HydroZitLa slopina kalcio oksalato akmenų susidarymą nefrolitinėse žiurkėse ir skatina nematodo Caenorhabditis Elegans ilgaamžiškumą 2 dalis

Cistanche glikozidas taip pat gali padidinti SOD aktyvumą širdies ir kepenų audiniuose ir žymiai sumažinti lipofuscino ir MDA kiekį kiekviename audinyje, efektyviai pašalindamas įvairius reaktyvius deguonies radikalus (OH-, H2O₂ ir kt.) ir apsaugodamas nuo DNR pažeidimo. OH-radikalais. Cistanche feniletanoidiniai glikozidai pasižymi stipriu laisvųjų radikalų šalinimo gebėjimu, didesne redukcine galia nei vitaminas C, pagerina SOD aktyvumą spermos suspensijoje, mažina MDA kiekį ir turi tam tikrą apsauginį poveikį spermos membranos funkcijai. Cistanche polisacharidai gali sustiprinti SOD ir GSH-Px aktyvumą eksperimentiškai senstančių pelių eritrocituose ir plaučių audiniuose, kuriuos sukelia D-galaktozė, taip pat sumažinti MDA ir kolageno kiekį plaučiuose ir plazmoje bei padidinti elastino kiekį. geras sugeriantis poveikis DPPH, pailgina senstančių pelių hipoksijos laiką, pagerina SOD aktyvumą serume ir lėtina fiziologinę plaučių degeneraciją eksperimentiškai senstančiose pelėse Dėl ląstelių morfologinės degeneracijos, eksperimentai parodė, kad Cistanche pasižymi geru antioksidaciniu gebėjimu. ir gali būti vaistas, skirtas odos senėjimo ligų prevencijai ir gydymui. Tuo pačiu metu Cistanche esantis echinakozidas turi didelį gebėjimą sunaikinti DPPH laisvuosius radikalus ir geba pašalinti reaktyviąsias deguonies rūšis ir užkirsti kelią laisvųjų radikalų sukeltam kolageno skaidymui, taip pat turi gerą atkuriamąjį poveikį timino laisvųjų radikalų anijonų pažeidimams.

Spustelėkite Cistanche Norge

【Daugiau informacijos:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:8613632399501】

Remiantis mūsų dabartinėmis išvadomis, HydroZitLa antipatogeninę funkciją atliko mažiausiai dviem būdais. Pirma, jis sumažino oksalato išsiskyrimą su šlapimu, sumažino CaOx kristalizacijos pajėgumą ir tiekė citratą. Antra, jame buvo žolelių polifenolių, kurie galėjo susilpninti oksidacinį stresą ir uždegimą, todėl slopina CaOx litogenezę. Iš esmės oksalatas endogeniškai sintetinamas kepenyse, naudojant glioksilatą kaip svarbų pirmtaką41. Glioksilatas yra sintetinamas iš glikolato, veikiant glikolato oksidazės (GO) fermentui, o laktato dehidrogenazės (LDH) toliau paverčiamas oksalatu. Mes nustatėme, kad HydroZitLa žymiai sumažino oksalato išsiskyrimą su šlapimu EG gydomoms žiurkėms. Mes spėliojome, kad HydroZitLa slopino oksalato sintetinį kelią kepenyse, sumažindamas kepenų fermentų, dalyvaujančių glioksilato metabolizme, ypač LDH ir GO, reguliavimą. Ankstesnis Kailash ir Varalakshmi tyrimas parodė, kad bananų stiebo ekstraktas sumažino kepenų GO ir LDH koncentraciją natrio glikolato sukeltose hiperoksalurinėse žiurkėse27. Poonguzhali ir Chegu taip pat pranešė, kad neapdorotas bananų stiebų ekstraktas sumažino oksalato, glikolio rūgšties ir glioksilo rūgšties kiekį šlapime glikolato sukeltose hiperoksaluro žiurkėse30. Neseniai Patankar ir kt. parodė, kad jų vaistažolių preparatas, vadinamas Herbmed Plus (su banano stiebu), sumažino LDH aktyvumo lygį kepenų ir inkstų audiniuose42. Norint patikrinti mūsų spėliones, reikėtų toliau tirti kepenų ir inkstų fermentų, dalyvaujančių oksalato sintezėje, ekspresiją EG žiurkėms, gydomoms HydroZitLa.

Keletas įrodymų tvirtai patvirtina, kad oksidacinis stresas, uždegimas ir inkstų kanalėlių pažeidimai yra labai svarbūs CaOx litogenezei3, 4, 15, 43–45. Oksidacinis stresas, kurį sukelia oksalato ir (arba) CaOx kristalai, sukelia inkstų kanalėlių pažeidimą, dėl kurio susidaro kristalų branduolių susidarymas, sukibimas, susilaikymas, agregacija ir galiausiai nidus susidarymas43, 46, 47. Be to, oksidacinis stresas suaktyvina uždegiminę reakciją, kuri savo ruožtu pagreitina litogeninį procesą 4, 47, 48. Taigi fitomedicina, turinti antioksidacinių ir priešuždegiminių savybių, yra perspektyvi priemonė inkstų akmenų susidarymo prevencijai24. Aggarwal ir kt. EG sukeltas nefrolitinės žiurkės modelis parodė, kad bergeninas (bioaktyvus fenolio junginys, išskirtas iš Bergenia ligulata) turi stiprų antipatogeninį poveikį, sumažindamas oksidacinį stresą, pagerindamas mitochondrijų disfunkciją ir sumažindamas kanalėlių pažeidimą bei uždegimą49. Nustatyta, kad rutinas ir kurkuminas (gerai žinomi vietiniai fitocheminiai preparatai, turintys antioksidacinių ir priešuždegiminių savybių) slopina tubulointersticinį pažeidimą ir kristalų nuosėdas EG sukeltose nefrolitinėse žiurkėse50. Taip pat buvo įrodyta, kad vynuogių sėklų polifenoliai slopina intrarenalinius CaOx kristalų nuosėdas EG sukeltose žiurkėse, kurių antioksidacinis aktyvumas yra tikėtinas51. Įrodyta, kad Ajurvedos žolelių preparatas Herbmed sumažina uždegiminius pažeidimus ir kristalų nuosėdas EG sukeltų nefrolitinių žiurkių inkstuose42. Šiame tyrime parodėme, kad HydroZitLa sumažino intrarenalinį oksidacinį stresą, uždegimą ir CaOx kristalų nuosėdas, o tai rodo, kad HydroZitLa veikė antioksidacinius ir priešuždegiminius veiksmus, kad užkirstų kelią CaOx inkstų akmenų susidarymui.

