ABSTＲACT

Tikslas: išsiaiškinti, ar bendrojicistanozidai(GC) pagerinapažinimo disfunkcijagreitai senstančios pelės (SAMP8), tarpininkaudamos specifiniams androgenų receptoriams (AＲ)sinapsinio baltymo ekspresijos reguliavimas． 

Metodai: iš viso 76 7-mėnesio amžiaus SAMP8 pelių patinai buvo atsitiktinai suskirstyti į modelių grupę, GC grupę, GC + flutamido (F) grupę, GC + fulvestranto (ICI) grupę, F grupę ir ICI grupę. Kiekvienos grupės pelių mokymosi ir atminties funkcijos buvo išbandytos Morriso vandens labirintu. Bandymui buvo naudojamas Western blot ir RT-PCRsinaptofizino ekspresijos lygis(SYN), postsinapsinis tankis – 95 (PSD –95) ir kiekvienos grupės pelių smegenų neurotrofinis faktorius (BDNF).

Rezultatai: GC žymiai pagerino SAMP8 pelių mokymosi ir pažinimo funkciją.

Palyginti su GCsgroup, pelių mokymosi ir atminties funkcija GCs + F grupėje ir GCs + ICI grupėje buvo žymiai sumažinta. Western blot ir RT-PCR rezultatai parodė, kad BDNF, SYN ir PSD-95 ekspresijos lygis buvo žymiai padidėjęs baltymų ir genų lygiu GC grupėje, palyginti su modelio grupe (P ＜ 0． {{ 11}}5) SYN ekspresijos lygis buvo padidintas GCs + F ir GCs + ICI grupėje, o BDNF ir PSD -95 ekspresijos lygis buvo žymiai sumažintas GCs + F ir GCs + ICI grupėje, palyginti su GC grupe (P ＜ 0 - 05) .

Išvada: GC gali konkrečiai tarpininkauti AＲ, kad padidintų SAMP8 pelių sinaptinį plastiškumą, o tai savo ruožtu pagerina mokymąsi ir pažinimo funkciją.

RAKTINIAI ŽODŽIAI:Bendrieji cistanozidai; Androgenų receptorius; Sinapsinis plastiškumas; SAMP8 pelės

Cistanche papildas kognityvinių funkcijų gerinimas Maisto papildas PhGs75% Ech 30% Act 12%

Alzheimerio liga(AD) yra įprastaneurologinė degeneracinė liga, kuriai kliniškai būdingas progresuojantis kognityvinių funkcijų silpnėjimas ir psichinės bei psichologinės būklės pokyčiai [1]. Tyrimai parodė, kad AD sergančių vyrų testosterono lygis yra žymiai mažesnis nei įprastų vyrų.

Nutarėpacientų pažinimo funkcijapo to buvo įvairiais laipsniais patobulintaspakaitinė ketonų terapija[2], o tai rodo, kad su amžiumi susijęs androgenų kiekio sumažėjimas gali būti vyresnio amžiaus vyrų AD rizikos veiksnys.

Cistanche deserticola bendrieji glikozidai (bendrieji cistanozidai, GC) yra vienas iš pagrindinių Cistanche deserticola ekstraktų, galinčių pagerinti su AD susijusį mokymąsi irpažinimo disfunkcija[3]. Be to, GC skyrimas per zondą žymiai padidino testosterono kiekį gyvūnams [4]. GC taip pat atlieka yang skatinimo funkciją ir gali daryti poveikį

Į androgenus panašus farmakodinaminis poveikis. Ankstesni tyrimai parodė, kad testosteronas gali pagerinti AD modelio gyvūnų mokymosi ir pažinimo funkcijas, o šis procesas priklauso nuo specifinių androgenų receptorių (androgenų receptorių, AR) tarpininkaujamų [5].

Gerai žinoma, kad AD pacientų kognityvinė disfunkcija yra glaudžiai susijusi su sinaptiniu plastiškumu. Tačiau konkretus mechanizmas, per kurį GC reguliuoja sinaptinį plastiškumą ir taip pagerina mokymosi bei pažinimo funkcijas, vis dar neaiškus. Šiuo tyrimu buvo siekiama išsiaiškinti, ar GC tarpininkauja specifiniam ARＲ, kad paveiktų sinaptinį plastiškumą ir taip pagerintų mokymosi ir pažinimo funkcijas sergant AD.

1 Medžiagos ir metodai

1. 1 Eksperimentiniai gyvūnai ir įranga

3-Mėnesių SAMP8 pelių patinai buvo įsigyti iš Pekino universiteto Medicinos mokyklos (SCXK [Pekinas] 2016-0010) ir buvo auginami iki 7 mėnesių amžiaus. Gyvūnai buvo laikomi švarioje aplinkoje (24 ± 1) laipsnių ir

Gyvūnams buvo suteiktas natūralus apšvietimas, nemokama prieiga prie maisto ir vandens, humanitarinė pagalba buvo suteikta laikantis eksperimentinių gyvūnų naudojimo 3R principų. Šį eksperimentinį tyrimą patvirtino Baotou medicinos koledžo Eksperimentinių gyvūnų etikos komitetas (Baotou medicinos koledžas Nr. 20201102).

