Raudonojo ir baltojo vyno ekstraktų vaidmens kovojant su odos senėjimu nustatymas: antioksidantų poveikis fibroblastų elgesiui

Prašau susisiektioscar.xiao@wecistanche.comDaugiau informacijos

Santrauka:Odos fibroblastai yra pagrindiniai daugelio baltymų, įskaitant kolageną, sekrecijos veikėjai, išsaugantys odos funkciją. Laisvieji radikalai yra susiję su odos senėjimu ir įvairių ląstelių komponentų pažeidimais. Reaktyviųjų deguonies rūšių (ROS) kiekio ir natūralių antioksidantų fermentų disbalansas neigiamai veikia odos homeostazę. Natūralūs junginiai pastaruoju metu pasirodė kaip potenciali priemonė nuo senėjimo audinių regeneracijoje. Šiame darbe įvertinome baltųjų ir raudonųjų vynų antioksidacinį aktyvumą, atsižvelgdami į galimą jų, kaip žaliavų, naudojimą gaminant kosmetikos gaminius su senėjimą stabdančiomis savybėmis. Ištyrėme metodą, kuris leistų pašalinti vynų alkoholinę frakciją ir nustatėme jų sudėtį LC-MS analize. Tada ištyrėme galimą raudonųjų ir baltųjų vynų citotoksinį poveikį fibroblastams naudojant 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazolį (MTT). ) tyrimas ir jų antioksidacinis aktyvumas atliekant katalazės aktyvumo testą streso sąlygomis. Galiausiai, mes įvertinome jų senėjimą stabdantį potencialą naudodami -galaktozidazės kolorimetrinį tyrimą. Mūsų rezultatai parodė, kad vyno ekstraktai pasižymi nepaprastu antioksidaciniu ir senėjimą stabdančiu aktyvumu, ypač ląstelėse, kurios buvo paveiktos po ryškaus streso. Šios savybės gali reikšti, kad jos gali būti naudojamos kaip kosmetikos gaminiai odai regeneruoti.

Raktiniai žodžiai:ląstelių proliferacija; antioksidantai; ląstelių senėjimas; bioaktyvios molekulės; odos senėjimas; oksidacinis stresas

