Clr-f ekspresija reguliuoja inkstų imuninę ir metabolinę homeostazę Ⅱ

Inkstų kanalėlių ir glomerulų pažeidimai pelėms, kurioms trūksta Clr-f.

Pirminis patikrinimasClr-f−/− inkstų pjūviai atskleidė keletą pakitimų inkstų žievėje. Įvertintihistopatologiniai pažeidimai, PAS dažytos inkstų sekcijosnuo keturių 12-savaičių WT irClr-f−/− pelės buvo vertinamos aklai (1 pav.).2A). Buvo pastebėtas įvairus proksimalinių ir distalinių kanalėlių pažeidimų buvimasClr-f-/- inkstai, įskaitant kanalėlių epitelio ląstelių nutukimą, branduolio poslinkį ir šepetėlio kraštų praradimą (1 pav.).2A; viršutinės plokštės). Retais atvejais kai kuriose tirtose vietose buvo nustatyta kanalėlių nekrozė, pasireiškusi luminalinių nekrozinių šiukšlių kaupimu ir visišku epitelio praradimu. TheClr-f−/− taip pat eksponuojami inkstaiglomerulų patologijos(Pav.2A; apatinės plokštės), su židininio glomerulų kuokštelių sustorėjimo sritimis, minimalia periglomerulinių fibroblastų proliferacija, susijusia su lengva intersticine fibroze, ir sunkesniais pažeidimais su mezangiolize, kapiliarinėmis aneurizmomis, kurios progresavo iki ryškių glomerulų suirimo ir nuolatinio nekrotizuojančių ląstelių nuolaužų buvimo Bowmano erdvėje. . Glomerulinės patologijos įvertinimas atskleidė reikšmingą skaičiųglomerulų pažeidimaipelėms, kurioms trūksta Clr-f, palyginti su WT vados draugais (1 pav.).2B). Elektroninė mikroskopija atskleidė sunkų podocitų pažeidimą, podocitų pėdos procesų išbėrimą ir reikšmingą podocitų sustorėjimą.glomerulų rūsysmembrana (GBM) (pav.2C,D).

Spustelėkite, jei norite cistanche herba inkstų ligai gydyti

Norėdami įvertinti, ar yra inkstų imunoglobulino nuosėdų, kurios būdingos pastebėtoms patologijoms, IF ir Clr-f−/− inkstų žievės pjūvius nudažėme, kad nustatytų IgA, IgM ir IgG antikūnus (2E pav.). ). Clr-f-/- inkstuose yra aiškus dominuojantis IF glomerulų IgA nuosėdų dažymas, kartu su ryškiomis IgM nuosėdomis ir mažesniu, bet nuosekliu IgG nuosėdų buvimu. Taip pat aptikome panašius IgA, IgM ir IgG tubulointersticinių nuosėdų modelius Clr-f-/- inkstuose. Komplemento baltymas C3 taip pat buvo plačiai aptiktas Clr-f-/- inkstuose, bet ne WT inkstuose (2 pav. F).

Clr-f reikalinga tinkamai inkstų funkcijai.

Norėdami įvertinti Clr-f-/- patologijų įtaką inkstų funkcijai, išanalizavome 12-savaičių senumo patinų Clr-f-/- ir WT vados kraujo ir šlapimo sudėtį. Mes nustatėme nedidelį, tačiau statistiškai reikšmingą šlapimo ir baltymo ir kreatinino (UP/CR) santykio padidėjimą Clr f −/− pelėms, palyginti su WT pelėmis, kurių kreatinino kiekis serume padidėjo, tačiau baltymų kiekis šlapime buvo panašus, palyginti su WT. pelėms, taip pat panašus dalinis natrio (FENa) išsiskyrimas (2G pav.). Atsižvelgdami į vamzdinę Clr-f raišką, įvertinome, ar buvo paveiktas Clr-f-/- pelių kraujospūdis 12-savaitės ir 24-savaitės amžiaus Clr-f-/- pelėms. Clr-f - / - pelėms buvo nežymus, bet ne statistiškai reikšmingas kraujospūdžio sumažėjimas, palyginti su WT vados draugais (2H pav.). Šie rezultatai rodo, kad normalus inkstų filtravimas pasikeičia nesant Clr-f, tačiau Clr-f nerodo reikšmingo vaidmens inkstų elektrolitų homeostazėje ar kraujospūdžio reguliavime.

