Geležies nanodalelių, susintetintų iš Vitex Leucoxylon vandeninio lapų ekstrakto, žalioji sintezė ir apibūdinimas bei jo panaudojimas biomedicinoje

Santrauka:Vandeniniam ekstraktui gauti buvo naudojamas šalto ekstrahavimo metodasVitex leukoksilonaslapai santykiu 1:10. Geležies nanodalelės (FeNP) buvo susintetintos naudojant vandeninį lapų ekstraktąV. leukoksilonaskaip reduktorius. Fitomedicinos metodas buvo naudojamas FeNP gaminti, sumaišant 1 ml augalų ekstrakto su 1 mM geležies sulfato. Sintetiniams FeNP ištirti buvo naudojama skenuojanti elektroninė mikroskopija (SEM), Furjė transformacijos infraraudonųjų spindulių spektroskopija (FTIR), ultravioletinė-matoma spektroskopija (UV-Vis) ir energiją dispersinė rentgeno spindulių spektroskopija. Redukavimo reakcija buvo parodyta pasikeitus tirpalo spalvai, o juodos spalvos susidarymas patvirtina, kad susidarė FeNP. Didžiausia absorbcijos smailė (max) buvo nustatyta ties 395 nm UV-Vis spektrinės analizės metu. FTIR spektraiV. leukoksilonasvandeninis lapų ekstraktas parodė kai kurių smailių poslinkius, būtent 923,96 cm−1 ir 1709,89 cm−1, su funkcinėmis grupėmis karboksirūgštimis, nesočiaisiais aldehidais ir ketonais, kurių trūko FeNP FTIR spektruose ir kurie yra atsakingi už FeNP susidarymą. SEM vaizduose buvo pastebėti FeNP, kurių skersmuo nuo 45 iki 100 nm. FeNP sukūrimą patvirtino EDX, kuris rodo stiprų signalą metalinėje geležies srityje esant 6–8 Kev. XRD atskleidė kristalinę prigimtį ir vidutinį 136,43 nm skersmenį.Antioksidantas,priešuždegiminis, citotoksinis iržaizdų gijimasin vitro tyrimai parodė reikšmingą FeNP aktyvumą. Bendrieji šio tyrimo rezultatai rodo, kad žalioji FeNP sintezėpadidina jo biologinį aktyvumąir gali tarnauti kaipgalimas odos žaizdas gydantis agentasircitotoksinis agentas prieš vėžį. Būsimas tyrimas reikalingas, siekiant nustatyti mechanizmus, susijusius su FeNP sintezeV. leukoksilonasir jo biomedicinos taikymas.

Raktiniai žodžiai:Vitex leukoksilonas; geležies nanodalelės; SEM; žaizdų gijimas; citotoksinis