Eksperimentiškai įrodyta, kad kai kurie augalų polifenoliai yra naudingi prailginant gyvenimo trukmę ir atitolinant senėjimą52. Resveratrolis yra geriausiai apibūdintas gyvenimo trukmę prailginantis polifenolinis junginys. Jis pirmiausia veikia per sirtuino aktyvavimą ir oksidacinio streso slopinimą53. Resveratrolio ilgaamžiškumo poveikis, išbandytas naudojant C. elegans modelį, įvairiuose tyrimuose skiriasi, vidutinė gyvenimo trukmė pailgėja nuo 10 iki 65 procentų 54,55. HydroZitLa žymiai pailgino laukinio tipo C. elegans gyvavimo trukmę iki 34 proc., be toksiškumo požymių, o tai rodo, kad HydroZitLa gyvenimo trukmę prailginantis poveikis buvo panašus į resveratrolio. Mitybos apribojimas yra žinomas pagrindinis ilgaamžiškumo mechanizmas56. Ryklės siurbimo greitis tarp HydroZitLa kirminų ir kontrolinių kirminų buvo palyginamas, o tai rodo, kad HydroZitLa gyvenimo trukmė pailgėjo ne dėl mitybos apribojimo.

HydroZitLa reikšmingai sumažino autofluorescencinio amžiaus pigmento lipofuscino kaupimąsi C. elegans, o tai rodo anti-senėjimo poveikį. ROS ir oksidacinis stresas yra gerai žinomi SIPS induktoriai, o oksidacinis stresas pagreitina telomerų sutrumpėjimą57. Neseniai įrodėme, kad oksalatas, COM ir šlapimas iš pacientų, sergančių CaOx akmenimis, dėl oksidacinio streso sukelia priešlaikinį senėjimą, p16 padidėjimą ir telomerų dilimą inkstų kanalėlių ląstelėse 58. Šiame tyrime parodėme, kad HydroZitLa slopina telomerų dilimą, p16 reguliavimą ir priešlaikinis senėjimas HK-2 ląstelėse, veikiamose H2O2, oksalato ir COM. Nors šio anti-senėjimo poveikio molekulinis mechanizmas nebuvo išplėtotas, HydroZitLa buvo pasiūlyta mechaniškai užkirsti kelią priešlaikiniam senėjimui slopinant telomerų trumpėjimą ir sumažinant p16 ekspresijos reguliavimą.

Nors vaistažolių preparatai ir fitomedicina vis labiau populiarėja ir visame pasaulyje pripažįstami, turi būti pateikti moksliniai veiksmingumo ir saugumo įrodymai, todėl jie neturėtų būti pažeisti. Žolelių ir vaistų sąveika sunkiai prognozuojama, nes ji labai skiriasi tarp asmenų, priklausomai nuo kelių veiksnių, tokių kaip citochromo P450 fermento ir vaistų nešiotojų polimorfizmai bei esamos sveikatos būklės59. Nepageidaujamas vaistažolių ir vaistų vartojimo kartu poveikis turi būti atidžiai stebimas, siekiant nustatyti galimą žolelių ir vaistų sąveiką. Žinomiausios žolelės, kurios rimtai sąveikavo su narkotikais, yra česnakai, Baizhi, Danggui, ženšenis, ginkmedis, saldymedis, jonažolė, kava, juodieji ir ilgieji pipirai, Danshen, Huangqin ir pieno usnis59. Mūsų žiniomis, nebuvo pranešta apie rimtą šalutinį poveikį ar vaistų sąveiką, susijusią su bananų stiebu, drugelio mėlynojo žirnio žiedu ir mediena. Tailande banano stiebas vartojamas kaip maisto ingredientas. Geriant per daug (per daug) bananų stiebų sulčių gali atsirasti alergija, pilvo skausmas ir vėmimas, todėl rekomenduojama vartoti saikingai. Mėlynojo žirnio žiedas dažniausiai naudojamas maiste kaip natūralus dažiklis, taip pat naudojamas arbatai ruošti. Retai pranešama apie nepageidaujamą per didelio drugelių mėlynųjų žirnelių arbatos vartojimo poveikį, pavyzdžiui, skrandžio sutrikimus, pykinimą ir alergines reakcijas. Sappano mediena taip pat dažnai naudojama kaip natūralus maisto dažiklis, o bendruomenėse (įskaitant bendruomenes Tailande) ji dažniausiai vartojama kaip sveikas gėrimas. Tačiau žiurkės modelyje įrodyta sapano medienos ekstrakto kontraceptinė funkcija (anti-vaisingumas vyrams), nes jis trukdo spermatogenezei60. Kita vertus, Caesalpinia sappan L. šerdies mediena yra naudojama kaip vaistas nuo ginekologinių simptomų, įskaitant oligomenorėją ir amenorėją61. Todėl ilgalaikio HydroZitLa vartojimo žmonėms saugumas dar turi būti patikrintas klinikinio tyrimo metu.

Šis tyrimas turi tam tikrų apribojimų. Tikslūs aktyvūs junginiai, atsakingi už CaOx akmenų slopinimo funkciją, nebuvo nustatyti ir apibūdinti. Tikslūs HydroZitLa mechanizmai, slopinantys CaOx akmenų susidarymą žiurkėms, nebuvo išsamiai ištirti. Nuo dozės priklausomas antipatogeninis HydroZitLa poveikis netirtas. HydroZitLa dozė, galinti žymiai padidinti citrato kiekį šlapime nefrolitinėms žiurkėms, nebuvo ištirta. Reikėtų toliau tirti HydroZitLa fenolio profilį. HydroZitLa C. elegans ilgaamžiškumo skatinimo mechanizmas nebuvo intensyviai ištirtas. Galiausiai, specifiniai HydroZitLa junginiai, atsakingi už ilgaamžiškumą ir senėjimą stabdantys, nebuvo nustatyti ir apibūdinti.

Apibendrinant galima teigti, kad HydroZitLa buvo sukurtas siekiant vienu metu normalizuoti CaOx akmenų susidarymo rizikos veiksnius tiekiant skystį, citratą ir natūralius antioksidantus. Eksperimentiškai HydroZitLa slopino intrarenalinį CaOx nuosėdą nefrolitinėse žiurkėse. CaOx akmenį slopinantis HydroZitLa veiksmingumas buvo lygiavertis šiuo metu naudojamam kalio citratui (Uralyt-U). HydroZitLa efektyviai susilpnino oksidacinį stresą tiek in vitro, tiek in vivo. Pažymėtina, kad HydroZitLa pailgino C. elegans gyvavimo trukmę ir atitolino senėjimo pradžią. Be to, HydroZitLa žymiai slopino telomerų sutrumpėjimą, p16 ekspresiją ir priešlaikinį senėjimą žmogaus inkstų ląstelėse. Šios ikiklinikinės išvados rodo, kad HydroZitLa buvo kliniškai perspektyvi alternatyva CaOx inkstų akmenligės gydymui kartu su ilgaamžiškumo skatinimu ir senėjimo pranašumais. Norint patvirtinti terapinį HydroZitLa veiksmingumą žmonėms, būtina atlikti klinikinius tyrimus.