Norėdami sužinoti daugiau, spustelėkite čia

1. Įvadas

Oda yra plačiausias kūno organas, atliekantis daugybę funkcijų, apsaugančių apatinius audinius nuo cheminių ir mechaninių pažeidimų, UV spindulių, laisvųjų radikalų ir infekcijų. Jis dalyvauja termoreguliacijoje, atlieka endokrinines ir biochemines funkcijas ir yra ksenobiotikų (vaistų, nuodų, kosmetikos) panaudojimo ir (arba) įsisavinimo organas[1-3]. Dermoje elastino skaidulos ir kolageno skaidulos užtikrina tinkamą odos elastingumą. Amžius, hormonai ir žalingas ultravioletinių spindulių poveikis gali sumažinti dermos storį ir elastingumą, dėl to gali atsirasti raukšlių ir prarasti odos tonusą[4,5]. Jau žinoma, kad odos senėjimas pažeidžia odos barjerinę funkciją, todėl oda tampa sausa ir jautri aplinkos agresoriams [6]. Reaktyviosios deguonies rūšys (ROS), atsirandančios dėl elektronų praradimo aerobinio metabolizmo metu arba po aplinkos veiksnių poveikio, yra nestabilios rūšys, galinčios pažeisti įvairias biomolekules [7, 8]. Siekiant užkirsti kelią jų poveikiui, natūrali antioksidacinė organizmo apsauga gali išlaikyti ROS fiziologiškai priimtino lygio. Tiesą sakant, atrodo, kad ROS, jei yra kontroliuojamas kiekis, taip pat turi fiziologinį poveikį, veikdamas kaip signalinės molekulės tarp ląstelių [9, 10].cistanche ČingischanasŠis disbalansas tarp ROS ir antioksidantų fermentų, tokių kaip katalazė, glutationo reduktazė ir superoksido dismutazė, pažeidžia baltymus, lipidus ir DNR [11], todėl neigiamai veikia keratinocitų ir fibroblastų signalizacijos kelius ląstelėse ir keičia MMP ekspresiją. (matricos metaloproteinazės), prokolagenas ir priešuždegiminiai citokinai [12,13]. Fenoliniai junginiai, tokie kaip resveratrolis, hidroksitirozolis ir epigalokatechin-3-galatas, esantys daržovėse, vaisiuose ir dariniuose, yra pagrindinės apsaugos nuo grybelių, bakterijų ir virusų molekulės [14]. Teigiamas polifenolių, plačiai esančių vyne, poveikis pastaraisiais metais sulaukė didelio dėmesio farmacijos ir kosmetikos pramonėje[15,16]. Polifenolio vartojimas gali turėti apsauginį poveikį sergant ūminėmis ir lėtinėmis ligomis, taip pat reguliuojant medžiagų apykaitą ir ląstelių proliferaciją [17]. Vienos veiksmingos fenolio junginių ekstrahavimo ir apibūdinimo procedūros sukūrimas turi daug apribojimų, daugiausia dėl fenolinių junginių struktūrinės įvairovės ir jų sąveikos su kitais ląstelių komponentais[18,19]. Šiuolaikiniai žaliosios ekstrahavimo metodai ir didelės skiriamosios gebos masės spektrometrija (LC-ESI-LTQ-Orbitrap-MS) yra perspektyvūs šių bioaktyvių molekulių valdymo metodai [20]. Todėl ištyrėme pigų, lankstų, tvirtą ir efektyvų metodą, kuris leistų pašalinti alkoholinę vyno frakciją, kurią galima naudoti kaip kosmetikos gaminius. Daugybė su vyno vartojimu susijusių padarinių sveikatai buvo žinomi jau seniai, o ypač dėl didelio antioksidacinių polifenolinių junginių kiekio jis naudingas gydant ligas, sukeliančias didelį oksidacinį stresą[21,22]Vietinis antioksidantų naudojimas. gali palaikyti odos antioksidacinę sistemą nuo oksidacinio streso ir apsaugoti ją nuo ilgalaikio fotosenėjimo [23,24]. Šiame darbe siekėme įvertinti raudonojo ir baltojo vyno ekstraktų antioksidacinį poveikį ląstelėse, kurias veikia stiprus stresinis įvykis, siekiant užkirsti kelią ląstelių senėjimui, o tai rodo galimą jų įtraukimą į įvairias vietines senėjimą stabdančias formules. savybių, skirtas brandžiai ir pažeistai odai gydyti.

Cistanche gali kovoti su senėjimu

2. Medžiagos ir metodai

Šiame tyrime naudojami raudonieji ir baltieji vynai buvo „Buio“ su kontroliuojamos kilmės pavadinimu, gaunami iš Carignano del Sulcis vynuogių, gaminami Cantina Mesa, Sardegna ir Giunco, gaminami toje pačioje Cantina Mesa, gauti iš Vermentino vynuogių.

Eksperimentams in vitro buvo naudojami in-line žmogaus odos fibroblastai (HFF1) (ATCC, Manassas, VA, JAV) 5 ištraukoje. Ląstelės buvo auginamos naudojant bazinę auginimo terpę, sudarytą iš Dulbecco modifikuotos Eagle terpės (DMEM) (Life Technologies Grand Island, NY, JAV), papildytos 10 procentų galvijų vaisiaus serumu (FBS) (Life Technologies). , Grand Island, NY, JAV), 200 mM L-glutamino (Euroclone, Milano, Italija) ir 200 V/ml penicilino – 0,1 mg/ml streptomicino (Euroclone, Milano, Italija). Ląstelės buvo auginamos termostatiniuose inkubatoriuose 37 laipsnių temperatūroje ir 5 proc. (v/v) CO2. 2.1. Vyno ekstraktų ruošimas: Purškiamasis džiovintuvas

