Motic Med 6.0 vaizdo analizatorius.

Western blot analizė pelių smegenų audiniuose

Šiame tyrime buvo įvertinta tirozino hidroksilazės (TH), GDNF, GFR 1, Ret, Bcl2 ir Bax baltymų ekspresija. Smegenų lizatas iš kiekvienos grupės buvo homogenizuotas 3{{10}} min. ant ledo, po to centrifuguojamas žemoje temperatūroje, 20, 000 aps./min., 4 ◦C temperatūroje. 5 min. surinkti supernatantą. Baltymų mėginiai buvo atskirti esant pastoviam slėgiui, naudojant 10% SDS-PAGE gelį, kaip aprašyta aukščiau. Pirminė antikūnų koncentracija: TH 0,15 mg/ml, GDNF 0,5 mg/ml, GFR 1 0,8 mg/ml, Ret 0,63 mg/ml, Bcl-2 0,34 mg/ml ir Bax 0,11 mg/ml. Procedūra buvo tokia pati kaip aukščiau.

NATŪRALUS CISTANCHE TUBULOSA, skirtas ANTI SENĖJIMUI ANTI-ALZHEIMERIS PHGS75% ECH 30% ACT 12%

Statistinė analizė

Šiame tyrime duomenų apdorojimui ir analizei buvo naudojama SPSS 20.0 statistinė programinė įranga. Parametrų reikšmės buvo išreikštos kaip vidurkis ± standartinis nuokrypis (¯x ± S). ANOVA buvo naudojama vieno faktoriaus duomenų analizei. Grupių palyginimui buvo naudojamas LSD arba Games-Howell testas. P< 0.05 (or P < 0.01) was considered as a statistically significant difference.

REZULTATAI

Aktyvieji C. tubulosa nanomiltelių komponentai

200–400 nm skenavimo diapazone ECH C. tubulosa ir VER 330 nm turėjo didžiausią absorbcijos smailę, kuri pasireiškė per 20 min. ICA didžiausios absorbcijos smailės buvo 270 nm ir pasirodė po 20 minučių (1A pav.). Rezultatai parodė, kad neigiami mėginiai netrukdė aptikti (1B pav.). Mėginiai ir kontrolė turėjo tas pačias chromatografines smailes, o neigiamas mėginys neturėjo. Tai parodė, kad kitos mėginio sudedamosios dalys netrukdė matuojamam komponentui. Be to, trys komponentai ir gretimos smailės gali pasiekti atskyrimo bazinę liniją, o atskyrimo laipsnis buvo didesnis nei 1, 5.

C. tubulosa nanomiltelių sumažintas MPP{0}}sukeltas citotoksiškumas MES23.5 ląstelėse

MES23.5 ląstelių gyvybingumas buvo žymiai sumažintas didėjant MPP+ koncentracijai. 2F paveiksle parodytas reikšmingas skirtingų koncentracijų MPP+ citotoksiškumas.

C. tubulosa nanomilteliai sumažino MPP{0}}sukeliamą citotoksiškumą ir padidino MES23.5 ląstelių gyvybingumą. 2G paveiksle parodyta, kad 10–250 µg/mL C. tubulosa nanomiltelių dozės darė nuo dozės priklausomą apsauginį poveikį MPP+- apdorotoms MES23.5 ląstelėms.

Citomorfologinis C. tubulosa nanomiltelių poveikis

Normalios MES23.5 ląstelės turėjo gerą ląstelių sukibimą ir buvo verpstės formos su aiškiomis ląstelių ribomis ir sinapsėmis. MPP+-pažeistos MES23.5 ląstelės rodė prastą ląstelių sukibimą ir susitraukimą, o daugelis jų buvo suspenduotos terpėje su susitraukusiomis sinapsėmis. Šios ląstelės buvo agreguotos, susitraukusios ir apvalios su vakuolėmis viduje, o branduoliai buvo suirę arba sugriuvę. C. tubulosa nanomilteliai skirtingomis dozėmis pagerino MES23.5 ląstelių citomorfologiją skirtingais laipsniais, pagerindami ląstelių adheziją ir sinapsinį klirensą nešiklio grupėje. MES23.5 ląstelės didelės dozės C. tubulosa gydymo grupėje parodė morfologiją, kuri buvo panaši į normalios kontrolinės grupės (2A–E pav.).