medžiagos ir metodai

HydroZitLa gamyba, antioksidantų kiekis ir mitybos faktas. HydroZitLa yra vaistinių augalų gėrimų koncentratas, parduodamas Tailande32. Gėrimas ruošiamas skiedžiant HydroZitLa koncentratą (55 ml sandariame maišelyje) geriamuoju vandeniu (iki galutinio 500 ml tūrio). Jis yra rausvai violetinės spalvos ir skanaus rūgštaus ir saldaus skonio. Pagrindinės HydroZitLa sudedamosios dalys buvo banano stiebo (Musa sapientum L.) vandens ekstraktas ir citrinų rūgštis (16 mekv./maišelis). Kaip natūralūs dažikliai buvo naudojami tradiciniai Tai vaistiniai augalai, įskaitant Clitoria ternatea L. (drugelio mėlynųjų žirnelių gėlių milteliai) ir Caesalpinia sappan L. (Sappan medienos milteliai). Stevija ir sukralozė buvo saldikliai. Produktas buvo patvirtintas Tai FDA 2019 m. balandžio 10 d. gėrimo sandarioje taroje kategorijoje (Maisto serijos Nr. 10–1-02,244–5-0005).

Bendras HydroZitLa antioksidacinis pajėgumas (TAC) buvo 21,87 ± 7,96 mg vitamino C ekvivalento antioksidacinės talpos viename maišelyje (papildomas 8 pav.). Bendras fenolio kiekis (TPC) buvo 19,99 ±0,83 mg galo rūgšties ekvivalento/100 g. Bendras favonoidų kiekis (TFC) buvo 4,59±0,31 mg katechino ekvivalento/100 g. Kokybės kontrolei TAC, TPC ir TFC buvo naudojami kaip kokybės kontrolės parametrai. TAC, TPC ir TFC lygiai bananų stiebo, drugelio mėlynojo žirnio žiedo ir sapano medienos ekstraktuose tarp partijų ir laikymo laiko taškų reikšmingai nesiskyrė. Gaminant HydroZitLa, TAC, TPC, TFC ir brikso vertė (17±2) buvo naudojami kaip kokybės kontrolės parametrai, siekiant išlaikyti nuoseklumą tarp partijų.

Bendra HydroZitLa energija maišelyje (porcijoje) buvo 25 kcal. Baltymų, riebalų ir cholesterolio kiekis nenustatytas. Iš viso angliavandenių buvo 6 g, cukraus buvo<1 g, and sodium was 10 mg. The potassium content was 240 mg/100 g. Soluble and insoluble dietary fibers were 0.74 and 0.43 g/100 g, respectively. Te pH of  HydroZitLa was 3.4.

Toksiškumo įvertinimas.Escherichia coli, Clostridium spp., Salmonella spp. ir Staphylococcus aureus buvimą HydroZitLa išanalizavo Tailando Visuomenės sveikatos ministerijos Maisto kokybės ir saugos biuras. HydroZitLa metalinis profilis buvo ištirtas ICP-OES.

Ūmus HydroZitLa toksiškumas in vivo pelėms buvo išbandytas Tailando Visuomenės sveikatos ministerijos Vaistinių augalų tyrimų instituto. Pelėms buvo duodama per burną HydroZitLa arba vandens (kontrolė) po 20 ml/kg (n=10 vienai grupei). Pelės buvo stebimos 14 dienų prieš skrodimą. Buvo ištirti stambūs vidaus organų pažeidimai ir lyginami HydroZitLa ir kontrolinės grupės.

CaOx agregacijos tyrimas.Buvo paruošti sėkliniai COM kristalai62 ir atskiesti iki 50 mg/mL 0.05 M Tris/0.15 NaCl, pH 6,5. Į šviežiai paruoštą darbinę sėklų COM suspensiją (2 ml) buvo pridėta HydroZitLa arba BSA arba distiliuoto vandens (tuščias) (200 µL). Sumaišius, absorbcija prie 620 nm buvo išmatuota kaip pradinė linija (AT0). Po 10 minučių inkubacijos 37 laipsnių temperatūroje vėl buvo išmatuota absorbcija prie 620 nm (AT10). Sumavimo koeficientas (AC) buvo apskaičiuotas taip: AC=((AT0− AT10)/10)×1000. Didesnė kintamosios srovės vertė rodo didesnę COM agregaciją.

Ląstelių linijos, citotoksiškumo ir tarpląstelinio ROS nustatymas.HK{{0}} ląstelės (ATCC, VA, JAV) buvo palaikomos DMEM, papildytu 10 procentų galvijų vaisiaus serumo ir 1 procento Pen-Strep, esant žemesnei nei 37 laipsnių temperatūrai, 5 procentams CO2 ir 95 procentų drėgmei. HydroZitLa citotoksiškumas HK-2 ląstelėse buvo įvertintas MTT tyrimu63. HK-2 ląstelės buvo pasėtos (200 ląstelių/šulinėlyje), auginamos per naktį 96-šulinėlių plokštelėje ir apdorotos įvairiomis HydroZitLa koncentracijomis (0 kaip kontrolinė, 1,25 proc., 2,5 proc., 5 proc., 10). procentų, 20 procentų, 40 procentų, 50 procentų, 80 procentų ir 100 procentų t/t) 24 valandas. Po plovimo buvo pridėtas MTT tirpalas, inkubuojamas 1 valandą, o po to išmestas. Formazano kristalams ištirpinti buvo pridėta dimetilsulfoksido. Išmatuota absorbcija ties 570 nm. Ląstelių gyvybingumas (procentais) buvo apskaičiuotas naudojant neapdorotas ląsteles kaip kontrolę (100 procentų gyvybingumas).

Viduląstelinės ROS gamybos slopinimas naudojant HydroZitLa buvo nustatytas dichlordihidrofluoresceino diacetato (DCFH-DA) tyrimu 64,65 šulinėlių plokštelėje. HK-2 ląstelės buvo sujungtos su 0,1 M DCFH-DA tirpalu ir inkubuojamos 37 laipsnių temperatūroje 30 min. Po plovimo ląstelės buvo paveiktos H2O2 arba COM (su ir be 1 0 % v/v HydroZitLa). Fluorescencinis intensyvumas (sužadinamas ties 485 nm ir spinduliuojamas 535 nm) buvo matuojamas pradžioje (T0) ir 60 min (T60). Savavališkas fluorescencinis vienetas (AFU), rodantis ROS susidarymo lygį, buvo apskaičiuotas taip: AFU= T60/T0.

