Su imunine sistema susijusi genų ekspresija žąsų nefritiniu astrovirusu užsikrėtusių Goslingso inkstuose ir blužnyje

Liestistina.xiang@wecistanche.comdaugiau informacijos.

ABSTRAKTUSŽąsų nefritinis astrovirusas (GNAstV) pirmą kartą buvo izoliuotas 2018 m., Sukeldamas didelius ekonominius nuostolius žąsų pramonei. Tačiau apie šeimininką žinoma mažaiimuninis atsakasiki GNAstV infekcijos. Šiame tyrime keturiasdešimt 2 dienų amžiaus goslings buvo atsitiktinai suskirstyti į 2 grupes: infekciją ir neigiamas kontrolines grupes. Kiekvienas goslingas infekcijos grupėje buvo užginčytas 0,5 ml GNAstV-JSHA į raumenis, o neigiamos kontrolinės grupės goslingas buvo inokuliuotas tokiu pačiu PBS kiekiu. Histopatologiniai pokyčiai ir viruso vietablužnisirinkstasbuvo ištirti, o su imunine sistema susijusių genų ekspresija buvo nustatyta qPCR esant 7 ir 14 d po infekcijos. Mūsų rezultatai parodė, kad GNAstV infekcijos sukelta blužnies limfocitų ir inkstų epitelio ląstelių degeneracija ir nekrozė, ir šios ląstelės buvo teigiamos virusui. Be to, GNAstV infekcija paskatino modelio atpažinimo receptorių (RIG-I, MDA-5 ir TLR3) ir pagrindinių adaptorių molekulių aktyvavimą

(MyD88, MAVS ir IRF7) blužnyje ir inkstuose ir padidino interferono-α ekspresiją blužnyje ir antivirusiniuose baltymuose (MX1, OASL ir IFITM3)blužnyje ir inkstuose. Be to, buvo nustatytas didelis interleukino (IL)-1β ir IL-8 ekspresijos lygis blužnyje ir iNOS blužnyje ir inkstuose. Šie rezultatai parodė, kad GNAstV infekcija suaktyvino įgimtą šeimininko imuninį atsaką. Be to, GNAstV infekcija padidino CD8t, MHCI ir MHCII ekspresijos lygį, o tai rodo, kad buvo aktyvuotas adaptyvus imuninis atsakas. Be to, TGF-β buvo labai išreikšta blužnyje ir inkstuose, o tai gali būti GNAstV imuninės sistemos vengimo strategija, sukelianti infekciją. Įdomu tai, kad inkstuose sumažėjo tiek IL-1β, tiek IL-6 mRNR kiekis, o tai gali padėti sumažinti inkstų pažeidimus. Tai pirmasis tyrimas, kuriame pranešama apie su imunine sistema susijusios genų ekspresijos pokyčius reaguojant į GNAstV infekciją, o mūsų rezultatai suteikia įžvalgų apie virusinę patogenezę.

Raktažodžiai: žąsų nefritinis astrovirusas, imuninis atsakas, blužnis, inkstai, goslingas

Spustelėkite, kad sužinotumėte cistanche stiebo naudą ir turėtumėte cistanche patirties

ĮVADAS

Nuo 2017 m. keli žąsų pulkai patyrė didelį podagros protrūkį 4–16 dienų senumo goslings Rytų Kinijoje, o tai lėmė didelius ekonominius nuostolius žąsų pramonėje. Užkrėsti goslings pasižymėjo sumažėjusiu kūno svoriu, patinstančiais ir blyškiais inkstais, su baltais uratais šlapimtakiuose ir uratų dispozicija visceralinių organų ir sąnarių ertmės paviršiuje. 2018 m. naujas žąsų astrovirusas buvo išskirtas iš užkrėstų goslingų, o gyvūnų reprodukcijos eksperimentai įrodė, kad tai buvo pagrindinis gosling podagros ligos sukėlėjas. Šis virusas genetiškai skyrėsi nuo žinomo mamos astroviruso ir astroviruso. Jis suformavo aiškų klodą pagal viso ilgio ORF2 baltymo aminorūgščių seką(kapsidinis baltymas), kuris yra labiausiai kintantis genomo regionas. Taigi daugiau dėmesio reikėtų skirti viruso daromai žalai goslings. Šiame tyrime naujasis žąsų astrovirusas vadinamas žąsų nefritiniu astrovirusu (GNAstV).