Pagrindiniai reagentai eksperimente yra šie:Cistanche deserticola bendrieji glikozidai(GC, Xi'an Ciyuan Biological Co., Ltd.); androgenų receptorių antagonistas-flutamidas (Sigma Company, JAV); estrogenų receptorių antagonistas-fulvestrantas (ICI 182780, JAV) Med Chem Express); Triušio anti-pelės BDNF antikūnas,

PSD-95 antikūnas, SYN antikūnas, -aktino antikūnas (Jungtinių Valstijų „Proteintech Company“); baltymų elektroforezės tirpalas, baltymų pernešimo tirpalas, TEMED, akrilamido buferis, amonio persulfatas, Tris (Beijing Solebao Technology Co., Ltd.); cDNR sintezės rinkinys, talentų fluorescencijos kiekybinis aptikimas

Reagentų rinkinys (Tiangen Biochemical Technology Co., Ltd.) ir tt Pagrindinę eksperimentinę įrangą sudaro vertikalios plokštelės elektroforezės bakas, elektroforezės aparatas, perkėlimo bakas, dažų šalinimo kratytuvas (Beijing Liuyi Biotechnology Co., Ltd.), baltymų gelio vaizdų analizės sistema. (Shanghai Tanon Technology Co., Ltd.), realaus laiko fluorescencijos kiekybinis PGR prietaisas (JAV Roche) ir kt.

1. 2 Grupavimas ir administravimas

Dvi pelės natūraliai mirė šėrimo metu, o likusios 78 pelės buvo atsitiktinai suskirstytos į modelių grupę, GC grupę, GC + flutamido (F) grupę, GC + fulvestranto (ICI) grupę, F grupę, ICI.

Grupės po 13 gyvūnų. Išskyrus modelio grupę, F grupę ir ICI grupę, kitoms grupėms 30 dienų buvo nuolat vartojami GC po 50 mg / (kg · d).

Nuo 24 dienos po GC suleidimo GC + flutamido (F) ir GC + fulvestranto (ICI) grupėms buvo suleidžiama į pilvaplėvės ertmę F (5 mg/kg/d) praėjus 30 min. po GC suleidimo. zondu. ), ICI (1 mg/kg/d.), nepertraukiama injekcija 7 dienas. Sureguliuokite dozavimo koncentraciją taip, kad didžiausias pelių skrandžio tūris būtų 0,5 ml, 1 kartą per dieną.

1. 3 Morriso vandens labirinto testas

Pelės prisitaikė prie vandens aplinkos vieną dieną iš anksto. Morriso vandens labirintas truko 6 dienas. Pirmosios 5 dienos buvo padėties nustatymo ir navigacijos testas. Pelės buvo treniruojamos kartą per dieną kiekviename iš keturių kvadrantų po 1 minutę. Kiekvienas treniruočių intervalas buvo 15 minučių, o rekordai buvo registruojami tuo pačiu metu. Gyvūno padėties nustatymo ir navigacijos bandymo pabėgimo delsa; 6 dieną išimkite platformą iš vandens ir atlikite kosmoso tyrinėjimo testą. Užrašykite platformos kirtimų skaičių ir laiko, praleisto tiksliniame pelės kvadrante, procentą. tikslinis kvadrantas) ir erdvinio tyrinėjimo plaukimo trajektorija (Swimming trajectory of spatialprobe test) ir kiti rodikliai.

1. 4 Western blot aptikimas

SYN, PSD-95 ir BDNF sinapse susijusių baltymų ekspresija. Po Morriso vandens labirinto testo visos pelės buvo reguliariai anestezuojamos, jų galvos buvo nukirstos, smegenys pašalintos, o hipokampai – nuimti. Hipokampo audinys buvo lizuojamas baltymais, suardytas ultragarsu 4 laipsnių kampu, paliktas ant ledo 30 min. ir centrifuguojamas 12, 000 aps./min. greičiu 15 min 4 laipsnių temperatūroje. Supernatantas buvo paimtas ir baltymų koncentracija buvo išmatuota naudojant BCA metodą. Įdėjus baltymą, atlikti krovimo gelio elektroforezę esant pastoviai 80 V įtampai, atskyrimo gelio elektroforezę esant pastoviai 120 V įtampai ir šlapią perdavimą esant pastoviam 300 mA srautui; išimkite PVDF membraną, užblokuokite ją 5% nugriebtu pienu 80 minučių kambario temperatūroje ir tris kartus nuplaukite membraną TBST. 15 min./kartą, pirminis antikūnas buvo inkubuojamas per naktį ant kratymo stalo 4 laipsnių temperatūroje; kitą dieną membrana 3 kartus plaunama TBST.

15 min./kartą, antrinis antikūnas buvo inkubuojamas kambario temperatūroje 2 val., po to buvo atlikta ECL spalvos raida ir vaizdavimas chemiliuminescencine vaizdo sistema. -aktinas buvo naudojamas kaip vidinė atskaita, o juostos optinio tankio vertė buvo analizuojama naudojant Image J programinę įrangą.

1. 5ＲRT-PCRＲAptikimas

SYN, PSD-95 ir BDNF mRNR ekspresija buvo išskirta iš hipokampo audinio bendros RNR pagal Trizol ekstrahavimo metodą, o cDNR buvo sukurta po atvirkštinės transkripcijos. Talent fluorescencijos kiekybinio aptikimo rinkinys buvo naudojamas santykiniam fluorescencijos kiekybiniam aptikimui. Eksperimentas buvo pakartotas tris kartus, o rezultatai buvo konvertuoti į 2 - ΔΔCT buvo analizuojamas. Pelės -aktino, SYN, PSD-95 ir BDNF pradmenis sukūrė Shanghai Sangon Company, o pradmenų sekos parodytos 1 lentelėje.

1. 6 Statistinė analizė

Naudojant SPSS 25. 0 statistinę programinę įrangą, skirtą apdoroti, Graphpad Prism 8 programinė įranga buvo naudojama statistiniams grafikams braižyti, o vienpusė ANOVA buvo naudojama kelių mėginių poriniams vidurkiams palyginti. P < 0. 05 reiškia, kad skirtumas yra statistiškai reikšmingas.