Runing II poveikis persodinto naviko augimui ir metastazėms pelėms, turinčioms pieno vėžį, ir jo mechanizmui

Tikslas:

Ištirti Runing II (kinų augalinio preparato nuo pieno vėžio) poveikį persodintų krūties vėžio MA-891- navikų, turinčių TA2 pelių, augimui ir metastazėms bei jo mechanizmui. Metodai: TA2 pelių, turinčių metastazių plaučiuose, krūties vėžio MA-891 ląstelių padermės persodinto naviko modelis buvo sukurtas siekiant stebėti Runing II poveikį persodinto naviko augimui ir metastazėms. Imunohistocheminis metodas ir vaizdo analizė buvo pritaikyti kraujagyslių endotelio augimo faktoriaus (VEGF), kraujagyslių endotelio augimo faktoriaus receptorių (VEGFR), mikrokraujagyslių skaičiaus (MVC) ir mikrokraujagyslės ploto (MVA) lygiui nustatyti.

Rezultatai: Bėgimo II grupėje auglio svorio slopinimo laipsnis ir plaučių metastazių slopinimo dažnis buvo atitinkamai 37,3 ir 65,4 proc., naviko augimas ir plaučių metastazės buvo akivaizdžiai slopinamos; Ir VEGF ir VEGFR, MVC ir MVA lygiai buvo žymiai sumažėję, palyginti su auglių turinčios kontrolinės grupės (P<0.05). Conclusion: The Chinese herbal preparation Running II can inhibit the metastasis of tumors by inhibiting angiogenesis, and the mechanism is possibly related to the down-regulation of VEGF and VEGFR expression.

Be to, tuo pačiu metu tyrinėdami nustatėme, kad Cistanche ežiuolė turi priešnavikinį poveikį. Taikant echinakozidą priešnavikiniams vaistams, pagal šį išradimą į reakcijos tirpalą pirmiausia pridedama MTH1, neorganinės pirofosfatazės ir dGTP (100mM pH8,0 Tris-acto rūgšties, 40 mM NaCl, 10 mM magnio acetatas, 0,005 proc. Tween20 ir 1 mMDTT) Taikant šį metodą, fermentas ir substratas buvo inkubuojami kambario temperatūroje 1 valandą, o po to buvo pridėta 25 ul malachito žaliojo tirpalo, kad būtų nutraukta reakcija. Sugertis buvo aptikta esant 630 nm, naudojant BIO-RAD iMark mikroplokštelių skaitytuvą. Rezultatai parodė, kad echinakozidas turėjo reikšmingą slopinamąjį poveikį MTH1 fermentų aktyvumui; Antra, echinakozido poveikis naviko ląstelėms ląstelių lygiu buvo aptiktas MTT tyrimu, o rezultatai parodė, kad echinakozidas gali žymiai slopinti SW480 gaubtinės žarnos vėžio ląstelių ir U2OS žmogaus osteosarkomos ląstelių augimą, o šis išradimas slopino echinakozido augimą. MTH1, specifinis fermentas, palaikantis išgyvenimą navikinėse ląstelėse, veda prie oksiduotų nukleotidų įtraukimo į DNR, sukeldamas mirtinus DNR dvigubos grandinės pertraukas vėžio ląstelėse ir taip sukeliantis priešnavikinį poveikį. Nauja medicinos programa padės ateityje kurti naujus vaistus nuo vėžio.

Spustelėkite cistanche efektų produktą

Raktiniai žodžiai:

pieno liaukos navikas; angiogenezė; kraujagyslių endotelio augimo faktorius (VEGF); Running II (kiniškas augalinis preparatas nuo krūties vėžio)

Pieno vėžys yra piktybinis navikas, keliantis didelę grėsmę moterų sveikatai, o sergamumas tarp moterų piktybinių navikų užima pirmą vietą ir kasmet didėja. Nors jo terapiniai metodai padarė tam tikrą pažangą, krūties vėžiu sergančių pacientų ilgalaikis išgyvenamumas nepadidėjo dėl invazinio navikų augimo ir metastazių. Navikų angiogenezė yra pagrindinė auglių augimo, invazijos ir metastazių sąlyga.

