Cistanche Deserticola ekstraktai gali antagonizuoti imunosenescenciją ir pailginti gyvenimo trukmę pelėms, linkusioms į senėjimą 8 (SAM-P8)

Prašau susisiektioscar.xiao@wecistanche.comDaugiau informacijos

Senėjimo pagreitintos pelių 8 padermės (SAM-P8), plačiai pripažintos kaip gyvūnų modelis tiriant senėjimą ir senėjimą stabdančius vaistus, buvo panaudotos tiriant maisto papildų Cistanche deserticola (ECD) ekstraktais, kurie buvo plačiai naudojami tradicinė kinų medicina, nes manoma, kad ji gali skatinti pagyvenusių žmonių imuninę funkciją. Aštuonių mėnesių amžiaus SAM-P8 pelių patinai buvo gydomi ECD kasdien geriant 4 savaites. Rezultatai parodė, kad maisto papildai 150 mg/kg ir 450 mg/kg ECD gali pailginti gyvenimo trukmę, išmatuotą pagal Kaplan-Meier išgyvenamumo analizę, priklausomai nuo dozės. Nustatyta, kad 4 savaites SAM-P8 pelių papildymas 100 500 ir 2500 mg/kg ECD labai padidino tiek naivių T, tiek natūralių žudikų ląstelių skaičių kraujo ir blužnies ląstelių populiacijose. Priešingai, pelių, kurios kasdien suvartojo 100 ir 500 mg/kg ECD, periferinės atminties T ląstelės ir priešuždegiminis citokinas, IL-6 serume, labai sumažėjo. Be to, Sca-1 teigiamos ląstelės, atpažintos pirmtakėsperiferinis naivusT ląstelės buvo atkurtos lygiagrečiai. Mūsų rezultatai suteikia aiškią eksperimentinę paramą ilgalaikiams klinikiniams stebėjimo tyrimams, kurie tai rodoCistanchedeserticola turi reikšmingą poveikį pailginant gyvenimo trukmę ir rodo, kad tai pasiekiama antagonizuojantimunosenescencija.

Norėdami sužinoti daugiau, spustelėkite čia

1. Įvadas

Cistanchedeserticola, vienas populiariausių tradicinių kiniškų vaistažolių ir (arba) sveikatos produktų, daugelyje istorinių Kinijos žolelių farmakopėjų aprašytas kaip turintis senėjimą stabdančių savybių. Todėl Kinijoje jis buvo plačiai naudojamas įvairiems su amžiumi susijusiems sutrikimams, įskaitant senatvinę demenciją, impotenciją, nevaisingumą, lėtinę infekciją ir pagyvenusių žmonių kraujodaros sutrikimus, gydyti [1]. Šiuolaikiniai cheminiai metodai leido išskirti dviejų pagrindinių tipų junginius, feniletanoidinius glikozidus ir oligosacharidus, kurie yra pagrindinės Cistanche deserticola veikliosios medžiagos [1]. Per pastarąjį dešimtmetį Cistanche deserticola ir jos ekstraktai buvo intensyviai tiriami ir įrodyta, kad jie gali apsaugoti neuronus nuo neurotoksinų sukeltų sužalojimų [2], slopinti anglies tetrachlorido sukeltą.hepatotoksiškumas[2] ir skatina kaulų čiulpų ląstelių atsigavimą po Co60 sukeltos radiacijos žalos [3]. Taip pat buvo įrodyta, kad jis turi priešuždegiminį, antioksidacinį ir senėjimą stabdantį poveikį [4]. Tačiau ar Cistanche deserticola gali pailginti gyvenimo trukmę ir kokie yra pagrindiniai molekuliniai mechanizmai [3], susiję su jos senėjimą stabdančiomis savybėmis, nebuvo griežtai išbandyta.

