Cistanches Herba sumažina riebios dietos sukeltų nutukusių pelių svorio padidėjimą galbūt dėl ​​mitochondrijų atsiejimo

Kontaktai: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 El. paštas:audrey.hu@wecistanche.com

Hoi Shan Wong, Jihang Chen, Pou Kuan Leong, Hoi Yan Leung, Wing Man Chan, Kam Ming Ko

* Gyvybės mokslų skyrius, Honkongo mokslo ir technologijų universitetas, Honkongas, Kinija.

Santrauka:

Pusiau išgryninta frakcija, išskirta išCistanchesHerba(HCF1), anksčiau buvo nustatyta, kad H9c2 ląstelėse ir žiurkių širdyse sukelia mitochondrijų atsijungimą. Todėl iškėlėme hipotezę, kad HCF1 sukels svorio metimo efektą prieš riebios dietos (HFD) sukeltą nutukimą. Norint patikrinti šią hipotezę, buvo sukurtas HFD sukelto nutukimo pelės modelis ir ištirtas HCF1 poveikis normaliai mityba (ND) ir HFD maitinamoms pelėms. Tyrimo metu ilgalaikis gydymas HCF1 sumažino svorį prieš HFD sukeltą nutukimą pelių patinams ir patelėms. HCF{13}}sukeltas svorio kritimas buvo susijęs su padidėjusiu HFD šertų gyvūnų jautrumu insulinui. Norint suprasti veikimo mechanizmą, kuriuo grindžiamas HCF1 suteikiamas svorio mažinimo efektas, buvo ištirtas jo poveikis mitochondrijų atsiejimui. Taip pat buvo atliktas lyginamasis tyrimas su kolestiraminu (CT), tulžies rūgščių sekvestranu. Išvados parodė, kad HCF{16}sukeltas svorio kritimas greičiausiai buvo susijęs su padidėjusiu energijos suvartojimu, tikriausiai dėl pelių skeleto raumenų mitochondrijų atsijungimo. Taigi, mūsų išvados rodo, kad HCF1 gali būti naudojamas siekiant išvengti nutukimo ir su tuo susijusių padarinių sveikatai, pvz., Diabeto, širdies ir kraujagyslių ligų bei metabolinio sindromo.

Raktiniai žodžiai: Cistanches Herba, Svorio kontrolė,Mitochondrijų atjungimas,Mitochondrijų atjungimo baltymas 3

cistanche tubolosa nauda sveikatai

Chengdu Wecistanche daugiausia gamina Cistanche produktus sveikam gyvenimui.

Įvadas

Nutukimui būdingas nenormalus riebalų kaupimasis riebaliniame audinyje ir kituose organuose, o tai neigiamai veikia sveikatą. Dabartiniai duomenys rodo, kad sėslus gyvenimo būdas ir mitybos sudėties pokyčiai pasiturinčiose visuomenėse sukėlė nutukimo epidemiją, o kartu padidėjo įvairių su nutukimu susijusių lėtinių ligų, tokių kaip metabolinis sindromas, dažnis (Shi ir kt., 2012). . Nacionalinis sveikatos ir mitybos tyrimo tyrimas (NHANES), atliktas 2007 m., parodė, kad pasaulinis nutukimo paplitimas viršijo 30 procentų, o per ateinančius du dešimtmečius jis turėtų padidėti dar 33 procentais (Finkelstein ir kt., 2012). Nutukimo pradžia taip pat pereis prie jaunų žmonių, kaip rodo vaikų ir paauglių antsvorio ir nutukimo tendencijos (McTigue, Garrett ir Popkin, 2002). Šios išvados prognozuoja galimą nutukimo medicininės priežiūros naštą ir su tuo susijusias pasekmes sveikatai, todėl nedelsiant reikia kontroliuoti nutukusių gyventojų skaičių.

Nutukimo valdymas reikalauja ilgalaikės intervencijos ir daugiadisciplininio požiūrio. Atsižvelgiant į nutukimo epidemiją, įmanomų neterapinių ir (arba) terapinių intervencijų paieška buvo intensyvių tyrimų sritis. Strategija daugiausia orientuota į energijos balanso sukūrimą didinant energijos sąnaudas arba mažinant suvartojamos energijos kiekį. Tarp įvairių metodų, apimančių mitybos pakeitimą, pratimus, absorbcijos žarnyne slopinimą ir simpatinės nervų sistemos aktyvavimą, mitochondrijų atsijungimo indukciją naudojant cheminį atjungiklį arba mitochondrijų atjungimo baltymų indukciją (Cerqueira, Laurindo ir Kowaltowski, 2011; Clapham ir kt., 2000), įrodyta, kad tai yra veiksminga priemonė svorio metimui (Clapham ir kt., 2000; Diehl ir Hoek, 1999; Harper, Dickinson ir Brand, 2001; Li ir kt., 2000). Mitochondrijų atsiejimas reiškia procesą, sukeliantį atjungimą tarp energiją duodančių elektronų transportavimo procesų ir ADP fosforilinimo mitochondrijose. Pasiūlydamas alternatyvų protonų laidumo kelią, mitochondrijų atsiejimas sukelia protonų gradiento išsklaidymą ir greitesnį deguonies suvartojimą (Brand ir kt., 2005). Atjungimo sąlygomis ATP sintezės sumažėjimas yra susijęs su mitochondrijų membranos potencialo sumažėjimu, o protonų gradiente sukaupta potenciali energija išsisklaido kaip šiluma. Šis bergždžias protonų transportavimo ciklas sunaudoja didelę medžiagų apykaitos energijos dalį įvairiuose audiniuose, ypač skeleto raumenyse, kurie sunaudoja apie 20 procentų visos metabolizmo metu susidarančios energijos (Chan, Wei, Chigurupati ir Tu, 2010; Korshunov, Skulachev ir Starkoc). , 1997). Mitochondrijų protonų nutekėjimo moduliavimas padidina bazinį medžiagų apykaitos greitį, kuris prisideda prie didelės dienos energijos sąnaudų dalies, o vėliau padidina kuro molekulių (pvz., riebalų rūgščių) naudojimą ir dėl to mažėja svoris (Ricquier ir Bouillaud, 2000). ).