Pradiniuose tyrimo etapuose ištyrėme metodą, kaip pašalinti vyno alkoholinę frakciją, toksišką ląstelėms. Džiovinimo procedūrai buvo naudojamas mini purškiamas džiovintuvas B{{0}} (BUCHIItalia srl, Cornaredo, Italija). Iš pradžių 100 ml vyno alikvotinė dalis buvo išdžiovinta, esant atitinkamai 25 ir 70 laipsnių įleidimo ir išleidimo temperatūrai (azotui); debitas buvo nustatytas 15 proc. Vėliau į 100 ml vyno dalį buvo pridėta 0,2 g ksantano dervos ir minimalus vandens tūris, reikalingas dervai ištirpinti. Įleidimo ir išleidimo temperatūra (azotas) buvo atitinkamai 135 ir 70 laipsnių; pašarų srautas buvo nustatytas 12 proc.

2.2.Vyno ekstraktų ruošimas: Rotavapor

Tiksliai išgaravome 500 g ir pasvėrėme Buchi Rotavapor卵R-10 (BUCHI Italia srl, Cornaredo, Italija) raudonuosius ir baltuosius vynus 500 ml talpos kolbose, kurių temperatūra 55 laipsniai, kolbos sukimosi greitis lygus 5 ir vakuumo sąlygomis. lygus 60 mmHg. Iš pradžių 2 vyno pavyzdžiai buvo atvežti visiškai sausi. Tada mes juos kontroliuojame išgariname nustatytu 20 minučių laiku, kad pašalintume alkoholio frakciją.

2.3.HPLC analizė

Skysčių chromatografijos-masių spektrometrijos (LC-MS) analizė buvo atlikta pagal D'Urso ir kt. （2020） 【25】 su nedideliais pakeitimais. Trumpai tariant, į skysčių chromatografijos sistemą, sudarytą iš ketvirtinės Accela 600 siurblys ir Accela automatinis mėginių ėmiklis, prijungtas prie linijinio Trap-Orbitrap hibridinio masės spektrometro (LTQ-Orbitrap XL, Thermo Fisher Scientific, Bremenas, Vokietija) su elektropurškimo jonizacija (ESI). Chromatografinis atskyrimas buvo atliktas C18 Moon kolonėlėje (100 × 2,0 mm, dalelių dydis 5 um; Phenomenex), naudojant 0,1 procento skruzdžių rūgšties (tirpiklis A) ir 0,1 procento skruzdžių rūgšties (tirpiklis B) H2O ir CHSCN kaip eliuento fazes. Šis dvejetainis gradientas buvo taikomas esant 200 μL/min∶ 0-35 min, 5–95 proc. (B) ir 35-40 min., izokratiniai 95 proc. （B ESI šaltinio parametrai buvo tokie: Kapiliarinė įtampa {{ 25}} V; vamzdžio objektyvo įtampa-176.47; kapiliarinė temperatūra 280 laipsnių ; apvalkalas ir pagalbinių dujų srautas (N2),15 ir 5; Šlavimo dujos 0; Purškimo įtampa 5. MS spektrai buvo gauti imant visą diapazoną, apimantį m/z180-1400. Suskaidymo tyrimams buvo atliktas nuo duomenų priklausomas skenavimo eksperimentas, parenkant pirmtakų jonus, atitinkančius intensyviausias LC-MS analizės smailes. „Xcalibur“ programinės įrangos versija 2.1 buvo naudojama prietaisų valdymui, duomenų gavimui ir duomenų analizei.