Imunosenescencija, ty imuninės sistemos pokyčiai su amžiumi, yra pagrindas, dėl kurio vyresnio amžiaus žmonėms yra padidėjęs jautrumas infekcijoms, vėžiui, neurodegeneracinėms ligoms ir autoimuninėms ligoms [5]. Buvo pranešta, kad terapinės intervencijos, tokios kaip kalorijų ribojimas [6] ir vitamino E papildai, veiksmingos sulėtinant imuninės sistemos senėjimo progresavimą ir sumažinant sergamumą kai kuriomis su amžiumi susijusiomis ligomis, taip pat pailginant žmonių ir graužikų gyvenimo trukmę. [7, 8]. Tačiau šios srities tyrimus apsunkina tai, kad senėjimas yra susijęs su imuninės sistemos nepakankamumo ir lėtinio uždegimo paradoksu [9]. Tai reiškia, kad paprastas limfocitų proliferacijos stimuliavimas arba priešuždegiminis gydymas nėra ideali terapinė intervencija sprendžiant senėjimo ir su amžiumi susijusias sąlygas [10]. Todėl ieškant medicininių intervencijų, galinčių užkirsti kelią su amžiumi susijusioms ligoms, įskaitant infekcijas, vėžį, autoimunines ligas, aterosklerozę ir neurodegeneracines ligas, kurios yra pagrindinės mirties ir negalios priežastys, arba jas palengvinti, ir imuninės sistemos defektų taisymas turi būti lydimas uždegiminės reakcijos. Senėjimo pagreitinta pelė [11] yra inbred pelės modelis, gautas iš AKR/J padermės, plačiai naudojamas senėjimo tyrimuose. Šių pelių P8 padermė (SAM-P8) turi žymiai trumpesnę gyvenimo trukmę, palyginti su R1 padermiu (SAM-R1), kuris taip pat rodo lėtesnį senėjimo procesą [12]. Lygiagrečiai su priešlaikiniu senėjimu, SAM-P8 pelėms taip pat būdingas padidėjęs neurologinis senėjimas, imuninės sistemos senėjimas ir su amžiumi susiję pokyčiai.kraujodarostrūkumai, kurie labai primena tipiškas žmogaus senėjimo savybes [13, 14]. Pagrindinių mechanizmų, atsakingų už pagreitėjusį senėjimo procesą ir su amžiumi susijusius sutrikimus, analizė rodo, kad tai susiję su mitochondrijų disfunkcija [15], oksidaciniu stresu ir padidėjusiu somatinės DNR mutacijos greičiu [16, 17]. Todėl ši pelių sistema, turinti homogeninį genetinį foną, yra puikus eksperimentinis senėjimo ir senėjimo terapijos tyrimo modelis [12]. Šiame tyrime daugiausia dėmesio buvo skiriama ištirti, ar Cistanche deserticola ekstraktai gali pratęsti SAM-P8 pelių gyvenimo trukmę ir pakeisti jų imunosenescencijos būseną.

Cistanche gali pagerinti imunitetą ir kovoti su nuovargiu

2. Medžiagos ir metodai
2.1. Medžiagos. Šviežia Cistanche deserticola YC MA buvo surinkta iš įvairių vietovių šiaurės vakarų Kinijoje, įskaitant Sindziango, Neimenggu ir Ningxia autonominius regionus. Ekstraktams ruošti naudotus mėginius patvirtino Pekino universiteto Farmacijos mokslų mokyklos Natūralių vaistų katedros farmakognozijos specialistas profesorius Pengfei Tu. Naudotas Cistanche deserticola (numeris CD-2007-03-08) egzempliorius buvo deponuotas Pekino universiteto (Kinija) Farmacijos mokslų mokyklos herbariume. 2.2. Cistanche deserticola (ECD) ekstraktų paruošimas ir HPLC analizė. Oru išdžiovinta ir supjaustyta Cistanche deserticola (2.{7}} kg) buvo sumalta į miltelius ir du kartus ekstrahuota 7 0 procentų etanoliu 1 valandą. Pirmą kartą ekstrahuojant naudotas augalų ir etanolio santykis buvo 1/6 (m/m), o antroje – 1/4 (m/m). Abu ekstraktai buvo sujungti ir filtruojami prieš sukoncentruojant iki santykinio tankio 1,10–1,15 sumažintame slėgyje esant 60∘ C. Po to šis koncentratas džiovinamas vakuume ir gauti milteliai buvo ekstraktas. Cistanche deserticola (ECD), naudotos viso šio tyrimo metu. ECD komponentai buvo analizuojami naudojant HPLC, kaip aprašyta anksčiau [1]. Trumpai tariant, 100 mg ECD miltelių buvo ištirpinta 10,0 ml H2O ir po filtravimo įšvirkščiama į HPLC. HPLC analizė atlikta naudojant Agilent 1100 skysčių chromatografijos sistemą (Agilent Co., JAV). Mobiliąją fazę sudarė metanolio (A) ir 0,10 procentų metano rūgšties (B) mišinys. Buvo panaudota gradientinės chromatografijos programa; tai buvo 26,5 procento (A) ir 73,5 procento (B) per 0–7 min., 26,5–29,5 procento (A) ir 73,5–70,5 (B) per 8–10 min., o 29,5 procento (A) ir 70,5 procento (B) ) per 20–27 min. Srauto greitis buvo pastovus 1,0 ml/min., įpurškimo tūris buvo 10 ml, o kolonėlės temperatūra palaikoma 25°C. 330 nm UV detektorius buvo naudojamas kolonėlės nutekėjimui stebėti ir chromatogramoms generuoti. Feniletanoidiniai glikozidai ir oligosacharidai buvo nustatyti pagal jų sulaikymo laiką ir absorbcijos spektrus. Kiekybinis įvertinimas buvo atliktas išorinėmis standartinėmis kalibravimo kreivėmis. Cistanche deserticola (ECD) ekstraktų išeiga buvo apie 3,33 proc., o feniletanoidų kiekis – 17,94 proc. Akteozidas ir echinakozidas buvo dvi pagrindinės šios frakcijos sudedamosios dalys, kurių kiekis buvo atitinkamai 3,80 ir 8,25 proc. Oligosacharidai sudaro 82 procentus viso ECD. Pagrindinių aktyviųjų ECD komponentų koncentracijos pateiktos 1 lentelėje. 2.3. Gyvūnų gyvenimo trukmės analizė. Patinai SAM-P8 ir kontrolinės SAM-R1 pelės buvo įsigyti iš Pekino universiteto sveikatos mokslų centro (Pekinas, Kinija) laboratorinio gyvūnų veisimo ir tyrimų centro. Šį tyrimą patvirtino Pekino universiteto gyvūnų tyrimų komitetas ir jis buvo atliktas pagal Pekino universiteto laboratorinių gyvūnų priežiūros ir naudojimo gaires. Šių pelių sertifikavimo numeris buvo SCXK{70}}. Pelės buvo laikomos standartiniuose medžiagų apykaitos narveliuose kontroliuojamomis aplinkai sąlygomis (22 ± 2 ° C, 45–60 procentų drėgmė ir 12 valandų šviesos / tamsos ciklas) ir leido laisvai prieiti prie maisto ir vandens. Po 2 savaičių aklimatizacijos gyvūnai buvo suskirstyti į penkias grupes: 3 ECD gydymo grupes, SAM-R1 kontrolinę grupę ir negydomą SAM-P8 kontrolinę grupę. 3 gydymo grupių dieta buvo papildyta dieta, sumaišyta su

