HPLC echinakozido nustatymas Cistanche Cistanche

HPLC echinakozido nustatymas Cistanche Cistanche

Daugiau informacijos:ali.ma@wecistanche.com

Tikslas:HPLC nustatė kiekįechinakozidasinCistanchesumaltas skysto azoto sąlygomis, taip pat natūraliai išdžiovintas ore, lyginant jįlaukinė cistancheirdirbtinai auginama Cistanche.

Metodai:buvo naudojama lc{{0}}HPLC sistema (Shimadzu, Japonija). Kolonėlė buvo YMC inertsil ods-sp (4,6 mm × 150 mm, 5 μm; YMC Co Ltd, Japonija); Judanti fazė: acetonitrilas-metanolis -1 proc. skruzdžių rūgšties (10:15:75); Aptikimo bangos ilgis 334 nm; Srauto greitis 0,7 mg · ml-1. Kolonėlės temperatūra 30 laipsnių C.

Rezultatai:skirtingos apdorojimo sąlygos turėjo labai aiškų poveikį echinakozido kiekiui: paprastai echinakozido kiekis Cistanche žemėje skystu azotu buvo didesnis nei natūralioje ore išdžiovintoje žemėje; Aktyvių medžiagų kiekis laukinėjeCistanchebuvo daug didesnis nei dirbtinės kultūros.

Spustelėkite, kad gautumėte Cistanche ekstrakto miltelių gaminius

Cistanche yra nykstanti rūšis, parazitinis augalas, gyvenantis Clostridium, Salix rubrum šaknyse. Kinijoje Cistanche daugiausia platinamas Vidinėje Mongolijoje, Ningxia, Gansu ir Sindziange, turintis puikią „dykumos ženšenio“, turinčio didelę medicininę vertę, reputaciją. Pagrindiniai jo vaistiniai ingredientai yra feniletanolio glikozidai, kuriuos galima suskirstyti į echinakozidą, lapų kokozidą, cistanche ir kitus, priklausomai nuo jų pakaitalų. Tarp jų, echinakozidas pagerino seksualinę funkciją, turi antioksidacinį ir laisvųjų radikalų šalinimo poveikį, tačiau taip pat turi tam tikrą antiapoptotinį poveikį. Nuo devintojo dešimtmečio HPLC technologija, kuri suteikia paprastą ir greitą feniletanolio glikozidų atskyrimo būdą, buvo plačiai naudojama atskiriant natūralius produktus. Cistanche, pagrindinės aktyvios laukinės ir dirbtinai auginamos Cistanche sudedamosios dalies, kiekiui analizuoti pasirinktas HPLC metodas skirtingais augimo laikotarpiais, suteikiantis mokslinį pagrindą racionaliam Cistanche vystymuisi ir panaudojimui bei efektyviam jo kokybės įvertinimui.

Prietaisai ir reagentai

Shimadzu, Japonija, lc{0}}HPLC aparatas, lc-20prie tandeminio dvigubo stūmoklio siurblio, cto-20koloninės krosnelės, spda-20 UV Vis dvigubo bangos ilgio detektorius; Kunshan kq-100 ultragarsinis valiklis; Acetonitrilas (chromatografiškai grynas, Tianjin Guangfu Chemical Research Institute); Metanolis (chromatografiškai grynas, Tianjin Guangfu Chemical Research Institute); Skruzdžių rūgštis (chromatografiškai gryna, Tianjin Guangfu Chemical Research Institute); Distiliuotas vanduo

Kontrolė: echineozidas, kiekis didesnis arba lygus 98,43 proc. (Shanghai Yuanye Bio Technology Co., Ltd.).

Penki Cistanche pavyzdžiai: dirbtinai pasodinti vienerius metus su šiuo Cistanche, dirbtinai pasodinti Cistanche, dirbtinai džiovinti Cistanche, laukiniai Cistanche ir dirbtinai pasodinti daugiau nei trejus metus su Cistanche.

2 metodai ir rezultatai

2.1 chromatografinių sąlygų nustatymas

Siekiant atskirti išmatuoto echineozido smailę LC chromatogramoje nuo kitų medžiagų, taip pat kontroliuoti siurblio slėgį ir laiko grafiką, kad jis atitiktų tinkamą intervalą, buvo atliktas eksperimentinis chromatografinių sąlygų modifikavimas, o po to optimizavimo eksperimentų su mobiliąja faze metu buvo padaryta išvada, kad kuo aukštesnė temperatūra, tuo trumpesnis sulaikymo laikas ir mažesnė koncentracija, tuo mažesnis siurblio slėgis ir mažesnis sulaikymo laikas, tačiau smailės aukštis tapo mažesnis, o tai buvo nepalanku matavimas. Galiausiai nustatyta, kad judrioji fazė yra acetonitrilo-metanolio -1 procentų skruzdžių rūgšties (10:15:75), aptikimo bangos ilgis 334 nm, srauto greitis 0,7 ml/min. ir kolonėlės temperatūra. 30 laipsnių C, atsižvelgiant į objektyvias kambario temperatūros sąlygas ir maksimalų siurblio guolio slėgį, todėl gaunama daug informacijos su aštriomis smailių formomis ir gerai atskiriant sudedamąsias dalis.

