Maistinio glicino papildų poveikis paprastųjų karpių, Cyprinus Carpio, augimui, imunologiniams ir eritrocitų antioksidantų parametrams

Paprasta santrauka:

Amino rūgštys vaidina įvairius svarbius vaidmenis žuvų augimui ir sveikatai. Tarp jų nepakeičiamos aminorūgštys buvo mažiau ištirtos akvakultūroje, tačiau turi daug fiziologinių vaidmenų. Glicinas yra nepakeičiama aminorūgštis, kuri dalyvauja glutationo struktūroje ir taip pat dalyvauja žuvų antioksidacinėje sistemoje. Be to, glicinas stimuliuoja imuninę sistemą. Šis tyrimas rodo, kad 8 savaičių šėrimas ėdalu, papildytu 5 g/kg glicino, gali pagerinti paprastųjų karpių augimą, eritrocitų stabilumą ir humoralinį bei gleivinį imunitetą. Taigi, dabartiniai rezultatai gali būti naudojami karpių gamyboje, siekiant palaikyti didesnį augimą ir sveikatą.

Santrauka:

Ištirtas glicino papildų, 0 (kontrolė), 5 (5 GL) ir 10 (10 GL) g/kg, poveikis augimo veiksmingumui, hematologiniams parametrams, eritrocitų antioksidaciniam pajėgumui, humoraliniam ir gleivinės imunitetui. paprastųjų karpių, Cyprinus carpio. Po aštuonių šėrimo savaičių 5 GL gydymas žymiai pagerino augimo efektyvumą ir pašaro veiksmingumą, palyginti su kontroliniu gydymu. Raudonųjų kraujo kūnelių (RBC) ir baltųjų kraujo kūnelių (WBC) skaičius, hemoglobino, hematokrito, neutrofilų ir monocitų skaičius / procentai, RBC sumažintas glutationo (GSH) kiekis ir odos gleivinės šarminės fosfatazės, peroksidazės, proteazės ir lizocimo aktyvumas buvo panašus. glicinu apdorotose žuvyse ir žymiai didesnis nei kontrolinis gydymas. Glicinu gydytų žuvų kraujyje limfocitų procentas sumažėjo, tačiau limfocitų skaičius padidėjo, palyginti su kontroline žuvimi. RBC glutationo reduktazės aktyvumas glicinu apdorotose žuvyse buvo panašus ir žymiai mažesnis nei kontrolinio gydymo metu. Didžiausias lizocimo ir alternatyvaus komplemento aktyvumas plazmoje buvo stebimas gydant GL.

Glicinu apdorotos žuvys, ypač 5 GL, žymiai pagerino eritrocitų atsparumą osmosiniam trapumui. Dietinis glicinas neturėjo reikšmingo poveikio RBC glutationo peroksidazės aktyvumui, plazmos imunoglobulinui, eozinofilų kiekiui procentais ir hematologiniams rodikliams. Apibendrinant galima pasakyti, kad didžiąją dalį maisto papildų glicino privalumų gali lemti padidėjusi glutationo sintezė ir antioksidacinė galia.

Raktažodžiai: aminorūgštis; glutationas; mityba; kraujo ląstelės; odos gleivių.

Plazminiai imunoglobulinai yra vienas iš svarbiausių organizmo imuninės sistemos komponentų. Imunoglobulinai gali atpažinti ir surišti patogenus, taip skatindami jų pašalinimą, vykdydami imunines funkcijas ir palaikydami sveikatą. Imunoglobulinai plazmoje daugiausia apima tris tipus: IgG, IgM ir IgA, o jų kiekis ir santykis yra glaudžiai susiję su žmogaus imunitetu. Įprastomis aplinkybėmis sveikų žmonių imunoglobulino kiekis yra gana didelis, o santykis yra suderintas. Ši subalansuota būsena gali veiksmingai atsispirti išorinių patogenų invazijai. Kai organizmas yra imuninės būklės, imunoglobulinų kiekio ir santykio pokyčiai gali būti svarbus ligų profilaktikos ir gydymo pagrindas. Pavyzdžiui, IgM atlieka svarbų vaidmenį pradiniame ūminės patogeninės infekcijos atpažinimo ir surišimo metu, todėl jo padidėjimas gali rodyti ūminę infekciją arba atsigavimo laikotarpį. Ilgalaikis ir stabilus IgG lygis rodo, kad organizmo fiziologinė būklė yra geresnė, jis geriau palaiko ir gerina imuninę funkciją.

Todėl organizmo imunitetas yra glaudžiai susijęs su plazmos imunoglobulino kiekiu ir santykiu, o kruopštus plazmos imunoglobulino kiekio ir santykio stebėjimas ir reguliavimas yra viena iš svarbių priemonių gerai sveikatai ir stipriam imunitetui palaikyti. Iš to matyti, kad reikia atkreipti dėmesį į savo imuniteto gerinimą. Be sveikos mitybos ir mankštos kasdieniame gyvenime, cistanche taip pat gali pagerinti imunitetą. Cistanche yra įvairių biologiškai aktyvių komponentų, tokių kaip polisacharidai, grybai, Huangli ir kt. Šie ingredientai gali stimuliuoti įvairias imuninės sistemos ląsteles ir padidinti jų imuninį aktyvumą.

Spustelėkite cistanche naudą sveikatai

1. Įvadas

Dietinės aminorūgštys vaidina svarbų vaidmenį žuvų augimui ir sveikatai. Žuvis priklauso nuo mitybos, kad patenkintų tam tikrų aminorūgščių, vadinamų nepakeičiamomis aminorūgštimis, poreikį. Šios amino rūgštys negali būti susintetintos žuvies organizme [1]. Tačiau žuvys gali sintetinti kitas aminorūgštis, jei yra tam tikrų substratų, fermentų ir kofaktorių. Dauguma tyrimų, susijusių su aminorūgščių poreikiu žuvims, buvo sutelkti į nepakeičiamąsias aminorūgštis, tačiau taip pat reikėtų sutelkti dėmesį į nepakeičiamas aminorūgštis. Šios aminorūgštys, nors ir gali būti sintezuojamos žuvų kūnuose, atlieka daug svarbių fiziologinių vaidmenų, gyvybiškai svarbių žuvų sveikatai ir gerovei [2,3]. Taigi mokslininkai neseniai užginčijo įprastą esminių / nepakeičiamų aminorūgščių apibrėžimą.