Clr-f-/- inkstų transkriptas rodo metabolizmo sutrikimą.

Ištirti pagrindinius transkripcijos procesus, atsakingus už Clr-f−/−inkstų patofenotipai, atlikome RNR sekos nustatymą 7-, 13- ir 24-savaičių senumo WT ir Clr-f−/− pelių inkstams. Skirtingai išreikšti genai (DEG) Clr-f-/-pelėse, palyginti su WT pelėmis, buvo tiriami atliekant funkcinę sodrinimo analizę ir transkripcijos patotipo analizę (3A pav.). Mes nubrėžėme praturtintų biologinių procesų sąveikos tinklus iš kiekviename amžiuje nustatytų DEG genų rinkinio sodrinimo analizės (GSEA) (3B pav.). Mūsų analizė parodė, kad 7-savaičių senumo Clr-f−/− pelių inkstuose padaugėjo su ląstelių ciklu susijusių genų. Po 13 savaičių medžiagų apykaitos procesai, pernešimas, ląstelių mirtis ir atsakas į toksines medžiagas buvo praturtinti DEG su padidėjusia ekspresija Clr-f−/− inkstuose, o nejudrių blakstienų surinkimas, DNR transkripcija ir apdorojimas buvo praturtinti iš DEG. sumažėjusi išraiška. 24-Savaitės senumo Clr-f−/− pelių inkstuose taip pat buvo praturtinti medžiagų apykaitos procesai ir pernešimas tarp DEG su padidėjusia ekspresija, taip pat procesai, kurie reguliuojakraujo cirkuliacija, o ląstelių mirtis, imunitetas ir transformuojančio augimo faktoriaus beta (TGF) signalizacijos reguliavimo procesai buvo praturtinti DEG su sumažėjusia ekspresija.

Norėdami užfiksuoti su amžiumi susijusius procesus, kuriais grindžiami Clr-f-/- inkstų defektai, išanalizavome genus, priklausančius keturiems dinaminiams diferencinės ekspresijos modeliams: DEG, kurie didėja su amžiumi, mažėja su amžiumi arba laikinai didėja arba mažėja sulaukus 13 savaičių. Šių grupių biologinių procesų, molekulinių funkcijų ir apibrėžtų kelių funkcinė praturtinimo analizė atskleidė, kad DEG, kurių ekspresija didėja nuo 7 iki 24 savaičių amžiaus Clr-f-/- inkstuose, buvo per daug lipidų metabolizmo keliuose, o DEG buvo susiję su ląstelių substrato sukibimas sumažėjo ekspresija nuo 7 iki 24 savaičių amžiaus (3C pav.). DEG su trumpalaikiu ekspresijos padidėjimu 13 savaičių amžiaus dažniausiai buvo susiję su mitochondrijų kvėpavimu, o DEG su trumpalaikiu ekspresijos sumažėjimu buvo susieti su ląstelių ciklo keliais. Šiose keturiose dinaminės išraiškos kategorijose buvo trys pogrupiai, atspindintys skirtingus raiškos modelius, kuriuose ekspresijos pokyčio dydis nuo 7 iki 13 savaičių buvo panašus, didesnis arba mažesnis nei pokyčio laipsnis tarp 13 ir 24 savaičių amžiaus. , atitinkamai (3C pav.). Praturtinti kiekvieno genų pogrupio biologiniai procesai ir molekulinės funkcijos iš esmės skyrėsi per keturis pagrindinius nustatytus dinaminės ekspresijos modelius, bet atspindėjo persidengiančius arba susijusius ląstelių procesus kiekvienoje grupėje. Apskritai, Clr-f-/- inkstų transkripcijos profilis atskleidžia dinamišką ir besivystantį ląstelių metabolizmo, funkcijos ir homeostazės sutrikimą.

