Etanolis ožragės ekstraktas: jo molekuliniai mechanizmai prieš odos senėjimą ir sustiprintos nanokapsuliavimo funkcijos

Prašau susisiektioscar.xiao@wecistanche.comDaugiau informacijos

Santrauka:Ožragės arba Trigonella foenum-graecumL.(Leguminosae šeimos) sėklos paprastai naudojamos kaip maisto papildai, siekiant padidinti pogimdyminę laktaciją. Vaistinės ožragės ekstraktas pasižymi antioksidacinėmis ir priešuždegiminėmis savybėmis, tačiau jo mechanizmai prieš odos senėjimą nebuvo išnaudoti. Šiame tyrime mes pirmieji nustatėme ožragės ekstrakto (ICso =0,57±0.02mg/mL) in vitro kolagenazę slopinamąjį aktyvumą, kuris yra 2,6 karto didesnis. stipresnis nei vitaminas C (IC50=1.46mg/ml). Nanokapsuliavimas buvo pritaikytas ekstrakto stabilumui pagerinti ir vėliau padidino jo biologinį aktyvumą. Liponiosomas kapsuliuojantis ožragės ekstraktas (LNF) buvo paruoštas naudojant greitaeigį homogenizatorių, todėl gautos vienalytės sferinės nanodalelės, kurių dydžiai yra 174,7±49,2 nm, 0,26±0,04 PdI ir 46,4,6 proc. įstrigimo efektyvumas. LNF formulė žymiai palengvino ilgalaikį išsiskyrimą ir žymiai pagerino ekstraktų prasiskverbimą į odą, o tai rodo, kad LNF galima naudoti transderminiam tiekimui. Sudėtas LNF buvo labai stabilus, nebuvo toksiškas žmogaus fibroblastams ir galėjo padidinti ląstelių gyvybingumą, kolageno gamybą ir slopinti MMP1, MMP9, IL-6 ir IL-8 sekreciją, palyginti su ekstraktu bendrai auginamas odos modelis. Todėl etanolinis ožragės ekstraktas ir jo sukurtas LNF pasižymi molekuliniais mechanizmais prieš odos senėjimą ir gali būti naudojami kaip naujoviškas ingredientas odos senėjimo prevencijai.

Norėdami sužinoti daugiau, spustelėkite čia

Raktiniai žodžiai:ožragė; rutinas; antikolagenazė; kovoti su senėjimu; kolageno gamyba; liposomos; nanokapsuliavimas; lipidų dalelės; transderminis pristatymas; ilgalaikis paleidimas