2.4.MTT gyvybingumo tyrimas

Norint įvertinti galimą citotoksinį poveikį, raudonojo ir baltojo vyno ekstraktai buvo tiriami naudojant HFFl, esant skirtingoms koncentracijoms (100,200,300,400 ir 500 mg/mL) nuo 24 iki 72 valandų, naudojant kolorimetrinį 3- (4,5-dimetiltiazol-2-il)-2.5-difeniltetrazolis (MTT) (Sigma-Aldrich, Sent Luisas, MO, JAV). Gyvybinės ląstelės sugebėjo sumažinti šį junginį, gamindamos formazaną, kurį galima kiekybiškai įvertinti spektrofotometru esant 570 nm. HFF1 buvo sėjama į 96-šulinėlių plokšteles, kurių koncentracija buvo 5000 ląstelių/šulinėlių. Ląstelės, naudojamos kaip neapdorota kontrolė, buvo auginamos vienintelėje pagrindinėje auginimo terpėje. Pasibaigus inkubaciniam laikotarpiui, terpė, kurioje yra ekstraktų, buvo pašalinta, į kiekvieną šulinėlį įpilama 10 μL MTTT, kurios galutinė koncentracija yra 0, 65 mg / ml, ir inkubuojama 2 valandas.cistanche gyvenimo pratęsimasPo inkubacijos formazanas buvo ištirpintas DMSO ir absorbcija buvo aptikta spektrofotometriniu skaitymu esant 570 nm (Akribis Scientific, Common Farm, Frog Ln, Knutsford WA16 OJG, Didžioji Britanija). Kultivuotų ląstelių gyvybingumas, esant įvairiems ekstraktams, buvo apskaičiuotas kaip ląstelių gyvybingumas procentais, palyginti su neapdorota kontrole: (OD570 apdorotos ląstelės) × 100/(OD570 kontrolė).

(1)

2.5.Antioksidacinė veikla

Vyno ekstraktų antioksidacinis aktyvumas buvo įvertintas ištyrus katalazės, fermento, galinčio skaidyti vandenilio peroksidą vandenyje ir deguonyje, aktyvumą. Naudojamas kolorimetrinis tyrimas (Catalase Assay Kit) (Sigma-Aldrich, Saint Louis, MO, JAV) leidžia įvertinti šio fermento aktyvumą apdorotose ląstelėse spektrofotometriniu skaitymu. Ląstelės buvo skatinamos senėti 1 valandą apdorojant 100 μM vandenilio peroksidu (H2O2) ir vėliau kultivuojamos esant įvairių koncentracijų ekstraktams (10, 200 300, 400 ir 500 mg/mL) 24,48 ir 72 val. Ląstelės, naudojamos kaip teigiama oksidacinio streso kontrolė, buvo auginamos bazinėje auginimo terpėje po H2 poveikio. Ląstelės, naudojamos kaip kontrolė, buvo auginamos tik bazinėje auginimo terpėje, iš anksto neveikiant H2O2. Pasibaigus inkubaciniam laikui, apdoroti ir kontroliniai mėginiai buvo inkubuojami su rinkinyje esančiais reagentais kambario temperatūroje 15 min., kad būtų galima įvertinti spalvos raidą, o kiekvieno jų absorbcija buvo išmatuota spektrofotometriniu rodmeniu 520 laipsnių kampu. nm (Akribis Scientific, Common Farm, Frog Ln, Knutsford WA16 OJG, Didžioji Britanija). Katalazės aktyvumas buvo apskaičiuotas pagal kiekviename mėginyje esančių mikromolių skaičių ir palygintas su neapdorotos kontrolinės medžiagos aktyvumu.

2.6. - Galaktozidazės senėjimo tyrimas

Senstančiosioms ląstelėms kultūroje identifikuoti buvo naudojamas -galaktozidazės kolorimetrinis tyrimas (Cell Signaling, MA, JAV). HFF1 buvo auginamas 24-šulinėlių lėkštelėse, naudojant baltojo ir raudonojo vyno ekstraktus, kurių koncentracija 500 mg/ml, iš viso 72 val. Ląstelės anksčiau buvo sukeltos senėjimo, 1 valandą apdorojant 100 uM vandenilio peroksidu (H-O2). Inkubavimo laiko pabaigoje terpė, kurioje buvo peroksidai, buvo pašalinta ir į ląsteles buvo pridėta šviežia terpė, kurioje yra kondicionuotų koncentratų. Ląstelės, naudojamos kaip neapdorota kontrolė, buvo kultivuojamos vien tik auginimo terpėje, prieš tai neveikiant H2O2. Vietoj to, ląstelės, iš anksto apdorotos peroksidais, buvo naudojamos kaip teigiama senėjimo kontrolė, kultivuojamos normalioje augimo terpėje. Po 72 valandų apdorojimo ekstraktais visos ląstelės buvo fiksuotos ir inkubuojamos su dažais, kad būtų galima stebėti šviesos mikroskopu. 2.7.Statistinė analizė