C. tubulosa nanomiltelių poveikis TH ekspresijai ir apoptozei ląstelėse

3 paveiksle parodytas reikšmingas TH baltymo ekspresijos sumažėjimas nešiklio grupėje. TH baltymo ekspresija padidėjo skirtingai grupėse, gydomose skirtingomis C. tubulosa dozėmis. Tačiau LSD testas parodė, kad tarp trijų gydytų grupių reikšmingo skirtumo nebuvo.

4 paveiksle parodyti apoptozės įvertinimo naudojant srauto citometriją rezultatai. Apoptozės greitis transporto priemonių grupėje buvo žymiai didesnis nei kitose grupėse. Ląstelės, apdorotos skirtingomis C. tubulosa nanomiltelių dozėmis, parodė skirtingą apoptozės greičio sumažėjimo laipsnį, palyginti su nešiklio grupe. Vidutinės ir didelės dozės C. tubulosa gydymo grupės ląstelės turėjo didžiausią apoptozės greičio pagerėjimą, palyginti su kitomis C. tubulosa gydymo grupėmis. LSD testas parodė, kad nebuvo reikšmingo skirtumo tarp dviejų gydytų grupių, tačiau reikšmingas skirtumas buvo ir tarp mažų dozių grupės.

C. tubulosa nanomiltelių poveikis Bcl2/Bax baltymų ekspresijai ląstelėse

5 paveiksle parodyta, kad Bcl2 baltymo ekspresija nešiklio grupės ląstelėse buvo žymiai mažesnė, palyginti su normalia kontroline grupe. Priešingai, Bax baltymo ekspresija nešiklio grupės ląstelėse buvo žymiai didesnė nei normalioje kontrolinėje grupėje. C. tubulosa gydymo grupėse buvo padidinta Bcl2 baltymo ekspresija ir sumažėjusi Bax baltymo ekspresija MPP+-gydytose MES23.5 ląstelėse. Tarp trijų gydytų grupių buvo reikšmingų LSD testo skirtumų. Šis poveikis priklausė nuo dozės.

Elgesio testai

Plaukimo testo rezultatai rodo, kad transporto priemonių grupės pelių nejudėjimo trukmė buvo gana ilga, kuri laikui bėgant didėjo. 14 dieną nešiklio grupės pelės stovėjo žymiai ilgiau nei normalios kontrolinės grupės pelės. Pelių nejudėjimo trukmė

maža dozėC. tubulosagydymo grupė reikšmingai nesiskyrė nuo pelių grupės nešiklio grupės. Tačiau didelių dozių C. tubulosa gydymo grupėje pelių nejudėjimo trukmė buvo žymiai trumpesnė nei pelių, gavusių nešiklio grupę.

Atvirojo lauko testo rezultatai rodo, kad po MPTP sukeltos žalos pelėms, nešiklio grupės pelių gebėjimas spontaniškai aktyvuoti žymiai sumažėjo, kaip rodo auginimo dažnis. Po 14-dienos administravimoC. tubulosa nanomilteliai, vidutinės ir didelės dozės gydymo grupėse pelių auginimo dažnis buvo žymiai didesnis, palyginti su pelėmis nešiklio grupėje (6A, B pav.).

C. tubulosa nanomiltelių poveikis DA turiniui pelėse

SN DA kiekio pokyčiai buvo nustatyti HPLC. Nustatyta, kad DA kiekis transporto priemonių grupės smegenyse buvo žymiai sumažintas. DA kiekis PD pelių smegenyse mažomis C. tubulosa dozėmis gydomų grupių smegenyse reikšmingai nesiskyrė nuo nešiklio grupės pelių. TačiauC. tubulosa gydymaspadidino DA lygį PD pelių smegenyse priklausomai nuo dozės. PD pelių, gydytų didelėmis dozėmis C. tubulosa, smegenyse buvo žymiai didesnis DA kiekis nei pelių grupės smegenyse (6C pav.).