Clr-f-/- pelės kaupia riebalus.

Nustatytas su amžiumi susijęs DEG padidėjimas, susijęs su lipidų metabolizmu, paskatino mus ištirti WT ir Clr-f-/- pelių ekspresijos duomenis apie žinomus su lipidais susijusius genus. Dauguma šių genų nuorašų buvo padidėjęs Clr-f-/- pelėms (4 pav. A) ir suderintas su pilvo ir perirenalinių riebalų sankaupų padidėjimu Clr-f-/- pelėms 24 savaičių amžiaus (4B pav.). Nors Clr-f-/- ir WT pelių kūno svoris buvo panašus (4C pav.), Clr-f-/- pelių pilvo riebalų svoris buvo žymiai didesnis, o tai rodo, kad riebalinis audinys sudarė didesnę Clr-f dalį. −/− pelės kūno masė (4D pav.). Mes taip pat aptikome negimdinį lipidų kaupimąsi Clr-f-/- pelių inkstuose, kaip rodo padidėjęs Clr f -/- pelių inkstų ORO dažymas (4 pav. E). Kadangi perirenaliniai riebalai ir intersticinių riebalų buvimas inkstuose yra susiję su CKD21 metaboliniais rizikos veiksniais, iškėlėme hipotezę, ar Clr-f apsaugo nuodiabeto etiologijosarbasusiję medžiagų apykaitos sutrikimaisusijęs suLIL.

Clr-f-/- pelių inkstai turi transkripcijos panašumų ir skirtumų su žmogaus inkstų liga.

Negimdinis lipidų kaupimasis inkstuose yra susijęs su uždegimu, fibroze, mitochondrijų disfunkcija ir ląstelių mirtimi22, 23. Norėdami įvertinti, ar Clr-f-/- inkstai yra panašūs į nustatytas inkstų ligas, palyginome Clr-f-/- inkstų transkripcijos profilį su paskelbtais inkstų audinio ir (arba) kraujo ekspresijos profiliais.žmonių donorų, sergančių CKD, diabetinė nefropatija(DN), vilkligės nefritas (LN) arbaIgA nefropatija(IgAN) (5A pav.). Clr-f−/− inkstų transkripcijos profiliai susitelkę su IgAN pacientų krauju ir DN pacientų glomerulų audiniu (5B pav.). Clr-f-/- ir IgAN pacientų ekspresijos profilių palyginimas funkcinio praturtinimo analize parodė lygiagretų genų ekspresijos padidėjimą, susijusį su ląstelių reaktyviosiomis oksidų reakcijomis, ląstelių mirtimi, proteolize ir amido metabolizmu, taip pat bendrą genų ekspresijos sumažėjimą, susijusį su membrana. sekimo procesai, citoskeleto organizavimas, PI3K-AKT signalizacija, ląstelių ciklas ir DNR/RNR metabolizmas (5C pav.). Ir atvirkščiai, Clr-f-/- inkstų ekspresijos rinkiniai skyrėsi nuo IgAN, padidindami genų, priklausančių AGE-RAGE, ErbB, TNF/MAPK ir Rap1 signalizacijos keliams, ekspresiją ir vazopresino reguliuojamo vandens reabsorbcijos bei lizosomų aktyvumo procesus. ir sumažėjusi genų ekspresija priklausė adherenų jungties, nejudrių blakstienų surinkimui, ląstelių ciklui, DNR metabolizmui ir TGF signalizacijai. Šie radiniai rodo, kad, kaip ir IgAN, ląstelių augimo kontrolės, homeostazės ir atstatymo procesai taip pat yra nereguliuojami Clr-f−/− inkstuose, o pakinta medžiagų apykaita, streso signalai irepitelio struktūrair funkcija būdingi tik Clr-f−/− inkstams.