Baltymų karbonilinimo matavimas.Baltymų karbonilo kiekis, kaip baltymų oksidacijos rodiklis, buvo matuojamas pagal mūsų ankstesnes ataskaitas 64–66. Apdorotos HK-2 ląstelės (100-mm lėkštelėje) buvo lizuojamos radioimunoprecipitacijos tyrimo buferiu, kuriame buvo proteazės inhibitorių kokteilis. Bendra baltymų koncentracija buvo matuojama Bradfordo tyrimu. Ląstelių lizatas buvo inkubuojamas su 10 mM dinitrofenilhidrazino (DNPH) tirpalu arba 2 N HCl 1 valandą tamsoje. Buvo pridėta šaltos 20 procentų trichloracto rūgšties ir 10 minučių inkubuojama ant ledo. Granulės buvo surenkamos centrifuguojant, plaunamos etilo acetatu: etanoliu (1:1) ir vėl ištirpinamos 6 M guanidino HCl. Išmatuota absorbcija (A) ties 375 nm. Baltymų karbonilo kiekis, normalizuotas pagal bendrą baltymų koncentraciją, buvo apskaičiuotas taip: ((ADNPH – AHCl)×45,45)/baltymų koncentracija.

Žiurkės CaOx nefrolitiazės modelis.CaOx nefrolitiazei sukelti žiurkėms buvo naudojamas EG (1 proc. tūrio), papildytas geriamuoju vandeniu (laisva prieiga ad libitum, 35 dienas). Wistar žiurkių patinai (6–8 sav., 180–300 g) buvo suskirstyti į keturias grupes: EG (n=6), EG ir HydroZitLa (n=6), EG ir Uralyt-U. (n=6) ir normalios kontrolės (n=2) grupės. Visos žiurkės buvo laikomos nerūdijančio plieno narvuose 25 laipsnių kampu pagal 12:12 h šviesos ir tamsos ciklą. Dvi kontrolinės žiurkės buvo tikslingai naudojamos tik CaOx nuosėdoms žiurkių inkstuose palyginti ir imunohistochemijai, o ne šlapimo chemijai. HydroZitLa ir Uralyt-U buvo maitinami du kartus per dieną (ryte ir vakare), kai bendra citrato dozė buvo 2 mekv per dieną. Ši suvartota citrato dozė buvo lygi 60,8 mEq citrato žmonėms, apskaičiuotai remiantis dozės perskaičiavimu, kurį pasiūlė Reagan-Shaw ir kt.67. 24-h šlapimo mėginiai buvo paimti intervencijos pabaigoje (35 dieną), naudojant timolį kaip konservantą. Žiurkės buvo anestezuotos izofluranu ir nužudytos. Abu inkstai buvo pašalinti, supjaustyti ir fiksuoti 10 procentų neutraliame formalino buferyje histologiniam tyrimui.

Visos žiurkės buvo įsigytos iš Nacionalinio laboratorinių gyvūnų centro, Salaya Campus Mahidol universiteto, Nakhonpathom, Tailandas. Eksperimentinės procedūros buvo atliktos pagal Tailando nacionalinės tyrimų tarybos rekomendacijas dėl eksperimentinių gyvūnų ir patvirtintos Chulalongkorno universiteto Medicinos fakulteto Institucinio gyvūnų priežiūros ir naudojimo komiteto (Nr. 022/2560). Mūsų tyrimas buvo atliktas laikantis ARRIVE gairių.

CaOx nusėdimas inkstų skyriuose poliarizuotos mikroskopijos būdu.Formalinu fiksuotos parafinu įterptos žiurkės inkstų sekcijos buvo paruoštos automatizuotu audinių procesoriumi. H&E dažymas buvo atliktas pagal standartinę procedūrą. Dvigubai lūžtančios CaOx kristalų nuosėdos H&E dažytose sekcijose buvo vizualizuotos naudojant poliarizuotos šviesos mikroskopą (OLYMPUS BX50, Japonija).

Yasue dažymas CaOx histochemijai.Inkstų audinio pjūviai buvo deparafinuoti, rehidratuoti, panardinti į 5 procentų acto rūgštį 30 min., kad būtų pašalintas kalcio fosfatas ir kalcio karbonatas, ir plauti distiliuotu vandeniu 68. Pjūviai inkubuojami su 5 procentais AgNO3 12 min., plaunami ir inkubuojami su sočiuoju rubino rūgštimi. rūgštis 10 procentų amonio 1 min. Dažytos sekcijos buvo išplautos 50 procentų etanoliu, išplautos distiliuotu vandeniu, dehidratuotos, nuvalytos ir sumontuotos. Juodos CaOx nuosėdos buvo vizualizuotos šviesos mikroskopu69.

Imunohistocheminis dažymas.Po deparafinavimo ir rehidratacijos antigenas buvo paimtas virinant natrio citrato buferyje, naudojant mikrobangų krosnelę. Endogeninis H2O2 buvo inaktyvuotas inkubuojant su 0,3 proc. H2O2 30 min. Nespecifinis prisijungimas buvo užblokuotas 20 minučių inkubuojant su normaliu arklio serumu. Tada sekcijos buvo inkubuojamos su 1:1, 000 4-HNE (ab46545, Abcam, Kembridžas, JK) arba suskaldytu kaspazės-3 (5A1E, Cell Signaling Technology, MA, JAV) pirminiu antikūnu 4 laipsnių temperatūroje per naktį. po to inkubuojama su antriniu antikūnu 37 laipsnių temperatūroje 30 min. Po plovimo sekcijos buvo inkubuojamos su ABC reagentu (VECTASTAIN® ABC rinkinys) 30 minučių, mirkomos 1 procento diaminobenzidino dažymo reagentu 5 minutes ir 5 minutes prieš dažytos hematoksilinu. Galiausiai sekcijos buvo dehidratuotos, išvalytos, sumontuotos ir vizualizuotos šviesos mikroskopu.

Citrato, oksalato, šlapimo rūgšties ir iCOCI matavimai šlapime. Citrato kiekis šlapime buvo nustatytas didelio efektyvumo skysčių chromatografijos metodu (Varian Medical Systems, CA, JAV) naudojant ROAorganic Acid H plus kolonėlę (300 × 7,8 mm) (Phenomenex, CA, JAV) ir išplautas. 5 mM H2SO4 0,5 mL/min srauto greičiu. Šlapimo oksalato ir šlapimo rūgšties kiekis buvo matuojamas kapiliarine elektroforeze (Beckman Coulter, CA, JAV), atskirta 25 laipsnių kampu, esant –20 kV įtampai. Šlapimo iCOCI testas buvo atliktas pagal mūsų ankstesnę ataskaitą 38.

