Į vandenilio peroksidą reaguojančių EST, dalyvaujančių feniletanoido glikozido biosintezėje Cistanche salsa ląstelių kultūroje, identifikavimas

Kontaktai: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 El. paštas:audrey.hu@wecistanche.com

J. CHEN ir kt

Abstraktus
Vandenilio peroksidas yra veiksmingas abiotinis stimuliatorius, galintis sukelti antrinių metabolitų biosintezę augaluose. Mes parodome, kad druskai atsparaus vaistinio augalo ląstelių suspensijos kultūrojeCistanchesalsa, bioaktyvių komponentų gamybafeniletanoidasglikozidai(PeG) padidėjo po gydymo H2O2. Nustatyti genus, susijusius su PeG(feniletanoidasglikozidai)H2O2 paveiktą biosintezę, mes sukūrėme slopinamąją subtraktyviąją H2O2 reaguojančių genų hibridizacijos biblioteką, naudodamiCistanchesalsaląstelių liniją ir nustatė 105 išreikštos sekos žymes (EST) ir 85 genus. EST bibliotekos funkcinės anotacijos ir genų ontologijos analizės parodė genus, susijusius su įvairiais streso atsakais, antrinių metabolitų biosinteze ir transkripcijos reguliavimu. Tarp jų mes nustatėme du genus, susijusius su PeG(feniletanoidasglikozidai)biosintezės kelias (4-kumarato kofermento A ligazė ir cinamato 4-hidroksilazė) ir du WRKY tipo transkripcijos faktoriai. Pasirinktų genų ekspresija po apdorojimo H2O2 buvo analizuojama RT-qPCR. Anksti padidėjusi PeG transkripcija(feniletanoidasglikozidai)biosintezės kelio genai po gydymo atskleidė, kad H2O2 sukėlė PeG(feniletanoidasglikozidai)biosintezė, reguliuojant pagrindinius genus.
Papildomi raktiniai žodžiai: cinamatas-4-hidroksilazė, 4-kumarato kofermento A ligazė, slopinimas subtraktyvioji hibridizacija.Cistanchesalsa. feniletanoidasglikozidai.

Įvadas

Cistanchesalsayra daugiametis augalas parazitas ant Haloxylos ammodendrun šaknies, ir jis auga dykumoje Vakarų Kinijoje. Amžiais,Cistancherūšis buvo naudojama kaip tradicinė žolelių medicina (Wang ir kt., 2012). Bioaktyvūs komponentai yrafeniletanoidasglikozidai(PeG), kurie turi puikų poveikį reaktyviųjų deguonies rūšių (ROS) klirensui, radiacinei apsaugai, imuniteto stiprinimui ir senėjimo stabdymui (Nan ir kt., 2013). PeG(feniletanoidasglikozidai)biosintezė inCistancheyra inicijuojamas iš fenilalanino (1 pav. Suppl.), o susintetinta kavos rūgštis toliau glikozilinama, kad susidarytų įvairūs PeG(feniletanoidasglikozidai)(Wang ir kt. 2012). Trys pagrindiniai PeG(feniletanoidasglikozidai), echinakozidas, akteozidas ir 2'-acetillakteozidas yra laikomi aktyviausiais komponentaisCistanche(Kobayashi ir kt., 1984). Norėdami pagerinti jų turinįCistancheLąstelių kultūroje buvo išbandyti įvairūs sukėlėjai, įskaitant chitozaną, putresciną, Ag plus ir osmosinį stresą (Ouyang ir kt., 2005a,b, Cheng ir kt., 2005, 2006, Liu ir kt., 2007, Liu ir Cheng, 2008). Tačiau genai, susiję su PeG(feniletanoidasglikozidai)biosintezė inCistanche, daugiausia fenilalanino metabolizmo kelio genai, buvo retai identifikuoti. Neseniai Cistanche deserticola buvo nustatytas tik genas, koduojantis fenilalanino amoniako-liazę (PAL) (Hu et al. 2011). Kiti genai, koduojantys, pavyzdžiui, cinamato-4-hidroksilazę (C4H), galinčią katalizuoti cinamato pavertimą kumaro rūgštimi, ir 4-kumarato kofermento A ligazę (4CL), esminį lignino ir flavanoidų geną. biosintezės, nebuvo rastaCistanche.
Mes panaudojome ląstelių kultūrąCistanchesalsastudijuoti PeG(feniletanoidasglikozidai)biosintezė ir susijusių genų ekspresija. Taip pat ištyrėme veiksmingo H2O2 sukėlėjo poveikį PeG(feniletanoidasglikozidai)biosintezė. Be to, rasti ankstyvus reaguojančius genus, susijusius su PeG(feniletanoidasglikozidai)biosintezės metu atlikome slopinimo subtraktyviąją hibridizaciją (SSH), kad sukurtume H2O2- reaguojančių genų cDNR biblioteką.