Inkstai, kuriems trūksta Clr-f, pasižymi uždegimu ir imuninių ląstelių infiltracija.

Atsižvelgdami į žinomus Clr baltymų imunomoduliacinius vaidmenis, ištyrėme imuninių ląstelių indėlį įClr-f−/− inkstų patologija. Išanalizavome 12-savaičių senumo WT ir Clr-f−/− pelių sveikų inkstų imuninių ląstelių sudėtį srauto citometrijos metodu. Mūsų analizė atskleidė reikšmingą neutrofilų, T ląstelių ir B ląstelių skaičiaus padidėjimą, tačiau inkstų NK ląstelių, ILC ar makrofagų skaičiaus skirtumo nesiskyrė (6A pav.). Imuninių ląstelių periglomerulinio pasiskirstymo WT ir Clr-f−/− inkstų žievėje analizė pagal IF, pastebėjome CD45+ ląstelių sankaupas glomeruluose (6B pav.). Pažymėjus CD11c, F4/80, NKp46 ir CD3, žymenis, rodančius atitinkamai DC, makrofagus, NK/ILC ir T ląsteles, nustatytas intraglomerulinis CD11c+ ląstelių kaupimasis (6C pav.) ir F4/{{ kaupimasis periglomeruluose. 16}}, NKp46+ ir CD3+ ląstelės Clr-f−/− inkstuose (6D pav.). Vizualinis imuninių ląstelių populiacijų, aptiktų glomeruluose, kiekybinis įvertinimas patvirtino, kad Clr-f-/- pelių inkstuose labai padidėjo kiekvienos iš šių imuninių ląstelių populiacijų, palyginti su WT pelėmis (6E pav.). Imuninį infiltraciją sergant autoimunine inkstų liga sustiprina IL-12 sekrecija kanalėliuose, todėl IFN išskiriančios ląstelės yra pažeistos24–26. Todėl mes ištyrėme WT ir Clr-f−/− inkstus, ar nėra šių citokinų, ir pastebėjome, kad Clr-f−/− inkstų kanalėlių ląstelėse nusidažė IL-12 ir IFN (6F pav., G).

Kadangi manoma, kad Clr-f yra ląstelių sveikatos signalas NKR-P1G ekspresuojančioms ląstelėms, iškėlėme hipotezę, kad inkstų imuninė infiltracija Clr-f-/- pelėse yra iš dalies dėl padidėjusio NKR-P1G ekspresuojančių limfocitų buvimo. inkstuose. NKR-P1G ekspresijos analizė inkstų TCR + T ląstelėse ir NK1.{12}} WT ir Clr f −/− pelių NK ląstelės tėkmės citometrijos metodu neparodė skirtumo tarp NKR-P1G dažymo inkstų NK vidutinio fluorescencijos intensyvumo. ląstelių, bet padidėjęs NKR-P1G dažymas inkstų T ląstelėse Clr-f-/- pelėse (6H pav.)

5 pav. Clr-f−/− pelių ir žmogaus CKD transkripcijos profilių palyginimas. (A) 15 žmogaus inkstų sutrikimų ir 13-savaičių senumo Clr-f-/- pelių genų ekspresijos profilio duomenų rinkinių lentelė. Žmogaus raiškos profilio duomenų rinkinių šaltinių atskaitos šaltinis nurodomas stulpelyje Tyrimas. (B) Panašumo matrica, rodanti hierarchinį diferencinių genų ekspresijos profilių grupavimą skydelyje (A). Raudona brūkšninė linija dendrogramoje rodo matricos klasterių atskyrimo lygį. (C) 4531 DEG palyginimas (Log2 FC; Padj.<0.05) of 13-week-old Clr-f−/− mice (group 0) and IgAN patients. Gene set enrichment from 4 DEG clusters: (I) upregulated in both Clr-f−/− mice and IgAN patients, (II) upregulated in Clr-f−/− mice and downregulated IgAN patients, (III) downregulated in Clr-f−/− mice, and upregulated IgAN patients, and (IV) downregulated in both Clr-f−/− mice and IgAN patients. Heat maps were constructed using Morpheus (https://sofware.broadinstitute. org/morpheus).