Todėl navikų angiogenezės slopinimas yra veiksmingas būdas užkirsti kelią navikų susidarymui ir vystymuisi bei pailginti paciento gyvenimą.1 Šiame tyrime kiniško vaisto Running II mechanizmas, turintis qi papildymo ir yin maitinimo, TA2 pelių, turinčių metastazių plaučiuose, krūties vėžio persodinto naviko MA-891 angiogenezės ir jos reguliavimo veiksnių reguliavimas, reguliavimas ir pastojimo kraujagyslės, masės atskyrimas ir detoksikacija, slopinant naviką ir antimetastazes.

MEDŽIAGOS

Šešiasdešimt SPF patelių TA2 pelių, sveriančių (20±2) g, kurių amžius buvo 6-8 sav., buvo įsigytos iš Tiandzino medicinos mokslų universiteto laboratorinių gyvūnų skyriaus. Pelės pieno vėžio MA-891 ląstelių štamą tiekė prof. Luo Liqin iš Kinijos medicinos mokslų akademijos Navikų instituto Patologinės laboratorijos.

Runing II susideda iš Sheng Huang Qi (Radix Astragali Mongolici), Shan Ci Gu (Pseudobulbus Cremastrae), Tai Zi Shen (Radix Pseudostellariae), Gou Qi Zi (Fructus Lycii), E Zhu (Rhizoma Curcumae Phaeocaulis), Yi Yi Ren ( Semen Coicis), Yin Yang Huo (Herba Epimedii), Dang Gui (Radix Angelicae Sinensis) ir kt., kurių dozių santykis yra 1,67: 1,67: 1,33: 1,33: 1,33: 1,33: 1,33: 1, kurie buvo paruošti nuoviru. Farmacijos skyrius, Longhua ligoninė, pagal tradicinę techniką ir saugomas 4 °C, kad būtų galima naudoti; Ciklofosfamidą (CTX, 200 mg/ampulėje, filialo numeris: 981104) ir tamoksifeną (TAM) gamino Shanghai Hualian Pharmaceutical Co. Ltd.; Įprastą fiziologinį tirpalą gamino Shanghai Fumin Pharmaceutical Co.

Kraujagyslių endotelio augimo faktoriaus (VEGF) polikloninis antikūnas (darbinis skiedimas 1:25–1:50), kraujagyslių endotelio augimo faktoriaus receptorius (VEGFR, darbinis skiedimas 1:30–1:50) ir polikloninis antikūnas FVIIIAg (darbinis praskiedimas 1:50). ) buvo įsigyti iš Santa Cruz Biotechnology Inc.; Antrasis EnVision antikūnas, triušio anti-žiurkės VEGF antikūnas, ožkos anti-triušio FVIII Ag antikūnas ir ožkos anti-triušio VEGFR antikūnas ir EnVision rinkinys buvo įsigyti iš Dako Co., Danija; 3,3- diaminobenzidinas (DAB) buvo įsigytas iš Šanchajaus Huamei bioinžinerijos gamyklos.

METODAI

Gyvūnų modelio kūrimas

Gyvūnų modelis buvo sukurtas remiantis Luo ir Gao ir kt. 2,3 metodais. Buvo atrinktos in vitro kultivuotos pelės pieno vėžio MA-891 ląstelės logaritminėje išgyvenimo fazėje ir nustatyta ląstelių koncentracija 1x107 /ml. Aseptinėmis sąlygomis žinduolių vėžio ląstelės buvo pasėtos į TA2 pelių poodinę dešinės pažasties dalį (0,2 ml/pelei, ty 2X106 ląstelės/pelei).