1 pav. Santykinė genų ekspresija, nustatyta RT-qPCR po apdorojimo H2O2. CsWRKY1 - WRKY transkripcijos faktorius (Contig07), CsC4H1 - cinamatas 4-hidroksilazė (Contig09), Cs4CL1 - 4-kumaratas: ligazė (Contig03), CsHSP1 - šilumos šoko baltymas 70 kDa (Contig 01) ir CsSOD1 - superoksido dismutazė (Contig16). Ląstelės buvo apdorotos 80 ug dm-3 H2O2 skystoje terpėje 2 valandas, o ekspresijos buvo palygintos su kontroliniu, apdorotu vandeniu. Priemonė plius - trijų biologinių pakartojimų SD; * - P < 0,05,="" **="" -="" p=""><>

medžiagos ir metodai

CS2001 ląstelių linija buvo sukurta iš žiedlapiųCistanchesalsa(CA Mey.) Beck surinko Neimenggu provincijoje ir subkultūrino. Kultūros metodas buvo panašus į anksčiau paskelbtą protokolą (Liu ir kt., 2007). Paprastai subkultūrai buvo naudojama kieta Murashige ir Skoog (1962; MS) terpė, o PeG - skysta terpė.(feniletanoidasglikozidai)biosintezė (tai buvo modifikuota MS terpė, papildyta 30 g dm-3 gliukozės ir 20 mg dm-3 indol-3-acto rūgštimi). Gydant H2O2, 5.0 ± 0,2 g ląstelių greito augimo laikotarpiu, paprastai praėjus 20–30 dienų po to, kai jos buvo subkultūrintos kietoje terpėje, buvo pasėjamos į 50 cm3 skystą terpę 250 cm3 Erlenmejerio kolboje. ir auginami tamsoje su skirtinga H2O2 koncentracija arba be jos. PeG(feniletanoidasglikozidai)kiekis po 10 d. indukcijos H2O2 buvo analizuojamas pagal anksčiau paskelbtą metodą (Liu et al. 2007), pagrįstą atvirkštinės fazės efektyvia skysčių chromatografija su metanolio gradiento eliuavimu.

Ląstelės, praėjus 2 valandoms po apdorojimo H2O2, buvo surinktos iš terpės filtravimo popieriumi, naudojant Büchner piltuvą, o po to užšaldomos skystame azote ir sumalamos iki miltelių. Kas 2 g ląstelių miltelių buvo lizuojami naudojant 1 cm3 2-merkaptoetanolio, 1 cm3 200 g dm{{10}} sarkozilo, ir 8 cm3 GTC buferio (5 M guanidinio izotiocianatas, 62,5 mM Tris-HCl, pH 8,0, 6,25 mM EDTA, pH 8,0, 5 mM tiokarbamido ir 10 mM ditiotreitolio). Tada ląstelės buvo inkubuojamos ant ledo 15 min., po to buvo pridėta 1/3 tūrio 8,5 M CH3COOK, pH 6,0, ir ląstelės buvo inkubuojamos ant ledo 15 min., o po to centrifuguojamos 15 000 g 15 min. . Supernatantas buvo pridėtas prie vienodo tūrio izopropanolio, kad nusodintų bendrą RNR. Visa RNR toliau buvo išgryninta RNeasy mini rinkiniu (Qiagen, Hilden, JAV) pagal gamintojo instrukcijas. Messenger RNR buvo išskirta iš visos RNR naudojant Oligotex mRNA midi rinkinį (Qiagen).