Clr-f trūkumas sukelia nuo T ir B nepriklausomą autoimunitetą ir patogenezę. Norėdami išsiaiškinti imuninės sistemos indėlį į Clr-f-/- pelių inkstų patologiją, mes ištyrėme Clr-f-/- peles, kurioms taip pat trūko T ir B ląstelių, naudodami Rag{4}}trūkumą turinčią pelių padermę. (Rag1−/−Clr-f−/−). Kadangi Rag1-/-Clr-f-/- pelėms trūksta antikūnų, galėtume įvertinti su Clr-f susijusią patogenezę nesant imunoglobulino nusėdimo. Rag1−/−Clr-f−/− inkstų analizė atskleidė glomerulų pažeidimus, rodančius lengvą proliferacinę glomerulopatiją ir glomerulų fibrozės sritis (7A pav.). Glomerulinės patologijos įvertinimas parodė žymiai didesnį glomerulų skaičių su pažeidimais Rag1−/−Clr-f−/−, palyginti su Rag1−/− pelėmis (7B pav.). Įvertinus Rag1−/−Clr-f−/− inkstų pjūvius, nustatytas padidėjęs endokapiliarų proliferacija, pusmėnuliai, glomerulosklerozė arba židininė segmentinė sklerozė, intersticinė fibrozė ir kanalėlių atrofija, o tai žymiai padidino mezangialinių ląstelių susidarymą (7C pav.) .

Norėdami įvertinti T ir B ląstelių indėlį į lipidų kaupimąsi, pastebėtą Clr-f-/-pelėse, išmatavome bendrą kūno svorį ir pilvo riebalų svorį Rag1-/-Clr-f-/-, palyginti su Rag1-/- pelėmis. Te Rag1−/−Clr-f−/− kūno svoris buvo žymiai mažesnis nei Rag1−/− kontrolinių (7D pav.), o pilvo lipidų svoris buvo žymiai padidėjęs (7E pav.), nors ir mažesniu mastu, nei pastebėta Clr-f-/- pelėms, palyginti su WT pelėmis (174 mg riebalų, palyginti su 274 mg vidutiniškai).

Galiausiai, norėdami ištirti imuninės sistemos veiksnius, prisidedančius prie šių inkstų defektų, ištyrėme Rag1−/−Clr-f−/− inkstus, ar nėra IL-12 ir IFN bei inkstus infiltruojančių imuninių ląstelių. IF Rag1−/−Clr-f−/− inkstų analizė atskleidė padidėjusį IL-12 ir IFN kiekį (7F, G pav.). Taip pat stebėjome platų CD45+ ląstelių periglomerulinį kaupimąsi Rag1−/−Clr-f−/− inkstuose (7H pav.), kurį, kaip nustatyta, sudaro CD11c+, F4/80+ ir Nkp46+ langeliai. Šie radiniai rodo, kad nuo T ir B ląstelių nepriklausomi mechanizmai yra pagrindiniai inkstų patologijos tarpininkai pelėms, kurioms trūksta Clr-f.

„Wecistanche“ – didžiausio cistansų eksportuotojo Kinijoje – pagalbinė tarnyba:

El. paštas:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp / Tel:+86 15292862950

Įsigykite daugiau specifikacijų:

https://www.xjcistanche.com/cistanche-shop

GAUKITE NATŪRALIŲ EKOLOGIŠKŲ CISTANČŲ EKSTRAKTO SU 25% ECHINAKOZIDU IR 9% AKTEOZIDU NAUDOJANT INKŠTŲ INFEKCIJĄ