Eksperimentinis cistanche bendrojo glikozidų (CTG) apsauginio poveikio inkstų išeminiam reperfuzijos sužalojimui tyrimas

Kontaktai: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 El. paštas:audrey.hu@wecistanche.com

ZHU Jun, ZHAO Xi

Abstraktus:Tikslas Nustatyti žiurkių hemoraginio šoko ir gaivinimo modelį, kad būtų galima stebėti apsauginįbendras cistancho glikozidų kiekis( CTG)ant inkstųišeminė-reperfuzijos trauma. Met ods SD žiurkės buvo atsitiktinai suskirstytos į apgaulingą - operacijų grupę, šoko ir gaivinimo grupę( eksperimentinę grupę) ir CTG grupę, kurioje kiekvienoje buvo po 10 žiurkių. Po modeliavimo CTG grupės žiurkėms buvo suleista 400 mg/kg CTG injekcija į pilvaplėvės ertmę. Eksperimentinėje grupėje ir fiktyvios operacijos grupėje buvo švirkščiamas fizinis fiziologinis tirpalas 3 ml. Cr, BUN ir Cys - C lygis buvo nustatytas siekiant nustatyti inkstų funkciją kiekvienoje grupėje. Srauto citometrija buvo naudojama inkstų ląstelių apoptozės dažniui nustatyti. ELISA buvo naudojama XIAP ekspresijai inkstų audinyje nustatyti. Rezultatai Palyginti su eksperimentų grupe, Cr, BUN ir Cys - C lygiai akivaizdžiai sumažėjoCTG (angl.grupė( P < 0,01),="" o="" inkstų="" ląstelių="" apoptozė="" sumažėjo(="" p="">< 0,01).="" ctg="" žymiai="" pagerino="" xiap="" ekspresiją(=""><0.05). conclusion="">CTG (angl.suteikia apsauginį poveikįišeminė reperfuzijažiurkių inkstų pažeidimas, kuris gali būti susijęs su XIAP ekspresijos skatinimu.

【Raktiniai žodžiai】 Inkstai; Išeminė reperfuzijos trauma; Cistanche Bendras glikozidų kiekis; XIAP; Ląstelių apoptozė

Cistanche bendras glikozidų kiekis

Išemijos-reperfuzijos (I/R) traumayra dažnas patofiziologinis inkstų pažeidimo reiškinys hemoraginio šoko, sunkios traumos, inkstų transplantacijos ir inkstų naviko operacijos procese. Tyrimai parodė, kad apoptozė yra svarbi inkstų funkcijos pažeidimo, kurį sukelia I/R trauma, grandis [1]. Su X chromosoma susijęs apoptozės baltymo inhibitorius (XIAP) yra vienas stipriausių iki šiol rastų endogeninių apoptozės inhibitorių [2]. Yra nedaug tyrimų apie XIAP anti-apoptotinį poveikį inkstų audiniams po I/R traumos.Cistanche bendras glikozidų kiekis(CTG) yra iš sąrašo Feniletanolio glikozidų junginiai, ekstrahuoti išCistancheturi skirtingas biologines funkcijas. Jo inkstų apsaugos po I/R traumos tyrimų yra nedaug. Šiame eksperimente buvo sukurtas žiurkių hemoraginio šoko gaivinimo modelis ir sukurtas sisteminis I/R sužalojimo modelis, skirtas ištirti apsauginį CTG išankstinio apdorojimo poveikį inkstams nuo I/R traumos ir ištirti galimą jo mechanizmą.

Cistanche poveikis: užkirsti keliąIšemijos-reperfuzijos (I/R) trauma

1 Medžiaga ir metodai

1.1 Eksperimentinės medžiagos

1.1.1 Laboratoriniai gyvūnai 30 švarių sveikų SD žiurkių patinų, kuriuos teikia Šanchajaus tradicinės kinų medicinos universiteto eksperimentinis centras, gyvūno sertifikato numeris: SYXK (Šanchajus) 2009-0069, kūno svoris (320 ± 30) g.