Kadangi GNAstV yra naujai atsirandantis virusas, dauguma tyrimų sutelkė dėmesį į jo išskyrimą, genetinę analizę ir diagnostinių metodų nustatymą (Yuan et al, 2018; Wan ir kt.,2019; Yin ir kt.,2020). Tačiau mažai žinoma apie šeimininko imuninį atsaką į GNAstV infekciją. Žąsų nefritinis astrovirusas daugiausia sukelia inkstų, kepenų ir blužnies pažeidimą goslingse, o inkstuose ir blužnyje buvo nustatyta didesnė viruso apkrova, palyginti su kitais organais (Jin et al, 2018; Xu ir kt., 2019). Blužnies pažeidimai ir didelė viruso apkrova rodo, kad virusas gali pakenkti imuniniam atsakui. Įgimta imuninė sistema vaidina svarbų vaidmenį virusinės infekcijos metu, tarnaudama kaip pirmoji gynybos linija nuo virusų invazijos (Chow J ir kt.,2015). Modelio atpažinimo receptoriai (PRR) atpažįsta virusines nukleino rūgštis ir sukelia įgimtą atsaką, įskaitant citokinų, tokių kaip I-1β, TNF-x ir IFN, gamybą ir antivirusinius baltymus, tokius kaip OASL, IFITM3 ir MX1. Membrana susietas Toll tipo receptorius 3 (TLR3) ir citozoliniai RIG-I tipo receptoriai, kuriuose daugiausia yra RIG-1 ir MDA-5, yra svarbiausi PRR, atpažįstantys virusinę RNR. Įgimtas imuninis atsakas sukelia signalą, kad sukeltų adaptyvų imuninį atsaką, kuris kontroliuoja virusinę infekciją vėlesnėje infekcijos fazėje. Adaptyvioji imuninė sistema apima antikūnų sukeltą / B ląstelių atsaką I atsaką ir ląstelių sukeltą atsaką, kuriam reikalingas CD3+, CD4+, CD8+ ir MHC I ir II klasės molekulių dalyvavimas. Šiuo metu mechanizmai, kuriais GNAstV veikia šeimininko įgimtą ir adaptyvų imuninį atsaką, yra neaiškūs. Kinijoje gyvena didžiausia žąsų populiacija visame pasaulyje; todėl, norint išsiaiškinti GNAstVand patogeniškumo ir imuniteto mechanizmą, kontroliuojantį jo plitimą, svarbu ištirti žąsų imuninį atsaką į GNAstV infekciją. Šiame tyrime 2 dienų amžiaus goslings buvo užsikrėtę GNAstV. Tada buvo ištirti histopatologiniai pokyčiai ir viruso vieta, taip pat su imunine sistema susijusi genų ekspresija blužnyje ir inkstuose.

MEDŽIAGOS IR METODAI

Etikos pareiškimas

Visi eksperimentai su gyvūnais buvo atlikti pagal Mokslo ir technologijų ministerijos (Pekinas, Kinija) eksperimentinių gyvūnų gaires ir buvo patvirtinti Nandzingo žemės ūkio universiteto Institucinio gyvūnų priežiūros ir naudojimo komiteto.

Virusas

GNAstV-JSHA izoliatas(GenBank prisijungimo nr. MK125058)buvo izoliuotas nuo sergančių goslings su podagra (Jiangsu provincija, Kinija) ir laikomas mūsų laboratorijoje. GAstV-JSHA titras buvo 1 × 104,25 50% audinių kultūros infekcinė dozė (TCID50)/ml, nustatyta titruojant žąsų inkstų epitelio ląsteles pagal Reed & Muench metodą.

Eksperimentas su gyvūnais

Blužnies ir inkstų mėginiai buvo paimti iš mūsų ankstesnio eksperimento su gyvūnais, kuris buvo aprašytas Xu tyrime (Xuet al.,2019). Trumpai tariant, 2 dienų amžiaus keturiasdešimt goslings be GNAstV infekcijos buvo atsitiktinai suskirstyti į 2 grupes: infekciją ir neigiamas kontrolines grupes. Kiekvienas infekcijos grupės goslingas buvo užginčytas 0,5 ml GNAstV-JSHA, inokuliuojant į raumenis, o goslingas neigiamoje kontrolinėje grupėje buvo inokuliuotas tokiu pačiu PBS kiekiu.