Glicinas yra viena iš nepakeičiamų aminorūgščių žuvyse, kaip ir kituose gyvūnuose, tačiau atlieka daug svarbių fiziologinių funkcijų [2]. Glicinas dalyvauja kolageno formavime ir 33 procentus kolageno pagamina iš šios aminorūgšties [4]. Be to, glicinas, bendradarbiaudamas su glutamatu ir cisteinu, dalyvauja sintetinant glutationą – galingą ir svarbią antioksidanto molekulę [5]. Taigi glicinas moduliuoja antioksidacinę sistemą. Ši aminorūgštis atlieka įvairius vaidmenis imuninėje veikloje. Nustatyta, kad glicino koncentracijos kraujo serume sumažėjimas padidina įvairių žmogaus patogenų atsparumą serume [6]. Nilinės tilapijos, Oreochromis niloticus, tyrimas atskleidė, kad glicino metabolizmo keliai yra svarbiausi Edwardsiella tarda užkrėstų žuvų mirtingumo prevencijos būdai [7].

Yra keletas tyrimų apie glicino poveikį žuvims, tačiau rezultatai nėra nuoseklūs. Pavyzdžiui, Nilo tilapijos augimas žymiai padidėjo, kai buvo šeriama dieta, papildyta 5 g/kg glicino. Dietinis glicinas nepaveikė įvairių plazmos ir (arba) kepenų metabolitų, antioksidacinių fermentų aktyvumo, lizocimo / mieloperoksidazės aktyvumo ir malondialdehido (MDA) kiekio. Eksperimentinis iššūkis su Streptococcus iniae parodė, kad glicinas nesugebėjo pagerinti atsparumo ligoms, o kiti antioksidantai / imunologiniai atsakai buvo panašūs į prieš iššaukimą, išskyrus plazmos superoksido dismutazės (SOD), glutationo reduktazės (GR) ir mieloperoksidazės padidėjimą. veikla [8].

Didžiasnukių ešerių Micropterus salmoides tyrimas atskleidė, kad augalinė dieta, papildyta 20 g/kg glicino, buvo naudinga siekiant išvengti augimo sulėtėjimo ir žarnyno gaurelių trūkumo, palyginti su dieta, kurios pagrindą sudaro žuvies miltai. Tačiau jokie kepenų SOD ir glutationo peroksidazės (GPx) aktyvumo pokyčiai ir MDA kiekio padidėjimas kepenyse bei plazmos alanino aminotransferazės aktyvumas rodo galimas žuvų kepenų problemas [9]. Hoseini ir Moghaddam [10] parodė, kad glicino papildymas neturi reikšmingo poveikio beluga, Huso huso, augimui. Baltųjų kraujo kūnelių (WBC) skaičius, sumažėjęs glutationo (GSH) kiekis plazmoje, GPx, lizocimo ir komplemento aktyvumas padidėjo, kai glicino lygis yra 2,5 ir (arba) 5 g/kg, o tai reiškia, kad glicinas turi antioksidacinį ir imunomoduliacinį poveikį; tačiau dėl reikšmingo MDA kiekio padidėjimo plazmoje, kai glicinas yra 5 ir 10 g/kg, sunku patikėti antioksidaciniu glicino poveikiu šiai rūšiai.

Ankstesnis mūsų paprastojo karpio Cyprinus carpio tyrimas parodė, kad 3-savaitės šėrimo 2,5–10 g/kg glicino laikotarpis yra naudingas gerinant plazmos lizocimą (5 ir 10 g/kg glicino), GPx ( 2,5–10 g/kg glicino), glutationo-s-transferazės (GST; 10 g/kg glicino) aktyvumo ir GSH (5 ir 10 g/kg glicino) kiekio, bet sumažina plazmos katalazę (CAT; 5 ir 10 g). /kg glicino) aktyvumo ir neturi reikšmingo poveikio plazmos MDA [11]. 8-Savaitė šeriant tomis pačiomis dietomis parodė, kad glicinas neturėjo žuvų augimą skatinančio poveikio, nors žuvų augimo greitis ir pašaro efektyvumas pagerėjo atitinkamai ~10,5 ir 12,5 proc. SOD, CAT, GPx ir GST plazmoje nepasikeitė, tačiau plazmos GSH ir MDA atitinkamai padidėjo ir sumažėjo [12]. Šie tyrimai rodo, kad norint pagerinti dabartines žinias apie glicino poveikį žuvims, reikia atlikti tolesnius vertinimus.

Pavyzdžiui, pirmiau minėti tyrimai buvo skirti ribotam humoralinių įgimtų imuninių parametrų skaičiui (lizocimas, komplementas, mieloperoksidazė, kvėpavimo sprogimo veikla ir WBC), o kiti, tokie kaip odos gleivinės imuniniai parametrai, buvo nepaisyti. Tai svarbi tema, atsižvelgiant į keletą imunologinių glicino vaidmenų, apie kuriuos pranešta žinduoliams [13], ir ypatingą jo vaidmenį gleivinės imunitetui, pastebėtam kiaulėms [14]. Be to, antioksidacinis glicino poveikis buvo įvertintas tik žuvų kraujyje ir kepenyse, tačiau buvo įrodyta, kad raudonieji kraujo kūneliai (RBC) tiek žinduolių, tiek žuvų organizme aktyviai pumpuoja gliciną į savo citoplazmą [15,16], kad palaikytų glutationo sintezę. ir išlaikyti vidinį antioksidacinį pajėgumą. Glicinas taip pat yra pagrindinis hemo sintezės komponentas, nes dalyvauja 5-aminolevulino rūgšties gamyboje; eritroidų glicino importo slopinimas sutrikdė žinduolių hemo sintezę [17].

Atsižvelgiant į ribotą informaciją apie maistinio glicino vaidmenį žuvyse (palyginti su žinduoliais), šis tyrimas buvo skirtas įvertinti su maistu gaunamo glicino poveikį augimo veiksmingumui, odos gleivinės ir humoraliniams imuniniams parametrams, hematologiniams parametrams, RBC antioksidaciniam pajėgumui ir polinkiui paprastųjų karpių hemolizė.