1.1.2 Eksperimentinis reagentasCTG (angl.(įsigyta iš Zhejiang Hangzhou Xinghui Tianli Pharmaceutical Co., Ltd., partijos numeris: 20081516); natrio pentobarbitalis (partijos numeris: P3761), propidžio jodidas (PI), Rhodamin123 (abu įsigyti (Iš Sigmos, JAV); Žiurkių XIAP nustatymo rinkinys ELISA rinkinys (įsigytas iš Šanchajaus Kemin Biotechnology Co., Ltd., partijos numeris CSB-ELO26172MO).

1.1.3 Laboratorinis instrumentas Mikroplokštelių skaitytuvas (American Thermo Company); Kelių parametrų fiziologinis detektorius (įsigytas iš NIHON KOHDEN Company, Japonija); Srauto citometras (įsigytas iš "Becton-Dickinson Company", JAV); 24 G trocar ( Shandong Jierui medicinos įrangos kompanija).

1.2 Eksperimentiniai metodai

1.2.1 Gyvūnų modelio SD žiurkių paruošimas buvo pasninkaujamas likus 12 valandų iki eksperimento ir anestezuojamas į pilvaplėvės ertmę į pilvaplėvės ertmę suleidžiant natrio pentobarbitalio (50 mg/kg). Žiurkės buvo pritvirtintos gulint, o kairėje pilvo dalyje buvo padarytas 3 cm pjūvis ir atskirtas. Šlaunikaulio arterijoje įdedamas 24 G trokaras, prijungiamas kelių parametrų fiziologinis testeris, heparinizuojamas 20 ml švirkštas, o kraujospūdis sumažėja iki 40 mm Hg. Kraujospūdis sumažėja iki 40 mm Hg. Manoma, kad prasidėjo šokas, o kraujospūdis palaikomas 90 minučių. Jis yra (13 ± 3) ml, o tada švirkšte esantis autologinis kraujas lėtai grąžinamas. Norint atkurti kraujospūdį iki daugiau nei 90% pagrindinės vertės, reikia apie 30 minučių. Manoma, kad gaivinimas yra sėkmingas [3]. Ištraukite trokaro adatą, suriškite šlaunikaulio arteriją ir siūkite pjūvį. Po to, kai žiurkės buvo pabudusios, jos buvo grąžintos į narvą stebėjimui, ir jos turėjo laisvą prieigą prie maisto ir vandens. Praėjus 24 valandoms po gaivinimo, žiurkės buvo anestezuotos pentobarbitalio natrio druska (50 mg/kg) injekcijos į pilvaplėvę, laparotomijos būdu, o iš prastesnės vena cava buvo surinkta 5 ml kraujo. Žiurkės buvo nužudytos nedelsiant, o kairysis ir dešinysis inkstai buvo paimti naudoti.

1.2.2 Gyvūnų grupė ir suleidimas į 30 žiurkių atsitiktine tvarka buvo suskirstytos į fiktyvios chirurgijos grupę, šoko gaivinimo grupę (eksperimentinę grupę) ir CTG grupę, kiekvienoje grupėje buvo po 10 žiurkių.

Eksperimentinei grupei į pilvaplėvės ertmę buvo suleista 3 ml normalaus fiziologinio tirpalo likus 2 valandoms iki kraujo praliejimo. NutarėCTG (angl.grupėje CTG buvo suleista likus 2 valandoms iki žiurkių kraujo praliejimo, o dozė buvo suleista į pilvo ertmę 400 mg/kg doze. Fiktyvios operacijos grupei buvo atlikta tik anestezija, laparotomija ir šlaunikaulio arterijos trokaro įdėjimo ir siūlų pjūvių atskyrimas ir kt., Kraujo praliejimas ir gaivinimas nebuvo atlikti, o likusieji buvo tokie patys kaip eksperimentinė grupė.

1.3 Bandymų rodikliai ir metodai

1.3.1 Kreatinino (Cr), karbamido azoto (BUN), cistatino C Cr, BUN ir cistatino C kraujo nustatymą nustato mūsų ligoninės laboratorija. Cystatinas C yra endogeninis glomerulų filtracijos greičio pokyčių žymuo. Sutrikus inkstų funkcijai, glomerulų filtracijos greitis mažėja, o cistatino C koncentracija kraujyje gali padidėti daugiau nei 10 kartų. C cikastatino diagnostinis tikslumas yra žymiai geresnis nei kreatinino serumo tikslumas.