1. Įvadas

Odos senėjimas yra biologinis procesas, kurį sukelia tiek vidiniai, tiek išoriniai veiksniai. Vidinį senėjimą sukelia odos elastingumo pokyčiai laikui bėgant, o išorinis senėjimas yra priskiriamas UV spinduliuotei, taršai ir rūkymui. UV spinduliuotės poveikis (fotosenėjimas) yra vyraujantis veiksnys [1,2]. Svarbiausios tarpląstelinės matricos (ECM) struktūros yra kolagenas, elastinas ir glikozaminoglikanai (GAG) [3]. Įprasti odos senėjimo bruožai yra reaktyviųjų deguonies rūšių (ROS) susidarymas ir ECM skaidymas dėl per daug išreikštų matricos metaloproteinazių (MP). Nustatyta, kad kaupiamasis oksidacinis stresas ir UV spinduliuotė padidina skaidančių fermentų, ypač kolagenazės ir elastazė [1,4,5]. Tai prisideda prie bendro odos elgesio, įskaitant tempimo stiprumo ir elastingumo praradimą, dėl to susiraukšlėjimą ir sausumą. Siekiant kovoti su odos senėjimu, moksliniai tyrimai daugiausia skirti oksidacinio streso (antioksidanto) ir ECM degradacijos (antikolagenazės ir antielastazės) mažinimui[6-8]. Natūralūs produktai sulaukė susidomėjimo kaip naujos kartos kosmetikos gaminiai. Yra daug įrodymų, kad augalai turi įvairių aktyvių junginių, pavyzdžiui, terpenoidų, alkaloidų ir fenolio junginių [9-11].flavonoidųTrigonella foenum-graecum L. (ožragė), priklausanti Leguminosae šeimai, yra žolinis augalas, paprastai augantis Vakarų Azijoje, Šiaurės Indijoje, Šiaurės Afrikoje ir Viduržemio jūroje [12]. Vaistinės ožragės sėklos dažniausiai naudojamos kaip maistas, prieskonis, galaktagogas ir tradicinė diabeto medicina[13-15]. Be to, toksikologinis tyrimas parodė ožragės sėklų saugumą, kai jos naudojamos kaip maisto papildas [16]. Ožragės sėklose yra daug fitocheminių medžiagų, įskaitant alkaloidus, saponinus ir flavonoidus (rutiną, kvercetiną ir viteksiną) [17]. Daugelyje tyrimų buvo pranešta apie ožragės antidiabetinį, priešvėžinį, antimikrobinį, antioksidacinį ir priešuždegiminį poveikį. kolageno skaidymo slopinimas [24-26]. Nors nėra pranešimų, kad ožragės ekstraktas būtų įtrauktas į kosmetikos gaminius, tikimasi, kad jis turės biologinių savybių, rodančių šias galimas funkcijas. Nepaisant to, bendrosios natūralaus ekstrakto naudojimo kosmetikos gaminiuose problemos yra prastas įsiskverbimas į odą, tirpumas ir stabilumas. Nanokapsuliavimas yra metodas, kuris buvo naudojamas (i) pagerinti stabilumą, (ii) padidinti tirpumą vandenyje, (iii) pagerinti odos prasiskverbimą ir absorbciją ir iv) lėtai atpalaiduoti veikliąsias medžiagas [27, 28]. Yra daug skirtingų nanodalelių tipų, tokių kaip liposomos, niosomos ir liponiosomos (liposomų ir niosomų derinys). Liponiosomos yra sudarytos iš fosfolipidų ir nejoninių aktyviųjų paviršiaus medžiagų, kurios padidina nano-nešiklių gebėjimą ir kontroliuoja jų išsiskyrimą[29]. Liponiosomų morfologija panaši į liposomų morfologiją. Tačiau liponiosomos yra lankstesnės ir pritaikomos, o svarbiausia – veikia kitaip. Liponiosomų nešiklio privalumai yra tai, kad jie yra deformuojami, kad prasiskverbtų į poras, kurios yra daug mažesnės nei nešiklio dydis, ir gali transportuoti tiek vandenyje, tiek riebaluose tirpias medžiagas. Vadinasi, liposomos yra perspektyvios nešiklios, pernešančios veikliąją medžiagą į odą [30]. Šiame tyrime buvo patvirtintas ir identifikuotas ožragės ekstraktas, kuriame kaip analitinis žymeklis naudojamas rutinas. Buvo išaiškintas ožragės ekstrakto biologinis aktyvumas. Vaistinė ožragė parodė antikolagenazės aktyvumą ir padidino kolageno gamybą, o tai gali reikšti anti-senėjimą. Buvo sukurtas ir apibūdintas liponiosomas inkapsuliuojantis ožragės ekstraktas (LNF). LNF citotoksiškumas buvo pastebėtas žmogaus odos fibroblastuose, naudojant ląstelių tyrimus. Tai taip pat apėmė molekulinių mechanizmų, susijusių su LNF senėjimą stabdančiomis savybėmis, tyrimą. Pakartotiniai rezultatai rodo, kad LNF nėra toksiškas derninėms fibroblastų ląstelėms ir gali slopinti MMP1, MMP9, IL-6 ir IL-8 sekreciją UV sukeltam odos senėjimui. Taigi, mūsų išvados patvirtina, kad ožragės ekstraktas ir LNF yra naujoviškos senėjimą stabdančios medžiagos, padidinančios jų, kaip kosmetikos produktų veikliųjų medžiagų, potencialą.