skirtingos ECD koncentracijos: mažos (50 mg/kg), vidutinės (150 mg/kg) ir didelės (450 mg/kg) vidutinės ECD dozės kasdien. SAM-R1 ir SAM-P8 kontrolinės grupės nebuvo šeriamos ta pačia dieta be ECD. Viso eksperimento metu visų gyvūnų maisto suvartojimas buvo matuojamas kas tris dienas. Eksperimento metu kraujospūdžio ir širdies ritmo stebėjimas buvo atliekamas neinvaziškai kas tris mėnesius, siekiant nustatyti pelių sveikatos būklę. Kiekvienos pelės gyvenimo trukmė buvo užfiksuota iki visų gyvūnų mirties. 2.4. Naivių T ląstelių, atminties T ląstelių, NK ląstelių ir Sca{9}} teigiamų ląstelių analizė periferinio kraujo ir blužnies ląstelių populiacijose naudojant srauto citometriją. Aštuonių mėnesių SAM-P8 pelių patinai ir kontrolinės SAM-R1 pelės buvo suskirstytos į 5 grupes: 3 SAM-P8 pelių ECD gydymo grupes, SAM-P8 be gydymo kontrolinę grupę ir SAM-R1 kontrolinę grupę. 3 gydymo grupių dieta buvo papildyta kasdieniu ECD zondavimu 100 mg/kg, 500 mg/kg arba 2500 mg/kg dozėmis. Po 4 gydymo savaičių gyvūnai buvo pririšti 12 valandų, po to anestezuojami pentobarbitalio natrio tirpalu (50 mg/kg, injekcija į pilvaplėvę, ip), o kraujas buvo paimtas ir apdorotas antikoaguliantu natrio citratu (2 mg/ml). ). Kraujo limfocitai buvo surinkti ir išanalizuoti. Tada pelės buvo nuvalytos 75 procentų alkoholiu, o pilvo ertmės buvo atidarytos itin švarioje spintelėje (garų gaubtu). Blužniai buvo plaunami PBS; po to sumalama ir filtruojama ląstelių sieteliu (70 µm). Gauta blužnies ląstelių suspensija buvo plaunama ir resuspenduojama PRMI 1640 terpėje, kurios koncentracija buvo 2 × 106 /mL. Kiekvienos pelės blužnies ląstelės buvo padalytos į 6 mėgintuvėlius srauto citometrijos analizei. Galutinė blužnies ląstelių suspensijos koncentracija kiekviename mėgintuvėlyje buvo 2 × 105/100 µl. Periferinio kraujo limfocitai ir blužnies limfocitai buvo inkubuojami atskirai su FITC-CD4, PerceCD3, Perce-CD8a, PC-CD28, PE-CD44, FITC-CD45RB, PE CD49b/rožine ir FITC-ly-6A/E. Sca-1) (visi įsigyti iš BD Biosciences, San Diego, CA, JAV) monokloniniai antikūnai kambario temperatūroje 30 min. Lizuojantis tirpalas, kuris yra specialiai skirtas raudoniesiems kraujo kūneliams lizuoti, išsaugant leukocitus, taip pašalinant trukdančias ląsteles srauto citometrinei analizei, buvo inkubuojamas su krauju tamsoje kambario temperatūroje 5 min. Po centrifugavimo 500 x g 5 min., supernatantas nupilamas. Tada susmulkintos ląstelės 3 kartus plaunamos PBS, resuspenduojamos ledu šaltame fosfatiniu buferiniu tirpalu (PBS, pH 7,4), turinčiame 0,01 proc. natrio azido, ir veikiamos FCM. analizė. Limfocitų subpopuliacijos buvo analizuojamos srauto citometrijos metodu, naudojant FACS Calibur srauto citometrą (BD Biosciences, San Diego, CA, JAV) ir BD CellQuest analizės programinę įrangą. 