1.3.2 Ląstelių apoptozės greičio nustatymas Srauto citometrija buvo naudojama inkstų ląstelių apoptozės dažniui nustatyti. Paimkite inkstą ir supjaustykite jį peiliuku, įpilkite šiek tiek PBS ir perkelkite į mėgintuvėlį. Įpilama 0,3 % tripsino virškinimui 37 °C vandens vonioje ir inkubuojama 20 min. Kai mėgintuvėlyje esanti medžiaga tampa drumsta, du kartus įpilkite PBS, kad sustabdytumėte virškinimą, filtruokite 300 akių nailono tinkleliu, išmeskite priemaišas ir naudokite žemos temperatūros centrifugą Centrifuga 1500 g / s temperatūroje 5 min., Išpilkite supernatantą, sureguliuokite ląstelių koncentraciją iki 1 × 106 ~ 1,5 × 106 / ml, paimkite 0,4 ml pirmiau minėtos ląstelių suspensijos, ir įpilama 10 μl /ml Rhodamin123 0 .4 ml, inkubuojama 37 °C vandens vonioje, apsaugotoje nuo šviesos, mėgintuvėlis uždaromas, po 30 min. plaunamas du kartus PBS, po 5 min centrifuguojama 1500 g/s temperatūroje, supernatantas išmetamas ir vėl plaunamas tokiu pačiu būdu. Įpilkite PI 0,4 ml, dažykite 15 min. ir patikrinkite normalių, nekrotinių ir apoptotinių ląstelių procentą inkstuose. Pagal šių dviejų dažų afinitetą įvairių tipų ląstelėse yra žinoma, kad tik PI spalvos ląstelės yra negyvos ląstelės, tik Rhodamin123 spalvotos ląstelės yra gyvos ląstelės, o abi spalvotos ląstelės yra apoptotinės ląstelės.

1.3.3 Su fermentais susijęs imunologinis tyrimas (ELISA) buvo naudojamas XI-AP ekspresijai žiurkių inkstų audiniuose nustatyti. Buvo paimti kiekvienos grupės inkstai, o švieži inkstų audiniai buvo gydomi audinių lizatu. Centrifuguojama 1500 g/s žemos temperatūros centrifugoje 5 min. Paimkite supernatantą ir dirbkite pagal XI-AP ELISA rinkinio instrukcijas. Šanchajus Jiaoda Fenghe Technology Co., Ltd. yra atsakingas už bandymus.

1.4 Statistinis apdorojimas

Visi duomenys buvo statistiškai išanalizuoti naudojant SPSS17.0 programinę įrangą, o duomenys buvo išreikšti kaip vidutinis ± standartinį nuokrypį (x ± s) ir P<0.05 indicated="" that="" the="" difference="" was="" statistically="">

bendras cistancho glikozidų kiekis

2 rezultatai

2.1 Inkstų funkcijos indeksai Cr, BUN, Cystatin C Cr, BUN, Cystatin C palyginimas eksperimentinėje grupėje buvo žymiai didesnis nei fiktyvios operacijos grupės (P<0.01), indicating="" that="" the="" rat="" kidney="" i/r="" model="" was="" prepared="">

Palyginti su eksperimentine grupe, Cr, BUN ir Cystatin C vertėsCTG (angl.grupė žymiai sumažėjo, o skirtumas buvo statistiškai reikšmingas (P<0.01). the="" results="" are="" shown="" in="" table="">

1 lentelė Kiekvienos grupės žiurkių inkstų funkcijos indeksų Cr, BUN ir Cystatin C palyginimas (x ± s)

Pastaba: palyginti su fiktyvia operacijų grupe, P<0,01; palyginti="" su="" eksperimentine="" grupe,=""><>

2.2 Inkstų ląstelių apoptozės greitis ir XIAP ekspresija inkstų audinyje. Tik kelios fiktyvios operacijos grupės inkstų audinio ląstelės patiria apoptozę.

