Penkių Rehmannia Glutinosa komponentų nustatymas ir HPLC pirštų atspaudų nustatymas

Santrauka:Penkių komponentų turinio nustatymo metodasRehmannia glutinosa, būtent,rehmannozidas D, leonurinas,echinakozidas,cistanchesidas Airverbascoside, buvo sukurtas, o Rehmannia glutinosa didelio efektyvumo skysčių chromatografijos (HPLC) pirštų atspaudai buvo sukurti siekiant suteikti mokslinį pagrindą Rehmannia glutinosa kokybės kontrolei. Buvo naudojama Shiseido CAPCELL PAK C18 kolonėlė su acetonitrilo -0,1 % skruzdžių rūgšties tirpalu kaip judria faze, gradiento eliuavimu, kolonėlės temperatūra 30 laipsniais, kintamo bangos ilgio nustatymu ir 1,0 srauto greičiu. ml/min. Rehmannia glutinosa HPLC pirštų atspaudas buvo ištirtas "Kinų medicinos chromatografinė pirštų atspaudų panašumo vertinimo sistema (2012 Edition)" software to evaluate its quality consistency. The results showed that according to the established content determination method, the five components had a good linear relationship within their respective concentration ranges (R2>{{0}}.999 0), tikslumo testo, pakartojamumo testo ir stabilumo testo RSD buvo 0,12 %–1,58 %, o vidutinis mėginio atkūrimo rodiklis buvo 96,5 % ~98,6%; nustatytas Rehmannia glutinosa HPLC piršto atspaudas nustatė 23 bendras smailes, o Rehmannia glutinosa mėginio ir kontrolinio piršto atspaudo panašumas buvo 0,904~0,950. Rezultatai rodo, kad nustatytas turinio nustatymo metodas ir HPLC pirštų atspaudai yra tinkami Rehmannia glutinosa kokybei įvertinti ir žalios Rehmannia glutinosa bei virtos Rehmannia glutinosa identifikavimui, pasižymintys dideliu tikslumu ir geru atkuriamumu, ir gali teikti techninę pagalbą kokybei kontroliuoti. Rehmannia glutinosa vaistinės medžiagos.

Raktiniai žodžiai:Rehmannia glutinosa; turinio nustatymas; pirštų atspaudai; kokybės vertinimas

NAUJA ŽOLELĖ CISTANCHE SUECHINAKOZIDAS,CISTANCHESIDAS AIRVERBASCOSIDE

Rehmannia glutinosayra švieži arba džiovinti Scrophulariaceae augalo Rehmannia glutinosa Libosch šakniagumbiai. Dėl skirtingų apdorojimo būdų ji daugiausia skirstoma į šviežią rehmaniją, žalią rehmaniją ir virtą rehmaniją [1-2]. Pagrindinės gamybos sritys yra Henan, Shanxi, Shaanxi ir kt. žemė. Tarp jų, žaliavinė rehmannia glutinosa pašalina šilumą ir vėsina kraują, maitina yin ir skatina skysčių gamybą, be to, ji daugiausia naudojama šilumai kraujyje, šiltiems toksinams ir dėmėms gydyti ir kt.; virta rehmannia glutinosa veikia kaip kraują ir yin, papildo esenciją ir papildo kaulų čiulpus, daugiausia naudojama kraujo trūkumo, chlorozės ir kt. gydymui. Palpitacija, neramumas ir tt.[1-2]. Abu turi skirtingas savybes ir skonį, tačiau abu priklauso kepenų ir inkstų dienovidiniams. Rehmannia glutinosa sudėtyje yra sudėtingų cheminių komponentų, daugiausia įskaitant iridoidus, jononus, feniletanolio glikozidus, flavonoidus ir kt. [3-5].

Po to, kai Rehmannia glutinosa buvo apdorojama skirtingais apdorojimo metodais, cheminių komponentų tipai, turinys ir proporcijos kiekviename perdirbtame produkte labai skiriasi, todėl labai skiriasi jo farmakologinis aktyvumas [6-10]. pagal

Susiję tyrimai[11-12] rodo, kad Rehmannia glutinosa pakeitus iš „žalio“ į „virtą“, cheminių komponentų, tokių kaip katalpolis, motininė žolė, stachiozė ir aminorūgštys, kiekis labai sumažėjo, o jų kiekis sumažėjo. fruktozės, 5-hidroksimetilfurfurolio ir kt. Žymiai padidėjo izorebaskozido ir kt. kiekis. Šiuo metu žaliavos ir virtos rehmannia glutinosa kokybės kontrolė daugiausia naudoja katalpolio ir rehmanniazido D turinį kaip vertinimo rodiklius. Vertinimo sistemos rodikliai yra gana pavieniai, todėl sunku visapusiškai kontroliuoti rehmannia glutinosa kokybę. Be to, tyrimai parodė, kad rehmannia glutinosa D kiekis keičiasi prieš ir po apdorojimo. Jis yra mažas ir menkai apibūdina kompozicijos pokyčius po apdorojimo ir apdorojimo laipsnį [12-13].