C. elegans įtempimas ir priežiūra.C. elegans laukinio tipo padermė Bristol N2 ir jos laboratorinis maisto šaltinis E. coli OP50 buvo gauti iš Caenorhabditis genetikos centro, Minesotos universiteto, JAV. Jie buvo auginami ir laikomi nematodų auginimo terpės agaro plokštelėse su E. coli OP50 veja 20 laipsnių 70 laipsnių temperatūroje. Visi eksperimentai buvo atlikti su amžiaus sinchronizuotomis jaunomis suaugusiomis kirmėlėmis.

Gyvenimo trukmės tyrimas.Gyvenimo trukmės analizė buvo atlikta skystoje terpėje71. Trumpai tariant, 10 sinchronizuotų jaunų suaugusių nematodų buvo perkelti į 24-šulinėlių plokštelę su M9 buferiu kartu su E. coli OP50 ir 5-fuoro-2′-deoksiuridinu, kad būtų išvengta palikuonių susidarymo. Įvairių koncentracijų HydroZitLa buvo pridėta naudojant distiliuotą vandenį kaip nešiklio kontrolę. Gyvi nematodai buvo skaičiuojami kas 24 valandas. Nematodai buvo laikomi negyvais, kai nereagavo į švelnų pastūmimą naudojant platinos kilpą.

Ryklės siurbimo tyrimas.Jaunų suaugusių nematodų (~10) ryklės siurbimas (gebėjimo įsisavinti maistą rodiklis) buvo išmatuotas, lyginant kontrolinį ir HydroZitLa papildą, stebint ryklės susitraukimą 30 s kas 24 valandas stereomikroskopu (SMZ{). {3}}, Motic, Kinija) 0 dienomis (prieš papildymą), 5, 10 ir 1572 m.

Lipofuscino tyrimas.Buvo stebimas lipofuscino kaupimasis laukinio tipo nematoduose po įvairių koncentracijų HydroZitLa (20 proc., 30 proc., 40 proc. v/v) 5 dienas. E. coli OP{5}}šeriami kirminai buvo naudojami kaip kontrolė. Po intervencijos kirminai buvo kelis kartus plaunami M9 buferiu ir dedami ant stiklinio stiklelio į natrio azido lašą. Fluorescencinis vaizdas buvo atliktas naudojant ZEISS LSM 700 konfokalinį mikroskopą. Vaizdai buvo toliau analizuojami naudojant Image J programinę įrangą, o fluorescencijos intensyvumas buvo pateiktas kaip savavališki vienetai (AU)72.

Santykinio telomero ilgio matavimas. Santykinis telomero ilgis (RTL) buvo matuojamas HK{0}} ląstelėse, apdorotose H2O2 (25 µM), natrio oksalatu (NaOx, 900 µM) ir COM (25 µg/cm2 ) su arba be HydroZitLa (10 proc. v. /v). RTL buvo nustatytas realaus laiko kiekybine polimerazės grandinine reakcija (qPCR)73. Jis apskaičiuojamas pagal telomerinių pasikartojimų kopijų skaičiaus santykį su vienos kopijos geno (36B4 geno) kopijų skaičiumi, kuris yra proporcingas vidutiniam telomero ilgiui. Naudoti tokie pradmenys: telomeras (pirmyn) 5′-CGGTTTGTTTGGGTTTGGGTTTGGGTTTGGGTTTGGGTT-3′, telomeras (atvirkštinis) 5′-GGC TTGCCTTACCCTTACCTACCTACCTA}′4BAG (forward,18CCTACCCT) CAAGTGGGAAGGTGT AATCC{{23 }}′ ir 36B4 (atvirkštinis) 5′-CCCATTCTATCATCAACGGGTACAA-3′. PGR buvo amplifikuotas 95 laipsnių 10 minučių, po to 40 ciklų 95 laipsnių 15 s ir 54 laipsnių 1 min.

Dvigubas SA-gal ir p16 dažymas.HK{{0}} ląstelės, užaugintos ant dengiamųjų stiklelių, buvo apdorotos H2O2, NaOx ir COM su 10 % v/v HydroZitLa ir be jos 72 valandas, kad sukeltų SIPS. Po apdorojimo ląstelės buvo fiksuotos ir dažytos šviežiai paruoštu X-gal tirpalu (Vivantis, Malaizija) 12–16 val., plaunamos, 3 min. pralaidžios 0,1 proc. Triton X-100 (Amresco, TX, JAV). , ir užblokuotas nespecifiniam surišimui su 1% normaliu arklio serumu (Gibco, MA, JAV) 37 laipsnių temperatūroje 1 val. Tada ląstelės buvo inkubuojamos su 1:10,000 p16 pirminiu antikūnu (ab108349, Abcam) 4 laipsnių temperatūroje per naktį, po to 1:10,000 Alexa Fluor® 488-konjuguotu antriniu antikūnu ( Ląstelių signalizacijos technologija) 37 laipsnių temperatūroje 30 min. Beicuotas dengiantis stiklas buvo pritvirtintas naudojant Fluoroshield tvirtinimo terpę su 4′, 6-diamidino-2-fenilindoliu (Abcam). SA- -gal-teigiamos senstančios ląstelės (mėlyna) ir p16-ekspresuojančios ląstelės (žalia) buvo vizualizuotos ir vaizduojamos naudojant EVOS FL Auto 2 vaizdo gavimo sistemą (Thermo Fisher Scientific, MA, JAV).

Statistinė analizė.Visi duomenys buvo pateikti kaip vidutinis ± standartinis nuokrypis arba mediana (tarpkvartilis diapazonas), atitinkamai. Dviejų mėginių t testas arba Mann-Whitney testas buvo atliktas siekiant patikrinti skirtumą tarp dviejų grupių. Trijų ar daugiau grupių skirtumui patikrinti buvo naudojama vienpusė dispersijos analizė arba Kruskal-Wallis testas, po kurio buvo atliktas daugkartinis palyginimo testas. GraphPad Prism Software 9 versija (GraphPad Software Inc., CA, USA) buvo naudojama skaičiavimams ir grafikams. P<0.05 was considered significant.

Nuorodos

1. Michell, AR Urolitiazė – istoriniai, lyginamieji ir patofiziologiniai aspektai: apžvalga. JR Soc. Med. 82, 669–672 (1989).

2. Shah, J. & Whitfield, HN Urolitiazė per amžius. BJU Int. 89, 801–810 (2002).

3. Boonla, C. ir kt. Monocitų chemoattraktanto baltymo-1 ir interleukino-6 pasiuntinio RNR ekspresija inkstuose, kuriuose yra akmenų. BJU Int. 101, 1170–1177 (2008).

4. Boonla, C. ir kt. Fibrozė ir epitelio-mezenchiminio perėjimo įrodymai pacientų, sergančių stagaragių akmenlige, inkstuose. BJU Int. 108, 1336–1345 (2011).

5. Chuang, TF ir kt. Lėtinės inkstų ligos rizika pacientams, sergantiems inkstų akmenlige - šalies kohortos tyrimas. BMC Nephrol. 21, 292 (2020).