Gyvūnų grupavimas ir vartojimo būdai

Praėjus dviem dienoms po inokuliacijos, pelės buvo atsitiktinai suskirstytos į 4 grupes, po 15 pelių kiekvienoje grupėje. 1) Kontrolinė grupė, turinti auglį: 0.4 ml normalaus fiziologinio tirpalo buvo švirkščiama į skrandį vieną kartą per dieną, penkis kartus per savaitę. 2) II bandymo grupė: II bandymas buvo praskiestas įprastu fiziologiniu tirpalu ir 0,4 ml šio skiedimo, atitinkančio 48 g·kg{{10}·d-1, kuris buvo apskaičiuotas pagal pridedamą lentelę „Žmogaus ir gyvūno kūno paviršiaus plotų perskaičiavimo lentelė“ „Kiniškų vaistų farmakologijos tyrimų metodika“4 buvo skiriama į skrandį vieną kartą per dieną, penkis kartus per savaitę. 3) CTX kontrolinė grupė: apie Jiang Bo vartotą dozę, 5 CTX buvo praskiestas įprastu fiziologiniu tirpalu, o 0,4 ml atitinka 50 mg·kg-1·d-1 švirkščiamas į skrandį kartą kas antrą dieną, tris kartus per savaitę. 4) TAM kontrolinė grupė: TAM buvo skiedžiamas įprastu fiziologiniu tirpalu ir 0,4 ml, atitinkantis 2,7 mg·kg-1·d-1, buvo švirkščiama į skrandį vieną kartą per dieną, penkis kartus per savaitę. Visoms keturioms grupėms vaistai buvo skiriami 3 savaites.

Mėginių ėmimas

22 dieną po įvedimo pelės buvo numarintos išnirstant kaklo slankstelius ir pasvertos. Tada buvo paimta ir atitinkamai pasverta naviko masė ir plaučiai. Tikrasis pelės kūno svoris=svertinis kūno svoris – naviko svoris. Pilki mazgai plaučių paviršiuje, ty metastazių židiniai, buvo skaičiuojami plika akimi. Auglio masė buvo patalpinta į 10 procentų neutralų formaldehido tirpalą fiksavimui, po to buvo įterptas parafinas, per plonas pjūvis, imunohistocheminis dviejų pakopų įtempimas ir VEGF, VEGFR, mikrokraujagyslių skaičiaus (MVC) ir mikrokraujagyslių ploto (MVA) nustatymas.

Naviko svorio slopinimo greitis

Naviko slopinimo laipsnis=(kontrolinės grupės vidutinis naviko svoris po gydymo – vidutinis vaistinių preparatų grupės naviko svoris po gydymo) / vidutinis kontrolinės grupės naviko svoris po gydymo × 100 proc.

Plaučių metastazių slopinimo greitis

Plaučių metastazių slopinimo dažnis=(kontrolinės grupės vidutinis plaučių metastazių mazgo skaičius – vidutinis vaistų grupės plaučių metastazių mazgo skaičius) / kontrolinės grupės vidutinis metastazių plaučiuose mazgo skaičius x 100 proc.

Imunohistocheminis dviejų pakopų dažymas

Buvo paimta 4 μm parafino dalis, po to įprastas deparafinas su ksilenu, dehidratacija gradientu ir plovimas PBS, 5 min. x 3 kartus; sekcija buvo panardinta į 0.01 mol/L, pH 6,0 citratinis buferis, įdėtas į 98 °C mikrobangų krosnelę 10 min., kad būtų atkurtas antigenas, ir natūraliai atvėsinta kambario temperatūroje, paėmus iš Mikrobangų krosnelė; pirmojo antikūno lašinimas (aukščiau minėtas antikūnas ir atitinkamo antikūno praskiedimas), 37 °C, 90 min., plovimas PBS, 5 min x 3 kartus; lašinamas antrasis Envasion antikūnas, kambario temperatūroje 60 min., plovimas PBS, 5 min x 3 kartus; lašinamas naujai paruoštas DAB spalvą išryškinantis tirpalas, 3–10 min. kontroliuojant besivystančią spalvą po mikroskopu, 45 s kontradažymas su campeachy, skalavimas vandeniu iš čiaupo, džiovinimas pūstuvu, tvirtinimas neutralia guma. Ląstelė su rudai geltonų arba juodai rudų granulių citoplazma buvo laikoma teigiama. Žinoma teigiama krūties vėžio dalis buvo naudojama kaip teigiama kontrolė, o ta, kurioje pirmasis antikūnas buvo pakeistas PBS buferiu, buvo naudojama kaip neigiama kontrolė.