2.5. Periferinių T limfocitų ląstelių gyvybingumo įvertinimas naudojant aneksino V-FITC ir PI dvigubą dažymą ir FACS analizę. Po SAM P8 pelių dietos papildymo trimis ECD dozėmis 4 savaites, gyvūnai buvo pritvirtinti 12 valandų, po to anestezuoti, o kraujas buvo paimtas ir analizuojamas. Gyvybingi apoptoziniai ir nekroziniai limfocitai buvo kiekybiškai įvertinti naudojant Annexin V-FITC rinkinį (Beijing Biosea Biotechnology Co., Ltd., Pekinas, Kinija). Limfocitai buvo dvigubai nudažyti fluoresceino izotiocianatu konjuguotu pažymėtu aneksinu V (Aneksino V-FITC) ir propidžio jodidu (PI). Trumpai tariant, limfocitų suspensijos, kuriose yra maždaug 106 ląstelės/ml, buvo du kartus plaunamos PBS ir suspenduotos 200 µl rišamojo buferio (10 mM HEPES/NaOH, pH 7,4, 140 mM NaCl, 2,5 mM CaCl2) ir 10 priedo V-FIL. buvo pridėta prie ląstelių suspensijos. Po 15 minučių inkubavimo tamsoje kambario temperatūroje, buvo pridėta dar 300 𝜇L surišimo buferio ir 5 𝜇L PI. Iškart po tolesnio 5 minučių inkubavimo tamsoje, dvigubai dažytų limfocitų mėginiai buvo analizuojami naudojant srauto citometrą FACS Calibur (BD Biosciences, San Diego, CA, JAV). 2.6. Plazmos citokinų nustatymas citometrinio granulių matricos (CBA) imunologiniu tyrimu. Citokinų kiekis plazmoje buvo kiekybiškai įvertintas naudojant citometrinių granulių matricos (CBA) tyrimo rinkinį (BD Biosciences, San Diego, CA, JAV), galintį vienu metu aptikti IFN-𝛾, TNF-𝛼, IL-6, IL{96. }}, IL-10, GM-CSF ir IL-3 viename pavyzdyje. Todėl šis multipleksinis imunologinis tyrimas leido aptikti imuninę sistemą stimuliuojančius citokinus (IL{101}}), priešuždegiminius citokinus (IFN-𝛾, TNF-𝛼 ir IL-6), uždegimą slopinančius citokinus (IL{105). }}) ir hematopoetinius citokinus (IL{106}} ir GM-CSF). Trumpai tariant, 50 𝜇L plazmos buvo sumaišyta su 50 𝜇L PE konjuguotų citokinų gaudymo granulių, kurios buvo padengtos IFN-𝛾, TNF-𝛼, IL-6, IL-2, IL specifiniais fiksuojančiais antikūnais. -10, GM-CSF ir IL-3 baltymai. Po 2 valandų inkubacijos kambario temperatūroje mėginiai buvo plaunami ledu šaltu fosfatu buferiniu tirpalu (PBS, pH 7,4), turinčiu 0,01 procento natrio azido, tada fiksuojami 0,5 ml 1 procento paraformaldehido PBS ir laikomi 4 °C temperatūroje. tamsoje iki analizės, o tada analizuojama FACS Calibur srauto citometru (BD Biosciences, San Diegas, CA, JAV). 2.7. Statistinė analizė. Duomenys pateikiami kaip vidutinės vertės ± SD. Skirtingų grupių palyginimai buvo atlikti vienpusio ANOVA metodu su post hoc testu. Gyvenimo trukmės tyrime duomenims buvo atlikta Kaplan-Meier išgyvenamumo analizė, kuri apėmė ir Log-rank (Mantel-Cox) ir Gehan-Breslow Wilcoxon testų naudojimą. Statistinė analizė buvo atlikta naudojant „Windows“ skirtą socialinių mokslų statistinį paketą (SPSS, Chicago, IL), o mažesnė nei 0,05  reikšmė buvo laikoma reikšminga.