feniletanoidasglikozidaiinCistancheSalsa

SSH biblioteka buvo sukurta iš kontrolinių ir 30 procentų H2O2- sukeltų ląstelių mėginių praėjus 2 valandoms po iškvietimo, naudojant PGR pasirinktą cDNR atimties rinkinį (Clontech, Mountain View, JAV). Bibliotekos statybai produktai buvo išgryninti atskirai naudojant gelio gryninimo rinkinį (Qiagen) ir klonuoti į pGEM vektorių, naudojant TA klonavimo rinkinį (Tiangenas, Pekinas, Kinija). Plazmidės iš nepriklausomų klonų buvo išskirtos ir sekvenuotos naudojant T7 pradmenį. Visos išreikštos sekos žymos (EST) sekos iš bibliotekos (pašalinus vektorių sekas) buvo naudojamos kontiginiam surinkimui su CAP3 (//doua.prabi.fr/software/cap3). EST buvo sugrupuoti į kontiginius ir pavienius; jie buvo naudojami homologijos paieškai naudojant BLASTx programą NCBI (//blast.ncbi. nlm.nih.gov). Tada sekos buvo komentuojamos, analizuojamos ir klasifikuojamos pagal genų ontologijos (GO) terminus naudojant Blast2GO (//www. blast2go.com).
Realaus laiko kiekybinė polimerazės grandininė reakcija (RT-qPCR) buvo atlikta pagal Bustin ir kt. (2009). cDNR mėginiai buvo susintetinti naudojant PrimeScript RT reagentų rinkinį (Takara, Dalian, Kinija) iš 0, 5 ug bendros RNR. RT-qPCR buvo atlikta naudojant SYBR Premix Ex Taq II ir ROX plus rinkinius (Takara) ABI 7300 realaus laiko PGR sistemoje (Applied Biosystems, Foster City, JAV) su trimis techniniais pakartojimais. Gruntai buvo sukurti naudojant internetinę Primer3 programinę įrangą pagal Takara pateiktą instrukciją; Šiame tyrime naudojami pradmenys yra išvardyti 1 lentelėje Suppl. Genų ekspresijos buvo normalizuotos iki 18S RNR, kurios ekspresija buvo stabili visuose mėginiuose.

Rezultatai analizuoti naudojant R versiją 3.1.1, skirtumų reikšmingumas patikrintas Stjudento t-testu.