CISTANCHE NAUDA UŽANTIOKSIDANTAS,PRIEŠUŽDŽEMYMAS, CITOTOKSINIS IRŽAIZDŲ GIJIMAS

1. Įvadas

Nanotechnologijų taikymas moksle ir technologijose naujoms medžiagoms gaminti nanoskalės lygiu yra sparčiai auganti sritis [1]. Nanotechnologijos gamina medžiagas atominiu lygmeniu, kad įgytų išskirtinių savybių, kurias galima pritaikyti pageidaujamoms reikmėms. Ši sritis sparčiai plečiasi, nes ji taikoma moksle ir technologijoje gaminant naujas medžiagas nanoskalės lygiu [2]. Įvairūs pramonės sektoriai pastaraisiais metais panaudojo nanotechnologijas dėl jos taikymo elektroninių saugojimo sistemų [3], biotechnologijų [4], tikslinių analičių magnetinio atskyrimo ir išankstinio koncentravimo, tikslinio vaistų tiekimo [5] ir genų bei vaistų transporto priemonių srityse. pristatymas [3,5,6]. Todėl šios dalelės gali turėti didelį poveikį visuomenei, nes jos gali būti naudojamos įvairiai. Nanodalelės (NP) yra dalelių masė, kurios dydis yra mažesnis nei šimtas nanometrų ir kurios laikomos pagrindinėmis struktūrinėmis masėmis nanotechnologijų srityje. Didesnis NP aktyvumas yra ir jų charakteristika, ir kokybė, dėl kurios jie yra labiausiai pastebimi [7]. Organiniai ir neorganiniai NP yra dvi pagrindinės klasifikacijos, kurios gali būti taikomos nanodalelėms. Neorganinės nanodalelės gali būti magnetinės NP, tauriųjų metalų NP (pvz., Auksas ir sidabras) ir puslaidininkiniai NP (pvz., Titano dioksidas ir cinko oksidas). Organinėse nanodalelėse gali būti anglies NP. Neorganinės nanodalelės sulaukia didžiulio dėmesio, nes pasižymi puikiomis medžiagų savybėmis ir funkciniu universalumu. Jie buvo ištirti kaip galimos medicininio vaizdavimo priemonės, taip pat ligų gydymui dėl jų turimų dydžio savybių [8]. Įvairioms cheminėms, fizinėms ir biologinėms NP savybėms didelę įtaką daro įvairūs parametrai, įskaitant nanodalelių dydį ir morfologiją, taip pat paviršiaus padengimą, kurie paprastai nustatomi nanodalelių sintezės metu. Numatyto biologinio aktyvumo praradimą sukelia koloidinio stabilumo sumažėjimas. PH, jonų stiprumas ir daugybė baltymų, kurie atitinkamomis aplinkybėmis sąveikauja su AgNP, turi įtakos koloidiniam stabilumui. Dėl to tinkamas sintezės technikos pasirinkimas yra labai svarbus norint gauti norimas dalelių charakteristikas konkrečioms reikmėms [9].

Šiuo metu yra daug įvairių NP, kurias galima susintetinti naudojant įvairius fizinius, cheminius, biologinius ir hibridinius procesus. Remiantis daugelio tyrimų išvadomis, fiziniai ir cheminiai nanodalelių gamybos procesai apima organinių tirpiklių, pavojingų junginių, didelių energijos kiekių ir stabilizatorių, kurie nėra biologiškai skaidūs, naudojimą [10]. Todėl žaliosios nanotechnologijos srityje vis labiau populiarėja NP sintezė, naudojant natūraliai prieinamas medžiagas, tokias kaip augalų ekstraktai, įvairūs mikroorganizmai, jų metabolitai ir kelios natūralios humusinės medžiagos [11,12] kaip redukuojančios ir ribojančios medžiagos. Gaminant įvairias metalines nanodaleles, įskaitant sidabrą, auksą, geležį, varį ir cinką, buvo naudojami aplinkai nekenksmingi sintezės metodai. Lengvų ir aplinkai priimtinų NP sintezės metodų kūrimas yra vienas iš pagrindinių nanotechnologijų akcentų. Biomedžiagos, tokios kaip mikroorganizmai ir augalų ekstraktai, gali būti naudojamos ruošiant įvairius NP [13, 14]. Tačiau, kadangi kai kurie organizmai yra patogenai, su jais elgtis pavojinga. Kad mikroorganizmai klestėtų, jie turi būti laikomi kultūroje ir jiems turi būti taikomos kruopščiai kontroliuojamos sąlygos, įskaitant temperatūrą, pH ir kitus parametrus. Kadangi tai pašalina daug pastangų reikalaujantį mikrobų kultūros palaikymo procesą, NP sintezė naudojant augalų dalis kartais gali pasirodyti naudingesnė nei kiti biologiniai procesai [15]. Dėl to jis susilaukė daug dėmesio dėl savo būdingų savybių, tarp kurių yra gamtos išteklių naudojimas, greitumas, ekologiškumas ir geranoriškumas. Šios viliojančios savybės yra būtinos naudoti medicinoje. Žaliosios sintezės būdu pagamintų nanodalelių dydis yra tiksliai apibrėžtas ir kontroliuojamas, jose nėra teršalų, o metodą lengva padidinti. Tai yra keletas papildomų žaliosios sintezės pranašumų [16]. Sintetintų nanodalelių biologinį aktyvumą daugiausia lemia ir tiksliai sureguliuoja žaliosios medžiagos, naudojamos metalo jonų stabilumui ir mažinimui. Viena iš idealių NP savybių turėtų būti ta, kad ji turi turėti išskirtinį gebėjimą atskirti galimus taikinius (patogenus) ir žinduolių (šeimininkų) ląsteles [17].