Visi goslings buvo kasdien stebimi dėl klinikinių požymių. 7 d po infekcijos (dpi) buvo eutanazuota 10 goslingų iš kiekvienos grupės ir ištirti bendrieji pokyčiai, o tada buvo surinkti inkstai ir blužnis. Dalis šių problemų buvo išspręstos 10% formaldehido histopatologiniam tyrimui, likusios buvo saugomos 80 °C temperatūroje tolesniems eksperimentams. 14 dpi metu išlikę goslings buvo eutanazuoti, o audiniai surinkti ir saugomi, kaip minėta aukščiau.

Histopatologinis tyrimas

Fiksuoti mėginiai buvo dehidratuoti daugybe alkoholių, skaidrinti ksilenu ir įterpti į parafiną. Tada mėginiai buvo supjaustyti nuosekliai į 4 μm sekcijas ir įprastiniais metodais nudažyti hematoksilinu ir eozinu. Dažytos sekcijos buvo tiriamos šviesos mikroskopu.

Viruso vietos aptikimas in situ hibridizacija

In situ hibridizacijos (FISH) metodas buvo atliktas pagal komercinio ISH rinkinio (Boster, Kinija) instrukcijas su kai kuriais pakeitimais. Prieš atliekant ISH, mėginio jautrumas ir specifiškumas buvo išbandyti ir optimizuoti naudojant keletą išankstinių apdorojimų. Trumpai tariant, deparafinuotos audinių sekcijos buvo iš anksto apdorotos HCl (0,2 M,15 min)ir proteinaze K (40 μg/ml,20 min,37 °C). Proteazė K buvo slopinama fiksuojant 4% paraformaldehidą 5 min. Tada buvo atlikti hibridizacijos ir po hibridizacijos žingsniai. Zondai buvo pridėti prie hibridizacijos buferio, esant 0,5-2 μg/ml koncentracijai; buferis su zondais buvo denatūruotas 98 °C temperatūroje 10 min. ir iš karto atvėsintas ant ledo. Maždaug 20 μL hibridizacijos mišinio buvo pipete įpilama į audinių sekcijas, padengta dietilpirokarbonatu apdorotais gaubteliais, ir inkubuojama 16–20 val. 42 °C temperatūroje. Zondai, kurie hibridizavosi su virusine RNR, buvo aptikti naudojant anti-DIG antikūną, konjuguotą su 3,3-N-diaminobenzidino tetrahidrochloridu. Skaidrės buvo atsvertos metilo žalia spalva ir užsandarintos neutralia guma. Siekiant pagerinti jautrumą, proteinazė K buvo naudojama audinių pralaidumui padidinti, kad būtų lengviau patekti zondams į audinius.

Imuninių genų analizė kiekybiniu realaus laiko PGR

Bendra RNR buvo išgauta naudojant Trizolį (Invitrogen, CA), o atvirkštinė RNR transkripcija buvo atlikta naudojant HiScript Q RT SuperMix rinkinį (Vazyme, Kinija). Termocikleris(AB7300; Life Technologies)buvo naudojamas kiekybiniam PGR. "Primer 5.0" programinė įranga buvo naudojama su imunine sistema susijusiems genams įvardyti, kaip parodyta 1 lentelėje. Ribonukleino rūgšties ekspresija buvo normalizuota kiekybiškai įvertinus GAPDH kaip namų tvarkymo geną. Santykiniai transkripcijos lygiai buvo analizuojami metodu, naudojant 2-AACT

Statistikos analizė

Skirtumus tarp kontrolinės grupės ir eksperimentinės grupės analizavo studentas t-testas. Rezultatai išreiškiami kaip standartinio nuokrypio ± vidurkis. P<0.05 was="" considered="" to="" indicate="" a="" statistical="" significance="" compared="" with="" the="" control="" group,="" and="">< 0.01="" was="" considered="" to="" indicate="" a="" high="" degree="" of="" significance="" compared="" with="" the="" control="">