Cistanches Herba, džiovintas visas Cistanche deserticola YC Ma augalas, yra tradicinėje kinų medicinoje „Yang gaivinanti“ tonizuojanti žolė. Ši žolė taip pat šimtus metų Kinijoje buvo naudojama kaip sveikas maistas inkstų nepakankamumui gydyti. Mūsų naujausi rezultatai parodė, kad pusiau išgryninta Cistanches Herba (HCF1) frakcija sukėlė mitochondrijų atsijungimą H9c2 ląstelėse ir žiurkių širdyse (Wong & Ko, 2013). Taip pat buvo įrodyta, kad ilgalaikis gydymas HCF1 (1,14 ir 11,4 mg/kg paros dozėmis; 14 dienų iš eilės) sukėlė žiurkių inkstuose ir kepenyse išskirtų mitochondrijų atsijungimą, kaip netiesiogiai įrodo ATP koncentracijos sumažėjimas šiose ląstelėse. audinių (duomenys neskelbtini). Atsižvelgiant į tai, kad mitochondrijų atsiejimo indukcija yra veiksminga svorio metimo priemonė (Clapham ir kt., 2000; Diehl ir Hoek, 1999; Harper ir kt., 2001; Li ir kt., 2000), iškėlėme hipotezę, kad HCF1 taip pat gamins. mitochondrijų atsijungimas skeleto raumenyse, dėl kurio sumažėja svoris. Norint patikrinti hipotezę, buvo sukurtas riebios dietos (HFD) sukelto nutukimo pelės modelis ir ištirtas HCF1 poveikis normaliai mityba (ND) ir HFD maitinamoms pelėms. Be to, taip pat buvo atliktas lyginamasis HCF1 ir tulžies rūgštis sekvestranto kolestiramino (CT) poveikio tyrimas (Chen ir kt., 2010; Yamato ir kt., 2012), siekiant apibūdinti HCF1 sukeliamą svorio mažinimo poveikį.

cistanche stiebas

2. Medžiagos ir metodai

2.1. Žolelių ekstrahavimas

Cistanches Herba, visas džiovintas Cistanches deserticola YC Ma (Orobanchaceae) augalas, buvo nupirktas iš vietinio vaistažolių pardavėjo (Lee Hoong Kee). Žolės autentiškumą patvirtino tiekėjas, o kupono pavyzdys (HKUST00301) buvo deponuotas Honkongo mokslo ir technologijų universiteto (HKUST) Gyvybės mokslų skyriui. Cistanches Herba etanolinis ekstraktas buvo gautas etanoliu ekstrahuojant sumaltą augalinę medžiagą, kaitinant su grįžtamu šaldytuvu 78 laipsnių temperatūroje 2 valandas, kaip aprašyta anksčiau (Leung & Ko, 2008), o išeiga buvo 14 procentų (m/m). Ekstraktas toliau frakcionuojamas naudojant silikagelio chromatografiją (Wong & Ko, 2013). Gautas HCF1, kurio ekstrahavimo išeiga yra 1,14 proc. Ekstraktas buvo džiovinamas išgarinant tirpiklį sumažintame slėgyje 50 laipsnių temperatūroje, o džiovintas ekstraktas buvo laikomas –20 laipsnių temperatūroje iki naudojimo.

2.2. Chemikalai

Bio-Rad tyrimo reagentas buvo įsigytas iš Bio-Rad Laboratories (Richmond, CA, JAV). LabAssay™ trigliceridas (290-63701), LabAssay™ cholesterolis (294-65801) ir HDL-cholesterolio E tyrimo rinkinys (431-52501) buvo įsigyti iš Wako (Osaka, Japonija). Antikūnas prieš UCP3 (E-18) (katalogo Nr. sc-31387) ​​buvo įsigytas iš Santa Cruz Biotechnology (Santa Cruz, CA, JAV). Visos kitos cheminės medžiagos buvo perkamos iš Sigma (St. Louis, MO, JAV).