2. Medžiagos ir metodai

2.1. Dietos

Atsižvelgdami į ankstesnius tyrimus [11,12], papildymui pasirinkome 5 (5 GL) ir 10 (10 GL) g/kg glicino, bet sumažinome bazinį (endogeninį) glicino lygį (nuo 19,8 iki 16,1 g/kg), sumažindami paukštienos šalutinio produkto kiekis racione, siekiant išsiaiškinti, ar glicino papildymas augalinės kilmės racione (mažas paukštienos šalutinis produktas) gali palaikyti maksimalų augimą. Taip pat buvo įtraukta kontrolinė dieta be glicino papildų (CTL). Pašarai (kukurūzų miltai, kviečių miltai, sojų miltai, medvilnės sėklų miltai, žuvies konservavimo šalutinis produktas ir paukštienos šalutinis produktas) buvo persijoti (200 µ) ir sumaišyti norimomis proporcijomis (1 lentelė).

Tada į mišinį buvo pridėtas sojų aliejus, vitaminų / mineralų premiksai, aminorūgštys, celiuliozė ir glicinas. Į mišinį įpilama apie 400 ml/kg vandens ir paruošta tešla, kuri granuliuojama mėsmale. Apytikslė dietos sudėtis (trys mėginiai vienai dietai) buvo nustatyta standartiniais metodais (Kjeldahlio metodas baltymams; eterio ekstrahavimas lipidams; džiovinimas orkaitėje 70 ◦C temperatūroje; pelenų deginimas krosnyje ir skaidulų skaidymas rūgštimi/šarmu). Hoseini, Moghaddam [10]. Maisto aminorūgščių profilis buvo nustatytas HPLC sistema (Waters Corporation, Milford, MA, JAV). Mėginiai buvo nuriebalinti n-heksanu ir virškinami HCl, po to dariniai fenilizotiocianaze, atskirti PICO.TAG kolonėlėmis ir aptikti dvigubu λ absorbcijos detektoriumi [10].

2.2. Žuvies auginimas

Du šimtai paprastųjų karpių jauniklių buvo nupirkti iš vietinio ūkio ir laikomi viename 1 m3 talpos rezervuare 7 dienas, per kurias buvo šeriami CTL dieta. Po to buvo atrinktos vienodo dydžio sveikos 90 žuvys (24,5 ± 0,21 g), kurios atsitiktine tvarka paskirstytos 9 stikliniuose akvariumuose. Akvariumai buvo pripildyti 50-l dechloruoto vandens iš čiaupo, nuolat aeruojant. Gyvūnų tankumas buvo pagrįstas ankstesniu tos pačios rūšies žuvų tyrimu [12]. Žuvys buvo šeriamos vienu iš aukščiau paminėtų dietų du kartus per dieną (2 proc. biomasės) 8 savaites. Kas antrą savaitę kiekvieno akvariumo žuvys buvo sugaunamos dideliais kiekiais ir dedamos į rezervuarą, pripildytą vandens skaitmenine skale, kad būtų fiksuojama rezervuaro biomasė ir pašarų kiekio koregavimas. Kasdien akvariumo vanduo buvo atnaujinamas 30 proc., o atliekos buvo išpilamos. Vandens temperatūra, pH, ištirpusio deguonies kiekis ir bendras amoniakas buvo atitinkamai 23,8 ± 0,85 ◦C, 7,74 ± 0,68, 6,78 ± 0,74 mg/L ir 1,53 ± 0,33 mg/L .

Po 8 auginimo savaičių svorio prieaugis (WG), specifinis augimo greitis (SGR) ir pašarų konversijos santykis (FCR) buvo užregistruotas taip:

2.3. Mėginių surinkimas ir apdorojimas

Auginimo laikotarpio pabaigoje iš kiekvieno akvariumo buvo sugautos trys žuvys ir anestezuotos 100 µL/L eugenoliu. Tada iš žuvies uodegos venos, naudojant heparinizuotus švirkštus, buvo paimti kraujo mėginiai (1 ml vienai žuviai). Hematologiniams tyrimams buvo panaudota 300 µl šviežio kraujo mėginių dalis. Kita 200 µl šviežio kraujo mėginių dalis buvo panaudota eritrocitų osmosinio trapumo tyrimui. Norint pagaminti ląstelių lizatą, mėginių supakuoti RBC buvo užšaldyti –70 ◦C temperatūroje ir įpilami du tūriai fosfatinio buferio (pH 7,0). Po maišymo suspensijos buvo centrifuguojamos (6000 × g; 7 min; 4 °C), o supernatantai buvo laikomi –70 °C temperatūroje iki RBC GSH, GR ir GPx analizės. Norint gauti plazmą, 350 µl šviežių kraujo mėginių buvo centrifuguojami (6000 × g; 7 min.; 4 °C) ir plazmos mėginiai laikomi –70 °C temperatūroje iki lizocimo, alternatyvaus komplemento (ACH50) ir bendrojo imunoglobulino analizės. (Ig).

Odos gleivių mėginiai buvo paimti iš trijų žuvų viename rezervuare. Žuvys buvo anestezuotos, kaip minėta aukščiau, o gleivių mėginiai buvo paimti iš nugaros šoninio paviršiaus, šveičiant mentele. Surinkti gleivių mėginiai buvo sumaišyti su tokiu pat kiekiu Tris buferinio fiziologinio tirpalo (TBS, 50 mM Tris-HCl, 150 mM NaCl, pH 8,0). Po maišymo mišiniai buvo centrifuguojami (13, 000 × g; 15 min.; 4 ◦ C), o supernatantai buvo laikomi –70 ◦ C temperatūroje iki gleivinės imunologinių tyrimų.

2.4. Analizė

2.4.1. Hematologiniai tyrimai

RBC ir WBC buvo skaičiuojami naudojant Neubauer kamerą, praskiedus Dacie tirpalu. Hematokritas (Hct) ir hemoglobinas (Hb) buvo išmatuoti atitinkamai centrifuguojant ir cianomethemoglobino metodais. Vidutinis korpuskulinis tūris (MCV), vidutinis korpuskulinis hemoglobinas (MCH) ir vidutinė korpuskulinio hemoglobino koncentracija (MCHC) buvo apskaičiuoti pagal Dacie ir Lewis [18]. Leukocitų diferencinis skaičius buvo atliktas ruošiant Giemsa dažytus kraujo stiklelius.