Rezultatai

Vandenilio peroksidas sukėlė visų trijų pagrindinių PeG biosintezę(feniletanoidasglikozidai)inCistanchesalsasuspensijos ląstelės (1 lentelė), bet neturi jokio akivaizdaus poveikio ląstelių augimui (S2 pav.). Echinakozido kiekis padidėjo jau po gydymo 10 ug dm-3 H2O2 (P < 0.05),="" didesnis="" padidėjimas="" užfiksuotas="" po="" 20="" ug="" dm="" -3="" gydymas="" h2o2="" (p="">< 0,01),="" o="" didžiausias="" padidėjimas="" buvo="" po="" 40,="" 80="" ir="" 160="" ug="" dm-3="" h2o2="" gydymo.="" panašūs="" rezultatai="" rodomi="" ir="" akteozidui,="" tačiau="" jo="" kiekis="" didžiausias="" buvo="" po="" 80="" ug="" dm-3="" h2o2="" apdorojimo.="" 2'-acetilakteozido="" biosintezė="" buvo="" mažiau="" jautri="" gydymui="" h2o2;="" reikšmingas="" jo="" kiekio="" padidėjimas="" (p="">< 0,05)="" buvo,="" kai="" h2o2="" koncentracija="" viršijo="" 40="" ug="" dm-3.="" po="" 80="" ug="" dm-3="" h2o2="" apdorojimo="" visų="" trijų="" pagrindinių="" peg="">(feniletanoidasglikozidai)žymiai padidėjo (P < 0.01),="" palyginti="" su="" kontroline.="" todėl="" ši="" koncentracija="" buvo="" naudojama="" tolesniuose="">
Norėdami sukurti biblioteką, praturtintą ankstyvais reaguojančiais genais, kuriuos reguliuoja H2O2, naudojome cDNR išCistanchesalsasuspensijos ląstelės 2 valandas apdorotos 80 ug dm-3 H2O2. Vieno praėjimo sekos nustatymas 129 rekombinantiniai klonai SSH bibliotekoje davė 105 švarius EST po vektoriaus sekos pašalinimo. Šiuos aiškius EST surinkimui naudojo CAP3 ir buvo sugeneruota 18 kontigų ir 67 vienetai (2 lentelė). Taigi šioje bibliotekoje buvo išskirti 85 genai. Vidutinis švarių 105 EST ilgis buvo 527 bp, o tai yra pakankama sekų panašumu pagrįstai funkcinei klasifikacijai.

feniletanoidasglikozidaiinCistancheSalsa

Visi 85 genai, gauti bibliotekoje, buvo gauti naudojant BLASTx pagal GenBank neperteklinių baltymų duomenų bazę, siekiant nustatyti sekos panašumą (E vertė mažesnė arba lygi 0.001). Dvidešimt vienas genas duomenų bazėje nerodė jokių įvykių, jie gali būti specifiniaiCistanchesalsa. BLASThits rezultatai buvo importuoti į Blast2GO programinę įrangą, kad būtų galima atlikti tolesnę GO ir KEGG kelio praturtinimo analizę. Iš 64 genų, turinčių BLAST atitikmenis, 50 buvo anotuoti pagal homologinių genų iš kitų rūšių aprašymą. Anotuoti genai buvo pavadinti pagal BLAST hitų aprašymą. GO analizė (3 pav. Suppl.) rodo, kad tarp šių 50 genų buvo 14 genų, susijusių su atsaku į dirgiklius, ir daugiau nei 30 genų, susijusių su medžiagų apykaitos procesais (1 ir 2 lentelės). Kaip tikėtasi, tarp šių genų buvo išskirti du PeG biosintezės kelio geno homologai: 4-kumarato kofermento A ligazė (pavadinta Cs4CL1: Contig03) ir cinamato 4-hidroksilazė (pavadinta CsC4H1: Contig14). Be to, buvo atlikta RT-qPCR, siekiant patvirtinti sukeltas genų ekspresijas iš bibliotekos po gydymo H2O2.

Siekiant patvirtinti, kad esminiai genai, nustatyti iš SSH bibliotekos, reagavo į gydymą H2O2, dviejų PeG ekspresijos.(feniletanoidasglikozidai)Su biosintezės keliu susiję genai (Cs4CL1, CsC4H1), du ROS indukuoti genai (CsSOD1: Contig 16, CsHSP1: CISTH099) ir vienas WRKY šeimos transkripcijos faktorių panašus genas (CsWRKY1: Contig 07) buvo išmatuoti po RT-qPCR. su H2O2 (1 pav.). CsC4H1, Cs4CL1, CsSOD1 ir CsWRKY1 išraiškos buvo atitinkamai reguliuojamos daugiau nei 15-, 3-, 45- ir 4- kartus, atitinkamai praėjus 2 valandoms po H2O2. gydymas. Po gydymo H2O2 CsHSP1 ekspresija pasikeitė tik 1, 8 karto.
CsWRKY1, CsC4H1 ir Cs4CL1 raiškos laiko eiga po apdorojimo H2O2 buvo toliau analizuojama RT-qPCR (2 pav.). CsC4H1 ir Cs4CL1 išraiškos labai padidėjo (atitinkamai daugiau nei 80- ir 50- kartus) po 16- val. gydymo, o po 32 valandų sumažėjo. CsWRKY1 ekspresija buvo padidinta daugiau nei 20- karto po 4 valandų, o po to sumažėjo nuo 8 valandų (2 pav.).