cistanche gali kovoti su senėjimu

2. Rezultatai

2.1. UHPLC patvirtinimas ir rutino identifikavimas ožragės ekstrakte

Po maceravimo etanoliu buvo gauta aliejinė gelsvai ruda ožragės ekstrakto pasta. Rutino kiekio, kaip analitinės žymens, identifikavimas buvo tiriamas naudojant UHPLC. Optimalus rutino atskyrimas nuo ožragės ekstrakto buvo pasiektas, kai sulaikymo laikas buvo maždaug 2,458 min (1 pav.), ir tai patvirtinta naudojant LC-MS, kai aptiktas produkto jonas yra 301 (papildomas S1 paveikslas). Rutino patvirtinimas buvo atliktas naudojant AOAC gaires [31,32] ir parodyta 1 lentelėje. Lentelėje esanti lygtis rodo gerą tiesiškumą, o determinacijos koeficientas (r2) yra 0,998, o tikslumas matuojamas susigrąžinimo procentas. Jautrumas buvo nurodytas naudojant aptikimo ribą (LOD) ir kiekybinę ribą (LOQ) atitinkamai 5,17 ir 15,67 ug/mL. Vaistinės ožragės ekstraktai buvo ruošiami įvairiomis koncentracijomis, o rutino kiekis ekstrakte buvo interpretuojamas naudojant plotą po kreive. , palyginti su standartine komercinės rutino nuorodos kreive. Rezultatai parodė, kad paruoštame ekstrakte yra 7,73±0,40 mg/gofrutino.

2.2. In vitro kolagenazės slopinimas ir ožragės ekstrakto kolageno gamyba

Ožragės ekstrakto senėjimą stabdantis aktyvumas pirmiausia buvo nustatytas in vitro kolagenazės slopinimo tyrimu. Pastebėjome, kad ofrutino trihidrato standarto, ožragės ekstrakto ir epigalokatechino galato (EGCG) IC50, kaip teigiamos kontrolės, buvo 0.06±0,56±{ {10}},02 ir 0,11±0,01 mg/mL atitinkamai (2a, b pav.). Pažymėtina, kad ožragės ekstrakto slopinamoji koncentracija buvo žymiai mažesnė nei askorbo rūgšties (IC50=1.46±0,02 mg/mL), o tai rodo, kad ožragės ekstraktas ir rutino trihidrato standartas pasižymi antikolagenazės aktyvumu. Toliau buvo tiriamas ožragės ekstrakto gebėjimas gaminti kolageną, naudojant žmogaus odos fibroblastą. Ląstelės buvo gydomos 125 ug/ml ekstrakto ir vitaminu Cas, teigiama kontrole 7 ir 14 dienų. Ląstelės buvo nudažytos Sirius Red, o dažyti kolagenai buvo ištirpinti NaOH.hesperidino vartojimasKaip parodyta 2b paveiksle, „Sirius Red“ rodo kolageno kiekį. Dažyto kolageno kiekis žymiai padidėjo ekstraktu apdorotose ląstelėse (163 proc. ir 131 proc.), palyginti su nešiklio kontrole (225 proc. ir 187 proc.), atitinkamai 7 ir 14 dieną. Ši indukcija buvo panaši į vitamino C sukeltos kolageno gamybos poveikį ir buvo žymiai didesnė nei rutino sukelta kolageno gamyba žmogaus fibroblastų ląstelėse. Šis rezultatas parodė, kad ožragės ekstraktas skatina kolageno gamybą žmogaus odos fibroblastų ląstelėse.

2.3.Sudėtos LNF fizikinės ir cheminės charakteristikos

Siekiant pagerinti vaistinės ožragės ekstrakto stabilumą ir pagerinti jo išvaizdą, LNF paruošimas buvo atliktas naudojant visus 2 lentelėje nurodytus ingredientus. Gauta geltonai auksinė pastos medžiaga (3a pav.: apatiniame kairiajame kampe), kuri lengvai disperguojama vandenyje ir gaunamas gelsvas tirpalas (pav. 3a: dešinėje).