2.4.2. Plazmos imunologiniai parametrai

Plazmos lizocimo aktyvumas buvo nustatytas remiantis turbidimetriniu metodu, kaip aprašė Ellis [19]. Micrococcus luteus buvo naudojamas kaip taikinys ir suspenduotas fosfatiniame buferyje (pH 6,2). Į 1 ml šios suspensijos buvo pridėta 25 µL plazmos mėginio ir per 5 minutes buvo užfiksuotas vidutinis optinio tankio sumažėjimas per minutę esant 45{7}} nm. Kiekvienas 0,001 optinio tankio sumažėjimas per minutę buvo laikomas vienu lizocimo aktyvumo vienetu

Plazmos ACH50 aktyvumas buvo matuojamas remiantis hemoliziniu metodu [20], taikiniu naudojant avių RBC veronaliniame buferyje, kuriame yra magnio ir želatinos (pH 7,0). Serijiniu būdu atskiesti plazmos mėginiai buvo pridėti prie RBC suspensijos buferyje ir inkubuojami kambario temperatūroje 60 min. Buvo įvertintas plazmos kiekis, sukeliantis 50 procentų hemolizę, ir naudojamas ACH50 aktyvumui 1 ml plazmos apskaičiuoti.

Suminė Ig koncentracija plazmoje nustatyta po nusodinimo polietilenglikoliu [21]. Vienodai kiekiai plazmos ir polietilenglikolio tirpalo (12 proc.) buvo sumaišyti ir maišomi kambario temperatūroje. Po 2 valandų mišinys centrifuguojamas (6000 × g; 7 min; 4 °C), kad nusodintų Ig. Mėginio baltymo skirtumas prieš ir po centrifugavimo buvo lygus bendrai mėginio Ig koncentracijai.

2.4.3. RBC antioksidaciniai fermentai

RBC antioksidaciniai parametrai buvo įvertinti pagal Yousefi ir Hoseini [22]. RBC ląstelių lizatai buvo atšildyti, o tirpalai centrifuguojami, kad būtų nusodinti derbiai. Supernatantai buvo naudojami fermentiniams tyrimams. Fermentų aktyvumui ištirti buvo naudojami komerciniai rinkiniai (Zellbio Co., GmbH, Deutschland, Vokietija). GSH koncentracija buvo matuojama remiantis reakcija su 5,50 -ditiobis-(2-nitrobenzenkarboksirūgštimi) esant 412 nm. GPx tyrimo principas buvo pagrįstas GSH pridėjimu į mėginius ir GPx mėginio GSH pavertimu oksiduotu glutationu (GSSG). Gautas GSSG yra perdirbamas į GSH, naudojant GR veiklą, kuri naudoja NADPH. NADPH koncentracijos sumažėjimas yra proporcingas GPx aktyvumui ir išmatuojamas esant 340 nm. Tas pats protokolas naudojamas GR aktyvumui nustatyti, tačiau vietoj GSH į mėginius pridedama GSSG. Tirpalo hemoglobino kiekis buvo matuojamas ir pagal jį išreiškiamas fermentų aktyvumas.

2.4.4. Osmosinio trapumo testas

Pagal Gao, Liu [23], buvo atliktas RBC osmosinio trapumo tyrimas. Trumpai tariant, 25 µL supakuotų šviežių eritrocitų buvo įpilta į 1 ml 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, {{ 11}}.5, 0.6, 0.7, 0.85 proc. natrio chlorido tirpalas ir paliekamas kambario temperatūroje 90 min. Tada suspensijos buvo centrifuguojamos (6000 × g; 7 min; 4 °C), o supernatantų absorbcija buvo išmatuota esant 492 nm. Optinis tankis buvo pakoreguotas pagal RBC skaičių ir MCH. Didžiausias optinis tankis buvo laikomas 100 procentų hemolizės, o kitų optinių tankių hemolizės rodikliai buvo apskaičiuoti pagal jį.

2.4.5. Odos gleivių imunologiniai parametrai

Tirpių baltymų koncentracijos odos gleivių mėginiuose buvo nustatytos remiantis Bradfordu [24]. Odos gleivių peroksidazės aktyvumas buvo nustatytas pagal Quade ir Roth [25], naudojant 3,30,5,50 -tetrametilbenzidino hidrochloridą ir vandenilio peroksidą kaip substratą esant 450 nm. Odos gleivių proteazės aktyvumas buvo nustatytas pagal Zhang, Hu [26], naudojant AZOkazeiną kaip substratą esant 350 nm. Odos gleivių lizocimo aktyvumas buvo nustatytas taip, kaip aprašyta aukščiau. Odos gleivių šarminės fosfatazės (ALP) aktyvumas buvo nustatytas naudojant Parsazmun Co. rinkinį (Teheranas, Iranas), remiantis Hoseinifar, Roosta [27].

2.5. Statistinė analizė

Prieš analizę buvo apskaičiuoti akvariumo duomenų vidurkiai ir naudojami statistinei analizei (n {0}}). Patvirtinus normalų duomenų pasiskirstymą Shapiro – Wilk testu ir dispersijos homogeniškumą Levene testu, duomenims buvo atlikta vienpusė ANOVA. Reikšmingi skirtumai tarp gydymo būdų buvo nustatyti Tukey testu. p < 0,05 buvo laikomas reikšmingu ir visos analizės buvo atliktos naudojant SPSS v.22.

3. Rezultatai

Žuvų augimo rodikliai pateikti 2 lentelėje. FCR, gydant 5 GL ir 10 GL, buvo žymiai mažesnis nei gydant CTL. Galutinis svoris, WG ir SGR gydant 5 GL buvo žymiai didesni nei gydant CTL. Mirtingumo tarp gydymo atvejų nebuvo.

Raudonųjų kraujo kūnelių antioksidaciniai parametrai pateikti 3 lentelėje. GSH kiekis žymiai padidėjo, nes GR aktyvumas reikšmingai sumažėjo gydant 5 GL ir 10 GL, palyginti su gydymu CTL. Tarp gydymo GPx aktyvumo reikšmingo skirtumo nebuvo.

Osmosinio pažeidžiamumo testo rezultatai pateikti 4 lentelėje. Gydymo atveju hemolizės greitis reikšmingai nesiskyrė, kai NaCl koncentracija buvo 0.1, 0.2, 0. 7 ir 0,85 proc. Kai NaCl koncentracija buvo 0,3–0,5 proc., hemolizės greitis gydant 5 GL buvo žymiai mažesnis nei gydant CTL. Glicinu apdorotų žuvų hemolizės greitis, kai NaCl koncentracija yra 0,6 proc., buvo žymiai mažesnis nei gydytų CTL.

Žuvų odos gleivinės imunologiniai parametrai pateikti 6 lentelėje. Nebuvo reikšmingų skirtumų tarp gleivinės tirpių baltymų kiekio, lizocimo, peroksidazės, proteazės ir ALP aktyvumo tarp gydymo 5 GL ir 10 GL; abiejų vertės buvo žymiai didesnės, palyginti su gydymu CTL.