2.3. Gyvūnų priežiūra

ICR pelės (8 savaites; 30–35 g patinams ir 25–30 g patelėms) buvo laikomos 12-h tamsos/šviesos ciklu oru/drėgme kontroliuojamoje patalpoje maždaug 22 laipsnių temperatūroje ir leido valgyti bei vandens ad libitum gyvūnų ir augalų priežiūros įstaigose (APCF) HKUST. Visos eksperimentinės procedūros buvo patvirtintos Mokslinių tyrimų praktikos komiteto (HKUST) (Gyvūnų protokolo patvirtinimo Nr. 2013049; patvirtinimo data: 2013 m. rugsėjo 25 d.; eksperimento trukmė: 3 metai).

cistanche gyvenimo pratęsimas

2.4. Gydymo protokolas

Norint ištirti HCF1 poveikį HFD sukeltam nutukimui, ICR pelių patinai arba patelės buvo atsitiktinai suskirstyti į aštuonias grupes, kiekvienoje po 10–15 pelių: (1) normalios mitybos (ND, 13 proc. energijos gaunama iš riebalų) kontrolė; (2) ND plius maža HCF1 (HCF1 L) dozė (kai paros dozė yra 1,5 mg/kg); (3) ND plius vidutinė HCF1 dozė (HCF1 M) (kai paros dozė yra 15 mg/kg); (4) ND plius didelė HCF1 (HCF1 H) dozė (kai paros dozė yra 45 mg/kg); (5) HFD (60 proc. energijos gaunama iš riebalų; pirkta iš Research Diet Inc., produkto Nr. D12492) kontrolė; (6) HFD plius HCF1 L; (7) HFD plius HCF1 M; ir (8) HFD ir HCF1 H. Kadangi buvo pranešta apie žiurkių ir žmonių organizmo svorio pokyčius ir svorio mažinimo priemones pagal lytį (Rodriguez ir Palou, 2004; Rodriguez, Quevedo-Coli, Roca ir Palou, 2001), buvome suinteresuoti ištirti HCF1 poveikį pelių patinams ir patelėms. HCF1 dozės buvo gautos iš jo efektyvių dozių, skatinančių mitochondrijų atsiejimą žiurkių širdims (Wong & Ko, 2013). Bendro gydymo HCF1 grupėse pelėms buvo intragastriniu būdu skiriamas HCF1 5 dienas per savaitę 8 savaites (ty 40 dozių). Kontrolinės pelės gavo tik nešiklį (alyvuogių aliejų). Eksperimento metu kas savaitę buvo stebimas pelių kūno svoris ir maisto suvartojimas. Kūno svorio pokyčiai buvo kiekybiškai įvertinti apskaičiuojant plotą po kreive (AUC) diagramoje, kurioje vaizduojamas procentas pradinio kūno svorio pagal laiką (1–8 savaitė) ir išreikštas savavališkais vienetais. Kraujo mėginiai buvo paimti praėjus 24 valandoms po paskutinės HCF1 dozės iš per naktį nevalgiusių, fenobarbitaliu anestezuotų pelių širdies punkcija. Tada pelės buvo paaukotos dėl gimdos kaklelio išnirimo. Gastrocnemius raumenų mėginiai buvo iškirpti tolesnei biocheminei analizei. Riebalinės pagalvėlės (lytinės liaukos, retroperitoniniai ir mezenteriniai riebalai) buvo išpjaustytos ir pasvertos. Konkrečios riebalų pagalvės svorio ir kūno svorio santykis buvo įvertintas ir išreikštas riebalų pagalvėlės indeksu. Norint ištirti KT poveikį HFD maitinamoms nutukusioms pelių patinams, pelių patinams į skrandį buvo sušvirkšta CT (suspenduota vandenyje) 300 mg/kg paros dozė.

2.5. Mėginių paruošimas

Plazmos mėginiai, skeleto raumenų homogenatai (frakcija be branduolio) ir skeleto raumenų mitochondrijos buvo gauti, kaip aprašyta anksčiau (Leong ir kt., 2013).

2.6. Biocheminė analizė

2.6.1. Gliukozės ir lipidų kiekis plazmoje

Gliukozės kiekis plazmoje buvo matuojamas gliukozės (heksokinazės) tyrimo rinkiniu (Sigma, St. Louis, MO, JAV). Gliukozės kiekis buvo įvertintas pridedant reakcijos mišinio, kuriame yra 1,5 mM NAD, 10 mM ATP, 10 vnt/mL heksokinazės ir 10 vienetas/ ml gliukozės{8}}fosfato dehidrogenazės. Absorbcijos pokyčiai esant 340 nm buvo stebimi spektrofotometriškai Victor V3 Multi-Label Counter (Perkin Elmer, Santa Clara, CA, JAV).