Vaizdo analizė

Naudota ACE vaizdo kamera (skirta 930 eilučių) ir LEICAQ500W vaizdo analizatorius bei LEICA pilnai automatinė vaizdo analizės sistema. Mikroskopu x 200 kiekvienoje sekcijoje atsitiktine tvarka buvo atrinkti 2 regėjimo laukai VEGF nustatyti arba 3 regėjimo laukai VEGFR ir MVA nustatyti, ir visose grupėse apskaičiuotas teigiamo ploto procentas nuo viso regėjimo lauko ploto. . Norint nustatyti MVC, kiekviename skyriuje mikroskopu buvo atrinkti 5 regionai su turtingiausiomis kraujagyslėmis po 100 x 100, tada pagal x 400 buvo suskaičiuoti mikrokraujagyslės kiekviename regėjimo lauke iš 5 nepersidengiančių regionų ir buvo naudojamas vidurkis. kaip vidutinis naviko mikrokraujagyslių skaitiklis (MVC).

Statistinis metodas

Naudota programinė įranga SPSS8.0, o rodiklių palyginimui naudotas chi kvadrato testas, o vidurkių palyginimui – t testas arba vienpusė ANOVA.

REZULTATAI

Navikus slopinantis ir antimetastazinis bėgimo II poveikis persodintam krūties vėžio MA-891-augliui, turinčioms TA2 pelėms, turinčioms metastazių plaučiuose

It was shown in Table 1 that the tumor weight inhibition rate was 37.3% in the Runing II group and 86.2% in the CTX control group, both tumor inhibition rates being >30 proc., su dideliu skirtumu (abu P<0.05) as compared with both tumor-bearing control group and TAM control group, indicating that both Runing II and CTX have a certain tumor-inhibiting effect. And there was a significant difference (P<0.05) between the Runing II group and the CTX control group in the tumor inhibition rate, indicating that the tumor-inhibiting effect of Runing II was lower than that of CTX. The lung metastasis inhibition rate was 65.4% in the Runing II group and 43.9% in the CTX control group, with significant difference (both P<0.05) as compared with a tumor-bearing control group and TAM control group, indicating that both Runing II and CTX have a certain tumor metastasis-inhibiting action. And there was a significant difference between the Runing II group and the CTX control group (P<0.05) in the lung metastasis inhibition rate, suggesting that the anti-metastasis action of Runing II is superior to that of CTX.

II bėgimo poveikis VEGF ir VEGFR ekspresijai persodintame MA-891- pelių, turinčių TA2, auglyje

Kaip parodyta 2 lentelėje, VEGF ir VEGFR ekspresijos tiek Running II grupėje, tiek CTX kontrolinės grupės buvo žymiai mažesnės nei auglių turinčių kontrolinių grupių (P<0.05), with a significant difference between the two. In the Running II group, the VEGF and VEGFR expressions were not significantly different from those in the CTX control group (P>0.05), VEGF ekspresija buvo žymiai mažesnė nei TAM kontrolinės grupės (P<0.05), and the VEGFR expression was similar to that in the TAM control group (P>0.05). In the CTX control group, the VEGF and VEGFR expression was lower than those in the TAM control group. In the TAM control group, the VEGF expressions were similar to that in the tumor-bearing control group (P>0.05), o VEGFR ekspresija buvo mažesnė nei auglių turinčios kontrolinės grupės (P<0.05).

II bėgimo poveikis persodinto naviko MVA ir MVC pelėms, turinčioms MA{0}} TA2

Kaip parodyta 3 lentelėje, MVA ir MVC lygiai persodintame vėžyje vaistų grupėse buvo žymiai mažesni nei kontrolinėje grupėje, kurioje buvo auglys (P<0.05); in the Running II group, the levels of MVA and MVC were significantly higher than those in the CTX control group (P<0.05), the level of MVC was lower than that in the TAM control group (P<0.05), and the MVA level was similar to that in the TAM control group (P>0.05).