C. tubulosa nanomiltelių poveikis TH ekspresijai pelėse

TH teigiamų ląstelių skaičius ir TH baltymo ekspresijos lygis MPTP sukeltų PD pelių SN buvo mažesni, palyginti su pelėmis kontrolinėje grupėje. Po gydymo C. tubulosa padidėjo TH teigiamų ląstelių skaičius ir TH baltymo ekspresijos lygis MPTP sukeltų PD pelių SN; reikšmingas skirtumas tarp didelėmis C. tubulosa dozėmis gydomų ir nešiklio grupių. LSD testu; ir tarp trijų gydytų grupių buvo reikšmingų skirtumų (7 pav.).

C. tubulosa nanomiltelių poveikis GDNF ir jo receptorių, GFR 1 ir Ret baltymų ekspresijai pelėse

GDNF ir jo receptorių GFR 1 ir Ret baltymų ekspresija teigiamai nudažytose ląstelėse buvo įvertinta naudojant imunohistochemiją. Western blot analizė buvo naudojama norint įvertinti baltymų ekspresijos lygius skirtingų pelių grupių SN. Naudojant du aptikimo metodus, skirtingų grupių rezultatai buvo panašūs. GDNF ir jo receptorių baltymų, GFR 1 ir Ret, ekspresija teigiamai nudažytose ląstelėse nešiklio grupės pelių SN buvo žymiai mažesnė nei normalios kontrolinės grupės pelių. Skirtingos gydymo C. tubulosa dozės padidino GDNF, GFR 1- ir Ret teigiamų ląstelių skaičių (8A–S pav.).

GDNF, GFR 1 ir Ret baltymų ekspresija nešiklio grupės pelių SN buvo žymiai mažesnė nei kontrolinės grupės pelių. Didinant gydomąją koncentracijąC. tubulosa nanopoweržymiai padidino šių baltymų ekspresiją. GDNF, GFR 1 ir Ret baltymų ekspresija pelių, gydytų didelėmis dozėmis C. tubulosa grupėje, SN buvo žymiai didesnė nei pelių nešiklio grupėje (P< 0.01; Figures 8T, U). 

C. tubulosa nanomiltelių poveikis Bcl2/Bax baltymų ekspresijai pelėse

Bcl2 baltymo ekspresija buvo žymiai sumažinta, o Bax baltymų ekspresija žymiai padidėjo nešiklio grupės pelių SN (P< 0.01) compared with the mice in the normal control group. High-dose C. tubulosa treatment significantly increased Bcl2 protein expression and significantly reduced Bax protein expression in the brains of the vehicle mice (P < 0.01; Figure 9). LSD test showed there was no significant difference between the middle-dose and high-dose groups but a significant difference between the low-dose group. 

DISKUSIJA

PD ir apoptozė

PD yra neurodegeneracinis sutrikimas. Pasak Zhang ir kt. (2005), paplitimas yra 10,7% vyresnių nei 55 metų Kinijos gyventojų ir 1,67% vyresnių nei 65 metų amžiaus. PD sergančių pacientų skaičius kasmet didėja, spartėjant visuotiniam senėjimui, todėl pacientų šeimoms tenka didelė finansinė našta. ir visuomenė apskritai. Smegenyse dopaminerginiai neuronai daugiausia dalyvauja DA sintezėje ir sekrecijoje. Jie yra plačiai paplitę centrinėje nervų sistemoje ir daugiausia yra SN (80%). TH yra pagrindinis greitį ribojantis fermentas DA sintezei. Taigi, TH aktyvumo slopinimas sumažina DA sintezę (Huot ir Parent, 2007). Pagrindiniai patologiniai ir biocheminiai PD pokyčiai yra dopaminerginių neuronų apoptozė SN, reikšmingas nigrostrialinio DA sumažėjimas ir Lewy kūnų susidarymas dopaminerginiuose neuronuose (Dexter ir Jenner, 2013). PD etiologija apima susijusius genetinius veiksnius, aplinkos veiksnius ir nervų sistemos senėjimą (Allam ir kt., 2005). PD patogenezė šiuolaikinėje medicinoje lieka neaiški. Nuo septintojo dešimtmečio pabaigos pakaitinė terapija levodopa buvo sėkmingai naudojama gydant PD ir buvo pripažinta kaip pagrindinis lūžio taškas gydant PD. Tačiau ilgalaikis šios terapijos taikymas sukelia šalutinį poveikį, o terapija negydo pagrindinių PD priežasčių (Del Sorbo ir Albanese, 2008). Todėl aktyvūs naujų vaistų ar gydymo metodų, skirtų dopaminerginių neuronų apsaugai, tyrimai yra labai svarbūs gydant PD.