Apoptozės skaičius eksperimentinėje grupėje žymiai padidėjo, o skirtumas buvo statistiškai reikšmingas, palyginti su fiktyvios operacijos grupe (P<0.01); the="" number="" of="" apoptosis="" in="" the="" ctg="" group="" was="" decreased="" compared="" with="" the="" experimental="" group,="" and="" the="" difference="" was="" statistically="" significant="" (p=""><0.01)>

Fiktyvios operacijos grupė turėjo tik silpną XIAP išraišką, o eksperimentinė grupė turėjo reikšmingą XIAP ekspresijos padidėjimą (P<0.01). compared="" with="" the="" experimental="" group,="" the="" ctg="" group="" can="" significantly="" increase="" the="" expression="" of="" xiap=""><0.05). the="" results="" are="" shown="" in="" table="">

2 lentelė Kiekvienos grupės žiurkių inkstų ląstelių apoptozės dažnio ir XIAP ekspresijos palyginimas (x± s)

Pastaba: palyginti su fiktyvia operacijų grupe, aP<0. 01;="" palyginti="" su="" eksperimentine="" grupe,="" b=""><0. 05,=""><0.>

3 Diskusija

I/R inkstų pažeidimo mechanizmas yra labai sudėtingas. Tai patologinis procesas, kuris vyksta per daugelį kelių, veikiant įvairiems veiksniams, tokiems kaip kalcio jonų perkrova, lipidų peroksidacijos pažeidimas, apoptozė ir nekrozė, tarp kurių endogeninės kaspazės Nuo kaspazės priklausoma apoptozė yra viena iš pagrindinių inkstų kanalėlių epitelio ląstelių pažeidimo formų, kurias sukelia I/R inkstų pažeidimas [4]. Apoptozės baltymų (IAP) šeimos inhibitorius yra vienintelis iki šiol žinduolių ląstelėse rastas kaspazės inhibitorius, kuris gali veiksmingai užkirsti kelią apoptozės atsiradimui. XIAP yra stipriausias kaspazę slopinantis IAP šeimos narys, kuris gali slopinti ląstelių apoptozę, kurią sukelia įvairūs patologiniai dirgikliai, ir turėti apsauginį poveikį pažeistiems organams [5].

Šiuo metu inkstų I/R sužalojimo gyvūnų modelių nustatymo metodas dažniausiai yra pašalinti vieną inksto pusę ir užspausti kitą inkstų kiaulytės ar inkstų arterijos pusę [6], kad būtų galima imituoti inkstų transplantacijos būklę. Autorius šiame tyrime naudojo hemoraginio šoko / gaivinimo modelį, kuris yra artimesnis sisteminės išemijos-reperfuzijos patofiziologiniam procesui, kuris vyksta klinikinio trauminio šoko metu. Šiame eksperimente KRAUJAS BUN, Cr ir SD žiurkių cistatinas C kiekis žymiai padidėja ir inkstų funkcija yra labai sutrikusi. Tai idealus gyvūnų modelis I/R inkstų pažeidimo tyrimui.

CTG yra svarbus tradicinės kinų medicinos vaistinis komponentasCistanche.Cistanche, kuris yra šilto pobūdžio, saldus ir sūrus, priklauso inkstų ir storosios žarnos dienovidiniui ir iš pradžių buvo Shennongo "Materia Medica". "Benas Jingas," sako: "Išlaiko penkis darbus ir septynis sužalojimus, maitina vidurį, maitina penkis vidaus organus, stiprina yiną ir maitina esmę bei qi". Taip pat."Cistanchemano šalyje buvo naudojamas du tūkstančius metų. Praeityje jis užima pirmąją vietą stiprumą didinančiose formulėse, o antroje - tik ženšenyje maitinančiose formulėse.Cistanchegalėtipagerinti lytinę funkciją, reguliuoti neuroendokriną ir pagerinti organizmo imuninę funkciją. Antioksidantai, skatina medžiagų apykaitą, apsaugo išeminį miokardą ir kitas funkcijas. Kaip pagrindinis vaistinis ingredientasCistanche, CTG turi daug funkcijų. Smegenų tyrimaiišemija-reperfuzijaModelis