LNF rodė įvairų ir švelnų žolelių kvapą. Sudėtos LNF fizikinės ir cheminės charakteristikos buvo ištirtos naudojant dinaminę šviesos sklaidą (DLS) ir parodytos 3 lentelėje. Dalelių dydis buvo 174,7±49,2 nm, o polidispersiškumo indeksas mažas (PdI=0.26±{). {7}}.{18}}4) ir neigiamai įkrautas paviršius dėl fosfolipidų [33]. Inkapsuliavimo ir įkrovimo efektyvumas buvo atitinkamai maždaug 46,6±7,4 proc. ir 33,5±4,0 proc. Mikrografijoje parodyta formuotų dalelių morfologija kaip sferinės dalelės, gaubiančios ožragės ekstraktą 3a paveiksle, kurių skersmuo yra 50-150 nm (3b pav.). Endoterminės smailės DSC termogramoje (3c pav.), esančios ties 45,8 laipsniu, rodo LNF lydymosi temperatūrą, kuri yra tarp liposomų lydymosi temperatūrų atitinkamai 44,2 laipsnio ir niosomos 47,5 laipsnio.oteflavonoidasMorfologija ir terminis elgesys gali patvirtinti, kad LNF rodo fizines liposomų ir niosomų savybes.

LNF buvo laikomas 4 laipsnių, 25 laipsnių ir 40 laipsnių temperatūroje 3 mėnesius, siekiant ištirti jo stabilumą pagal dalelių dydį, PdI ir Z potencialą naudojant DLS techniką. Taip pat buvo tiriamas gautų dalelių pH ir klampumas1. Pastebėjome nedidelį dalelių dydžių, laikomų 40 laipsnių, padidėjimą, palyginti su 4 laipsniais, tačiau šie pokyčiai statistiškai nesiskyrė.prarasta imperija cistancheBe to, nebuvo reikšmingų pokyčių kitose paruošto LNF charakteristikose, įskaitant pH, klampumą ir kapsuliavimo procentą. Visi šie rezultatai rodo, kad gautos dalelės buvo fiziochemiškai stabilios (4 pav.).

2.4. Formulės LNF atpalaidavimo profilis ir prasiskverbimas į odą

Išsiskyrimo profilis (5a pav.) parodė, kad ožragės ekstraktas išsiskyrė vienu metu, o jo liposomos buvo aptiktos po 2 valandų – 6,98±0,37 proc., o po 24 val. padidėjo iki 23,92±1,41 proc., o tai rodo ilgalaikį išsiskyrimą Siekiant ištirti LNF stiprumą per odą, buvo atliktas įsiskverbimas į odą naudojant ex vivo kiaulių odą. Vaizdo masės mikroskopo (IMS) analizė buvo naudojama siekiant stebėti kumuliacinį rutino kiekį, kuris buvo perneštas per kiaulių odą pagal rutino standartą, ekstraktą ir LNF. 5b paveiksle pastebėjome, kad ožragės ekstraktas ir LNF parodė didesnį susikaupusio rutino kiekį odoje, palyginti su rutino standartu. Šis rezultatas parodė, kad ožragės ekstrakto ir LNF pralaidumas buvo didesnis ir gilesnis nei rutino 24 val.mikronizuota išgryninta flavonoidų frakcija 1000 mgBe to, LNF prasiskverbimas į odą pastebimai pagerėjo, palyginti su ekstraktu. Remiantis atpalaidavimo profiliu ir ex vivo odos prasiskverbimo tyrimu, LNF galbūt padidina ekstrakto efektyvumą padidindamas prasiskverbimą ir kontroliuojamą išsiskyrimą.

Šis straipsnis ištrauktas iš Pharmaceuticals 2022, 15, 254. https://doi.org/10.3390/ph15020254 https://www.mdpi.com/journal/pharmaceuticals