DISKUSIJA

Tradicinė kinų medicina teigia, kad naviko atsiradimą ir vystymąsi lemia visapusiškas idiopatinių ir empatinių veiksnių poveikis, tačiau pirmiesiems tenkantis stresas. Ankstesniame klinikiniame tyrime prof. Lu ir Tangas laikėsi nuomonės, kad pagrindinės naviko atsiradimo priežastys yra vital-qi trūkumas viduje ir magistralinių bei gimdymo kraujagyslių disharmonija, o vidinė invazija, vėžio patogenų judėjimas ir plitimas yra pagrindinės sąlygos. pieno liaukos vėžio augimą ir metastazę.6 Todėl gydydami jie pasisako už gyvybiškai svarbaus qi maitinimą ir masių pašalinimą. Running II – tai kiniška žolelių formulė, kuri apibendrinta per ilgametę klinikinę praktiką pagal gydymo principą – pirmiausia stiprinti organizmo atsparumą, o paskui – pašalinti patogeninius veiksnius. Formulėje Sheng Huang Qi (Radix Astragali Mongolici), Tai Zi Shen (Radix Pseudostellariae), Gou Qi Zi (Fructus Lycii), Yin Yang Huo (Herba Epimedii) yra suverenios sudedamosios dalys, kurios papildo qi ir maitina yin, reguliuoja. magistralės ir pastojimo kraujagyslės, kurios atitinka įprastas krūties vėžio ypatybes, tokias kaip qi ir yin trūkumas ir magistralinių bei pastojimo kraujagyslių disharmonija. Kliniškai ši formulė leidžia pasiekti akivaizdų efektą – prailgina išgyvenamumą, gerina gyvenimo kokybę, stabilizuoja naviko židinį ir užkerta kelią vėžio metastazėms.

Šiame tyrime nustatytas krūties vėžio MA-891 ląstelių padermės, persodinto TA2 pelių, turinčių metastazių plaučiuose, modelis ir buvo stebimas Running II poveikis solidinio naviko augimui ir plaučių metastazėms bei nustatyta, kad auglys turi reikšmingų skirtumų. slopinimo greitis ir plaučių metastazių slopinimo greitis tarp Running II grupės ir auglio turinčios grupės bei tarp Running II grupės ir CTX kontrolinės grupės, rodantis, kad Running II turi akivaizdžių naviko augimo slopinimo ir antimetastazių funkcijų. Be to, tamoksifenas (TAM) neturi akivaizdžios funkcijos slopinti naviko augimą ir kovoti su metastazėmis pavyzdinėse pelėse, nes yra panašus į rezultatą, kad pieno liaukos vėžys MA-891 yra ER ląstelių padermė, ir ataskaita apie tiesioginį poveikį. mažos TAM koncentracijos užsienyje.7

Navikas yra tipiška nuo kraujagyslių priklausoma liga, o jo augimas, infiltracija ir metastazės priklauso nuo angiogenezės. Tuo pačiu metu neovaskuliarizacija vėl suteikia metastazių kanalą naviko ląstelėms, sudarydama palankias sąlygas naviko augimui, metastazei ir difuzijai. 8, 9 VEGF yra proangiogeninis veiksnys, stipriausiai, unikaliai ir specifiškai veikiantis kraujagyslių endotelio ląsteles, o daugelis navikų ląstelių gali išskirti VEGF, kuris padidina kraujagyslių pralaidumą ir tiesiogiai veikia kraujagyslių endotelio ląsteles, prisijungdamas prie VEGF receptorių. stimuliuoja jo dalijimąsi ir dauginimąsi, skatina naviko angiogenezę ir daro įtaką mikrokraujagyslių skaičiui, skatina naviko augimą ir metastazes.10,11 Daugumos naviko ląstelių VEGF ekspresija yra didelė, o normaliuose audiniuose – tik nedidelis organų skaičius, pvz. inkstai, kiaušidės ir kt. turi didesnę VEGF ekspresiją. Todėl kai kurie mokslininkai mano, kad VEGF gali būti naudojamas kaip naviko metabolizmo ir metastazių žymenys12 ir idealesnė tikslinė dalis, blokuojanti neoangiogenezę navikuose13 ir trukdanti kraujagyslių reguliavimo veiksniams navikų bei jų veikiančioms jungtims, reguliuoti angiogenezės faktorių raišką ir angiogenezės slopinimas gali kontroliuoti naviko augimą ir metastazes.