6. Dhondup, T. ir kt. ESRD rizika ir mirtingumas nuo inkstų ir šlapimo pūslės akmenų formuotojų. Esu. J. Inkstas Dis. 72, 790–797 (2018).

7. Kum, F. ir kt. Ar akmenys vis dar žudo? Mirties nuo akmenligės analizė 1999–2013 m. Anglijoje ir Velse. BJU Int. 118, 140–144 (2016).

8. Geraghty, RM, Cook, P., Walker, V. & Somani, BK Ekonominės inkstų akmenligės naštos įvertinimas Jungtinėje Karalystėje: retrospektyvus kohortinis tyrimas su vidutiniu stebėjimu 19 metų. BJU Int. 125, 586–594 (2020).

9. C. Türk (pirmininkas), AN, A. Petrik, C. Seitz, A. Skolarikos (vicepirmininkas), K. Tomas & Guidelines Associates: NF Davis, JFD, R. Lombardo, N. Grivas, Y. Ruhajelis. Europos urologų asociacijos (EAU) rekomendacijos dėl šlapimo pūslės akmenligės.

10. Jendle-Bengten, C. & Tiselius, HG Ilgalaikis akmens formuotojų, apdorotų maža natrio kalio citrato doze, stebėjimas. Scand. J. Urolis. Nefrolis. 34, 36–41 (2000).

11. Schwille, PO, Herrmann, U., Wolf, C., Berger, I. & Meister, R. Citratas ir pasikartojanti idiopatinė kalcio urolitiazė. Išilginis bandomasis tyrimas dėl geriamojo kalio citrato, vartojamo trumpalaikio, vidutinio ir ilgalaikio gydymo pacientams, sergantiems akmenimis, metaboliniam poveikiui. Urol. Res. 20, 145–155 (1992).

12. Tracy, CR & Pearle, MS Akmenų ligos medicininio valdymo atnaujinimas. Curr. Nuomonė. Urol. 19, 200–204 (2009).

13. Mechlin, C., Kalorin, C., Asplin, J. & White, M. Splenda(R) pagerina geriamojo kalio citrato papildų toleranciją akmenų susidarymo prevencijai: atsitiktinių imčių dvigubai aklo tyrimo rezultatai. J. Endourol. 25, 1541–1545 (2011).

14. Boonla, C. Oksidacinis stresas sergant urolitiaze, reaktyviosios deguonies rūšys (ROS) gyvose ląstelėse, Cristiana Filip ir Elena Albu, IntechOpen.

15. Boonla, C., Wunsuwan, R., Tungsanga, K. & Tosukhowong, P. Šlapimo 8-hidroksideoksiguanozino kiekis yra padidėjęs pacientams, sergantiems inkstų akmenlige. Urol. Res. 35, 185–191 (2007).

16. Khan, SR Hiperoksalurijos sukeltas oksidacinis stresas ir antioksidantai inkstų apsaugai. Urol. Res. 33, 349–357 (2005).

17. Khan, SR Reaktyviosios deguonies rūšys kaip kalcio oksalato inkstų akmenų susidarymo molekuliniai moduliatoriai: klinikinių ir eksperimentinių tyrimų įrodymai. J. Urolis. 189, 803–811 (2013).

18. Kittikowit, W. ir kt. Padidėjęs oksidacinis DNR pažeidimas, pastebėtas inkstų biopsijose, esančiuose šalia akmenų pacientams, sergantiems nefrolitiaze. Urolithasis 42, 387–394 (2014).

19. Yasui, T. ir kt. Patofiziologinis urolitiazės gydymas. Tarpt. J. Urolis. 24, 32–38 (2017).

20. Huang, HS, Ma, MC ir Chen, J. Dieta, kurioje mažai vitamino E, padidina kalcio oksalato kristalų susidarymą dėl padidėjusio oksidacinio streso žiurkės hiperoksaluriniame inkste. Esu. J. Physiol. Inkstų. Physiol. 296, F34-45 (2009).

21. Huang, HS, Chen, J., Chen, CF & Ma, MC Vitaminas E susilpnina kristalų susidarymą žiurkių inkstuose: inkstų kanalėlių ląstelių mirties ir kristalizacijos inhibitorių vaidmuo. Kidney Int. 70, 699–710 (2006).

22. Tamilselvan, S. & Menon, M. Vitamino E terapija užkerta kelią hiperoksalurijos sukeltam kalcio oksalato kristalų nusėdimui inkstuose, nes pagerina inkstų audinio antioksidacinę būklę. BJU Int. 96, 117–126 (2005).

23. Tamilselvan, S. & Selvam, R. Vitamino E ir manitolio poveikis inkstų kalcio oksalato susilaikymui eksperimentinėje nefrolitiazėje. Indijos J. Biochem. Biofizė. 34, 319–323 (1997).

24. Butterweck, V. & Khan, SR Žoliniai vaistai gydant urolitiazę: alternatyva ar papildoma? Planta Med. 75, 1095–1103 (2009).

25. Kasote, DM, Jagtap, SD, Tapa, D., Khyade, MS & Russell, WR Indijoje ir Kinijoje naudojami vaistažolių preparatai nuo šlapimo pūslės akmenligės: apžvalga. J. Ethnopharmacol. 203, 55–68 (2017).

26. Abu Zarin, M., Tan, JS, Murugan, P. & Ahmad, R. Galimo anti-urolitiazės aktyvumo iš įvairių Musa pseudo-stiebo ekstraktų, slopinančių kalcio oksalato kristalizaciją, tyrimas. BMC Complement Med. Ter. 20, 317 (2020).

27. Kailash, P. & Varalakshmi, P. Bananų stiebo sulčių poveikis biocheminiams pokyčiams normalių ir hiperoksalurinių žiurkių kepenyse. Indijos J. Exp. Biol. 30, 440–442 (1992).

28. Prasad, KV, Bharathi, K. & Srinivasan, KK Musa (paradisiacal Linn. kultivaras) – "Puttubale" stiebo sulčių antilitinio aktyvumo įvertinimas žiurkėms albinosams. Indijos J. Physiol. Pharmacol. 37, 337–341 (1993).

29. Panigrahi, PN, Dey, S., Sahoo, M. & Dan, A. Musa paradisiaca pseudostem antiurolitiatinis ir antioksidacinis veiksmingumas žiurkėms etilenglikolio sukeltai nefrolitiazei. Indijos J. Pharmacol. 49, 77–83 (2017).

30. Poonguzhali, PK & Chegu, H. Te įtaka banano stiebo ekstrakto šlapimo rizikos veiksniams dėl akmenų susidarymo normaliose ir hiperoksalurinėse žiurkėse. Br. J. Urolis. 74, 23–25 (1994).