3. Rezultatai
3.1. Potencialių aktyvių komponentų Cistanche deserticola (ECD) ekstraktuose analizė. Kaip parodyta 1 lentelėje, ECD daugiausia sudaro dviejų tipų junginiai – feniletanoidiniai glikozidai ir oligosacharidai. Feniletanoidiniuose glikoziduose buvo nustatytas echinakozidas, acetonidas ir 8-epilogano rūgštis, o oligosachariduose – tik galaktitolis.

1 paveikslas: Cistanche deserticola (ECD) ekstraktų poveikis SAM-P8 pelių gyvenimo trukmei. Aštuonių mėnesių senėjimo pagreitintos pelės / linkusios 8 (SAM-P8) pelės buvo atsitiktinai suskirstytos į 4 grupes (kiekvienoje grupėje, 𝑛 {{10}}): 3 gydymo grupes ir ne. -gydymo kontrolinė grupė. Nesenėjanti pelių padermė (SAM-R1) buvo naudojama kaip eksperimentinė kontrolė. Viso eksperimento metu buvo stebimas visų gyvūnų suvartojamas maistas 3-dienų intervalais. 3 gydymo grupės buvo šeriamos ad libitum dietomis, papildytomis mažomis (50 mg/kg), vidutinėmis (150 mg/kg) ir didelėmis (450 mg/kg) Cistanche deserticola dozėmis. ekstraktas (ECD). Dvi kontrolinės gyvūnų grupės buvo šeriamos ta pačia dieta be ECD papildų. a ) SAM-P8 pelių, kurioms buvo skirta dieta ECD arba nešiklio kontrolė, Kaplan-Meier išgyvenimo kreivės. Kaplan-Meier išgyvenamumo analizė buvo atlikta naudojant Log-rank (Mantel-Cox) ir Gehan-Breslow-Wilcoxon testus. b ) pelių grupių vidutinės gyvenimo trukmės histograma. Klaidų juostos rodo, kad standartinis nuokrypis nuo vidurkio ir statistinis reikšmingumas buvo atliktas naudojant ANOVA analizę, po kurios buvo atliktas post hoc 𝑡 testas. ###𝑃 < 0,001="" sam-p8,="" palyginti="" su="" sam-r1;="" ∗∗𝑃="">< 0,01="" didele="" doze="" gydoma="" grupė,="" palyginti="" su="" sam-p8;="" ∗𝑃="">< 0,05="" vidutine="" doze="" gydoma="" grupė,="" palyginti="" su="" sam-p8="" (kiekvienoje="" grupėje="" 𝑛="">