Dėl šios priežasties dabartiniuose tyrimuose buvo ištirtas vandeninis V. leucoxylon lapų ekstraktas, siekiant palengvinti geležies nanodalelių (FeNP) susidarymą. Geležis yra vienas iš elementų, kurių galima rasti daugiausiai Žemėje. Pastaruoju metu jis buvo pripažintas nauja svarbių NP klase dėl to, kad turi daugybę unikalių savybių, įskaitant aukštą prievartą ir superparamagnetizmą. Cataly sis, elektroniniai prietaisai, informacijos saugojimas, jutikliai, vaistų tiekimo technologija, biomedicina, magnetiniai įrašymo prietaisai ir aplinkos valymas yra tik keletas iš daugelio intriguojančių programų, kuriose buvo naudojami FeNP [18]. Be to, remiantis daugeliu tyrimų, FeNP gali būti sukurti iš įvairių augalų ekstraktų. Šie augalų ekstraktai apima Eucalyptus globulus lapą [19], granato lapą [20] ir bananų žievelės pelenus [21]. Šiame tyrime naudotas augalas V. leucoxylon yra Verbenaceae šeimos narys. Jis taip pat žinomas kaip penkialapis švarus medis (kanadų kalba: Sengeni, Holenekki, Hollalakki) ir gali būti aptinkamas regione palei upių krantus visžalių ir pusiau visžalių miškų bei drėgnų lapuočių miškuose prie upelių. Jis gali siekti iki 20 m aukštį ir priskiriamas prie kuklių iki didelių lapuočių medžių. Išilgai Indijos Vakarų Ghatų miškų jo galima rasti daug. Buvo pranešta, kad V. leucoxylon lapų ekstrakto infuzija pasižymi įvairiu farmakologiniu poveikiu, pavyzdžiui, priešuždegiminiu, antioksidaciniu, antipsichoziniu, antidepresantu, antiparkinsoniniu ir antihiperlipideminiu poveikiu [22]. Natūralūs produktai per visą istoriją, ypač liaudies medicinoje, buvo naudojami įvairių negalavimų ir ligų gydymui. Ši praktika siekia senovės laikus. Natūralių produktų chemijos metodai, kurie buvo naudojami ilgą laiką, leido rasti daugybę bioaktyvių antrinių metabolitų, gaunamų iš sausumos ir jūros šaltinių. Nemažai šių natūraliai susidarančių medžiagų dabar svarstoma naudoti kaip galimus vaistus [23].

Yra daug natūraliai susidarančių cheminių ir maistinių medžiagų, kurios dar neatrastos ir kurios yra naudingos žmonijai. Dėl šios priežasties iš karto atsiranda poreikis tyrinėti ir plėtoti naujoviškas gydymo galimybes, kurias būtų galima sėkmingai panaudoti terapinėse intervencijose, tuo pačiu sukuriant minimalų neigiamą poveikį.