Statistinė analizė atlikta naudojant Statistical Package for the Social Sciences version 13 Software (SPSSInc, Chicago, IL, JAV).cistanche nzEksperimentai buvo atlikti 2 kartus su 3 techniniais kiekvieno gydymo pakartojimais. Kiekvienos grupės dispersijos skirstiniai buvo įvertinti naudojant Kruskal-Wallis rangų sumą ir Wilcoxon signed-rang testą, darant prielaidą, kad p reikšmė<0.05 as="" statistically="">

3. Rezultatai

3.1. Vyno ekstrahavimas naudojant Rotavapor pagerina ekstrahavimo kokybę išlaikant vyno fenolio profilius

Pirmasis bandymas gauti vyno ekstraktą buvo atliktas purškiamąja džiovykle, kuri buvo greita ir paprasta technika, tinkama alkoholio frakcijai iš vyno pašalinti. Šiaip gautas ekstraktas mūsų reikmėms netiko, todėl, norint gauti mėginį biologinei ir cheminei analizei, buvo svarstomas paprasčiausias ir pigesnis išgarinimas vakuume. Pradėjus nuo 500 g vyno ir dirbant 55 laipsnių temperatūroje, po 20 min. buvo atgauta 262 g ekstrakto.

Siekiant aptikti bet kokį vyne esančių polifenolių pablogėjimą išgarinimo etape, mėginiams prieš ir po apdorojimo buvo atlikta skysčių chromatografijos analizė. 1 ir 2 paveiksluose pavaizduoti raudonųjų ir baltųjų vynų LC-ESI-LTQ-Orbitrap MS profiliai prieš ir po išgarinimo. Duomenų rinkimas atliktas neigiamos jonizacijos režimu; buvo žinoma, kad neigiamas jonizacijos režimas buvo selektyvesnis ir leidžia gauti didesnį jautrumą fenolio junginiams. Raudonojo vyno mėginiuose nustatyti 33 fenoliniai junginiai, baltojo vyno – 26 junginiai (1 ir 2 lentelės). Pirštų atspaudai parodė, kad mėginiuose yra fenolio rūgščių, katechinų ir susijusių proantocianidinų, stilbenų ir flavonoidinių glikozidų. Raudonojo vyno profiliai prieš ir po išgarinimo atskleidė nedidelius kiekybinius skirtumus (1 pav.). Kaip ir tikėtasi, raudonojo vyno chromatogramos buvo perpildytos, palyginti su baltojo vyno chromatogramomis, o tai reiškia, kad raudonajame vyne buvo daugiau polifenolių junginių nei baltame. (2 pav.). Kokybiniu požiūriu žaliaviniai mėginiai ir atitinkamas vyno ekstraktas buvo lygiaverčiai.