Ankstesniuose tyrimuose, naudojant terminalo deoksinukleotidiltransferazės sukeltą dUTP slapyvardžio žymėjimą, nustatyta, kad 0,6–4,8 % dopaminerginių neuronų PD pacientų SN pasireiškė apoptozė (Mochizuki ir kt., 1996). Elektroninė mikroskopija parodė apoptotines savybes, įskaitant chromatinę kondensaciją ir apoptotinius kūnus dopaminerginėse ląstelėse (Anglade ir kt., 1997). Tompkins ir kt. (1997) atliko ultrastruktūrinę smegenų audinių skrodimų analizę pacientams, sergantiems PD, AD ir difuzine Lewy kūno liga (DLBD). Jie aptiko apoptozinius kūnus tankiame SN sluoksnyje PD ir DLBD pacientams, o tai yra įtikinami neuronų apoptozės PD ir susijusių ligų įrodymai. Todėl PD gydymui labai svarbu sumažinti arba slopinti apoptozę dopaminerginiuose neuronuose.

Ankstesni tyrimai parodė, kad MPTP sukėlė į PD panašius simptomus. MPTP kerta kraujo ir smegenų barjerą ir metabolizuojamas B tipo monoaminooksidazėse astrocituose. Vėliau jis paverčiamas toksišku MPP+, kuris kaupiasi dopaminerginių neuronų mitochondrijose per DA transporterio baltymų suvartojimą. Taip susidaro laisvųjų deguonies radikalų perteklius, kurie slopina mitochondrijų kvėpavimo grandinės I komplekso aktyvumą ir ATP sintezę. Šie įvykiai dar labiau skatina laisvųjų radikalų susidarymą ir oksidacinio streso reakcijas, o galiausiai sukelia dopaminerginių neuronų degeneraciją ir mirtį. Taigi šiame tyrime buvo naudojamas MPP+, siekiant sukurti in vitro nešiklį MES23.5 dopaminerginiuose neuronuose ir MPTP, kad sukeltų nešiklio pelę abipusiam patikrinimui. Remiantis MTT tyrimo rezultatais, MPP+ reikšmingai sumažino MES23.5 ląstelių gyvybingumą, o tai rodo, kad MPP+ buvo citotoksiškas dopaminerginiams neuronams. Rezultatai taip pat parodė, kad C. tubulosa veiksmingai sustiprino anti-apoptotinių baltymų ekspresiją ir slopino MPP{11}}sukeltos apoptozės padidėjimą.

PD ir GDNF

GDNF yra neurotrofinis faktorius, kurį pirmą kartą išskyrė Lin ir kt. (1993). Lin ir kt. (1993) taip pat parodė, kad GDNF turėjo specifinį mitybos poveikį dopaminerginiams neuronams žiurkių vidurinėse smegenyse. GDNF, neurturinas (NTN), persefinas (PSP) ir arteminas (ART) sudaro GDNF šeimą. Jie yra struktūriškai panašūs ir funkciškai susiję sekrecijos baltymai (Kotzbauer ir kt., 1996; Baloh ir kt., 1998; Milbrandt ir kt., 1998; Woodbury ir kt., 1998).

GDNF receptorius sudaro du komponentai. Pirmasis komponentas, GFR, yra pritvirtintas prie išorinės glikozilfosfatidilinozitolio (GPI) membranos ir pritvirtintas prie konneksino paviršiaus. Antrasis komponentas yra Ret baltymas. Tyrimai parodė, kad yra keturi skirtingi GFR tipai: GFR 1, GFR 2, GFR 3 ir GFR 4. GFR 1 yra didelio afiniteto GDNF receptorius (Onochie ir kt., 2000; Chen ir kt., 2001; Lindahl ir kt., 2001). Ret baltymas yra funkcinis GDNF receptorius. GDNF homodimerinė molekulė tiesiogiai jungiasi prie GFR 1, sudarydama kompleksus ir sąveikauja su Ret, todėl Ret dimerizuojamas ir aktyvuojamas. Dėl Ret autofosforilinimo Ret aktyvuoja kelis įprastus TH signalizacijos kelius. Nesant Ret baltymo, GDNF sukelia MAPK, PI{10}} ir PLC- baltymų fosforilinimą, be mRNR ekspresijos ir C-fos funkcinio aktyvumo per jo receptoriaus baltymą GFR 1 (He ir kt., 2008).