Šiuo metu siūlomas žaliosios FeNP sintezės procesas yra skirtingas ir ekonomiškas. Dabartiniame tyrime buvo bandoma sukurti nanodaleles kambario temperatūroje nenaudojant jokių cheminių medžiagų ar fizinių metodų. Vitex leucoxylon augalas buvo pasirinktas siekiant susintetinti geležies nanodaleles, o geležies nanodalelių stiprumui įvertinti buvo atlikti išsamūs sisteminiai in vitro modeliai. Apie šį augalą paskelbta tik nedaug mokslinių tyrimų apie nanodalelių koncepciją ir jų biomedicininį pritaikymą. Todėl nusprendėme, kad būtų naudinga atlikti šį tyrimą turint omenyje šiuos tikslus: fitocheminių medžiagų patikrą ir antrinių metabolitų skaičių V. leucoxylon; žalioji sintezė ir FeNP iš V. leucoxylon apibūdinimas; lyginamasis V. leucoxylon ir jo FeNP antioksidacinio ir priešuždegiminio poveikio tyrimas in vitro; V. leucoxylon vandeninio lapų ekstrakto ir jo FeNP citotoksinis aktyvumas prieš odos vėžį, plaučių vėžį ir burnos vėžį; V. leucoxylon vandeninio lapų ekstrakto ir jo sintetinių FeNP žaizdų gijimo aktyvumas in vitro įbrėžimų testu.

2. Medžiagos ir metodai

2.1. Augalinės medžiagos rinkimas

2022 m. kovo mėnesį švieži V. leucoxylon lapai buvo nuskinti iš Anshi miško Vakarų Ghatuose Indijos Karnatakos valstijos Utar Kanados rajone. Lapus identifikavo ir patvirtino dr. Kotresha K., taksonomė, Botanikos katedra, Karnataka mokslo koledžas, Dharwad; Karnataka, remdamasis kupono pavyzdžiu, deponuotu Karnatakos mokslo koledžo Botanikos katedroje, Dharwad, Karnataka. Po surinkimo šviežių augalų lapų medžiaga buvo nuplaunama po tekančiu vandeniu iš čiaupo, išdžiovinta saulėje ir sumalta į stambius miltelius naudojant mechaninį smulkintuvą. Milteliai buvo laikomi talpyklose, kurios buvo sandariai uždarytos kambario temperatūroje, kad vėliau būtų galima panaudoti neapdoroto tirpiklio ekstrahavimo procese.

2.2. Augalų ekstrakto paruošimas

Naudojant Soxhlet prietaisą, 25 g miltelių pavidalo lapų buvo ekstrahuojami 48 valandas su 250 ml distiliuoto vandens. Vandeninis ekstraktas buvo toliau koncentruojamas naudojant rotacinį garintuvą, o po to išdžiovinamas eksikatoriuose ir laikomas uždarame butelyje 4 °C temperatūroje iki naudojimo. FeNP sintezei vandeninis ekstraktas buvo naudojamas kaip redukuojantis ir stabilizuojantis agentas.

2.3. Tirpikliai ir reagentai

Visos naudojamos cheminės medžiagos ir tirpikliai buvo analitinės kokybės ir buvo įsigyti iš Hi-media (Hubli, Indija).

2.4. Fitocheminė analizė

Vykdydami procedūrą, aprašytą Deepti ir kt. (2012), neapdorotas vandeninis lapų ekstraktas V. leucoxylon buvo kokybiškai ištirtas dėl įvairių fitocheminių sudedamųjų dalių, tokių kaip flavonoidai, alkaloidai, fenoliai, glikozidai, steroliai, ligninai, saponinai, antrachinonai, taninai ir redukuojantys cukrūs [24].