4. Diskusija

Glicinas prisideda prie struktūrinių baltymų sintezės ir sudaro beveik 9 procentus paprastojo karpio viso kūno baltymų [28]. Šiame tyrime maisto papildas glicinu žymiai pagerino paprastųjų karpių augimą ir pašarų efektyvumą, o tai nėra panašu į ankstesnį tyrimą su tomis pačiomis rūšimis [12]. Tikslios tokio skirtumo priežastys nėra aiškios; buvo tikimasi, kad mažesnis glicino kiekis šio tyrimo kontrolinėje dietoje (1,61 proc.), palyginti su ankstesniu (1,98 proc.), padarė skirtumą. Tačiau abiejuose tyrimuose kontrolinių žuvų augimo rodikliai buvo maždaug panašūs.

Taigi prie tokio skirtumo gali prisidėti kiti veiksniai. Vienas iš paaiškinimų gali būti maisto aminorūgščių sudėties pasikeitimas tarp dviejų tyrimų. Lizinas ir metioninas, dvi pagrindinės augimą ribojančios aminorūgštys, šiame tyrime buvo didesni nei ankstesniame, o neoptimalus šių aminorūgščių kiekis maiste sumažina azoto, aminorūgščių ir glicino sulaikymą [29, 30]. . Dabartiniai rezultatai atitinka ankstesnius Nilo tilapijos [8] ir ešerių [9] tyrimus, kad maisto papildas glicinu pagerino žuvų augimą. Nors nepakeičiamos aminorūgštys gali būti susintetintos žuvų organizme, jų sintezės greitis gali būti nepakankamas, kad būtų patenkinti biologiniai reikalavimai. Taigi, šiame tyrime geresnis augimo efektyvumas gydant glicinu gali būti dėl didesnio glicino prieinamumo, kad būtų patenkinti augimo ir priežiūros reikalavimai.

Hematologiniai tyrimai leidžia pamatyti žuvų sveikatą ir dujų mobilizacijos būklę. Raudonųjų kraujo kūnelių skaičiaus ir hemoglobino kiekio sumažėjimas trukdo audinių aprūpinimui deguonimi ir anglies dioksido klirensu [31]. Todėl keliuose tyrimuose buvo įvertintas mitybos manipuliacijų [32–34], įskaitant aminorūgščių papildymą [35–37], vaidmuo įvairių žuvų rūšių hematologiniams parametrams. Mažai žinoma apie glicino vaidmenį žuvų hematologiniuose parametruose. Kanalinio šamo Ictalurus punctatus tyrimas atskleidė, kad RBC aktyviai transportuoja gliciną į citoplazmą, kuris gali būti naudojamas glutationo sintezei [15], kaip pastebėta žinduoliams [17]. Dėl hemoglobino buvimo raudoniesiems kraujo kūnams nuolat gresia oksidacija, o glutationas atlieka lemiamą vaidmenį užkertant kelią raudonųjų kraujo kūnelių oksidaciniam stresui [15].

Remiantis dabartiniais rezultatais, su glutationu susijusių antioksidantų parametrų pagerėjimas (padidėjęs GSH kiekis ir sumažėjęs GR aktyvumas) gali lemti didesnį eritrocitų skaičių ir atsparumą hemolizei glicinu apdorotose žuvyse. Nustatyta, kad žuvų eritrocitai yra labai jautrūs oksidacinėms sąlygoms, kurioms esant žymiai sumažėja GSH kiekis (dėl oksidacijos) ir padidėja GPx, lipidų peroksidacija ir hemolizė [38–40]. Jokie GPx aktyvumo pokyčiai šiame tyrime rodo, kad gydymo oksidacinės sąlygos tikriausiai nesiskiria. Taigi, didesnis GSH kiekis gydant 5 GL ir 10 GL gali būti dėl pagerėjusios glutationo sintezės, kai yra glicino. GSH sintezės padidėjimas gali patenkinti ląstelės biologinį poreikį, todėl nereikia tolesnio GSSG perdirbimo, o tai paaiškina GR aktyvumo sumažėjimą gydant 5 GL ir 10 GL.

Leukocitai yra svarbios imuninės ląstelės, turinčios įvairias funkcijas, padedančios šeimininkui kovoti su svetimais mikrobais [41]. Nustatyta, kad leukocitų kiekio padidėjimas po maisto papildų padidina įvairių žuvų rūšių atsparumą ligoms [42, 43]. Kalbant apie gliciną, buvo nustatyta, kad maisto papildai padidina baltųjų kraujo kūnelių kiekį belugoje [10], panašiai kaip ir dabartiniai rezultatai. Neutrofilai yra pirmieji, saugantys leukocitus, kai žuvys susiduria su patogenų atakomis. Jie fagocitozės būdu naikina patogenus, dėl kurių susidaro reaktyvios molekulės [44]. Monocitai yra kitos imuninės ląstelės, turinčios fagocitines funkcijas [45].

Kadangi šios ląstelės gamina įvairias prooksidantų molekules, joms išgyventi reikalinga stipri antioksidantų sistema. Žmogaus ląstelių tyrimai atskleidė, kad glutationas yra labai reikalingas neutrofilų ir monocitų gyvybingumui ir funkcijai [46, 47], tačiau informacijos apie šią temą žuvyse yra nedaug. Karpių tyrimai parodė, kad glutationo kiekis neutrofiluose padidėja fagocitozės ar lipopolisacharidų indukcijos metu [48]. Nilo tilapijos monocitų veikimas prooksidantu (vario nanodalelėmis) sukėlė apoptozę, oksidacinį stresą ir GSH kiekio sumažėjimą [45].

Atitinkamai, spėjama, kad didesnis neutrofilų ir monocitų skaičius / procentas glicinu apdorotose žuvyse šiame tyrime buvo ląstelės GSH kiekio pagerėjimo pasekmė. Tačiau glicinas neturi reikšmingo poveikio kraujo limfocitų populiacijai, o limfocitų procento sumažėjimą glicinu apdorotose žuvyse lėmė kitų leukocitų tipų procentinės dalies padidėjimas. Apskritai šie rezultatai rodo, kad maisto papildas glicinu pagerina įgimtos imuninės sistemos stiprumą.