Tyrimai parodė, kad GDNF turėjo stipriausią apsauginį poveikį dopaminerginiams neuronams (Rangasamy ir kt., 2010; Campos ir kt., 2012). Transporto priemonėse, naudojančiose MPTP ir 6-hidroksidopaminą (6-OHDA), kad sukeltų žalą dopaminerginiams neuronams, GDNF apsaugo dopaminerginius neuronus, sumažindamas apoptozę ir skatindamas aksonų augimą, kad sukeltų kamieninių ląstelių diferenciaciją (Lucas ir kt., 2012); Littrell ir kt., 2013). Lin ir kt. (1993) parodė, kad GDNF specialiai skatino dopaminerginių neuronų gyvybingumą, diferenciaciją ir aksoninį augimą, kad paskatintų DA įsisavinimą neuronuose. Tyrimas taip pat parodė, kad GDNF ne tik užkirto kelią ūminiam toksiškumui, bet ir sumažino ilgalaikį MPP+ arba 6-OHDA toksiškumą dopaminerginiuose neuronuose, be to, užkirto kelią ląstelių žūčiai streso patiriančiose ar pažeistose ląstelėse (Yu ir kt., 2010). Be to, GDNF skatino nervų kamieninių ląstelių dauginimąsi ir diferenciaciją link dopaminerginių neuronų vidurinėse smegenyse (Lindsay, 1995), kad išgelbėtų dopaminerginius neuronus nuo retrogradinės degeneracijos (Hong-Juan ir kt., 2011).

Tyrimai parodė, kad GDNF ekspresija SN buvo žymiai sumažinta naudojant gyvūnų transporto priemones (Yang ir kt., 2010). Tai rodo, kad tai gali būti vienas iš PD žiurkių patogenezės mechanizmų. 5–15 µg/d GDNF injekcija į MPTP sukelto transporto priemonės gyvūno šoninį skilvelį arba striatumą tris mėnesius iš eilės paskatino nešiklio gyvūno dopaminerginės sistemos nigrostrialinį atstatymą (Grondin ir kt., 2002). GDNF gydymo nuo PD su gyvūnų nešikliais tyrimai parodė, kad intracerebrinė GDNF injekcija į skirtingus smegenų regionus, tokius kaip SN, uodegos branduolys ir šoninis skilvelis, pagerino judėjimo sutrikimus, susijusius su PD gyvūnų modeliais, įskaitant sumažėjusį motorinį aktyvumą, raumenų rigidiškumą ir tremoras (Grondin ir kt., 2002). Tačiau GDNF negali tiesiogiai prasiskverbti pro kraujo ir smegenų barjerą. Todėl vietinė GDNF injekcija į smegenis yra susijusi su didele rizika ir klinikinio taikymo sunkumais. Vis dar tiriamos galimybės įvesti egzogeninį GDNF naudojant kontroliuojamo atpalaidavimo mikrosferas, ilgalaikio atpalaidavimo kapsules ir virusinius genus (Liang ir kt., 2010; Yang ir kt., 2010; Qiao ir kt., 2012). Atsižvelgiant į įvairių egzogeninio GDNF įvedimo į smegenis metodų apribojimus, neuroprotekcinės medžiagos, skatinančios endogeninio GDNF išsiskyrimą, yra svarbios klinikiniam naudojimui.