2.5. Geležies nanodalelių sintezė

Pirmiausia į 1 0 ml 0,05 mM FeSO4 vandeninio tirpalo buvo įpilta 1 ml V. leucoxylon vandeninio lapų ekstrakto ir mišinys suplaktas. Kambario temperatūroje ir tamsioje aplinkoje buvo atliktas visas reakcijos mišinio procesas. Oksidacijos / redukcijos reakcija buvo aiškiai matoma po to, kai bespalvis reakcijos mišinys buvo inkubuojamas ir reagavo reikiamą laiką [25]. Siekiant pašalinti bet kokius vandeninio ekstrakto pėdsakus iš šviežiai susintetintų FeNP, kuriems buvo leista išdžiūti milteliuose po centrifugavimo 10, 000 aps./min 10 min. per norimą reakcijos laikotarpį, vandeninis mišinys, kuriame yra FeNP, buvo centrifuguojamas. antrą kartą ir pakartotinai disperguoti dvigubai distiliuotame vandenyje ir išdžiovinti [26].

2.6. FeNP apibūdinimas

Keletas metodų, tokių kaip ultravioletinė ir matoma spektroskopija (UV-Vis), Furjė transformacijos infraraudonoji spektroskopija (FTIR), skenuojanti elektronų mikroskopija ir energijos dispersinė rentgeno spektroskopija, rentgeno spindulių difrakcija (XRD), dalelių dydžio analizatorius ir zeta. potencialas buvo panaudotas FeNP apibūdinimui.

2.6.1. UV matoma spektroskopija pagrįsta analizė

Pirma, 1 ml koloidinio FeNP tirpalo alikvotinė dalis kvarcinėse kiuvetėse buvo įvertinta naudojant UV matomą spektroskopiją (U-3310, Hitachi, Tokijas, Japonija), naudojant distiliuotą vandenį kaip etaloną ir 0,05 mM FeSO4. kaip tuščiasis mėginys, siekiant patvirtinti geležies jonų redukciją koloidiniame tirpale [27].

2.6.2. FTIR pagrįsta analizė

Funkcinės grupės (grupės), kurios buvo surištos ant geležies paviršiaus ir dalyvavo FeNP sintezėje, buvo nustatytos naudojant FTIR spektroskopiją (S700, Nicolet, MA, JAV), [28]. Po 72 valandų inkubacijos FeNP buvo išskirti pakartotinai centrifuguojant (3–4 kartus) reakcijos mišinius 10, 000 aps./min. greičiu 15 min. Supernatantas buvo pakeistas dejonizuotu vandeniu, o granulės buvo laikomos miltelių pavidalu. Išdžiovinus FeNP buvo atlikta FTIR analizė, naudojant kalio bromido granuliavimo procesą santykiu 1:100.

2.6.3. Skenavimo elektronų mikroskopija pagrįsta analizė

Skenuojanti elektroninė mikroskopija (JSM-IT 500, Jeol, Boston, MA, JAV) buvo naudojama nanodalelėms ištirti ir jų paviršiaus formai nustatyti. Substratai buvo paruošti ant švaraus 5 mm × 5 mm Si substrato, suskaidyto iš 100 mm skersmens plokštelės. Substratui buvo leista reaguoti 2–6 valandas, o mėginys buvo paruoštas centrifuguojant koloidinį tirpalą 10, 000 aps./min. greičiu 5 min. Granulės buvo išdžiovintos po daug kartų pakartotinai centrifuguotos, po to vėl disperguotos dejonizuotame vandenyje ir procedūra kartojama. Galiausiai buvo gauta sausa granulė, kuriai toliau buvo atlikta SEM analizės struktūra, kaip aprašyta Nacionalinio standartų ir technologijos instituto NIST{10}} [29].

2.6.4. Energijos dispersinis rentgenas

Po džiovinimo ant anglimi dengto vario tinklelio redukuoti FeNP buvo analizuojami naudojant EDX (JSM-IT 500, Jeol, Boston, MA, JAV), kuris taip pat leido nustatyti elementų sudėtį.