Plazmos trigliceridų (TG), bendrojo cholesterolio (TC) ir didelio tankio lipoproteinų cholesterolio (DTL) lygiai buvo matuojami naudojant tyrimų rinkinius: TG: LabAssayTM Trigliceridas, TC: LabAssayTM Cholesterol; DTL-C: DTL-cholesterolio E tyrimo rinkinys. TG, TC ir DTL kiekis buvo įvertintas pridedant chromogeno reagentus, pateiktus iš atitinkamų tyrimų rinkinių. Buvo stebimi absorbcijos pokyčiai esant 600 nm (Siddiqua, Hamid, Ar-Rashid, Akther ir Choudhuri, 2010). Mažo tankio lipoproteinų-cholesterolio (MTL) lygis buvo įvertintas pagal Friedewaldo formulę:

MTL= TC-(DTL plius TG/5)

2.6.2. Fosfofruktokinazės (PFK) aktyvumas skeleto raumenyse

PFK aktyvumas buvo įvertintas sumaišius reakcijos mišinį, kuriame yra 1 mM fruktozės-6-fosfato, 1 mM ATP, 0,5 mM NADH, 2 mU/mL aldolazės, 2 mU/mL triosefosfato izomerazės, 2 mU /mL glicerofosfato dehidrogenazės tyrimo buferyje (50 mM Tris-HCl, 5 mM MgCl2, 5 mM (NH4)2SO4, pH 7,4) su skeleto raumenų frakcija be branduolių (50 ug baltymo/ml) galutiniame tūryje 200 μl. Tada NADH oksidacija buvo matuojama stebint absorbcijos pokyčius esant 340 nm (Coelho, Costa ir Sola-Penna, 2007).

2.6.3. Citrato sintazės (CS) aktyvumas

Reakcijos mišinys CS aktyvumui matuoti buvo paruoštas sumaišius {{0}},1 M Tris buferį (pH 8.0), 0.058 mM acetilą -CoA ir 0,1 mM 5,5'-ditiobis-(2-nitrobenzenkarboksirūgšties) (DTNB). Reakcija buvo pradėta pridedant oksaloacetato (galutinė koncentracija: 0,5 mM). Absorbcija ties 412 nm buvo registruojama kas 30 s 30 laipsnių temperatūroje 3 minutes (Carter, Rennie, Hamilton ir Tarnopolsky, 2001; Holloway, Bonen ir Spriet, 2009).

cistanche tubolosa nauda sveikatai

2.6.4. -hidroksiacil-kofermento A dehidrogenazės (-HAD) aktyvumas

-HAD aktyvumas buvo matuojamas sumaišius reakcijos mišinį, kuriame yra 100 μM acetoacetil-CoA ir 100 μM -NADH tyrimo buferyje (100 mM kalio fosfato buferis su 2 mM etilendiaminotetraacto rūgštimi (EDTA), pH 7,3). Absorbcijos pokyčiai esant 340 nm buvo stebimi 30 laipsnių kampu 2 minutes (Holloway ir kt., 2006).

2.6.5. Karnitino palmitoiltransferazės (CPT) aktyvumas

CPT aktyvumo vertinimas buvo pagrįstas CPT katalizuojama CoA-SH gamyba iš palmitil-CoA. Reakcija buvo pradėta į reakcijos mišinį pridedant L-karnitino (galutinė koncentracija 6 μM) (16 mM Tris, 2,5 mM EDTA, 2 mM DTNB ir 50 μM palmitoil-CoA, pH 8,0). Sugertis prie 412 nm buvo stebima 30 laipsnių kampu 180 s. Fermento aktyvumui įvertinti buvo naudojamas 5'-tio-2-nitrobenzoato (galutinio produkto) milimolinis ekstinkcijos koeficientas 13,6 mM−1 cm−1. Vienas CPT aktyvumo vienetas apibrėžiamas kaip fermento kiekis, katalizuojantis 1 nmol CoA-SH išsiskyrimą per 1 minutę (Karlic, Lohninger, Koeck ir Lohninger, 2002).

2.6.6. Mitochondrijų kvėpavimas

Kvėpavimo dažnis mitochondrijose, išskirtose iš pelių skeleto raumenų, buvo nustatytas taip, kaip aprašė Wong ir Ko (2013). Trumpai tariant, mitochondrijų kvėpavimas buvo matuojamas polarografiškai Clark tipo elektrodu (Hansatech Instruments, Norfolkas) 30 laipsniu. Mitochondrijų frakcija (1 mg baltymo/ml) buvo inkubuojama kvėpavimo buferyje (30 mM KCl, 6 mM MgCl2, 75 mM sacharozės, 1 mM EDTA, 20 mM KH2PO4, pH 7,0). Pridėtas substrato tirpalas, kuriame yra 15 mM natrio piruvato ir 5 mM natrio malato. Po pusiausvyros, 3 būsenos kvėpavimas buvo pradėtas pridedant ADP (galutinė koncentracija 0,6 mM). Kai visas pridėtas ADP buvo sunaudotas ATP generavimui, buvo pridėta oligomicino, kad sukeltų 4 būsenos kvėpavimą. Kvėpavimo kontrolės koeficientas (RCR) buvo įvertintas apskaičiuojant 3 būsenos ir 4 būsenos kvėpavimo dažnių santykį (Jiang ir kt., 2009).