REZULTATAI

Klinikiniai pokyčiai

Neinokuliuotos kontrolės metu mirties ar akivaizdžių klinikinių požymių nepastebėta. Tačiau 5 iš 20 užsikrėtusių goslings mirė eksperimento metu, o GNAstV infekuotų goslingių kūno svorio sumažėjimas buvo pastebėtas. Autopsijos metu neigiamos kontrolinės grupės organai pasirodė normalūs, tačiau uratų dispozicija organų (kepenų, širdies ir inkstų), tulžies maišelių ir sąnarių ertmės paviršiuje buvo aptikta negyvuose goslinguose. Be to, visuose užsikrėtusiuose goslinguose buvo stebimi patinę ir blyškūs inkstai su baltu uratu šlapimtakiuose. Patologiniai pokyčiai buvo parodyti mūsų ankstesniame tyrime (Xu ir kt.). 2019). Šie rezultatai parodė, kad sėkmingai sukūrėme GNAstV infekcijos gyvūnų modelį goslinguose.

Histopatologiniai inkstų ir blužnies pokyčiai

Histopatologinio tyrimo metu inkstai ir blužnis iš neigiamų kontrolinių goslingų pasirodė histologiškai normalūs (1A ir 1B pav.). Tačiau inkstų epitelio ląstelių degeneracija ir nekrozė irUždegimoląstelių infiltracija buvo stebėta infiltracija infiltruotų goslingių inkstuose (1C pav.). Be to, blužnies nekrozėLimfocitųir uždegiminė ląstelių infiltracija taip pat buvo nustatyta blužnyje (1D pav.).

Viruso vieta inkstuose ir blužnyje

Žąsų nefritinio astroviruso vieta inkstuose ir blužnyje buvo tiriama naudojant ISH. Kaip parodyta 2 paveiksle, inkstų kanalėlių epitelio ląstelių citoplazmoje buvo aptiktos kelios rudos dalelės, tačiau inkstų glomeruluose nebuvo pastebėta rudų dalelių. Blužnies blužnies blužnies spindesio limfocituose ir makrofagų ląstelėse buvo aptikta nedaug rudų Šie rezultatai rodo, kad GNAstV gali užkrėsti inkstų kanalėlių epitelio ląsteles ir blužnies limfocitus.

PRR ir adapterių molekulių ekspresija GNAstV užkrėstų goslingų blužnyje ir inkstuose PRR (RIG-1, MDA-5 ir TLR3) ir raktų adapterių molekulių (MAVS, MyD88 irIRF7)blužnyje ir inkstuose buvo nustatytas pagal qPCR, kaip parodyta 3 paveiksle. 3 PRR lygis blužnyje infekuotoje grupėje reikšmingai padidėjo 7 ir 14 dpi, palyginti su neigiama kontroline grupe (P<0.05). the="" rig-1="" and="" tlr3="" mrna="" levels="" in="" the="" kidneys="" were="" also="" increased="" in="" the="" infected="" group="" at="" 7="" and="" 14="" dpi="" compared="" with="" that="" in="" the="" negative="" control="">< 0.01).="" the="" mda-5="" mrna="" level="" was="" higher="" in="" the="" infected="" group="" at="" 14="" dpi,="" but="" no="" difference="" in="" mda-5="" mrna="" expression="" was="" observed="" between="" the="" infected="" and="" negative="" control="" groups="" at="" 7="" dpi(p="">0,05). Atitinkamai adapterio molekulių ekspresija užkrėstoje grupėje esant 7 ir 14 dpi buvo žymiai didesnė nei kontrolinėje grupėje (P<0.05). these="" results="" indicate="" that="" gnastv="" infection="" activates="" the="" host's="" innate="" immune="">