3.2. Vyno ekstraktai gerina ląstelių gyvybingumą ir antioksidacinį atsaką

MIT tyrimas parodė vyno ekstraktų netoksiškumą visoms tirtoms koncentracijoms (3 pav.) ir poveikio laikui, išlaikant ląstelių gyvybingumą, palyginti su kontrolinėmis neapdorotomis ląstelėmis. Tik didesnėms koncentracijoms (400 ir 500 mg/ml baltojo ir 500 mg/mL raudonojo vyno ekstraktų) ląstelių gyvybingumas žymiai sumažėjo po 24 h (A skydelis) ir 48 h (B skydelis), palyginti su kontroliuoti neapdorotas ląsteles. Ląstelės, apdorotos įvairiais ekstraktais, taip pat parodė geresnį antioksidacinį aktyvumą, skatindamos katalazės aktyvumą skaidant H-O2 deguonyje ir vandenyje, apsaugodamos ląsteles nuo oksidacinio streso sukeltų pažeidimų (4 pav.). Antioksidacinio aktyvumo pagerėjimas apdorotose ląstelėse, lyginant su kontrolinėmis grupėmis, buvo matomas jau po 24 valandų gydymo, ypač esant didesnei koncentracijai (500 mg/mL) (4A pav.), o didžiausias pasiekęs po 48 val., statistiškai reikšmingas didesnėms koncentracijoms ( 4B pav.), o po to stabilizavosi po 72 valandų (4C pav.).

3.3. Vyno ekstraktai kovoja su ląstelių senėjimu, nepaisant stipraus streso

5 paveiksle parodytas -galaktozidazės aktyvumas įvairiomis auginimo sąlygomis. Ląstelės, kultivuotos naudojant du ekstraktus (baltos ir raudonos po 500 mg/ml), aiškiai sumažino mėlynų teigiamų ląstelių skaičių, taigi ir senstančias, lyginant su neapdorotomis kontrolinėmis ląstelėmis, auginamomis tik auginimo terpė (Ctrl) ir ląstelėms, veikiamoms H2O2 be ekstraktų (Ctrl H2O2).

4. Diskusija

Polifenoliai yra gausiausios bioaktyvios molekulės vyne, taip pat pastaruoju metu susidomėjusios kosmetikos taikymo srityje [26]. Polifenoliai yra junginių, plačiai randamų augaluose, grupė, kuri labai skiriasi struktūriniu požiūriu, tačiau yra atsakinga už maisto produktų ir augalų organoleptines ir maistines savybes [14]. Jie taip pat turi teigiamą poveikį, saugo nuo vėžio, širdies ir kraujagyslių ligų, diabeto, osteoporozės ir neurodegeneracinių ligų [27-29]. Kiti autoriai anksčiau aprašė jų savybes kovoti su oksidaciniu stresu ir uždegimu [30]. Visų pirma, gerai žinomas prevencinis aterosklerozės poveikis priklauso nuo MTL cholesterolio antioksidacinio aktyvumo, kurio oksidacija sukeltų baltųjų kraujo kūnelių gaudymą, o vėliau susidarytų ateromatozinės plokštelės [31, 32]. Šiame kontekste vynas neseniai pasirodė kaip vienas geriausių būdų apsisaugoti nuo žarnyno infekcijų, pasižymintis antivirusiniu ir antibakteriniu poveikiu prieš gramteigiamus ir gramneigiamus mikroorganizmus, tokius kaip salmoneliozė, šigeliozė, kolibacilozė, stafilokokai ir streptokokai [334]. .