2.2 stulpelių nustatymas

YMC-Inertsil ODS-SP (4,6 mm × 150 mm, 5 μm; YMC Co Ltd, Japonija).

2.3 eksperimentinis tirpalo paruošimas

2.3.1 etaloninių tirpalų ruošimas

Tinkamas echineozido etalono kiekis buvo tiksliai pasvertas ir įmaišytas judriosios fazės acetonitrilo-metanolio -1 procentų skruzdžių rūgšties (10:15:75), kad susidarytų 0.0 6 mg · ML - 1, 0.05 mg · ML {{1{{20}}}}, 0,04 mg · ML - 1 , 0,03 mg · ML - 1, 0,02 mg · ML - 1, 0,01 mg · ML - 1 ir 0,005 mg · ML - 1 echinakozido etaloniniai tirpalai.

2.3.2 tiriamojo tirpalo paruošimas

Atitinkami kiekiai dirbtinai pasodintų šviežių Cistanche (iki vienerių metų), dirbtinai šviežių Cistanche ir laukinių šviežių Cistanche buvo susmulkinti iki miltelių, naudojant skiedinį skystu azotu; Be to, atitinkamas kiekis pirmiau minėtų 3 Cistanche buvo supjaustytas į blokus, natūraliai išdžiovinamas ore vėdinamoje pavėsyje, o po džiovinimo buvo susmulkintas ir sumaltas į miltelius. Dirbtinis sausas cistanche ir laukinis per trejus metus sausas Cistanche buvo sumaltas tiesiai į miltelius. Paimta 0,5 g aukščiau paruoštų Cistanche miltelių ir sudėti į centrifugos mėgintuvėlį, įpilta 25 ml judriosios fazės, pasverta ir mirkyti 30 min., apdorota ultragarsu 40 min., atšaldyta ir tada dar kartą pasveriamas, kad būtų užpildytas trūkstamas svoris su judriąja faze, sukratytas ir centrifuguojamas, o supernatantas buvo paimtas 0,45 μM mikroporinės filtro membranos filtravimui.

2,4 standartinio echinakozido mėginio regresijos kreivių grafikai

Paruošti standartiniai echineozido mėginiai buvo įšvirkščiami į LC aparatą atskirai, o kontrolinės medžiagos koncentracija (mg · L{{0}}) buvo naudojama kaip abscisė, o atitinkami smailių plotai buvo orientuoti į grafiką. standartinė kreivė, todėl gaunama regresijos lygtis: y=66 867 100x-46 360.83, R2=0.98637, kuri parodė echineozido 0,1–1,2 ug esant geram tiesiniam ryšiui.

3 Diskusijos

Echinakozidas yra vienas iš pagrindinių aktyvių Cistanche komponentų, kuris gali gerai atspindėti Cistanche farmakologinio poveikio cheminį pagrindą, todėl vaistinės medžiagos ir jos farmakologinio poveikio kokybės vertinimas atitinka ir pagerina Cistanche kokybės vertinimo tinkamumą.

Skirtingos apdorojimo sąlygos turėjo aiškų poveikį echinakozido kiekiui, o Cistanche žemėje skystu azotu echinakozido kiekis paprastai buvo didesnis nei natūralioje ore išdžiovintoje žemėje. Įprastas džiovinimas oru sumažino echineozido kiekį, kuris galėjo būti sunaudotas džiovinant oru arba paverčiamas. Kad nesumažėtų veikliųjų medžiagų kiekis ir būtų garantuotas Cistanche veiksmingumas, reikia parinkti tinkamą gydymą.

Nuosekliai dauguma manė, kad dirbtinė Cistanche auginimo aplinka ir augimo įpročiai nesiskiria nuo laukinės gamtos ir nesiskyrė kokybe, buvo linkę akcentuoti tik derlių ir neanalizavo kokybės. Šis tyrimas parodė, kad dirbtinai auginamo Cistanche echinakozido kiekis buvo mažesnis nei laukinio Cistanche echinakozido. Didžiausias buvo {{0}},3360 proc. laukinių cistankų, o mažiausias – 0007 0 proc. dirbtinių cistankų. Todėl, norint pagerinti veikliųjų medžiagų kiekį, jį dar reikia ištirti auginimo technologijoje.

Cistanche kokybė priklauso nuo jo veikliosios medžiagos echinakozido kiekio, kuris savo ruožtu turi tvirtą ryšį su sezonu, laiku ir derliaus nuėmimo būdu, todėl nuimant Cistanche derlių reikia atsižvelgti į veikliosios medžiagos kaupimosi būseną ir augimo ir vystymosi stadija. Atsižvelkite į kokybę ir derlių.

Šiame darbe paminėtas metodas yra paprastas, tikslus, atkuriamas ir tikslus echineozidui nustatyti. Naudinga Cistanche nustatymui.