Citokinų ekspresija GNAstV infekuotų goslingų blužnyje ir inkstuose

Citokinų, IL-1β, I-6, IL-8, II.-10, TGF-B ir iNOS išraiškos buvo nustatytos pagal qPCR, kaip parodyta 4 paveiksle. Blužnyje mRNR IL-1B ir TGF-B lygis infekcijos grupėje 7 ir 14dpi buvo akivaizdžiai didesnis nei tie, kurie priklauso neigiamai kontrolinei grupei (P<0.01). furthermore,="" the="" i-8="" and="" inos="" mrna="" levels="" in="" the="" infection="" group="" at="" 14="" dpi="" were="" higher="">< 0.05).="" but="" no="" differences="" in="" the="" levels="" were="" observed="" between="" the="" infection="" and="" negative="" control="" groups="" at="" 7="" dpi(p="">0.05). Be to, I-6 mRNR ekspresijos skirtumas esant 7 ir 14 dpi nebuvo pastebėtas tarp infekcijos ir kontrolinės grupės(P> 0,05). Inkstuose I-1β mRNR koncentracija esant 7 ir 14 dpi ir I-6 esant 7 dpi infekcijos grupei buvo mažesnė nei neigiamoje kontrolinėje grupėje (P< 0.05),="" whereas="" the="" tgf-b="" and="" inos="" mrna="" levels="" at="" 7="" and="" 14="" dpi="" and="" the="" i-8="" mrna="" level="" at="" 14="" dpi="" were="" higher="" in="" the="" infection="" group="" than="" those="" in="" the="" negative="" control="" group=""><0.05). no="" difference="" in="" i-10="" expression="" was="" detected="" between="" the="" infection="" and="" control="" groups(p="">0.05).

Antivirusinių baltymų ekspresija GNAstV infekuotų goslings blužnyje ir inkstuose

IFN-d mRNR lygis. blužnyje ir antivirusinių baltymų (OASL, IFITM3 ir MIX1) ekspresija inkstuose ir blužnyje buvo nustatyti, kaip parodyta 5 paveiksle. Blužnyje mRNR lygisIFN-2. OASL, IFITM3 ir MX1, esant 7 ir 14 dpi, užsikrėtusioje grupėje buvo žymiai didesni nei neigiamų kontrolinių grupių (P)< 0.05).="" in="" the="" kidney,="" the="" mrna="" levels="" of="" oasl,="" ifitm3,="" and="" mx1="" at="" 14="" dpi="" were="" obviously="" higher="" in="" the="" infected="" group="" than="" in="" the="" negative="" control="" group=""><0.05); however,="" no="" significant="" differences="" in="" levels="" were="" observed="" between="" the="" infection="" and="" negative="" control="" group="" at="" 7="" dpi(p="">0.05).

CD4t, CD8+ ir MHC klasės bei I molekulių ekspresija GNAstV infekuotų goslingų blužnyje

Genų, susijusių su antigeno pateikimu (CD4', CD8', MHC I ir II klasės molekulės)blužnyje, ekspresija blužnyje buvo nustatyta pagal qPCR, kaip parodyta 6 paveiksle. MHC I ekspresijos lygiai esant 7 ir 14dpi buvo žymiai didesnis infekuotoje grupėje nei neigiamoje kontrolinėje grupėje (P< 0.05).="" the="" expression="" levels="" of="" mhc="" ii="" at="" 14="" dpi="" were="" obviously="" higher="" in="" the="" infected="" group="" than="" those="" in="" the="" negative="" control="" group=""><0.05); however,="" no="" difference="" in="" levels="" was="" observed="" between="" the="" 2="" groups="" at="" 7="" dpi(p="">0,05). CD8+ mRNR kiekis, esant 7 ir 14 dpi, infekuotoje grupėje buvo žymiai didesnis nei neigiamos kontrolinės grupės (P< 0.05).="" but="" no="" changes="" in="" cd4+mrna="" levels="" at="" 7="" and="" 14="" dpi="" were="" found="" between="" the="" 2="" groups="" (p="">0.05).

DISKUSIJA

Žąsų nefritinis astrovirusas yra naujai izoliuotas virusas, kuris gali sukelti visceralinę podagrą ir goslings mirtį, o tai daro didelę žalą žąsų fockams. Iki šiol jo gydymui nėra vakcinų ir terapinių medžiagų. Todėl būtina ištirti šeimininko imuninį atsaką į virusą, kad suprastumėte jo patogenezę ir sukurtumėte vakcinas bei terapijas. Šiame tyrime mes sėkmingai sukūrėme gyvūnų modelį goslingse, į raumenis inokuliuodami GNAst V-JSHA. Viruso vieta blužnies limfocituose ir makrofaguose bei blužnies limfocitų nekrozė rodo, kad GNAstV gali užkrėsti blužnį ir sukelti šeimininko imuninės sistemos pažeidimą. Tačiau iki šiol nebuvo pranešimų apie GNAstV užsikrėtusių goslingų imunologinį atsaką. Be to, inkstų epitelio ląstelėse buvo pastebėtas didelis virusinis titras. ir tai gali prisidėti prie inkstų pažeidimo ir šlapimo rūgšties išsiskyrimo sutrikimo.