2.6.5. Zeta potencialas

NP stebėjimai Zeta potencialas yra naudinga priemonė norint gauti papildomų įžvalgų apie koloidinių NP stabilumą. Zeta potencialo amplitudė suteikia užuominą apie galimą koloido stabilumą. Pasak Meléndrezo ir kt. (2010), dalelės laikomos stabiliomis, jei jų zeta potencialo vertės yra daugiau teigiamos nei plius 30 mV arba daugiau neigiamos nei 30 mV [30]. Į šį faktą reikėtų atsižvelgti. Lazerinis zeta matuoklis buvo naudojamas paviršiaus zeta potencialo rodmenims gauti (Malvern zeta seizer 2000, Malvern, JK). Skysti nanodalelių mėginiai, kurių bendras tūris yra 5 mililitrai, buvo praskiesti 50 mililitrų dvigubai distiliuoto vandens, o kaip suspenduojantis elektrolito tirpalas buvo naudojamas 2 mm kvadratiniam metrui natrio chlorido. Po to pH buvo keičiamas tol, kol pasiekė norimą lygį. Mėginiai buvo maišomi iš viso 30 min. Sukračius talpyklą, buvo pastebėtas pH pusiausvyroje ir nustatytas metalinių dalelių zeta potencialas. Norint nustatyti FeNP paviršiaus potencialą, buvo panaudotas zeta potencialas. Kiekvienu atveju nurodyta vertė buvo trijų atskirų matavimų rezultatų vidurkis. Kai zeta potencialo reikšmės svyravo nuo didesnės nei plius 30 mV iki mažesnės nei 30 mV, buvo nustatyti NP stabilumo kriterijai [31].

2.6.6. Dalelių dydžio analizatorius

Siekiant nustatyti mėginio dalelių dydį, buvo atliktas PSA tyrimas po to, kai jis buvo liofilizuotas ir išsklaidytas naudojant ultragarso aparatą (SZ-100, Horiba, Kiotas, Japonija).

2.6.7. Rentgeno spindulių difrakcijos analizė (XRD) analizė

Iš vandeninio V. leucoxylon lapų ekstrakto susintetintos geležies nanodalelės buvo tiriamos XRD (Smart Lab SE, Rigaku, Tokijas, Japonija), siekiant nustatyti nanodalelių prigimtį ir vidutinį dydį.

2.7. Antioksidacinio aktyvumo nustatymas naudojant in vitro metodus

2.7.1. Geležies jonus redukuojančio antioksidanto galios tyrimas (FRAP)

Pasak Oyaizu (1986), su nedideliu modifikavimu buvo įvertinta geležies jonų redukcinė galia [32]. 30 min. 50 ◦C temperatūroje 2,5 ml 20 mM fosfato buferio ir 2,5 ml 1 procento kalio fericianido buvo įpilama į 2,5 ml V. leucoxylon lapų ekstrakto ir jo susintetinti FeNP sumaišyti su derinys. Pasibaigus inkubaciniam laikotarpiui, mišinys buvo papildytas 2,5 ml 10 % m/v trichloracto rūgšties ir 0,5 ml 0,1 % m/m geležies chlorido, prieš inkubuojant dar 10 min. Galiausiai, UV-V spektrofotometras buvo naudojamas absorbcijai nustatyti esant 700 nm. Standartiškai buvo naudojama askorbo rūgštis. Kiekvienas mėginys buvo tiriamas tris kartus.

2.7.2. Vandenilio peroksido pašalinimo tyrimas

Remiantis V. leucoxylon vandeninio lapų ekstrakto ir jo sintetinių FeNP gebėjimu pašalinti vandenilio peroksidą, buvo įvertintas šių junginių antioksidacinis aktyvumas. Pirmiausia į 0,5 ml žinomos koncentracijos standartinės askorbo rūgšties buvo įpilta {{0}},6 ml fosfatinio buferio (pH-7,4), kuriame yra 4 mM H2O2, taip pat mėgintuvėlių su įvairių koncentracijų augalų ekstraktais. svyruoja nuo 100 µL iki 500 µL (pH – 7,4). Naudodami fosfatinį buferį ir tuščiąjį tirpalą be vandenilio peroksido, po 10 minučių įvertinome tirpalo absorbciją esant 230 nm. Kontrolei sukurti buvo naudojamas fosfatinis buferis, o ne mėginys ar standartas [33]. Kiekvienas mėginys buvo tiriamas tris kartus. Apskaičiuojant slopinimo procentą buvo naudojamas formulės metodas.