2.6.7. UCP3 išraiška

UCP3 lygis buvo įvertintas Western blot analize, naudojant anti-UCP3 (E-18) antikūnus, atlikus mitochondrijų frakcijos SDS-PAGE analizę, naudojant 10 procentų akrilamido atskyrimo gelį. Mitochondrijų frakcijos, išskirtos iš pelių skeleto raumenų (100 g), buvo pakrautos, o citochromo c oksidazė (COX) buvo naudojama kaip nuoroda. Imuniniu būdu dažytos baltymų juostos buvo analizuojamos densitometrijos metodu (Quantiscan, Biosoft, Cam bridge, GB, JK), o UCP3 kiekiai (savavališki vienetai) buvo normalizuoti, atsižvelgiant į COX lygį (savavališki vienetai) mėginyje.

2.7. Baltymų tyrimas

Baltymų koncentracija buvo nustatyta naudojant Bio-Rad baltymų tyrimo rinkinį. Baltymų koncentracija buvo nustatyta pagal kalibravimo kreivę, naudojant galvijų serumo albuminą (BSA) kaip standartą.

2.8. Statistinė analizė

Visi duomenys buvo išreikšti kaip vidurkis ± standartinė vidurkio paklaida (SEM), jei nenurodyta kitaip. Duomenys buvo analizuojami taikant vienpusę dispersijos analizę (vienpusė ANOVA), o skirtumas tarp grupių buvo aptiktas Tukey diapazono testu, kai p <>

Cistanche žolė

3. Rezultatai

3.1. HCF1 poveikis kūno svoriui pelėms, maitinamoms ND ir HFD

ND dietinis šėrimas šiek tiek padidino pelių patinų ir patelių kūno svorį (atitinkamai 13 proc. ir 10 proc.) 8-savaitės eksperimento metu (1a pav.). HFD pagreitino kūno svorio padidėjimą, o stimuliacijos mastas buvo atitinkamai 269 procentai ir 320 procentų pelių patinų ir patelių, lyginant su atitinkamais ND gyvūnais (1a pav.). Kūno svorio pokyčiai 8-savaitės eksperimento metu buvo kiekybiškai įvertinti ir išreikšti savavališkais vienetais. Gydymas HCF1 visiškai nuslopino ND maitinamų pelių patinų kūno svorio padidėjimą (1b pav.). Gydymas HCF1 taip pat, priklausomai nuo dozės, slopino HFD maitinamų pelių kūno svorio padidėjimą, o slopinimo laipsnis buvo atitinkamai 100 proc. ir 61 proc. 45 mg/kg pelių patinams ir patelėms (1b pav.). Palyginus su negydytomis ND maitintomis pelėmis, šeriant HFD ir (arba) kartu gydant HCF1, reikšmingų maisto suvartojimo pokyčių nepastebėta (duomenys nerodomi).

1 pav. HCF1 poveikis kūno svorio pokyčiams pelėms, maitinamoms ND ir HFD. Kūno svoris buvo stebimas kas savaitę 8-savaitės eksperimento metu. a ) Kūno svorio pokyčių laiko eiga buvo analizuojama mišraus dizaino ANOVA, o skirtumas tarp grupių buvo aptiktas Tukey diapazono testu. Duomenys buvo išreikšti kontrolės procentais, atsižvelgiant į atitinkamą pradinį kūno svorį. (b) Kūno svorio pokyčiai buvo kiekybiškai įvertinti, kaip aprašyta skyriuje „Medžiagos ir metodai“. Duomenys buvo išreikšti kontrolės procentais ND kontrolės atžvilgiu [kontrolės AUC reikšmė (savavališkas vienetas): vyriškos lyties=777,6 ± 10,4; moteris {{10}}.0 ± 8,0]. Pateiktos reikšmės yra vidurkiai ± SEM su n=15. * Žymiai skiriasi nuo ND kontrolės; # Žymiai skiriasi nuo HFD kontrolės (p <>

3.2. HCF1 poveikis riebalų pagalvių indeksams pelėms, maitinamoms ND ir HFD

Taip pat buvo tiriamas HCF1 poveikis riebalų kaupimuisi. HFD sukėlė reikšmingą poodinių ir visceralinių riebalų kiekio padidėjimą pelių patinuose (atitinkamai 346 proc. ir 325 proc.) ir patelių (atitinkamai 248 proc. ir 257 proc.) (2 pav.). Nors gydymas HCF1 neturėjo jokio poveikio poodiniams ir visceraliniams riebalams ND maitinamose pelėse, HCF1 gebėjimas slopinti HFD sukeltą kūno svorio padidėjimą buvo susijęs su kūno riebalų masės sumažėjimu, kaip rodo abiejų riebalų sumažėjimas. HFD šertų patinų poodiniai ir visceraliniai riebalai (atitinkamai 42 proc. ir 49 proc. 45 mg/kg doze) ir HFD šertų pelių patelių visceraliniai riebalai (53 proc., 45 mg/kg) (2 pav.) .