Tyrimai parodė, kadCTG (angl.gali sumažinti sužadinančias aminorūgštis smegenų audinyje po išemijos-reperfuzijos ir apsaugoti SD žiurkių smegenų audinį [7]. CTG turi antioksidacinį poveikį pelių audiniams ir turi tam tikrą apsauginį poveikį pelių ūminei smegenų hipoksijai ir pelių širdies raumenų pažeidimams [8]. CTG gali žymiai pagerinti Parkinsono modelio pelių neurobehaviorą ir slopinti dopamino neuronų skaičiaus sumažėjimą substantia nigra [9]. Stiprindamas laisvųjų radikalų šalinimo fermentų aktyvumą, užkertant kelią lipidų peroksidacijai, slopindamas β-amiloido peptido nusėdimą smegenyse ir slopindamas smegenų ląstelių apoptozę, CTG žymiai padidino β-amiloido peptidų sukeltą Alzheimerio ligos pelių mokymąsi ir atminties gebėjimą [10]. Šis tyrimas parodė, kad po išankstinio gydymo CTG, HB žiurkių BUN, Cr ir cistatino C kiekis kraujyje žymiai sumažėjo, o inkstų funkcijos pažeidimas sumažėjo. CTG padidino apoptozę slopinantį baltymą XIAP I/R sužalojimo inkstų audiniuose ir užblokavo ląsteles. Apoptozės atsiradimas vaidina apsauginį vaidmenį pažeidžiant inkstus.

Nuorodos

[1] Cassis P, Azzollini N, Solini S ir kt. Tiek darbepoetinas alfa, tiek karbamilintas eritropoetinas apsaugo nuo inkstų transplantato disfunkcijos dėl išemijos/reperfuzijos žiurkėms [J]. Transplantacija, 2011, 92 (3): 271-279.

[2] West T, Stump M, Lodygensky G ir kt. Su X susijusio apoptozės baltymo inhibitoriaus trūkumas sukelia padidėjusią apoptozę ir audinių praradimą po naujagimių smegenų pažeidimo[J]. ASN Neuro, 2009, 1 (1). AII: e00004. doi:10. 10421AN20090005.

[3] Fu X, Tian H, Wang D ir kt. Daugybiniai organų sužalojimai ir gedimai, kuriuos sukėlė šokas ir reperfuzija po šautinių žaizdų[J]. J Trauma, 1996, 40 (3 Suppl): S135-139.

[4] Padanilam BJ. Ląstelių mirtis, kurią sukelia ūminis inkstų pažeidimas: apoptozės ir nekrozės indėlio perspektyva[J]. Am J Physiol Renal Physiol, 2003, 284 (4): F608-F627.

[5] Galbán S, Hwang C, Rumble JM ir kt. Citoprotekcinis IIP poveikis, kurį atskleidė mažos molekulės antagonistas[J]. Biochem J, 2009, 417 (3): 765-771.

[6] Wu Jianguo, Zhang Dan, Wu Xinsheng ir kt., Ūminio išemijos-reperfuzijos inkstų pažeidimo modelio nustatymas ir patirtis pelėms [J]. Medicininė informacija: Chirurgijos vadovas, 2007, 20 (12): 1103-1105.

[7] Zhu Zheng. Cistanche glikozidų poveikis sužadinimo aminorūgštims žiurkių smegenų audinyje po smegenų išemijos ir reperfuzijos [J]. Anhui Medicina, 2010, 14 (12): 1393 -1394.

[8] Julia Y, Wang XW, Wubuli AS ir kt. Visų cistanche deserticola glikozidų apsauginis poveikis deguonies trūkumui [J]. Rep Chin Pharm, 2003, 20 (1): 73-76.

[9] Li Wenwei, Yang Ru, Cai Dongfang ir kt. Apsauginis visų cistancho glikozidų poveikis dopaminerginiams neuronams MPTP Parkinsono ligos modelio pelių substantia nigra

[10] Liu Fengxia, Wang Xiaowen, Luo Lan ir kt. Visų cistanche glikozidų poveikis ir mechanizmas Alzheimerio ligos pelės modelio, kurį sukelia β-amiloido peptidas, mokymuisi ir atminčiai [J]. Kinų farmakologijos biuletenis, 2006, 22 (5): 595-599.