2 pav. Santykinė CsWRKY1 (A), CsC4H1 (B) ir Cs4CL1 (C) išraiška skirtingu laiku po apdorojimo 80 ug dm-3 H2O2. Išraiškos buvo normalizuotos į kontrolę; (apdorotas vandeniu). Priemonė plius - trijų biologinių pakartojimų SD; * - P < 0,05,="" **="" -="" p=""><>

Diskusija

Vandenilio peroksidas yra gerai žinomas augalų stimuliatorius, turintis įvairų poveikį augalams. Kaip ir ROS, jis gali sukelti ROS šalinimo sistemą, sudarytą iš superoksido dismutazės, katalazės, peroksidazių ir kt., ir tarnauja kaip druskos, osmoso ir dehidratacijos signalas.

pabrėžia (Wi ir kt. 2006, Kar 2011, Furlan ir kt. 2013, Sathiyaraj ir kt. 2014). Buvo pasiūlyta, kad H2O2 susidarymą augaluose lydi indukuota antrinių metabolitų biosintezė.Cistanchesalsaląstelių kultūros. Kaip ir tikėtasi, mūsų rezultatai atskleidžia, kad PeG(feniletanoidasglikozidai)biosintezėCistanche salsaląstelių kultūra buvo sukelta po apdorojimo H2O2 (1 lentelė). Trijų pagrindinių PeG turinys(feniletanoidasglikozidai)padidėjo po gydymo H2O2, o tai rodo pagrindinį jo vaidmenį PeG biosintezėje. SSH bibliotekoje praturtinti genai taip pat parodė jo poveikį PeG(feniletanoidasglikozidai)biosintezės indukcijaCistanche salsa.

Daugelis žinomų H2O2-reaguojančių genų, tokių kaip askorbato peroksidazė (CISTH069, Karyotou ir Donaldson, 2005), h-chinono oksidoreduktazė (CISTH125, Bello ir kt., 2001), CsSOD1, CsHSP1 (Baruah1 ir kt.), ir atsparumo ligoms atsako genai (Contig10, Nanda ir kt., 2010) buvo praturtinti SSH biblioteka (3 lentelė, 2 lentelės priedas). Kai kurie iš šių tipiškų ROS reaguojančių genų, kurių ekspresija buvo sukelta po gydymo H2O2, buvo dar patvirtinti RT-qPCR (1 ir 2 pav.), o tai rodo, kad čia buvo sukurta kvalifikuota SSH biblioteka. Šioje bibliotekoje taip pat buvo rasti du PeG biosintezės kelio genai, CsC4H1 ir Cs4CL1, ir šios dvi genų ekspresijos buvo sukeltos gydant H2O2 priklausomai nuo laiko (2 pav.). Tai rodo, kad gydymas H2O2 sukėlė PeG(feniletanoidasglikozidai)biosintezė genetiniame lygmenyje, reguliuojant PAL kelio genus. Tačiau PAL ir kiti pasroviui priklausantys PeGs biosintezės genai (Wang ir kt., 2012) SSH bibliotekoje nebuvo identifikuoti; taip gali būti todėl, kad biblioteka nebuvo pakankamai sutvarkyta. Ryšys tarp CsC4H1 ir Cs4CL1 sukeltų ekspresijų ir padidėjusios PeGs biosintezės po gydymo H2O2 turėtų būti išaiškintas atliekant tolesnę analizę.