2 pav. HCF1 poveikis riebalų pagalvėlių indeksams pelėms, maitinamoms ND ir HFD. Poodinių riebalų ir visceralinių riebalų masė buvo išmatuota, kaip aprašyta Medžiagos ir metodai. Duomenys buvo išreikšti procentais, palyginti su ND kontrole. Pateiktos reikšmės yra vidurkiai ± SEM su n=15. * Žymiai skiriasi nuo ND kontrolės; # Žymiai skiriasi nuo HFD valdymo (p <>

3.3. HCF1 poveikis gliukozės ir lipidų kiekiui plazmoje ND ir HFD maitinamose pelėse

Gydymas HCF1 nepakeitė gliukozės ir lipidų kiekio plazmoje ND maitinamų pelių patinų ir patelių (3 pav.). Šėrimas HFD sukėlė reikšmingą gliukozės koncentracijos plazmoje padidėjimą (atitinkamai 39 proc. ir 29 proc.) pelių patinų ir patelių, lyginant su atitinkama ND kontrole (3a pav.). HCF1H panaikino HFD sukeltą gliukozės kiekio padidėjimą plazmoje (atitinkamai 41 ir 64 proc.) pelių patinų ir patelių (3a pav.). HFD taip pat reikšmingai padidino TG lygį plazmoje (atitinkamai 38 ir 53 proc.) pelių patinų ir patelių, lyginant su atitinkama ND kontrole (3b pav.). HCF1 L ir HCF1 M reikšmingai slopino HFD sukeltą TG koncentracijos padidėjimą plazmoje HFD šertų pelių patinuose (atitinkamai 135 ir 192 proc.) ir patelių (atitinkamai 103 ir 146 proc.) (3b pav.). HCF1H sukėlė reikšmingą TG lygio padidėjimą plazmoje (21 proc.) HFD maitinamoms pelių patelėms, palyginti su negydyta HFD kontrole (3b pav.). Be plazmos TG, po HFD šėrimo taip pat buvo pastebėtas reikšmingas TC koncentracijos padidėjimas plazmoje – pelių patinų ir patelių padidėjimo mastas buvo atitinkamai 73 proc. ir 100 proc. (3c pav.). Plazmos TC lygio padidėjimas buvo susijęs su reikšmingu HDL/MTL santykio plazmoje sumažėjimu tiek HFD maitinamų pelių patinų (29 proc.), tiek patelių (49 proc.) (3d pav.). HCF1 M ir HCF1 H sumažino HFD sukeltą TC koncentracijos padidėjimą plazmoje HFD maitinamiems pelių patinams, kartu padidindami DTL/LDL santykį plazmoje (atitinkamai 255 ir 212 proc.), palyginti su negydytais HFD. valdymas (3c ir 3d pav.). HCF1 L ir HCF1 M slopino HFD sukeltą TC koncentracijos padidėjimą plazmoje (atitinkamai 22 proc. ir 32 proc.) pelių patelėms, o plazmos DTL/MTL santykis nepakito (3c ir 3d pav.).

3 pav. HCF1 poveikis gliukozės ir lipidų kiekiui plazmoje pelėms, maitinamoms ND ir HFD. Gliukozės, TG ir TC lygis plazmoje buvo matuojamas taip, kaip aprašyta skyriuje „Medžiagos ir metodai“. Duomenys buvo išreikšti kontrolės procentais, palyginti su ND kontrole [kontrolinis gliukozės kiekis plazmoje (mg/dL): vyrų=91,1 ± 3,3, moterų=86.0 ± 2,3; kontrolinis plazmos TG lygis (mg/dL): vyrų=52.0 ± 1,7, moterų=95,8 ± 4,1; kontrolinis plazmos TC lygis (mg/dL): vyrų {{20}},8 ± 4,3, moterų=118,6 ± 5,4]. Pateiktos reikšmės yra vidurkiai ± SEM su n=15. * Žymiai skiriasi nuo ND kontrolės; # Žymiai skiriasi nuo HFD kontrolės (p <>

3.4. HCF1 poveikis kepenų lipidų kiekiui pelėms, maitinamoms ND ir HFD

Gydymas HCF1 nepakeitė ND maitinamų pelių kepenų TG ir TC lygio (4 pav.). HFD vartojimas reikšmingai padidino kepenų TG lygį (atitinkamai 108 proc. ir 135 proc.) pelių patinų ir patelių, lyginant su atitinkama ND kontrole (4a pav.). Viena vertus, HCF1 H slopino HFD sukeltą kepenų TG lygio padidėjimą (54 proc.) pelių patinams, palyginti su negydyta HFD kontrole (4a pav.). Kita vertus, HCF1H dar labiau padidino kepenų TG lygį (14 proc.) pelių, maitinamų HFD, patelėms, palyginti su atitinkama negydyta HFD kontrole (4a pav.). HFD taip pat reikšmingai padidino kepenų TC lygį (atitinkamai 48 proc. ir 26 proc.) pelių patinų ir patelių (4b pav.). Nors HCF1 L ir HCF1 H žymiai sumažino HFD sukeltą HFD sukeltą TC koncentracijos padidėjimą (atitinkamai 42 ir 44 procentais) HFD maitinamų pelių patinams, tik HCF1 H galėjo sukelti panašų poveikį HFD maitinamoms pelių patelėms. slopinimo laipsnis yra 62 procentai (4b pav.).