PD irC. tubulosaNano milteliai

PD dažniau serga vidutinio amžiaus suaugusieji ir pagyvenę žmonės. TCM teorija mano, kad PD pirmiausia yra smegenyse ir daugiausia dėl kepenų ir inkstų trūkumo, be gyvybinės energijos ir kraujo nepakankamumo. Remiantis šia teorija, PD gydymas turėtų būti sutelktas į inkstų ir kaulų čiulpų gaivinimą.Yang ir kt. (2010 m.)naudojo atsitiktinių imčių, dvigubai aklus ir placebu kontroliuojamus klinikinius tyrimus ir nustatė, kad kombinuotas gydymas naudojant Madopar ir inkstus tonizuojančius receptus sumažino PD pacientų motorinius sutrikimus. Gydymo rezultatas buvo geresnis nei gydant vieną kartą naudojant Madopar. TCM monoterapijos arba sudėtinio recepto gydymo veiksmingumas sergant PD buvo patvirtintas PD gyvūnų modeliuose ir klinikiniuose taikymuose. TCM taikymas, skirtas tonizuoti inkstus ir skatinti kraujotaką, sumažino PD monoterapijos dozę naudojant Madopar. Kai kurie tyrimai parodė, kad TCM pagerino PD simptomus ir apsaugojo dopaminerginius neuronus, kurie galėjo būti glaudžiai susiję su endogeninės GDNF ekspresijos skatinimu.Hong-Juan ir kt., 2011; Qiao ir kt., 2012 m).

Šiame tyrime naudojamas inkstus tonizuojantis junginys,C. tubulosananomilteliai, esantysCistanche, epimediumas, irRhizoma polygonati. Šiuolaikiniai tyrimai rodo, kad cheminė sudėtisCistancheyra ECH, kuris apsaugo MPTP sukeltų PD pelių dopaminerginius neuronus SN ir slopina DA ir DA transporterio sumažėjimą (Zhao ir kt., 2010 m). Be to, jis apsaugo nuo 6-OHDA sukelto DA sumažėjimo ir apsaugo striatalinius dopaminerginius neuronus (Chen ir kt., 2007 m). Epimedis slopina kaspazės aktyvavimą-3 ir atlieka neuroprotekcinį vaidmenį (Liu ir kt., 2011 m). Epimedijos flavonoidai veiksmingai skatina nervų kamieninių ląstelių dauginimąsi ir diferenciaciją (Yao ir kt., 2010 m).

Šiame tyrimeC. tubulosananomilteliai priešinosi MPP padidėjimui+- sukelta apoptozė priklausomai nuo dozės. Tai žymiai pagerino TH išraiškąin vitronešiklis ir turėjo reikšmingą anti-apoptotinį poveikį dopaminerginiams neuronams. MPTP sukeltos transporto priemonės pelėms pasireiškė elgesio sutrikimai ir žymiai sumažėjo TH ekspresija vidurinių smegenų audiniuose ir DA lygiai, kurie yra tipiški patologiniai PD požymiai. Skirtingos dozėsC. tubulosananomilteliai sutrumpino stovėjimo trukmę, sustiprino autonominę veiklą, pagerino elgesio sutrikimus, padidino DA lygį smegenyse ir padidino TH ekspresiją transporto priemonėse. Šie rezultatai parodė, kadC. tubulosananomilteliai darė apsauginį poveikį dopaminerginiams neuronams, taip pagerindami transporto priemonių elgesio sutrikimus. Skirtingos dozėsC. tubulosananomilteliai padidino GDNF baltymo ir jo receptorių baltymų ekspresiją transporto priemonių pelių smegenyse. Didelė dozėC. tubulosagydymas žymiai padidino Bcl2 ekspresiją ir sumažino Bax ekspresiją, o tai rodoC. tubulosananomilteliaigali skatinti GDNF ekspresiją ir sekreciją MPTP pažeistose pelių smegenyse. Be to, jis gali turėti neuroprotekcinį poveikį dopaminerginiams neuronams ir sumažinti neuronų apoptozę dėl GDNF neurotrofinio palaikymo vaidmens.

Šis tyrimas parodė, kadC. tubulosananomilteliai turėjo apsauginį poveikį abiejų dopaminerginiams neuronamsin vitroirin vivoir padidino TH išraišką, kad pagerintų DA turinį. Jis taip pat pagerino MPTP sukeltų transporto priemonių pelių elgesio sutrikimus, reguliavo GDNF ir jo receptorių baltymų ekspresiją SN ir turėjo anti-apoptotinį poveikį PD pelėms. Mechanizmas, kuriuo grindžiamas klinikinis poveikisC. tubulosananomilteliai sergant PD gali padidinti endogeninio GDNF kiekį smegenyse ir taip sumažinti žalą dopaminerginiams neuronams.

NATŪRALUS CISTANCHE TUBULOSA LYTINEI FUNKCIJAI GERINTI PHGS75% ECH 30% ACT 12