Lizocimas veikia kaip baktericidinis agentas, kurį išskiria cirkuliuojantys kraujo neutrofilai [49]. Todėl spėjama, kad glicinu apdorotų žuvų plazmos lizocimo padidėjimą lėmė padidėjęs neutrofilų skaičius kraujyje arba jų lizocimo gamyba. Panašiai, plazmos lizocimo aktyvumo padidėjimas buvo susijęs su neutrofilų populiacijos padidėjimu kraujyje po to, kai į žuvų racioną buvo įtraukta įvairių pašarų priedų [50, 51].

Panašiai kaip ir šiame tyrime, maisto papildai glicinu žymiai padidino lizocimo aktyvumą plazmoje beluga [10] ir paprastųjų karpių [11]. Komplemento sistema veikia kaip mikrobus naikinanti ir opsonizuojanti medžiaga žuvyje, kurią sudaro keli kepenyse gaminami baltymai [52]. Nustatyta, kad maisto papildai glicinu padidina ACH50 aktyvumą plazmoje beluga [10]; tačiau trumpalaikis šėrimo glicinu papildytais pašarais periodas nesukėlė reikšmingų paprastųjų karpių plazmos ACH50 aktyvumo pokyčių [11]. Tikslus mechanizmas, kuriuo glicinas pagerina plazmos ACH50 aktyvumą, nėra aiškus, tačiau GSH gali prisidėti, nes su maistu gaunamas glutationo papildas žymiai padidino komplemento baltymų koncentraciją kumštinių krabų Eriocheir sinensis hemolimfoje, o tai gali būti pablogėjusios hepatokasos būklė. ir baltymų sintezė, kurią sukelia GSH prieinamumas [53].

Todėl spėjama, kad dietinis glicinas gali padidinti GSH koncentraciją, o tai savo ruožtu gali būti atsakinga už didesnį ACH50 aktyvumą šiame tyrime. Be to, įvairiuose žuvų audiniuose, pvz., kepenyse, odoje, neutrofiluose ir monocituose, buvo nustatytas propidinas, glicino turtinga molekulė, kuri padidina komplemento aktyvumą [54, 55]. Ši molekulė buvo identifikuota paprastiesiems karpiams [56], todėl spėjama, kad glicino prieinamumas gali paskatinti didesnę megfelelődino gamybą ir padidinti ACH50 aktyvumą šiame tyrime.

Odos gleivinės imunitetas yra labai svarbus siekiant užkirsti kelią ligoms akvakultūros praktikoje, nes vanduo yra pagrindinis patogenų pernešėjas, o stiprus gleivinės imunitetas gali užkirsti kelią patogenams patekti į naujas žuvis [57]. Odos gleivinės lizocimas veikia kaip baktericidinis agentas, panašus į plazmos lizocimą [49]. Odos gleivėse esanti proteazė naikina patogenus, mažina gleivių vientisumą, didina gleivių sluoksnio slinkimą ir aktyvina kitus imuninius parametrus [58]. Odos gleivinės peroksidazė dalyvauja formuojant peroksidazės – H2O2 – halogenido kompleksą, stiprų baktericidinį ir citotoksinį agentą [58]. ALP aktyvumas odos gleivėse gali detoksikuoti mikrobų sukurtus priešuždegiminius junginius [59]. Panašių palyginimui skirtų tyrimų nėra, tačiau dabartiniai rezultatai rodo, kad maisto papildas glicinu gali pagerinti paprastųjų karpių odos gleivinės imunitetą.

5. Išvados

Apibendrinant galima pasakyti, kad maisto papildas glicinu gali palaikyti GSH sintezę, kuri pagerina antioksidacinį pajėgumą ir atsparumą hemolizei eritrocituose. Be to, maisto papildai glicinu padidina kraujo neutrofilų ir monocitų populiaciją, o tai gali būti dėl apsauginio GSH vaidmens šiose ląstelėse. Įdomu tai, kad glicinas gali pagerinti regėjimą į žuvų kūnus. Atsižvelgiant į šiuos privalumus, karpių pašarams papildomai rekomenduojamas 5 g/kg glicino papildas.

Autoriaus indėlis:

Konceptualizavimas, bankomatas, SMH ir HVD; metodika, MA ir HR; programinė įranga, SHH; formali analizė, SHH ir SMH; tyrimas, MA ir SMH; duomenų tvarkymas, bankomatas; rašymas – originalaus projekto rengimas, MA ir SMH; rašymas – peržiūra ir redagavimas, SMH; vizualizacija, HR; priežiūra, SMH; projektų administravimas, bankomatas, SMH; finansavimo įsigijimas, HVD Visi autoriai perskaitė ir sutiko su paskelbta rankraščio versija.

Finansavimas:

Šiam tyrimui lėšų nebuvo gauta.

Institucinės peržiūros tarybos pareiškimas:

Tyrimų su gyvūnais protokolą patvirtino Inland Waters Aquatics Resources Research Center Institucinė peržiūros taryba (ET.CG/2; 2021 m. rugsėjo 9 d.).“ tyrimams su gyvūnais.

Informuoto sutikimo pareiškimas:

Netaikoma.

Duomenų prieinamumo pareiškimas:

Šio tyrimo duomenis galima gauti atitinkamo autoriaus prašymu.

Padėkos:

Šį tiriamąjį darbą iš dalies parėmė Čiangmajaus universitetas.

Interesų konfliktai:

Autoriai pareiškia, kad nėra interesų konflikto.

Nuorodos

1. Mai, K.; Xue, M.; Jis, G.; Xie, SQ; Kaushik, SJ 4 skyrius – Baltymai ir aminorūgštys. Žuvies mityboje, 4 leidimas; Hardy, RW, Kaushik, SJ, red.; Academic Press: Oksfordas, JK, 2022 m.; 181–302 p.

2. Li, P.; Mai, KS; Trušenskis, J.; Wu, GY Nauji žuvų aminorūgščių mitybos pokyčiai: link funkcinių ir į aplinką orientuotų vandens pašarų. Amino rūgštys. 2009, 37, 43–53. [CrossRef] [PubMed]

3. Hoseinis, SM; Reverter, M. Aminorūgščių poveikis sveikatai žuvyje. Biotechnologijų pažanga akvakultūros sveikatos valdymo srityje; Gupta, SK, Giri, SS, red.; Springer Singapore: Singapūras, 2021 m.; 493–533 p.