Resveratrolis laikomas vienu iš veiksmingiausių vyne esančių antioksidantų, apsaugančių odą nuo laisvųjų radikalų ir lėtinančių senėjimo procesą, nes slopina tirozinazės aktyvaciją [35]. Be to, jis turi įtakos glikozaminoglikanų gamybai, kurie palengvina ir reguliuoja vandens persiskirstymą dermoje, atkuria jos pusiausvyrą ir užtikrina ilgalaikę hidrataciją [36]. Be to, resveratrolis moduliuoja ląstelių ciklus, apoptozę ir senėjimą, parodydamas apsauginį poveikį nuo DNR oksidacinio pažeidimo [37]. Galo rūgštis ir visi jos dariniai yra laikomos svarbiausiomis fenolio rūgštimis, pasižyminčiomis dideliu laisvųjų radikalų šalinimo aktyvumu, galinčiomis trukdyti ląstelių signalizacijos keliams ir vėžinių ląstelių apoptozei [38]. Flavonoidai ir antocianinai turi didelį antioksidacinį aktyvumą.cistanche varpos dydisJis gerai žinomas dėl savo ryškaus gebėjimo sumažinti vėžio ląstelių dauginimąsi ir apsaugoti nuo širdies ir kraujagyslių ligų, nutukimo ir diabeto [39, 40]. Be to, jie taip pat dalyvauja moduliuojant neuronų funkcijas ir užkertant kelią su amžiumi susijusioms ligoms [41]. Veiksminga ekstrahavimo procedūra yra labai svarbi siekiant išlaikyti fenolio junginių stabilumą[42]. Šiame kontekste šiame darbe įvertinome dviejų tipų vyno ekstraktų komponentus, gautus išgarinant vakuume, kad gautume koncentratą be alkoholio. Siekiant įsitikinti, kad išgarinimo procesas neturėjo įtakos vyno kokybei ir kiekiui, buvo išanalizuoti raudonojo ir baltojo vyno mėginių cheminiai profiliai ir palyginti su po išgarinimo. Mėginių pirštų atspaudų analizė parodė, kad yra daug fenolio rūgščių, katechinų ir susijusių proantocianidinų, stilbenų ir flavonoidinių glikozidų (1 ir 2 pav.), naudingų kaip žaliava vietiniam kosmetiniam preparatui [43]. Galimas jų gydomasis poveikis daugeliui odos ligų, įskaitant užkrėstas žaizdas ir UV spinduliuotę, tikriausiai yra susijęs su šių bioaktyvių molekulių sinergetiniu poveikiu [4]. Šie junginiai gali slopinti ROS generuojančius fermentus, pvz., ksantino oksidazę ir nikotinamido adenino dinukleotido fosfato (NADPH) oksidazę [45,46].

Oksidacinį stresą sukelia reaktyviųjų deguonies rūšių perteklius. ROS, atsirandanti dėl elektronų praradimo aerobinio metabolizmo metu arba po aplinkos veiksnių poveikio, yra nestabilios rūšys, galinčios sukelti biomolekulių struktūros ir funkcijos pokyčius [47, 48] Natūrali antioksidacinė apsauga dalyvauja palaikant ROS fiziologiškai tinkamu lygiu[49,50]. Bet kokie šio proceso pokyčiai gali neigiamai paveikti odos senėjimą[51,52]. Atsižvelgiant į tai, daugelis natūralių ekstraktų yra gerai žinomi dėl savo teigiamo poveikio skatinant žaizdų gijimą ir antioksidacinį atsaką pažeistoje odoje po aplinkos streso [53-56]. Dabar žinoma, kad odos senėjimas sukelia barjerinės funkcijos pablogėjimą, dėl to išsausėja išvaizda ir jautrumas aplinkos agresoriams, todėl kyla didesnė odos sutrikimų rizika [57,58]. Be to, žaizdų gijimas yra sudėtingas ir dinamiškas taisymo, odos vientisumo atkūrimo ir audinių homeostazės procesas [59]. Vietinis aktyvių antioksidantų molekulių naudojimas gali palaikyti odos antioksidacinę sistemą nuo oksidacinio streso ir taip apsaugoti ją nuo ilgalaikio fotosenėjimo [24,60]. Gerai žinoma, kad bioaktyvios molekulės, veikdamos kaip antioksidantai, gali neutralizuoti ląstelių senėjimo ir senėjimo procesus. Ląstelių senėjimas yra stabili ląstelių augimo sustabdymo fazė, kuriai būdinga sekrecinių faktorių, susijusių su senėjimo fenotipais (SASP) sekrecija [61]. SASP gali moduliuoti kaimynines ląsteles, todėl suaktyvėja signalizacijos kaskados, dalyvaujančios įvairiuose patologiniuose procesuose [62]. Senstančios ląstelės yra susijusios su telomerų trumpėjimu ir pastovia uždegimą skatinančia aplinka, skatinančia ląstelių transdiferenciaciją [63]. Šiame kontekste neseniai parodėme, kad Myrtus Communis L. pasižymi svarbiomis antioksidacinėmis ir regeneracinėmis savybėmis, nes moduliuoja kamieninių ląstelių pluripotenciją ir uždegiminį atsaką [64]. Šio augalo ekstraktai, kuriuose gausu polifenolių, gali apsaugoti ląsteles nuo oksidacinio streso, sukeldami telomerazės atvirkštinės transkriptazės (TERT) ekspresiją ir stabdydami priešlaikinį senėjimą [65].