4 pav. HCF1 poveikis kepenų lipidų kiekiui pelėms, maitinamoms ND ir HFD. Kepenų TG ir TC lygiai buvo išmatuoti, kaip aprašyta skyriuje „Medžiagos ir metodai“. Duomenys buvo išreikšti kontrolės procentais, palyginti su ND kontrole [kontrolinis kepenų TG lygis (g/mg baltymo): patinas=31,7 ± 1,6, moteris=38,5 ± 1,7; kontrolinis kepenų TC lygis (g/mg baltymo): vyrų=12,8 ± 0,4, moterų=17,9 ± 1,2]. Pateiktos reikšmės yra vidurkiai ± SEM su n {{20}}. * Žymiai skiriasi nuo ND kontrolės; # Žymiai skiriasi nuo HFD kontrolės (p <>

3.5. HCF1 poveikis metabolinių fermentų aktyvumui skeleto raumenyse, išskirtuose iš ND ir HFD maitinamų pelių

Gydymas HCF1 stimuliavo PFK aktyvumą ND maitinamų pelių patinų arba patelių skeleto raumenyse, o poveikis pelių patinams buvo ryškesnis (55 proc., palyginti su 20 proc. padidėjimu vartojant 45 mg/kg) (5a pav.). HFD vartojimas sukėlė reikšmingą PFK aktyvumo sumažėjimą (atitinkamai 16 proc. ir 17 proc.) pelių patinų ir patelių (5a pav.). HCF1H panaikino HFD sukeltą PFK aktyvumo slopinimą (atitinkamai 153 proc. ir 100 proc.) HFD maitinamų pelių patinų ir patelių (5a pav.). Gydymas HFD ir HCF1 nesukėlė aptinkamo poveikio pelių patinų ir patelių skeleto raumenų CS aktyvumui, lyginant su atitinkama neapdorota ND kontrole (5b pav.). HCF1 neturėjo jokio poveikio ND maitinamų pelių patinų ar patelių skeleto raumenų -HAD aktyvumui (5c pav.). Šėrimas HFD stimuliavo pelių patinų ir patelių -HAD aktyvumą (atitinkamai 47 ir 21 proc.), palyginti su negydyta ND kontrole (5c pav.). HCF1 visomis ištirtomis dozėmis reikšmingai slopino HFD sukeltą stimuliaciją -HAD aktyvumui pelių patinams, o slopinimo laipsnis buvo 62 proc., lyginant su neapdorota HFD kontrole (5c pav.). Gydymas HCF1 nepakeitė reikšmingų -HAD aktyvumo ND ir HFD maitinamų pelių patelių (5c pav.). Nors HCF1H sukėlė reikšmingą skeleto raumenų CPT aktyvumo sumažėjimą (16 proc.) pelių, maitinamų ND, patinų (5d pav.), HCF1 L ir HCF1 M reikšmingai padidino CPT aktyvumą 24 proc. ir 22 proc. pelių patelės, lyginant su ND kontrole (5d pav.). Šėrimas HFD taip pat padidino CPT aktyvumą (atitinkamai 13 proc. ir 18 proc.) pelių patinų ir patelių. HCF1 panaikino HFD sukeltą CPT aktyvumo padidėjimą, o slopinimo laipsnis pelių patinams (visomis tirtomis dozėmis) buvo 72 proc., o pelių patelėms (HCF1 L) – 100 proc. (5d pav.).

5 pav. HCF1 poveikis metabolinių fermentų aktyvumui skeleto raumenyse, išskirtuose iš pelių, maitinamų ND ir HFD. Skeleto raumenų PFK, CS, -HAD ir CPT aktyvumas buvo matuojamas taip, kaip aprašyta skyriuje „Medžiagos ir metodai“. Duomenys išreikšti kontrolės procentais, palyginti su ND kontrole [kontrolinis PFK aktyvumas (mU/mg baltymo): patinas=19,5 ± 1,1, moteris=14,1 ± 0,7 ; kontrolinis CS aktyvumas (mU/mg baltymo): patinas=30,6 ± 1,3, moteris=36,8 ± 3,6; kontrolinis -HAD aktyvumas (mU/mg baltymo): vyriškos lyties=13,5 ± 0,6, patelės=16,8 ± 0,6; kontrolinis CPT aktyvumas (mU/mg baltymo): vyras {{30}}.0 ± 0.3, moteris=3.0 ± { {39}}.1]. Pateiktos reikšmės yra vidurkiai ± SEM su n=15. * Žymiai skiriasi nuo ND kontrolės; # Žymiai skiriasi nuo HFD kontrolės (p <>

3.6. HCF1 poveikis mitochondrijų RCR pelių skeleto raumenyse

HFD nesukėlė aptinkamo poveikio pelių skeleto raumenų mitochondrijų RCR (6 pav.). Gydymo HCF1 sukeltas mitochondrijų atsijungimas pelių skeleto raumenyse, kaip rodo reikšmingas mitochondrijų RCR sumažėjimas tiek ND maitinamiems (61–69 proc. patinams; 66 proc. moterims), tiek HFD maitinamiems (73–78 proc. vyrams; 67). –70 proc. pelių patelių, lyginant su atitinkamais negydytais gyvūnais (6 pav.).