Todėl, siekiant visapusiškiau įvertinti Rehmannia glutinosa kokybę, šiame tyrime buvo nustatytas ryšys tarp rehmanniazės D ir Yimu Rehmannia glutinosa.

Penkių bendrų komponentų, įskaitant gliukozidą, ežiuolę, cistancheozidą A ir verbaskozidą, kiekio nustatymo metodai ir Rehmannia glutinosa HPLC pirštų atspaudų nustatymas, siekiant išanalizuoti pagrindinių Rehmannia glutinosa komponentų kiekį iš skirtingų gamybos vietovių ir prieš ir po perdirbimo, siekiant suteikti informacijos Rehmannia glutinosa kokybės kontrolei. Techninė pagalba.

Prietaisai, reagentai ir tiriamieji vaistai

Agilent 1260 didelio našumo skysčių chromatografas (detektorius yra diodų matrica); kintamo diapazono elektroninės analitinės svarstyklės (METTLER TOLEDO); skaitmeninis ultragarsinis valiklis (Shanghai Ultrasonic Instrument Factory, KH-500DE). Metanolis (Sinopharm Group) yra analitinės kokybės; acetonitrilas (Merck) yra chromatografinis; vanduo yra Watsono vanduo buteliuose. Rehmannia glutinosa D etaloninė medžiaga (partijos numeris RFSD8401909016, grynumas 98,0 %), leonurus glikozido etaloninė medžiaga (partijos numeris RFS-Y22002208010, grynumas 98,0 %) ir cistanchesidas A etaloninė medžiaga (partija) numeris RFS-R05002009014, grynumas 96,0 proc., visi buvo įsigyti iš Chengdu Ruifensidedan Biotechnology Co., Ltd.; Echinakozido etaloninė medžiaga (partijos numeris 111670-201907, grynumas 91,8 %) ir verbaskozido etaloninė medžiaga (partijos numeris 11530-201914, grynumas 95,2 %) buvo įsigytos iš Kinijos maisto ir vaistų inspekcijos institutų. Rehmannia mėginiai (SX1 ~ SX4, HN1 ir HN2) buvo paimti iš skirtingų auginimo sričių (žr. 1 lentelę), iš kurių SX4 ​​ir HN2 buvo garinami atitinkamai SX1 ir HN1, o SX2 ir SX3 buvo paimti iš tos pačios gamybos srities. Gansu provincijos vaistų kontrolės instituto vyriausiasis kinų medicinos specialistas Song Pingshun nustatė, kad visi mėginiai yra autentiški.

1 lentelė Informacija apie Semen Rehmanniae mėginius

2.1 Chromatografinės sąlygos

Naudota Shiseido CAPCELL PAK C18 (250.0 mm × 4,6 mm, 5 μm) kolonėlė, acetonitrilas – kaip judri fazė A, o 0,1 % skruzdžių rūgšties tirpalas – kaip judri B fazė. Gradiento eliuavimo sąlygos buvo: 0-3 min, 1%A; 3-9 min., 1 %A→5 %A; 9-24 min., 5 %A→35 %A; 24-35 min., 35 %A→65 %A; 35-40 min., 65 %A→90 %A. Kintamo bangos ilgio aptikimas (0-24 min., 203 nm; 24-40 min., 330 nm). Įpurškiamas tūris buvo 15 μL etaloninio tirpalo ir 20 μL mėginio tirpalo.

2.2 Tirpalo paruošimas

2.2.1 Etaloninio tirpalo ruošimas

Paimkite atitinkamus pirmiau minėtų penkių etaloninių medžiagų kiekius, įpilkite 70% metanolio, kad paruoštumėte mišrų etaloninį tirpalą, kurio masės koncentracija yra 0,4 mg/mL.

2.2.2 Bandomojo tirpalo ruošimas

Pasverkite apie 1.0 g Rehmannia miltelių (per sietelį Nr. 2), tiksliai pasverkite, sudėkite į užkimštą kūginę kolbą, tiksliai įpilkite 25 ml 70 % metanolio, uždarykite, pasverkite, apdorokite ultragarsu (galia 300). W, dažnis 50 kHz) 30 min., leiskite atvėsti iki kambario temperatūros, dar kartą pasverkite, prarastą masę papildykite 70 % metanoliu, filtruokite ir paimkite filtratą, kad gautumėte.