31. Pillai, RG Musa pseudostem šerdis gydant šlapimo akmenis. Anc Sci gyvenimas. 15, 2–6 (1995).

32. Lordumrongkiat, N., Chotechuang, N., Madared, N., Jindatip, D. & Boonla, C. Bendras fenolių kiekis, bendras flavonoidų kiekis ir bendras antioksidacinis pajėgumas vaistinių augalų kilmės gėrimuose: HydroZitLa. Chula Med. J. 64, 381–388 (2020).

33. Sakhaee, K. Akmenligės farmakologija. Adv. Lėtinė inkstų liga. 16, 30–38 (2009).

34. Baumann, JM ir Afolter, B. Paradoksalus šlapimo makromolekulių vaidmuo kalcio oksalato agregacijoje: dar vienas prašymas padidinti diurezę esant akmenų metafilaksijai. Urolithasis 44, 311–317 (2016).

35. Reddy, AJ ir kt. Musa sapientum stiebo ekstrakto prieštraukulinis ir antioksidacinis poveikis ūminiams ir lėtiniams eksperimentiniams epilepsijos modeliams. Farmakogn. Res. 10, 49–54 (2018).

36. Jaafar, NF, Ramli, ME & Mohd Salleh, R. Optimali Clitorea ternatea fower ekstrahavimo sąlyga dėl antioksidacinio aktyvumo, bendro fenolio, bendro flavonoidų ir bendro antocianino kiekio. Trop. Life Sci. Res. 31, 1–17 (2020).

37. Nirmal, NP, Rajput, MS, Prasad, RG & Ahmad, M. Brazilin iš Caesalpinia sappan heartwood ir jo farmakologinė veikla: apžvalga. Azijos Pac. J. Tropas. Med. 8, 421–430 (2015).

38. More-Krong, P. ir kt. Klinikinis su indolu reaguojančio kalcio oksalato kristalizacijos indekso (iCOCI) testo patvirtinimas kalcio oksalato urolitiazei diagnozuoti. Sci. Rep. 10, 8334 (2020).

39. Yasui, T. ir kt. Citrato poveikis inkstų akmenų susidarymui ir osteopontino ekspresijai žiurkių urolitiazės modelyje. Urol. Res. 29, 50–56 (2001).

40. Ghaeni, FA, Amin, B., Hariri, AT, Meybodi, NT ir Hosseinzadeh, H. Antilitinis krocino poveikis žiurkių etilenglikolio sukeltai litiazei. Urolitiazė 42, 549–558 (2014).

41. Holmes, RP & Assimos, DG glioksilato sintezė ir jos moduliavimas bei įtaka oksalatų sintezei. J. Urolis. 160, 1617–1624 (1998).

42. Patankar, S., Fanthome, B. & Bhalerao, SS Herbed plus veiksmingumas urolitinėse žiurkėse: eksperimentinis tyrimas. J. Ajurveda Integr. Med. 11, 250–255 (2020).

43. Chaiyarit, S. & Tongboonkerd, V. Mitochondrijų disfunkcija ir inkstų akmenligė. Priekinė fiziol. 11, 566506 (2020).

44. Holoch, PA & Tracy, CR Antioksidantai ir savarankiškai pranešta inkstų akmenų istorija: Nacionalinis sveikatos ir mitybos tyrimo tyrimas. J. Endourol. 25, 1903–1908 (2011).

45. Khan, SR Ar oksidacinis stresas, ryšys tarp inkstų akmenligės ir nutukimo, hipertenzijos, diabeto, lėtinės inkstų ligos, metabolinio sindromo? Urol. Res. 40, 95–112 (2012).

46. ​​Hirose, M. ir kt. Inkstų kanalėlių epitelio ląstelių pažeidimas ir oksidacinis stresas sukelia kalcio oksalato kristalų susidarymą pelių inkstuose. Tarpt. J. Urolis. 17, 83–92 (2010).

47. Khan, SR Reaktyviosios deguonies rūšys, uždegimas ir kalcio oksalato inkstų akmenligė. Vertimas Androl. Urol. 3, 256–276 (2014).

48. Boonla, C. ir kt. Uždegiminių ir fibrozinių baltymų proteominis sąjungininkas, nustatytas kaip pagrindinės baltymų sudedamosios dalys pacientų, sergančių inkstų akmenlige, šlapime ir akmenų matricoje. Clin. Chim. Acta 429, 81–89 (2014).

49. Aggarwal, D., Gautam, D., Sharma, M. & Singla, SK Bergeninas sumažina inkstų pažeidimą, pakeisdamas mitochondrijų disfunkciją etilenglikolio sukeltos hiperoksalurinės žiurkės modelyje. Euras. J. Pharmacol. 791, 611–621 (2016).

50. Ghodasara, J., Pawar, A., Deshmukh, C. & Kuchekar, B. Rutino ir kurkumino slopinamasis poveikis eksperimentiškai sukeltai kalcio oksalato šlapimo akmenligei žiurkėms. Farmakogn. Res. 2, 388–392 (2010).

51. Grases, F. ir kt. Vynuogių sėklų polifenolių poveikis inkstų litiazei. Oksidas. Med. Ląstelė. Longevas. 2015, 813737 (2015).

52. Cherniack, EP Galima augalų polifenolių įtaka senėjimo procesui. Forsch Komplementmed. 17, 181–187 (2010).

53. Wood, JG ir kt. Sirtuino aktyvatoriai imituoja kalorijų apribojimą ir lėtina metazoanų senėjimą. Nature 430, 686–689 (2004).

54. Bonkowski, MS & Sinclair, DA. Senėjimo lėtėjimas pagal planą: NAD( plius ) ir sirtuiną aktyvinančių junginių augimas. Nat. kun. Mol. Ląstelė. Biol. 17, 679–690 (2016).

55. Bhullar, KS & Hubbard, BP Gyvenimo trukmė ir sveikatos pratęsimas naudojant resveratrolį. Biochim. Biofizė. Acta. 1852, 1209–1218 (2015).

56. von Frieling, J. & Roeder, T. Veiksniai, turintys įtakos mitybos apribojimo pavertimui ilgesniu gyvenimu. IUBMB Life 72, 814–824 (2020).

57. von Zglinicki, T. Oksidacinis stresas sutrumpina telomerus. Trends Biochem Sci. 27, 339–344 (2002).

58. Chuenwisad, K. ir kt. Priešlaikinis senėjimas ir telomerų sutrumpėjimas, kurį sukelia oksalato, kalcio oksalato monohidrato ir šlapimo iš pacientų, sergančių kalcio oksalato nefrolitiaze, oksidacinis stresas. Priekyje. Immunol. 12, 696486 (2021).