6 pav. HCF1 poveikis mitochondrijų RCR ND ir HFD maitinamų pelių patinų ir patelių skeleto raumenyse. Mitochondrijų RCR buvo matuojamas, kaip aprašyta Medžiagos ir metodai. Duomenys buvo išreikšti procentais, palyginti su ND kontrole. Pateiktos reikšmės yra vidurkiai ± SEM su n=15. * Žymiai skiriasi nuo ND kontrolės; # Žymiai skiriasi nuo HFD valdymo (p <>

3.7. HCF1 poveikis UCP3 ekspresijai mitochondrijose, išskirtose iš pelių skeleto raumenų

Taip pat buvo ištirtas HCF1 poveikis UCP3 ekspresijai, siekiant ištirti galimą mitochondrijų atsiejimo poveikį HCF1-sukeltam svorio netekimui. 2-savaitę gydant HCF1 H, pelių patinų mitochondrijose, išskirtose iš pelių skeleto raumenų, žymiai padidėjo UCP3 lygis, o stimuliacijos mastas buvo 67 proc., lyginant su negydyta kontrole (7 pav.).

7 pav. HCF1 poveikis UCP3 ekspresijai mitochondrijose, išskirtose iš pelių skeleto raumenų. Pelių patinams 14 dienų iš eilės intragastriniu būdu buvo skiriamas HCF1H. Mitochondrijos buvo išskirtos, kaip aprašyta Medžiagos ir metodai, o UCP3 ekspresija buvo išmatuota Western blot analize. Duomenys buvo kiekybiškai įvertinti ir išreikšti kontrolės procentais, palyginti su neapdorota kontrole. Pateiktos reikšmės yra vidurkiai ± SEM su n=4. * Žymiai skiriasi nuo neapdorotos kontrolės.

3.8. HCF1 ir CT palyginimas dėl jų poveikio ND ir HFD maitinamoms pelėms

Siekiant geriau suprasti HCF1 sukeliamo svorio mažinimo poveikio mechanizmą, taip pat buvo tiriamas CT, tulžies rūgščių sekvestrantas, poveikis pelių patinams, maitinamiems ND ir HFD. Tiek KT, tiek HCF1 visiškai slopino ND sukeltą svorio padidėjimą per 8-savaitę eksperimento. Abu gydymo būdai taip pat turėjo slopinamąjį poveikį HFD sukeltam kūno svorio padidėjimui, visceralinių riebalų indeksui, gliukozės / TG ​​/ TC kiekiui plazmoje, taip pat kepenų TG / TC lygiui, o KT poveikis buvo ryškesnis (1 lentelė). Skirtingai nuo HCF1, kuris padidino DTL/MTL santykį plazmoje tik HFD maitinamoms pelėms, KT reikšmingai padidino DTL/MTL santykį plazmoje tiek ND maitinamoms, tiek HFD maitinamoms pelėms (atitinkamai 58 proc. ir 17 proc.), palyginti su atitinkama neapdorota ND kontrolė (1 lentelė). Be to, nors HCF1 padidino PFK aktyvumą tiek ND maitinamų (54 proc.), tiek HFD maitinamų (14 proc.) pelių patinų skeleto raumenyse, palyginti su negydyta ND kontrole, KT nesukėlė jokio aptinkamo poveikio ND maitinamoms pelėms ir pelėms. galėjo tik atkurti HFD sukeltą PFK aktyvumo sumažėjimą iki kontrolinės ND maitinamų pelių vertės (1 lentelė). Gydymas KT ir HCF1 panaikino HFD sukeltą -HAD (atitinkamai 61 proc. ir 60 proc.) ir CPT (atitinkamai 122 proc. ir 72 proc.) padidėjimą pelių patinams (1 lentelė). Nors HCF1 sukėlė mitochondrijų atsiejimą, kaip rodo reikšmingas mitochondrijų RCR vertės sumažėjimas tiek ND, tiek HFD maitinamų pelių patinams, KT nesukėlė aptinkamo poveikio mitochondrijų atsiejimui (1 lentelė).

Norėdami gauti daugiau informacijos, spustelėkite čia, kad gautumėte II dalį

Iš: „Cistanches Herba sumažina riebios dietos sukeltų nutukusių pelių svorio prieaugį, galbūt dėl ​​mitochondrijų atsiejimo“Hoi Shan Wong ir kt.

---funkcinio maisto žurnalas 10 (2014) 292–304