3.2.Cistanche deserticola ekstraktų įtaka SAM-P8 pelių vidutinei gyvenimo trukmei. Šiam ir tolesniems tyrimams aštuonių mėnesių amžiaus SAM-P8 pelių patinai buvo suskirstyti į 4 grupes. Iš jų viena pelių grupė buvo šeriama įprastu maistu be ECD, kitos 3 grupės atskirai valgė pašarus, kuriuose yra skirtingos ECD proporcijos. Visuose eksperimentuose kaip kontrolinė grupė buvo naudojamos pelės iš SAM-R1 padermės, kurios turi normalų senėjimo procesą ir gyvenimo trukmę. Palyginti su kontroline SAM-R1 grupe, vidutinė SAM-P8 pelių gyvenimo trukmė buvo žymiai sutrumpinta (1 pav. a; 𝑃 < 0.001).="" nors="" dietos="" papildymas="" maža="" (50="" mg/kg)="" ecd="" doze="" reikšmingai="" nepailgino="" sam-p8="" pelių="" gyvenimo="" trukmės,="" vartojant="" vidutinę="" (150="" mg/kg)="" ir="" didelę="" (450="" mg/ml)="" papildomą="" dozę.="" vartojant="" dozes,="" gyvenimo="" trukmė="" pailgėjo="" priklausomai="" nuo="" dozės="" (1="" (a)="" ir="" 1="" (b)="" paveikslai;="" 𝑃="">< 0,05–0,01),="" o="" tai="" patvirtino="" kaplan-meier="" išgyvenamumo="" analizė,="" kuri="" apėmė="" tiek="" log-rank="" (="" mantel-cox)="" ir="" gehan-breslow-wilcoxon="" testai.="" 3.3.="" sam-p8="" pelių="" imunosenescencijos="" panaikinimas="" naudojant="" cistanche="" deserticola="" (ecd)="" ekstraktus.="" periferinių="" naivų="" t="" limfocitų="" sumažėjimas="" ir="" kartu="" padidėjęs="" periferinės="" atminties="" t="" limfocitų="" skaičius="" yra="" ryškūs="" imuninės="" sistemos="" senėjimo="" požymiai,="" kurie="" plačiai="" laikomi="" pagrindinėmis="" su="" amžiumi="" susijusių="" imunologinių="" anomalijų="" priežastimis.="" šis="" sam-p8="" imunosenescencija,="" palyginti="" su="" sam-r1="" gyvūnais,="" buvo="" aiškiai="" akivaizdus,="" ​​kai="" facs="" analizė="" buvo="" naudojama="" limfocitams="" (cd3="" plius="" cd44low="" cd45rbhigh)="" suskaičiuoti="" kaip="" naivių="" t="" ląstelių="" ir="" (cd3="" plius="" cd44="" aukšto="" cd45brlow)="" limfocitų,="" kaip="" atminties="" t="" rodiklio.="" ląstelės.="" taigi,="" tiek="" periferiniame="" kraujyje="" (2="" pav.),="" tiek="" blužnies="" ląstelėse="" (3="" pav.)="" sam-p8="" pelėms="" buvo="" pastebėtas="" sumažėjęs="" naivių="" t="" ląstelių="" kiekis="" ir="" padidėjęs="" atminties="" t="" ląstelių="" kiekis.="" nustatyta,="" kad="" sam-p8="" pelių="" dietos="" papildymas="" ecd="" gali="" pakeisti="" šiuos="" imuninės="" sistemos="" senėjimo="" rodiklius="" priklausomai="" nuo="" dozės="" tiek="" periferinio="" kraujo="" (2="" pav.),="" tiek="" blužnies="" ląstelių="" (3="" pav.)="" populiacijose.="" kaip="" papildomas="" rodiklis,="" rodantis="" imunosenescencijos="" pasikeitimą="" papildant="" dietą="" ecd,="" buvo="" analizuojamas="" natūralių="" žudikų="" [18]="" ląstelių,="" pagrindinio="" įgimtos="" imuninės="" sistemos="" ląstelinio="" žymeklio,="" lygis.="" tai="" parodė,="" kad="" ecd="" dietos="" papildymas="" lėmė="" nuo="" dozės="" priklausomą="" nk="" (cd3="" ir="" cd49="" plius="" )="" ląstelių="" padidėjimą="" tiek="" periferinio="" kraujo="" (4="" pav.),="" tiek="" blužnies="" ląstelių="" (5="" pav.)="" limfocitų="" populiacijose.="" 3.4.="" cistanche="" deserticola="" ekstraktai="" stiprina="" sam-p8="" pelių="" sca{68}}="" teigiamų="" ląstelių="" santykinį="" fluorescencijos="" intensyvumą.="" kamieninių="" ląstelių="" antigenas="" -1="" (sca-1)="" yra="" vienas="" ryškiausių="" hematopoetinių="" kamieninių="" ląstelių="" (hsc)="" biologinių="" žymenų="" kaulų="" čiulpų="" ląstelių="" populiacijose.="" sca-1="" teigiamos="" ląstelės="" taip="" pat="" yra="" limfocitų="" pirmtakai,="" kurie="" buvo="" naujai="" eksportuoti="" iš="" kaulų="" čiulpų="" į="" periferinį="" kraują,="" kur="" jie="">