Kiti autoriai anksčiau parodė, kad terapinės intervencijos į senstančias ląsteles gali atkurti sveikatą, kovodamos su lėtiniu uždegimu ir skatindamos žaizdų taisymą [66]. Nepaisant to, kiti autoriai taip pat atskleidė, kad kvercetinas, flavonoidai ir galo rūgštis gali užkirsti kelią sužalojimams, atsirandantiems dėl tiesioginio laisvųjų radikalų šalinimo veiklos, palaikant ląstelių detoksikacijos sistemas, tokias kaip superoksido dismutazė, katalazė ir glutationo peroksidazė [67]. Katalazė yra vienas iš svarbiausių fermentų, dalyvaujančių ROS detoksikacijoje, kurio sutrikimas sukelia daugybę su amžiumi susijusių degeneracinių ligų [68, 69].cistanche milteliaiGerai žinoma, kad katalazės trūkumas yra susijęs su pagreitėjusiu diabetiniu inkstų pažeidimu dėl peroksisominės disfunkcijos [70], tokiu būdu įtakojantis biologinius procesus, įskaitant ląstelių proliferaciją, diferenciaciją, migraciją ir apoptozę [71]. Šiame darbe parodome, kad skirtingos koncentracijos raudonojo ir baltojo vyno ekstraktai gali neutralizuoti oksidacinio streso sukeltą ląstelių senėjimą, moduliuodami katalazės, pagrindinio fermento, dalyvaujančio reguliuojant oksidacinį stresą, aktyvumą (4 pav.) -galaktozidazės (5 pav.). Mūsų rezultatai rodo, kad vyno ekstraktai gali neutralizuoti ROS kaupimąsi, padidindami katalazės aktyvumą po gydymo H-O2, taip užkertant kelią lėtinėms odos ligoms ir sumažinant senstančių ląstelių skaičių. Apibendrinant, mūsų išvados rodo, kad šie vyno ekstraktai, gauti vakuuminiu garinimu, gali būti įdomi žaliava kuriant naujus kosmetikos gaminius, stabdančius odos senėjimą. Tolesni in vitro ir in vivo tyrimai, taip pat su pavieniais junginiais, gali būti naudingi siekiant panaudoti šiuos rezultatus būsimose audinių regeneracijos srityse.

5. Išvados

Odos senėjimas yra dinamiškas ir daugiafunkcinis procesas, kurį sukelia UV spinduliai ir su tuo susijęs reaktyviųjų deguonies rūšių susidarymas. Vienintelės žinomos apsaugos nuo fotosenėjimo priemonės yra saulės filtrai ir antioksidantai, ypač kartu, siekiant sumažinti ir neutralizuoti laisvųjų radikalų gamybą. Šiame darbe mes sutelkėme dėmesį į vyno ekstraktų, kurių flavonoidai gali neutralizuoti senėjimą, antioksidacinį potencialą, ypač kai jie naudojami ląstelėms, patiriančioms didelį stresą. Dėl naujos ekstrahavimo procedūros pašalinome alkoholio frakciją kokybiškai nepakeitę flavonoidinių antioksidantų komponentų. Ekonominiu požiūriu aišku, kad vynas yra brangesnis nei keli šalutiniai produktai. Gerai žinoma, kad kosmetikos pramonė taip pat naudoja keletą žaliavų, brangesnių nei vynas. Taigi raudonojo ir baltojo vyno ekstraktai gali būti įdomi žaliava kuriant naujus kosmetikos gaminius, padedančius kovoti su odos senėjimu ir pagerinti audinių regeneraciją.

Šis straipsnis ištrauktas iš Antioxidants 2021, 10, 227. https://doi.org/10.3390/antiox10020227 https://www.mdpi.com/journal/antioxidants