Be PAL kelio genų, kuriuos sukelia gydymas H2O2, SSH bibliotekoje buvo rasti du WRKY šeimos transkripcijos faktoriai (CsWRKY1, CsWRKY2) (3 lentelės ir 2 lentelės priedai), o CsWRKY1 sukelta ekspresija buvo patvirtinta RT-qPCR. . Jo ekspresija buvo jautri gydymui H2O2 anksčiau nei dviejų PAL kelio genų, Cs4CL1 ir CsC4H1, ekspresija (2 pav.). Ankstesniuose tyrimuose buvo pastebėta kai kurių WRKY transkripcijos faktorių ir PAL kelio genų ekspresija ryžiuose (Gupta ir kt., 2012). Be to, PAL geno ekspresija yra padidinta OsWRKY03 ekspresijos mutante (Liu ir kt., 2005). Pirmiau minėti du WRKY šeimos transkripcijos faktoriai taip pat gali būti įtraukti į PeG(feniletanoidasglikozidai)biosintezė inCistanchesalsa. Įdomu tai, kad su dehidratacija susiję EST (CISTH067, CISTH064) buvo rasti SSH bibliotekoje, o tai gali reikšti, kad gydymas H2O2 buvo susijęs su į dehidrataciją reaguojančių genų ekspresija.Cistanchesalsakaip pastebėta kituose augaluose (Schmidt et al. 2013, Zhou et al. 2013). SSH bibliotekoje buvo identifikuotas vienas su giberelino (GA) signalizavimu susijęs genas, panašus į giberelino receptorių gid1b (CISTH092), o tai reiškia GA signalizacijos ir gydymo H2O2 ryšį.Cistanchesalsa, apie kurį pranešta ir miežių atveju (Bahin ir kt., 2011). Tačiau norint patvirtinti, ar šie genai yra susiję su PeG, reikia atlikti daugiau tyrimų(feniletanoidasglikozidai)biosintezė. Išskyrus aukščiau paminėtus genus, čia sukurta SSH biblioteka taip pat pateikia genus su BLAST hitais arba be jų. Tai pagerina mūsų supratimą apie H2O2 poveikį C. salsa ir pirmiausia pateikia informaciją apie jos genus, dalyvaujančius PeG biosintezėje.

Apibendrinant, įvertinome H2O2 poveikį PeG(feniletanoidasglikozidai)indukcija įCistanchesalsaląstelių kultūros. SSH biblioteka buvo sukurta po apdorojimo H2O2, o pasirinktų genų ekspresija buvo patvirtinta RT-qPCR. Buvo nustatyti du su PeG biosintezės keliu susiję genai ir kiti H2O{5}}reaguojantys genai. Šie atradimai praplės mūsų supratimą apie H2O2-sukeliamus PeG(feniletanoidasglikozidai)biosintezė inCistanchesalsaiki molekulinio lygio, suteikiant informaciją apie genų manipuliavimąCistanchesalsaląstelių kultūros, siekiant pagerinti PeG(feniletanoidasglikozidai)gamyba.

Iš: „Cistanche salsa ląstelių kultūroje į vandenilio peroksidą reaguojančių EST, dalyvaujančių feniletanoido glikozidų biosintezėje, identifikavimas“J. CHEN ir kt.