2.7.3. DPPH laisvųjų radikalų šalinimas

Tyrimas V. leucoxylon lapų ekstraktas ir susintetinti FeNP buvo tiriami dėl jų gebėjimo sunaikinti laisvuosius radikalus, naudojant DPPH radikalą kaip reagentą [34]. Mėginiai buvo sujungti su DPPH radikalo tirpalu (60 M) etanolyje (100 µL), esant skirtingoms koncentracijoms (m/v). UV-Vis spektrofotometras buvo naudojamas mišinio absorbcijai matuoti esant 517 nm po 30 minučių inkubacijos tamsoje kambario temperatūroje. Askorbo rūgštis buvo naudojama kaip standartas eksperimentui. Norint nustatyti kiekvieno mėginio DPPH valymo aktyvumą, buvo naudojama ši lygtis:

čia Ac reiškia kontrolinės reakcijos, kuri atliekama sumaišant 100 l etanolio su 100 l DPPH tirpalo, absorbciją, o At reiškia bandomojo mėginio absorbciją. Eksperimentai buvo atlikti su trynukais. IC50 vertė buvo apskaičiuota kiekvienam mėginiui. Didesnį laisvųjų radikalų aktyvumo lygį rodo reakcijos mišinys, kurio absorbcija buvo mažesnė.

2.7.4. Fosfomolibdeno (PM) tyrimas

Bendras antioksidacinis aktyvumas buvo nustatytas naudojant Prieto et al., 1999, standartinę metodiką. Kiekviename mėgintuvėlyje, kuriame yra 3 ml distiliuoto vandens ir 1 ml molibdato reagento tirpalo, buvo gautas vandeninis V. leucoxylon lapų ekstraktas ir jo FeNP įvairios koncentracijos nuo 100 µL iki 500 µL. Šie mėgintuvėliai buvo inkubuojami 90 minučių 95 ◦C temperatūroje. Reakcijos mišinio absorbcija buvo išmatuota esant 695 nm po to, kai šie mėgintuvėliai buvo sureguliuoti iki kambario temperatūros 20–30 minučių po inkubacijos. Etaloninis standartas buvo askorbo rūgštis [35].

2.8. In vitro priešuždegiminės veiklos įvertinimas

Priešuždegiminis V. leucoxylon vandeninio lapų ekstrakto ir jo sukurtų FeNP poveikis buvo įvertintas naudojant baltymų denatūravimo metodą, aprašytą Elias ir kt., 1988 m., su nedideliais pakeitimais [36]. Kaip standartinis vaistas buvo naudojamas natrio diklofenakas. Reakcijos mišinys, sudarytas iš 2 ml žinomos koncentracijos pagamintų FeNP (100 g/ml) su standartiniu diklofenako natrio druska (100 g/ml) ir 2,8 ml fosfatiniu buferiniu tirpalu (pH 6,4), buvo sumaišytas su 2 ml šviežio vištos kiaušinio. albumino (1 mM) ir inkubuojama 27 ± 1 ◦C temperatūroje 15 min. Denatūracija buvo sukelta 10 min. laikant reakcijos mišinį į 70 ◦C vandens vonią. Atšaldžius, absorbcija prie 660 nm buvo išmatuota naudojant dvigubai distiliuotą vandenį kaip tuščią mėginį. Kiekvienas bandymas buvo atliktas tris kartus. Baltymų denatūracijos slopinimo procentiniam kiekiui apskaičiuoti buvo naudojama ši formulė:

kur: Esant=tiriamojo mėginio absorbcijai; Ac=valdymo absorbcija.