Šio tyrimo rezultatai rodo, kad „Runing II“ gali sumažinti VEGF ir VEGFR ekspresiją, kad galbūt blokuotų VEGF sukeltos migracijos ir endotelio ląstelių proliferacijos signalo laidumą ir toliau slopintų navikų angiogenezę, todėl pasireikštų antineoplastinis ir antimetastazinis poveikis. .

Ankstesni tyrimai parodė, kad augant piktybiniams navikams, pernelyg greitas audinių augimas neišvengiamai sukėlė rimtą vietinio audinio anoksiją, o anoksija gali paskatinti VEGF mRNR sintezę ir sulėtinti VEGF mRNR skilimą, kad sukeltų naviko genezę. daug vietinių naujų kapiliarinių kraujagyslių.14,15 Stebėdami imunohistochemiškai teigiamai nusidažytas ląsteles, autoriai nustatė akivaizdžią VEGF ekspresiją mirštančių nekrozinių naviko ląstelių citoplazmoje, priešingai, aktyvios proliferacijos navikinėse ląstelėse VEGF ekspresija buvo mažesnė arba jos nėra. , kuris gali būti susijęs su didesniu anoksiją sukeliančiu faktoriumi navikinėse ląstelėse, kaip nurodyta Talks KL ir kt. pranešime.16 Running II sudėtyje yra Dang Gui (ᔧᔦ Radix Angelicae Sinensis), E Zhu (Rhizoma Curcumae Phaeocaulis), Sheng Yi Yi Ren (Semen Coicis), Shan Ci Gu (Pseudobulbus Cremastrae) ir kt., kurie aktyvina kraujotaką, pašalina skreplius ir pašalina drumstumą. Jie slopina VEGF sintezę ir sekreciją, galbūt pagerindami vietinę naviko mikrocirkuliaciją, padidindami deguonies tiekimą į naviko ląsteles, taigi, slopindami naviko augimą, kad būtų galima kovoti su metastazėmis.

NUORODOS

1.Folkman J. Angiogenezė ir krūties vėžys. J Clin Oncol 1994; 12: 441-443.

2. Folkman J. Angiogenezės tyrimai: nuo laboratorijos iki klinikos. Forumas (Genova) 1999; 9: 59-62.

3. Potgens AJ. Kraujagyslių pralaidumo faktoriaus ekspresija įtakoja naviko angiogenezę žmogaus melanomos linijose, ksenografuotose plikoms pelėms. Am J Pathol 1995; 5: 775-782.

4. Sauter ER, Nesbit M, Watson JC ir kt. Kraujagyslių endotelio augimo faktorius yra naviko invazijos ir metastazių rinka galvos ir kaklo plokščialąstelinėse karcinomose. Clin Cancer Res 1999; 5: 775-782.

5. Warren RS, Yuan H, Matli MR ir kt. Kraujagyslių endotelio augimo faktoriaus reguliavimas dėl hipoksijos. J Biol Chem 1996; 271: 2746-2753.

6. Levy AP, Levy NS, Goldberg MA. Kraujagyslių endotelio augimo faktoriaus reguliavimas po transkripcijos hipoksija. J Biol Chem 1996; 271: 2746-2753.

7. Pokalbiai KL, Turley H, Gatter KC ir kt. Hipoksijos sukeliamų faktorių HIF-1 alfa ir HIF-2 alfa ekspresija ir pasiskirstymas normaliuose žmogaus audiniuose, vėžiuose ir su navikais susijusiuose makrofaguose. Am J Pathol 2000; 157: 411-421.

For more information:1950477648nn@gmail.com