--- BIOLOGIA PLANTARUM 59 (4): 695-700, 2015 J. CHEN ir kt. DOI: 10,1007/s 10535-015-0541-m

Nuorodos

Bahin, E., Bailly, C., Sotta, B., Kranner, I., Corbineau, F., Leymarie, J.: Reaktyviųjų deguonies rūšių ir hormonų signalizacijos kelių susikirtimas reguliuoja grūdų ramybės būseną miežiuose. - Augalų ląstelių aplinka. 34: 980-993, 2011 m.
Baruah, K., Norouzitallab, P., Liayati, L., Sorgeloos, P., Bossie, r P.: Reaktyviosios deguonies rūšys, sukurtos šilumos šoko baltymo (Hsp) sukeliančio produkto, prisideda prie Hsp70 gamybos ir Hsp{1} }tarpininkaujantis apsauginis imunitetas Artemia franciscana nuo patogeninių vibracijų. - Dev. Komp. Immunol. 46: 470-479, 2014 m.
Bello, RI, Gomez-Diaz, C., Navarro, F., Alcain, FJ, Villalba, JM: NAD(P)H: chinono oksidoreduktazės 1 ekspresija HeLa ląstelėse  vandenilio peroksido vaidmuo ir augimo fazė. - J. biol. Chem. 276: 44379-44384, 2001 m.
Bustin, SA, Vandesompele, J., Pfaffl, MW: qPCR ir RT-qPCR standartizavimas. - Genetas. inž. Biotechnol. 29 naujienos: 40-43, 2009 m.
Cheng, XY, Wei, T., Guo, B., N, I W., Liu, CZ:Cistanchedeserticola ląstelių suspensijos kultūros:feniletanoidasglikozidaibiosintezė ir antioksidacinis aktyvumas. - Proceso Biochem. 40: 3119-3124, 2005 m.
Cheng, XY, Zhou, HY, Cui, X., Ni, W., Liu, CZ tobulinimasfeniletanoidasglikozidaibiosintezė inCistanchedeserticola ląstelių suspensijos kultūros chitozano elicatoriumi. - J. Biotechnol. 121: 253-260, 2006 m.
Furlan, A., Llanes, A., Luna, V., Castro, S.: Abscisic rūgštis tarpininkauja vandenilio peroksido gamybai žemės riešutuose, kuriuos sukelia vandens stresas. - Biol. Augalas. 57: 555-558, 2013 m.
Gupta, SK, Ra, i AK, Kanwar, SS, Chand, D., Singh, NK, Sharma, TR: vienas funkcinis atsparumo sprogimui genas Pi54 aktyvuoja sudėtingą gynybos mechanizmą ryžiuose. - J. exp. Botas. 63: 757-772, 2012 m.
Hu, GS, Jia, JM, Hur, YJ, Chung, YS, Lee, JH, Yun, DJ, Chung, WS, Yi, GH, Kim, TH, Kim, DH: fenilalanino amoniako-liazės geno molekulinis apibūdinimas išCistanchedeserticola. - Mol. Biol. 38 rep.: 3741-3750, 2011 m.
Kar, RK: Augalų reakcija į vandens stresą: reaktyviųjų deguonies rūšių vaidmuo. – Augalų signalų elgsena 6: 1741-1745, 2011 m.
Karyotou, K., Donaldson, RP: Askorbato peroksidazė, vandenilio peroksido šaliklis glioksisominėse membranose. - lankas h. Biochem. Biofizė. 434: 248-257, 2005 m.
Kobayashi, H., Karasawa, H., Miyase, T., Fukushima, S.: Sudedamųjų dalių tyrimaicistancheyra žolė. 4. 2 naujų fenilpropanoidinių glikozidų, cistanozido-C ir cistanozido-D, išskyrimas ir struktūros. - Chem. Pharm. Bull. 32: 3880-3885, 1984.