2.9. Geležies nanodalelių citotoksinio ir priešvėžinio aktyvumo nustatymas naudojant MTT tyrimą

Buvo įvertintas V. leucoxylon ir jo susintetintų FeNP poveikis ne vėžinių fibroblastų ląstelių L292 gyvybingumui ir jo priešvėžiniam aktyvumui sergant odos vėžiu (A375), plaučių vėžiu (A549) ir burnos vėžiu (KB-3-1). naudojant standartinį MTT tyrimą, remiantis Carmichael ir kt., (1987) [37]. Visos ląstelių linijos buvo gautos iš Nacionalinio ląstelių mokslo centro (NCCS), Pune, Indija. Ląstelių augimo slopinimo procentais (IC50) reikšmės buvo išvestos naudojant kiekvienos ląstelių linijos dozės ir atsako kreives, o augimo slopinimo procentiniam kiekiui apskaičiuoti buvo panaudota ši formulė. Šio eksperimento pagrindas yra sveikų ląstelių mitochondrijų dehidrogenazės MTT pavertimas purpuriniu formazano produktu [38].

2.10. In vitro žaizdų gijimo tyrimas naudojant įbrėžimų testą

Šiame tyrime buvo ištirtos L292 ląstelių linijos ląstelių plitimo ir migracijos galimybės, kurias sukelia žinomos koncentracijos augalų ekstrakto ir geležies nanodalelių mėginiai [39]. Ląstelių auginimo procesui pradėti buvo naudojamos gyvūnų ląstelių kultūros plokštelės su DMEM terpėmis, papildytomis 10 procentų FBS ir 2 procentų Pen-Strep antibiotiku (Darmštatas, Vokietija). Sterilus plastikinis pipetės antgalis buvo naudojamas subraižyti vienasluoksnį ląstelių susiliejimą po to, kai jos išaugo iki maždaug 50 000 ląstelių viename ml. PBS tirpalas buvo naudojamas nepageidaujamoms ląstelių nuolaužoms pašalinti. Kaip neigiama kontrolė buvo naudojamos neapdorotos ląstelės, o standartinė askorbo rūgštis buvo naudojama kaip teigiama kontrolė žinomos koncentracijos polimerų mėginiams. Kitas 24 valandas ląstelės buvo laikomos 37 ◦ C temperatūroje su 5 procentais CO2. Norint ištirti santykinę ląstelių migraciją ir žaizdų uždarymą, subraižyti ląstelių sluoksniai buvo inkubuojami ir vaizduojami intervalais nuo 0 iki 6 valandų iki 12 valandų ir 24 valandų. Tarpo atstumui įvertinti buvo naudojamas „MagVision Software“ matavimas (X64, 2016 m., Magnusas, Naujasis Delis, Indija) 4 × raiška. Norėdami nustatyti žaizdos uždarymą ir migracijos greitį, buvo naudojama toliau pateikta formulė:

atsižvelgiant į: A0h=žaizdos plotas, išmatuotas iškart po įbrėžimo; ATh=žaizdos plotas, išmatuotas po h valandų; Rm=migracijos greitis (µm/h); Wf=pradinis žaizdos plotis (µm); ir T=perkėlimo laikas (valanda).

2.11. Statistinė analizė

Duomenys pateikiami kaip vidutinis standartinis nuokrypis ir standartinė paklaida, o kiekvienas eksperimentas buvo atliktas tris kartus. SPSS programinės įrangos versija 20 buvo naudojama atlikti vienpusę dispersijos analizę (ANOVA) dėl vidutinių balų skirtumų tarp grupių.

Paprašyk daugiau:

El. paštas:wallence.suen@wecistanche.com

WhatsApp / Tel: plius 86 15292862950

PARDUOTUVĖ:

https://www.xjcistanche.com/cistanche-shop