4. Li, P.; Wu, G. Dietinio glicino, prolino ir hidroksiprolino vaidmuo kolageno sintezėje ir gyvūnų augime. Amino rūgštys. 2018, 50, 29–38. [CrossRef] [PubMed]

5. Pérez-Torres, I.; María Zuniga-Munoz, A.; Guarner-Lans, V. Naudingas aminorūgšties glicino poveikis. Mini. Med. kun. Chem. 2017, 17, 15–32. [CrossRef] [PubMed]

6. Kou, T.-S.; Wu, J.-H.; Chen, X.-W.; Chen, Z.-G.; Zheng, J.; Peng, B. Egzogeninis glicinas skatina glutationo oksidaciją ir atkuria bakterinių patogenų jautrumą serumo sukeltai ląstelių žūčiai. Redox Biol. 2022, 58, 102512. [CrossRef]

7. Yang, D.-X.; Yang, M.-J.; Yin, Y.; Kou, T.-S.; Pengas, L.-T.; Chen, Z.-G. Serino metabolizmas suderina imuninį atsaką, kad paskatintų Oreochromis niloticus išgyvenimą po Edwardsiella tarda infekcijos. mSystems. 2021, 6, e00426-21. [CrossRef]

8. Xie, S.; Zhou, W.; Tianas, L.; Niu, J.; Liu, Y. N-acetilcisteino ir glicino papildymo poveikis augimo veiksmingumui, glutationo sintezei, Nilo tilapijos, Oreochromis niloticus antioksidaciniams ir imuniniams gebėjimams. Žuvis Moliuskai. Immunol. 2016, 55, 233–241. [CrossRef]

9. Rossi, W., jaunesnysis; Allenas, KM; Habte-Tsion, H.-M.; Meesala, K.-M. Glicino, prebiotikų ir nukleotidų papildymas sojų pupelių miltų dietoje, skirtoje stambiaburiams ešeriams (Micropterus salmoides): poveikis gamybos rezultatams, viso kūno maistinių medžiagų sudėčiai ir sulaikymui bei žarnyno histopatologijai. Akvakultūra 2021, 532, 736031. [CrossRef]

10. Hoseinis, SM; Mogaddamas, AA; Ghelichpour, M.; Pagheh, E.; Haghpanah, A.; Gharavi, B. Dietinis glicino papildymas moduliuoja beluga, Huso huso, jauniklių antioksidacinį ir imuninį atsaką. Aquac. Rep. 2022, 23, 101026. [CrossRef]

11. Hoseinis, SM; Paolucci, M.; Arghideh, M.; Hosseinpour Delavar, F.; Zavvaras, F.; Hoseinifar, SH Dietinio glicino vartojimo poveikis biocheminiam atsakui į amoniako toksiškumą paprastiesiems karpiams, Cyprinus carpio. Aquac. Res. 2022, 53, 2185–2194. [CrossRef]

12. Hoseinis, SM; Majidiyan, N.; Mighaed, AT; Hoseinifar, SH; Van Doan, H. Maisto papildai glicinu sumažina transportavimo sukeltą stresą paprastiesiems karpiams, Cyprinus carpio. Akvakultūra. 2022, 551, 737959. [CrossRef]

13. Li, P.; Yin, Y.-L.; Li, D.; Woo Kim, S.; Wu, G. Amino rūgštys ir imuninė funkcija. Br. J. Nutr. 2007, 98, 237–252. [CrossRef]

14. Ji, Y.; Ventiliatorius, X.; Zhang, Y.; Li, J.; Dai, Z.; Wu, Z. Glicinas reguliuoja atjunkytų paršelių gleivinės imunitetą ir žarnyno mikrobų sudėtį. Amino rūgštys. 2021, 54, 385–398. [CrossRef] [PubMed]

15. Angermeieris, SM; Shepard, MD; Tunnicliff, G. Glicino transportavimas kanalinio šamo raudonosiomis ląstelėmis. Gali. J. Zoolas. 1996, 74, 688–692. [CrossRef]

16. Kimas, KM; Kingsmore, SF; Han, H.; Yang-Feng, TL; Godinot, N.; Seldin, MF 1 tipo žmogaus glicino transporterio klonavimas: naujų izoformų variantų molekulinis ir farmakologinis apibūdinimas ir geno chromosominė lokalizacija žmogaus ir pelės genomuose. Mol. Pharmacol. 1994, 45, 608.

17. Žiema, M.; Funkas, J.; Körner, A.; Alberati, D.; Kristenas, F.; Schmitt, G. GlyT1 slopinimo poveikis žiurkių eritropoezei ir geležies homeostazei. Exp. Hematolis. 2016, 44, 964–974.e4. [CrossRef]

18. Dacie, J.; Lewis, S. Praktinė hematologija; Churchillis ir Livingstonas: Londonas, JK, 1996 m.

19. Ellis, AE Lizocimo tyrimai. In Techniques in Fish Imunology; Pavogtas, J. S., Red.; SOS leidinys: Fair Haven, NJ, JAV, 1990 m.; 101–103 p.

20. Yano, T. Hemolizinio komplemento aktyvumo tyrimai. In Techniques in Fish Imunology; Pavogtas, J. S., Red.; SOS leidinys: Fair Haven, NJ, JAV, 1992; 131–141 p.

21. Siwickis, A.; Anderson, D. Nespecifinių gynybos mechanizmų tyrimas žuvyse: II. Galimas neutrofilų ir makrofagų žudymo aktyvumas, lizocimo aktyvumas serume ir organuose bei bendras imunoglobulino kiekis serume. Žuvų ligų diagnostikos ir prevencijos metoduose; Siwicki, A., Anderson, D., Waluga, J., red.; Wydawnictwo Instytutu Rybactwa Srodladowego: Olštynas, Lenkija, 1993; 105–112 p.

22. Yousefi, M.; Hoseini, SM; Vatnikovas, YA; Nikišovas, AA; Kulikov, EV Timolis kaip naujas anestetikas paprastiesiems karpiams (Cyprinus carpio): veiksmingumas ir fiziologinis poveikis, palyginti su eugenoliu. Akvakultūra 2018, 495, 376–383. [CrossRef]

23. Gao, Y.-J.; Liu, Y.-J.; Chen, X.-Q.; Yang, H.-J.; Li, X.-F.; Tianas, L.-X. Laipsniško histidino lygio įtaka jauniklių amūrų Ctenopharyngodon idella augimui, virškinamų fermentų veiklai, eritrocitų osmosiniam pažeidžiamumui ir hipoksijos tolerancijai. Akvakultūra 2016, 452, 388–394. [CrossRef]

24. Bradford, MM Greitas ir jautrus baltymų kiekio mikrogramų kiekybinio nustatymo metodas, naudojant baltymų ir dažų surišimo principą. Analinis Biochem. 1976, 72, 248–254. [CrossRef]