2.3 Metodinis tyrimas

2.3.1 Specifiškumo tyrimas

Paimkite sumaišytą etaloninį tirpalą pagal "2.2.1", o tiriamąjį tirpalą (SX1 mėginys) į "2.2.2", įšvirkškite ir išmatuokite pagal chromatografines sąlygas pagal "2.1". Rezultatai rodo, kad Rehmannia mėginio chromatogramoje pateikiama chromatografinė smailė, kurios sulaikymo trukmė yra tokia pati kaip ir Rehmannia glutinosa D, Leonurino, Echinacoside, Cistanche deserticola A ir Verbascoside etaloniniai standartai (žr. 1 pav.), o tai rodo, kad šis metodas turi stiprią. specifiškumas.

2.3.2 Tiesinio ryšio tyrimas

Į sumaišytą etaloninį tirpalą įpilkite 70 % metanolio, praskieskite atitinkamai 5 kartus, 10 kartų, 25 kartus, 50 kartų, 100 kartų ir 250 kartų, įpurkškite ir išmatuokite pagal chromatografines sąlygas pagal "2.1". Standartinės kreivės buvo nubrėžtos, kai kiekvienos atskaitos masės koncentracija yra horizontali ašis (x), o atitinkamas chromatografinės smailės plotas yra vertikalioji ašis (y). Rezultatai pateikti 2 lentelėje, nurodant, kad kiekvienas komponentas turi gerą linijinį ryšį atitinkamame masės koncentracijos diapazone.

1.rehmaniozidas D; 2. leonuridas; 3. echinakozidas; 4. kastanozidas A;5. akteozidas

1 pav. Specifiškumo tyrimo chromatogramos

2 lentelė Semen Rehmanniae 5 komponentų tiesinis ryšys

2.3.3 Tikslus tyrimas

Paimkite tiriamąjį tirpalą (SX1 mėginys) pagal "2.2.2" ir atlikite injekcijos bandymą pagal chromatografines sąlygas pagal "2.1". Įpurkškite mėginį 6 kartus nepertraukiamai, užrašykite kiekvieno komponento smailės plotą ir apskaičiuokite rehmannia glutinosa D, motininės žolės glikozido, ežiuolės glikozido, cistanche glikozido A ir verbaskozido smailės plotą tiriamajame mėginyje, kad jis būtų 0. Atitinkamai 46%, 0.12%, 0.85%, 0.48% ir 0.82%, o tai rodo, kad instrumentas turi gerą tikslumą.

2.3.4 Pakartojamumo tyrimas

Šeši to paties Rehmannia šaknies mėginio (SX1) mėginiai buvo paruošti lygiagrečiai pagal „2.2.2“ metodą ir sušvirkšti bei nustatyti pagal „2.1“ nurodytas chromatografines sąlygas. Rehmannia šaknies glikozido D, motininės žolės glikozido, ežiuolės glikozido, cistanche glikozido A ir verbaskozido RSD šešiuose mėginiuose buvo 0,46%, 0,69%, 1,42%, {{ 12}}.48% ir 1,58% atitinkamai, o tai rodo, kad metodas turi gerą pakartojamumą.

2.3.5 Stabilumo tyrimas

Paimkite tiriamąjį tirpalą (SX1 mėginys) pagal "2.2.2" ir įšvirkškite bei išmatuokite pagal chromatografines sąlygas pagal "2.1" 0 h, 2 h, 4 h, 6 h, 8 h, 1{{ 15}} val., 12 val., 18 val. ir 24 val. atitinkamai. Rehmannia glutinosa D, motininės žolės glikozido, echinakozido, cistanche glikozido A ir verbaskozido smailių sričių RSD buvo 0,94%, 1.04%, 0,73%. , 0,83 % ir 0,71 %, o tai rodo, kad tiriamasis tirpalas turi gerą stabilumą per 24 val.

2.3.6 Mėginio atkūrimo greitis

{{0}}.5 g Rehmannia šaknies mėginio (SX1) su žinomu 5 komponentų kiekiu buvo tiksliai pasverta į užkimštą kūginę kolbą ir įpilta 6 lygiagrečios porcijos bei 5 tam tikros koncentracijos etaloniniai tirpalai. atitinkamai. Mėginiai buvo paruošti pagal "2.2.2" metodą, o mėginiai buvo įšvirkščiami ir matuojami pagal "2.1" chromatografines sąlygas. Buvo apskaičiuotas atkūrimo greitis, o rezultatai pateikti 3 lentelėje. Vidutinis kiekvieno komponento mėginio atkūrimo greitis buvo 96,5% ~ 98,6%, o RSD buvo 0,73% ~ 1,52%, tai rodo, kad metodas yra geras.