4. Diskusija

Imuninė apsauga nuo naujai invazinių mikroorganizmų ar endogeninių naviko ląstelių priklauso nuo T ląstelių repertuaro įvairovės, kuri savo ruožtu priklauso nuo naivių T ląstelių susidarymo ir palaikymo [19]. Įrodyta, kad senėjimo proceso metu T-ląstelių repertuaro įvairovė smarkiai mažėja dėl laipsniško naivių T ląstelių išeikvojimo periferiniame rezervo baseine. Manoma, kad būtent šis reaguojančių naivių T ląstelių trūkumas yra atsakingas už pagyvenusių žmonių jautrumą infekcijoms, vėžiui ir prastus rezultatus po vakcinacijos [20]. Įvairios intervencijos, įskaitant kalorijų apribojimą [7], mankštą [21] ir vitamino E papildą [8], buvo naudojamos siekiant sėkmingai papildyti naivias T ląsteles ir taip pailginti gyvenimo trukmę bei sumažinti pagyvenusių žmonių infekcijų ir vėžio atsiradimą. Šiame tyrime parodėme, kad ECD gali padidinti naivių T ląstelių kiekį periferiniame baseine ir kartu pailgėjo gyvenimo trukmė ir sumažėjo naviko formavimosi dažnis senėjimo pagreitėjusioms pelėms (ECD terapinė grupė, palyginti su SAM-P8, 0 prieš 1/6). Todėl atrodo pagrįsta daryti išvadą, kad ECD gebėjimas pakeisti nuo amžiaus priklausomą periferinių naivų T ląstelių išeikvojimą gali prisidėti prie žinomo jo poveikio mažinant su amžiumi susijusias ligas, atsirandančias dėl ilgalaikių klinikinių stebėjimų.

5. Medžiagos ir metodai

5.1. Medžiagos. Esant normaliam imuniniam atsakui, sulaikius ir pašalinus svetimą antigeną, dauguma kloniškai išsiplėtusių T ląstelių patiria apoptozę, o tik nedidelė dalis išlieka kaip atminties T ląstelės. Vadinasi, senstant imuninei organizmui, periferinės atminties T ląstelės kaupiasi visą gyvenimą veikiant svetimiems antigenams, paverčiant naivias T ląsteles į atminties ląsteles [22, 23]. Daugybė tyrimų parodė, kad vyresnio amžiaus gyvūnų ir žmonių limfocitų apoptozės defektai taip pat prisideda prie T ląstelių atminties skyriaus padidėjimo [24, 25]. Be to, neseniai atliktas tyrimas parodė, kad periferinės atminties T ląstelių perteklius gali slopinti naivių T ląstelių homeostatinį proliferaciją [26]. Šie naujausi tyrimai taip pat parodė, kad atminties T ląstelės gali išskirti daug priešuždegiminių citokinų, kurie gali prisidėti prie nuolatinių uždegimų įvairiuose pagyvenusių žmonių audiniuose. Todėl atminties T ląstelių lygio mažinimas turėtų būti naudingas tiek homeostatiniam naivių T ląstelių dauginimuisi, tiek palengvinti perteklinę uždegiminę būseną, pastebėtą senesniuose organizmuose. Šiame tyrime buvo įrodyta, kad maisto papildai su ECD gali sumažinti periferinės atminties T ląstelių kiekį ir padidinti naivių T ląstelių kiekį. Be to, ECD papildymas padidino apoptozę periferinėse limfocitų populiacijose, todėl galėjo atsirasti vietos naujiems naiviams limfocitams. Taip pat buvo slopinama periferinių limfocitų nekrozė, kurią daugiausia sukelia senatvinių gyvūnų oksidacinis stresas. Yra daug įrodymų, rodančių, kad organizmo senėjimui būdingas ne tik imuninės sistemos trūkumas, bet ir lėtinio uždegimo padidėjimas [27]. Priešuždegiminė būklė aiškiausiai pasireiškia padidėjusiu priešuždegiminių citokinų, įskaitant IL-6, TNF-𝛼 ir IL-1𝛽, kiekiu kraujyje, kartu su padidėjusiu lėtinių uždegiminių ligų, susijusių su senėjimu, dažniu, pvz. Alzheimerio liga, Parkinsono liga ir aterosklerozė. Vienas iš ryškiausių uždegiminių citokinezės IL-6 ir jo koncentracija plazmoje didėja senstant ir su amžiumi susijusiomis ligomis [18, 28, 29], o epidemiologiniai tyrimai rodo, kad IL-6 yra geras ilgaamžiškumo biologinis žymeklis, nes jis yra glaudžiai susijęs su mirtingumu vyresnio amžiaus pacientų grupėse [30, 31]. Atsižvelgiant į tai, daugelis terapinių intervencijų, mažinančių IL-6 koncentraciją, gali palengvinti su amžiumi susijusias ligas [18]. Atsižvelgiant į tai, buvo svarbu, kad šiame tyrime maisto papildai su ECD sumažino periferinę IL-6 koncentraciją, o tai reiškia, kad šis poveikis gali prisidėti prie pagrindinių mechanizmų, mažinančių su amžiumi susijusių ligų dažnį. buvo gauti klinikinėje praktikoje ilgą laiką naudojant ECD. Be adaptyvaus imuninio atsako pokyčių, atsirandančių su amžiumi, organizmui senstant yra ir didelių įgimto imuniteto pokyčių. Be to, natūralių žudikų [18] ląstelių, pirmųjų ląstelių komponentų, užtikrinančių tiesioginę naviko ląstelių ir virusais užkrėstų ląstelių citotoksinę lizę, pokyčiai buvo dideli, nes vyresnio amžiaus žmonės yra labiau jautrūs naviko vystymuisi ir virusinėms infekcijoms. 32]. Šis tyrimas parodė, kad senatvinėse SAM P8 pelėse CD3 ir Ly49 plius NK ląstelių buvo žymiai mažiau, palyginti su SAM-R1 kontroliniais gyvūnais, o tai gali būti dar vienas pagrindinis veiksnys, lemiantis padidėjusį pagyvenusių pelių jautrumą vėžiui ir virusinei infekcijai. Todėl šiame tyrime pastebėtas NK ląstelių kiekio padidėjimas po maisto papildymo ECD gali būti naudingas vyresnio amžiaus organizmams dėl padidėjusio atsparumo naviko vystymuisi ir virusinei infekcijai. Tačiau reikia atlikti tolesnius tyrimus, kad būtų išaiškintas ECD poveikis NK ląstelėms senyvuose organizmuose. Apibendrinant galima pasakyti, kad šis tyrimas parodė, kad senėjimo pagreitinto pelių padermės, SAM P8, gydymas ECD gali sukelti reikšmingą su amžiumi susijusių imunosenescencijos pokyčių pasikeitimą. Sumažėjo naivių T ląstelių ir NK ląstelių periferinių ir blužnies ląstelių populiacijų trūkumai, o perteklinių atminties T ląstelių lygis taip pat sumažėjo. Be to, maisto papildai su ECD galėjo slopinti tiek nekrozę periferiniuose limfocituose, tiek priešuždegiminio citokino, IL-6, kiekį. Galiausiai, be pokyčių senatvinėje imuninėje sistemoje, ECD maisto papildai žymiai pailgino senatvinių SAM-P8 pelių gyvenimo trukmę.