Įgimta imuninė sistema yra pirmoji gynybos linija nuo įsiveržusio patogeno. Mūsų tyrime GNAstV infekcija sukėlė TLR3 padidėjimą. RIG-1 ir MIDA-5 mRNR ekspresija blužnyje ir inkstuose, rodanti, kad buvo aktyvuota įgimta imuninė sistema, kuri gali prisidėti prie virusų invazijos slopinimo, Pagrindinių adaptorių molekulių (MyD88 ir IRF7) reguliavimas toliau patvirtino šiuos rezultatus. IFN gaminamas aktyvavus PRR, kuris vaidina lemiamą vaidmenį virusų slopinime, indukuojant kelis IFN stimuliuojamus genus, kurių produktai turi tiesioginį antivirusinį aktyvumą. Mūsų tyrime IFN-z ekspresija blužnyje ir antivirusinių baltymų (OASL, MX1 ir IFITM3) ekspresija blužnyje ir inkstuose buvo padidėjusi po GNAstrV infekcijos. Padidėjusi antivirusinių baltymų gamyba gali būti naudinga slopinant virusinę invaziją. Atsižvelgiant į tai, mūsų rezultatai parodė, kad TLR3. RIG-1. MDA-5 ir IRF7 buvo aktyvuoti GNAstV infekcijos metu. Ankstesnis tyrimas taip pat parodė, kad sistemos tipas riboja žmogaus astroviruso replikaciją in vitro ir in vivo ir užtikrina apsaugą nuo astroviruso sukelto barjerinio pralaidumo (Marvin et al.. 2015). Tačiau TLR3 ir OASL nustatyti duomenys skyrėsi nuo kitų PRR ir antivirusinių baltymų blužnyje nustatytų duomenų, nes tiek TLR3, tiek OASL ekspresija sumažėjo 14 dpi, palyginti su 7 dpi. Tai gali būti susiję su neigiamu grįžtamojo ryšio reguliavimu arba viruso apkrovos mažinimu. Atitinkamai, lL-1B, esant 14 dpi, gali būti kūno reguliavimo mechanizmų, skirtų perteklinei proinflammatory citokinų gamybai, rezultatas. Įdomu tai, kad iRNR lygis inkstuose buvo sumažėjęs užkrėstoje grupėje. Mažesnis šio proinflammatory citokinų kiekis gali padėti sumažinti inkstų pažeidimą. Ankstesni tyrimai parodė, kad žmogaus astroviruso ir kalakutienos astroviruso 2 tipo (TASt V-2) infekcijos nebuvo susijusios su uždegimu ir sukėlė nedaug pažeidimų žarnyno villiuose (Koci ir kt.). 2003; Sebire et al.2004), teigiantis, kad tai gali būti astrovirusinės infekcijos epitelinėse ląstelėse savybė. I-6 taip pat yra uždegiminis citokinas, kuris sukelia antivirusinį poveikį per veiksmingą imuninį atsaką, bet taip pat dalyvauja procesuose, kurie sukelia kraujagyslių pažeidimus,Uždegimaskraujagyslių sienelės ir trombozės. Mūsų tyrime po GNAstV infekcijos blužnyje reikšmingo IL-6 pokyčio nerasta; tai gali būti susiję su dideliais skirtumais tarp atskirų goslings. Tačiau I-6 ekspresija buvo sumažėjusi inkstuose, panašiai kaip ir -1B stebėjimas; tai taip pat gali padėti sumažinti inkstų pažeidimą. I-8 yra tarpininkas, atsakingas už neutrofilų, dalyvaujančių vietiniame uždegiminiame infiltrate, įdarbinimą. Šiame tyrime I-8 buvo reguliuojamas blužnyje ir inkstuose, todėl jis galėjo prisidėti prie uždegimo. IL-10 yra priešuždegiminis citokinas, kuris gali slopinti proinflammatory citokinų gamybą. Šiame tyrime GNAstV sukėlė akivaizdų IL-10 lygio sumažėjimą blužnyje; tai gali būti sunkaus blužnies uždegimo požymis ir viena iš blužnies pažeidimo priežasčių. Taip pat įrodyta, kad infekcija kitomis vi-ruses infekcijomis, tokiomis kaip japoniškojo encefalito virusas ir Zikos virusas, taip pat sumažino I-10 ekspresiją (Swarup et al.2007; Abreu 2019), tačiau reikia toliau tirti tikslų mechanizmą, kuriuo grindžiamas "GNAstr Vinfection". TGF-β yra imunosupresinis citokinas. Taigi, padidėjęs TGF-B kiekis blužnyje ir inkstuose rodo, kad GNAstV infekcija gali sukelti imuninės sistemos slopinimą. Be to, buvo pranešta, kad T AStV-2 infekcija padidino TGF-β koncentraciją serume kalakutuose (Koci et al.2003). Įrodyta, kad padidėjusi TGF-β gamyba slopina imuninį atsaką ir sustiprina viruso replikaciją (Letterio ir Roberts,1998). Taigi padidėjusi TGF β gamyba gali prisidėti prie GNAstV replikacijos, slopindama šeimininko imuninį atsaką.iNOS yra svarbi įgimto imuninio atsako sudedamoji dalis ir vaidina pagrindinį vaidmenį kontroliuojant virusines infekcijas. Mūsų tyrime išvados parodė, kad GNAstV infekcija