Liu, CZ, Cheng, XY: tobulinimasfeniletanoidasglikozidaibiosintezė ląstelių kultūroseCistanchedeserticola dėl osmosinio streso. – Plant Cell Rep. 27: 357-362, 2008.
Liu, JY, Guo, ZG, Zeng, ZL: patobulintas kaupimasfeniletanoidasglikozidaipirmtakus maitinant suspensijos kultūraiCistanchesalsa. - Biochemija. inž. J. 33: 88-93, 2007 m.
Liu, XQ, Bai, XQ, Qian, Q., Wang, XJ, Chen, MS, Chu, CC: OsWRKY03, ryžių transkripcijos aktyvatorius, veikiantis gynybos signalizacijos kelyje prieš OsNPR1. - Cell Res. 15: 593-603, 2005 m.
Murashige, T., Skoog, F.: peržiūrėta terpė greitam augimui ir biologiniams tyrimams su tabako audinių kultūromis. - Fiziol. Augalas. 15: 473-497, 1962 m.
Nan, ZD, Zeng, KW, Shi, SP, Zhao, MB, Jiang, Y., Tu, PF:Feniletanoidasglikozidaisu priešuždegiminiu poveikiu iš stiebųCistanchedeserticola, auginama Tarimo dykumoje. - Fitoterapija 89: 167-174, 2013 m.
Nanda, AK, Andrio, E., Marino, D., Pauly, N., Dunand, C.: Reaktyvios deguonies rūšys augalų ir mikroorganizmų ankstyvosios sąveikos metu. - J. Integr. Augalų Biol. 52: 195-204, 2010 m.
Ouyang, J., Wang, XD, Zhao, B., Wang, YC: patobulintafeniletanoidas glikozidaipirmtakais maitinant ląstelių kultūrąCistanchedeserticola. - Proceso Biochem. 40: 3480-3484, 2005a.
Ouyang, J., Wang, XD, Zhao, B., Wang, YC: patobulinta gamybafeniletanoidasglikozidaipateikėCistanchedeserticola ląstelės, kultivuotos vidinės kilpos oro transportavimo bioreaktoriuje su sijojimo stovu. - Fermentų mikrobiolis. Tech. 36: 982-988, 2005b.
Salcedo-Morales, G., Jimenez-Aparicio, AR, Cruz-Sosa, F., Trejo-Tapia, G.: Anatominis ir histocheminis in vitro haustoriumo apibūdinimas iš Castilleja tenuiflora šaknų. - Biol. Augalas. 58: 164-168, 2014 m.
Sathiyaraj, G., Srinivasan, S., Kim, YJ, Lee, OR, Parvin, S., Balusamy, SR, Khorolragchaa, A., Yang, DC: vandenilio peroksido aklimatizacija padidina druskos toleranciją aktyvinant su gynyba susijusius baltymus Panax ženšenis CA Meyer. - Mol. Biol. 41 rep.: 3761-3771, 2014 m.
Schmidt, R., Mieulet, D., Hubberten, HM, Obata, T., Hoefgen, R., Fernie, AR, Fisahn, J., Segundo, BS, Guiderdoni, E., Schippers, JHM, Mueller-Roeber, B.: DRUSKOS RESPONSIVE ERF1 reguliuoja nuo reaktyviųjų deguonies rūšių priklausomą signalizaciją pradinio atsako į druskos stresą metu
ryžiuose. – Augalų ląstelė 25: 2115-2131, 2013 m.
Wang, T., Zhang, XY, Xie, WY:Cistanchedeserticola YC Ma, "Dykumos ženšenis": apžvalga. - Amer. J. smakras. Med. 40: 1123-1141, 2012 m.
Wi, SG, Chung, BY, Kim, JH, Lee, KS, Kim, JS Vandenilio peroksido nusėdimo modelis ryžių lapų apvalkaluose esant druskos stresui. - Biol. Augalas. 50: 469-472, 2006 m.
Zhou, XF, Jin, YH, Yoo, CY, Lin, XL, Kim, WY, Yun, DJ, Bressan, RA, Hasegawa, PM, Jin, JB: CYCLIN H1 reguliuoja sausros streso reakciją ir mėlynos šviesos sukeltą dantų atsivėrimą slopina reaktyviųjų deguonies rūšių kaupimąsi Arabidopsis. - Augalų fiziol. 162: 1030-1041, 2013 m.