59. Hu, Z. ir kt. Žolelių ir vaistų sąveika: literatūros apžvalga. Drugs 65, 1239–1282 (2005).

60. Susanti, S. & Imannura, P. Secang Wood (Ceasalpinia Sappan L.) ekstrakto poveikis žiurkių patinų spermatozoidų morfologijai ir grįžtamajam procesui. Vyksta 2-osiose jungtinėse tarptautinėse konferencijose. ISBN: 978-602-5842-03-0 (2018).

61. Kim, BS ir kt. Caesalpinia sappan sukelia apoptotinę ląstelių mirtį negimdinio endometriumo 12Z ląstelėse, slopindama piruvato dehidrogenazės kinazės 1 ekspresiją. Exp. Ter. Med. 21, 357 (2021).

62. Boonla, C., Youngjermchan, P., Pumpaisanchai, S., Tungsanga, K. & Tosukhowong, P. Lipidų, išskirtų iš inkstų ir inkstų akmenligės, litogeninis aktyvumas ir klinikinė reikšmė. Urol. Res. 39, 9–19 (2011).

63. Kloypan, C., Srisa-art, M., Mutirangura, A. & Boonla, C. LINE-1 hipometilinimas, kurį sukelia reaktyvios deguonies rūšys, yra tarpininkaujama per S-adenozilmetionino išeikvojimą. Ląstelių Biochem. Funkcija. 33, 375–385 (2015).

64. Whongsiri, P., Phoyen, S. & Boonla, C. Oksidacinis stresas urotelio kancerogenezėje: baltymų karbonilinimo ir reaktyviųjų deguonies rūšių intracelulinės gamybos matavimai. Metodai Mol. Biol. 1655, 109–117 (2018).

65. Whongsiri, P. ir kt. Oksidacinis stresas ir LINE-1 reaktyvacija sergant šlapimo pūslės vėžiu yra epigenetiškai susiję dėl aktyvaus chromatino susidarymo. Laisvas Radikas. Biol. Med. 134, 419–428 (2019).

66. Whongsiri, P. ir kt. LINE-1 ORF1 baltymas yra reguliuojamas reaktyviųjų deguonies rūšių ir yra susijęs su šlapimo pūslės urotelinės karcinomos progresavimu. Vėžio genomas. Proteom. 15, 143–151 (2018).

67. Reagan-Shaw, S., Nihal, M. & Ahmad, N. Dozės vertimas iš gyvūnų į žmones dar kartą peržiūrėtas. FASEB J. 22, 659–661 (2008).

68. Yasue, T. Histocheminis kalcio oksalato identifikavimas. Acta Histochem. Cytochem. 2, 83–95 (1969).

69. Evan, AP ir kt. Randallo plokštelė pacientams, sergantiems inkstų akmenlige, prasideda plonų Henlės kilpų bazinėse membranose. J. Clin. Investuoti. 111, 607–616 (2003).

70. Prasanth, MI, Santoshram, GS, Bhaskar, JP ir Balamurugan, K. Ultravioletiniai spinduliai sukelia modelio nematodo Caenorhabditis elegans fotosenėjimą priklausomai nuo DAF{2}}. Amžius (Dordr) 38, 27 (2016).

71. Brimson, JM, Prasanth, MI, Plaingam, W. & Tencomnao, T. Bacopa monnieri (L.) wettst. Ekstraktas apsaugo nuo glutamato toksiškumo ir padidina Caenorhabditis elegans ilgaamžiškumą. J. Tradit. Sudėtingas. Med. 10, 460–470 (2020).

72. Prasanth, MI, Brimson, JM, Chuchawankul, S., Sukprasansap, M. & Tencomnao, T. Cleistocalyx nervosum var. panacėjos vaisių ekstraktai naudojant Caenorhabditis elegans modelį. Oksidas. Med. Ląstelė. Longevas. 2019 m., 7024785 (2019 m.).

73. Cawthon, RM Telomerų matavimas kiekybine PGR. Nucleic Acids Res. 30, e47 (2002).

Padėkos

Tyrimą finansiškai rėmė Mokslo ir technologijų ministerijos Research Gap fondas, Nacionalinė mokslo ir technologijų plėtros agentūra (NSTDA) ir Chulalongkorn universitetas (GB-rgf{1}} į CB), taip pat Tailando mokslo tyrimų ir tyrimų agentūra. Inovacijų pramonės skyrius (RDG6150088 – CB) ir Chulalongkorno universiteto Medicinos fakultetas (atitinkantis fondas). NL gavo Chulalongkorn universiteto fondo (Ratchadaphiseksomphot Endowment Fund) 90-ąsias metines. Autoriai dėkoja už paramą moksliniams tyrimams ir inovacijoms, kurias teikia Chulalongkorn universiteto technologijų centras ir Tailando mokslo tyrimų ir inovacijų fondas (TSRI) (CU_FRB640001_01_2). Dėkojame Miss Natcha Madared už puikią pagalbą. Būkite dėkingi Chulalongkorn universiteto Medicinos fakulteto gyvūnų skyriaus darbuotojams. Dėkojame asistentui prof. dr. Sitthichai Ukritchon ir prof. dr. Manathipui Osiri už paramą poliarizuotos mikroskopijos naudojimui.

Autoriaus indėlis

NL: atliko eksperimentus su ląstelėmis ir žiurkėmis ir rinko duomenis. NC: surinko duomenis ir padėjo suvokti tyrimo idėją bei duomenų analizę. MP: Sugalvojo ir atliko C. elegans eksperimentą ir atliko C. elegans duomenų analizę. DJ: padėjo atlikti imunohistocheminius eksperimentus ir vaizduoti. CM: Padėjo skaidant audinius. KC: atliko telomerų trumpinimo ir senėjimo eksperimentus. AL: pavyko pasiekti patalpą su gyvūnais eksperimentuoti su žiurkėmis. TT: padėjo sugalvoti ir suprojektuoti C. elegans eksperimentą. CB: Sukūrė ir suplanavo tyrimą, atliko statistinę analizę ir parašė rankraštį. Visi autoriai peržiūrėjo rankraštį.

Konkuruojantys interesai

CB, NC ir NL yra HydroZitLa išradėjai. Chulalongkorno universitetas ir išradėjai turi HydroZitLa intelektinę nuosavybę. Nė vienas iš kitų autorių neturi interesų konflikto, kurį reikėtų deklaruoti apie šį darbą.

Papildoma informacija

Papildoma informacijaInternetinėje versijoje yra papildomos medžiagos, kurią galima rasti svetainėje.

Susirašinėjimasir prašymai dėl medžiagos turi būti adresuojami CB

Perspausdinimų ir leidimų informacijayra prieinama svetainėje.

Leidėjo pastabaSpringer Nature išlieka neutralus dėl jurisdikcijos pretenzijų paskelbtuose žemėlapiuose ir institucinių ryšių.

【Daugiau informacijos:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:8613632399501】