akivaizdžiai reguliuojama INOS išraiška. Didelė "iNOS" gamyba gali leisti šeimininkui atsispirti virusinei infekcijai. Mūsų rezultatai atitiko ankstesnių tyrimų rezultatus, kurie parodė, kad TAStV-2 infekcija sukelia iNOS gamybą, o tai riboja astroviruso replikaciją (Qureshi et al.,200l; Koci ir kt.,2004; Meyerhoff ir kt.,2012).

Adaptyvi imuninė sistema vaidina pagrindinį vaidmenį kontroliuojant virusines infekcijas. Mūsų tyrime GNAstVinfection padidino MHC Ia, MHC Iix ir CD8+ mRNR lygį, o tai rodo, kad buvo aktyvuotas humoralinis ir ląstelinis imuninis atsakas. Anksčiau buvo pranešta, kad žmogaus astrovirusinė infekcija sukelia antikūnų gamybą, kuri gali neutralizuoti virusą (Kurtzand Lee,1978). tyrime However.no reikšmingų CD4+ mRNR ekspresijos pokyčių nustatyta. Atsižvelgiant į tai, kad CD4"T ląstelės yra būtinos B ląstelių brendimui ir antikūnų specifiškumui, gali būti, kad GNAst V negalėjo sukelti stipraus humoralinio imuninio atsako. Tai gali paaiškinti, kodėl nebuvo pastebėtas akivaizdus MHC II.a ekspresijos padidėjimas esant 7 dpi. Be to, mRNR cd8 ir MHCIa koncentracija esant 14 dpi sumažėjo, palyginti su 7 dpi. Tai gali būti susiję su viruso apkrovos mažinimu, kaip minėta pirmiau. Šiame tyrime GNAst V antikūnas nebuvo aptiktas, nes nėra komercinio rinkinio. Todėl reikia toliau tirti antivakserių vaidmenį "GNAstVinfection".

Apibendrinant, mūsų duomenys atskleidė imuninio atsako modelius GNAst V infekuotų goslings blužnyje ir inkstuose. Dėl GNAst V infekcijos buvo aktyvuoti genai, susiję su įgimtu ir adaptyviu imunitetu. Tačiau citokinų ir antivirusinių baltymų gamyba neapsaugojo goslings nuo ligos. Tai yra pirmasis tyrimas, kuriame pranešama apie su imunine sistema susijusių genų ekspresijų pokyčius reaguojant į GNAst Vinfection, o tai gali dar labiau padėti išsiaiškinti šeimininko GNAstV sąveikos molekulinius mechanizmus.