Nuorodos
[1] Y. Jiang ir P.-F. Tu, „Cistanche rūšių cheminių sudedamųjų dalių analizė“, Journal of Chromatography A, vol. 1216, Nr. 11, 1970–1979 p., 2009 m.
[2] Q. Xiong, K. Hase, Y. Tezuka, T. Tani, T. Namba ir S. Kadota, "Cistanche deserticola feniletanoidų hepatoprotekcinė veikla", Planta Medica, t. 64, Nr. 2, 120–125 p., 1998 m.
[3] "Imunologija ir senėjimas Europoje. 2-osios pagrindinės biologijos ir imunosenescencijos klinikinio poveikio konferencijos medžiaga. 2001 m. kovo mėn. 22-26, Kordoba, Ispanija", Eksperimentinė gerontologija, t. 37, Nr. 2-3, p. 183–473, 2002 m.
[4] G.-D. Xuanas ir C.-Q. Liu, „Cistanche deserticola feniletanoidinių glikozidų (PEG) poveikio D-galaktozės sukeltų senėjimo pelių senėjimui tyrimai“, „Journal of Chinese Medicinal Materials“, t. 31, Nr. 9, 1385–1388 p., 2008 m.
[5] D. Aw, AB Silva ir DB Palmer, „Imunosenescence: emerging challenges for an anaging electronic“, Immunology, vol. 120, Nr. 4, p. 435–446, 2007 m.
[6] M. Alizadeh, H. Pohla, A. Rehbein ir G. Pawelec, "Ilgalaikė monokloninių žmogaus T limfocitų kultūra: imunosenescencijos modeliai?" Senėjimo ir vystymosi mechanizmai, t. 83, Nr. 3, 171–183 p., 1995 m.
[7] EH Greeley, E. Spitznagel, DF Lawler, RD Kealy ir M. Segre, "Modulation of canine immunosenescence by life-long caloric limits", Veterinary Immunology and Immunopathology, t. 111, 287–299 p., 2006 m.
[8] SN Meydani, SN Han ir D. Wu, "Vitaminas E ir imuninis atsakas senyviems žmonėms: molekuliniai mechanizmai ir klinikinės pasekmės", Immunological Reviews, vol. 205, 269–284 p., 2005 m.
[9] SG Deeks, „ŽIV infekcija, uždegimas, imuninės sistemos senėjimas ir senėjimas“, Annual Review of Medicine, vol. 62, 141–155 p., 2011 m.
[10] M. Capri, D. Monti, S. Salvioli ir kt., "Imunosenescencijos strategijų sudėtingumas žmonėms", Artificial Organs, vol. 30, Nr. 10, 730–742 p., 2006 m.