25. Quade, MJ; Roth, JA Greitas, tiesioginis galvijų neutrofilų pirminių granulių degranuliacijos matavimo tyrimas. Vet Immunol. Imunopatolis. 1997, 58, 239–248. [CrossRef]

26. Zhang, W.-W.; Hu, Y.-H.; Wang, H.-L.; Sun, L. Su virulentiškumu susijusios proteazės iš patogeninės Pseudomonas fluorescens padermės identifikavimas ir apibūdinimas. Vet Microbiol. 2009, 139, 183–188. [CrossRef]

27. Hoseinifar, SH; Roosta, Z.; Hajimoradloo, A.; Vakili, F. Lactobacillus acidophilus, kaip pašarų papildo, poveikis odos gleivinės imuniniams parametrams, žarnyno mikrobiotai, atsparumui stresui ir juodosios karduodegės (Xiphophorus helleri) augimo savybėms. Žuvies vėžiagyviai Immunol. 2015, 42, 533–538. [CrossRef] [PubMed]

28. Fu, C.; Cui, Y.; Pakabintas, SSO; Zhu, Z. F4 žmogaus augimo hormono genų transgeninio raudonojo paprastojo karpio (Cyprinus carpio) viso kūno aminorūgščių modelis, šeriamas skirtingais baltymų kiekiais. Akvakultūra 2000, 189, 287–292. [CrossRef]

29. Gan, L.; Liu, YJ; Tianas, LX; Yue, YR; Yang, HJ; Liu, FJ Ištirpusio deguonies ir dietinio lizino lygio poveikis amūrų, Ctenopharyngodon idella, augimo rezultatams, pašarų konversijos santykiui ir kūno sudėčiai. Akvakultas. Nutr. 2013, 19, 860–869. [CrossRef]

30. Yun, Y.; Daina, D.; Jis, Z.; Mi, J.; Wang, L.; Nie, G. Metionino papildymo augalinių baltymų dietoje poveikis geltonojo upės karpių (Cyprinus carpio haematopterus) jauniklių augimo rezultatams ir filė kokybei. Akvakultūra 2022, 549, 737810. [CrossRef]

31. Fazio, F. Žuvų hematologijos analizė kaip svarbi akvakultūros priemonė: apžvalga. Akvakultūra 2019, 500, 237–242. [CrossRef]

32. Mohsenis, M.; Hamidoghli, A.; Bai, SC Organinis ir neorganinis dietinis cinkas beluga eršketuose (Huso huso): poveikis augimui, hematologijai, audinių koncentracijai ir oksidaciniam pajėgumui. Akvakultūra 2021, 539, 736672. [CrossRef]

33. Mohsenis, M.; Saltanat, NL; Rastravanas, ME; Golalipour, Y. Betaino papildymo augalinių baltymų dietose poveikis kaspinių upėtakių jauniklių augimui, hemato-imunologiniams parametrams, antioksidacinei būklei ir virškinimo fermentų veiklai (Salmo trutta, Kessler, 1877). Akvakultas. Nutr. 2021, 27, 2132–2141. [CrossRef]

34. Aftabgard, M.; Salarzadeh, A.; Mohsenis, M.; Bahri Shabanipour, AH; Zorrehzahra, MEJ Bendras dietinių izomaltooligosacharidų ir Bacillus spp. apie Kaspijos margųjų upėtakių augimą, hemato-serologinius ir žarnyno mikrobiotos rodiklius (Salmo trutta caspius Kessler, 1877). Probiotikai Antimikrobinis. Baltymai 2019, 11, 198–206. [CrossRef]

35. Michelato, M.; Zaminhanas, M.; Boscolo, WR; Nogaroto, V.; Vicari, M.; Artoni, RF Nilinių tilapijų jauniklių mitybos histidino poreikis, pagrįstas augimo našumu, su raumenų augimu susijusių genų ekspresija ir hematologiniais atsakais. Akvakultūra 2017, 467, 63–70. [CrossRef]

36. Machado, M.; Azeredo, R.; Fontinha, F.; Fernández-Boo, S.; Conceição, LEC; Dias, J. Dietinis metioninas pagerina europinio ešerio (Dicentrarchus labrax) imuninę būklę, uždegiminį atsaką ir atsparumą ligoms. Priekyje. Immunol. 2018, 9, 2672. [CrossRef]

37. Šarfas, Y.; Khan, MA Reikalavimas suvartoti Channa punctatus (Bloch) su maistu gaunamam lizinui, atsižvelgiant į augimą, pašarų konversiją ir lizino sulaikymo efektyvumą, RNR/DNR santykį, hematologinius parametrus ir serumo antioksidacinį aktyvumą. Akvakultas. Nutr. 2021, 27, 140–150. [CrossRef]

38. Li, H.-T.; Fengas, L.; Jiang, W.-D.; Liu, Y.; Jiang, J.; Li, S.-H. Oksidacinio streso parametrai ir anti-apoptotinis atsakas į hidroksilo radikalus žuvų eritrocituose: apsauginis glutamino, alanino, citrulino ir prolino poveikis. Aquat. Toksikolis. 2013, 126, 169–179. [CrossRef] [PubMed]

39. Gwo´zdzi ´ski, K.; Roche, H.; Pérès, G. Sunkiųjų metalų jonų poveikio antioksidacinių fermentų aktyvumui žmogaus ir žuvies Dicentrarchus labrax eritrocituose palyginimas. Komp. Biochem. Physiol. C dalis Komp. Pharmacol. 1992, 102, 57–60. [CrossRef] [PubMed]

40. Jansensas, BJ; Le Gall, R.; Reesas, JF peroksido sukelta eritrocitų hemolizė kaip pavyzdys oksidacinei žalai jūrų žuvyse tirti. J. Fish Biol. 2002, 61, 71–84. [CrossRef]

41. Maisey, K.; Imarai, M. Teleostinių leukocitų molekulių įvairovė: alternatyvaus sujungimo vaidmuo. Žuvies vėžiagyviai Immunol. 2011, 31, 663–672. [CrossRef] [PubMed]

42. Kochas, JFA; de Oliveira, CAF; Zanuzzo, FS Dietinis gliukanas (MacroGard®) pagerina Nilo tilapijos įgimtą imuninį atsaką ir atsparumą ligoms, nepaisant vartojimo laikotarpio. Žuvies vėžiagyviai Immunol. 2021, 112, 56–63. [CrossRef]

For more information:1950477648nn@gmail.com