Intratumor vaikystės vakcinos specifinis CD4+ T ląstelių atšaukimo koordinatės priešnavikinis CD8+ T ląstelės ir eozinofilai
Oct 17, 2023
SANTRAUKA
Fonas
CD{0}} T ląstelių priešnavikiniai mechanizmai tebėra neapibrėžti, o priemonių veiksmingai panaudoti CD4+ T ląstelių pagalbą vėžio imunoterapijai trūksta. Jau esamos atminties CD4+ T ląstelės turi potencialą būti panaudotos šiam tikslui. Be to, lieka neaiškus jau egzistuojančio imuniteto vaidmuo viroterapijoje, ypač rekombinantinėje poliomielito viruso imunoterapijoje, kai vaikystėje yra būdingas specifinis imunitetas nuo poliomielito vakcinos. Čia išbandėme hipotezę, kad vaikystės vakcinai būdingos atminties T ląstelės tarpininkauja priešnavikinei imunoterapijai ir prisideda prie poliomielito viroterapijos priešnavikinio veiksmingumo.
Cistanche tubulosa-Antitumor pranašumai
Metodai
Imunizacijos nuo poliomielito įtaka poliomielito viroterapijai ir priešnavikinis poliomielito bei stabligės atšaukimo poveikis buvo išbandytas singeninės pelių melanomos ir krūties vėžio modeliuose. CD8+ T-ląstelių ir B-ląstelių išmušimas, CD4+ T-ląstelių išeikvojimas, CD4+ T-ląstelių įsisavinimas, CD40L blokada, priešnavikinio T-ląstelių imuniteto įvertinimas ir eozinofilų išeikvojimas apibrėžė atšaukimo antigenų priešnavikinius mechanizmus. Siekiant įvertinti šių radinių svarbą žmonėms, buvo naudojami visos vėžio transkripto duomenų rinkiniai ir poliomielito viroterapijos klinikinių tyrimų koreliacijos.
Rezultatai
Ankstesnė vakcinacija nuo poliomielito viruso iš esmės sustiprino priešnavikinį poliomielito viroterapijos veiksmingumą pelėms, o polioviruso ar stabligės imuniteto atšaukimas į naviką sulėtino naviko augimą. Intratumor atšaukimo antigenai padidino priešnavikinių T-ląstelių funkciją, sukėlė ryškų 2 tipo įgimtų limfoidinių ląstelių ir eozinofilų naviko infiltraciją ir sumažino reguliuojančių T ląstelių (Tregs) proporcijas. Atšaukimo antigenų priešnavikinį poveikį sąlygojo CD4+ T ląstelės, ribojamos B ląstelės, nepriklausomos nuo CD40L ir priklausomos nuo eozinofilų ir CD8+ T ląstelių. Atvirkštinis ryšys tarp eozinofilų ir Treg parašų buvo pastebėtas visuose vėžio genomo atlaso (TCGA) vėžio tipuose, o eozinofilų išeikvojimas neleido Treg sumažinti po poliomielito prisiminimo. Prieš gydymą poliomielitą neutralizuojančių antikūnų titrai buvo didesni pacientams, gyvenantiems ilgiau, o eozinofilų kiekis padidėjo daugumai pacientų po poliomielito viroterapijos.
Išvada
Jau egzistuojantis imunitetas nuo poliomielito prisideda prie poliomielito viroterapijos priešnavikinio veiksmingumo. Šiame darbe apibrėžiamas vaikiškų vakcinų vėžio imunoterapijos potencialas, atskleidžiamas jų naudingumas padedant CD4+ T-ląstelių pagalbai priešnavikinėms CD8+ T ląstelėms ir nurodoma, kad eozinofilai yra priešnavikiniai CD4+ T ląstelės.
ĮVADAS
Nors CD4+ T ląstelės yra pagrindiniai adaptyvaus imuninio funkcionalumo ir atminties tarpininkai, trūksta 1–3 būdų, kaip panaudoti jų potencialą vėžio imunoterapijoje. Adaptyvi imuninė atmintis įgalina tvirtą imuninį atsaką į anksčiau aptiktus patogenus. Atitinkamai, atšaukimo atsakai, ty adaptyviųjų atminties ląstelių aktyvinimas giminingo antigeno pagalba, organizuoja lokalizuotą įgimtą ir adaptyvų uždegimą.4 5 Remiantis naujausiu darbu, įrodančiu intratumorinių antivirusinių CD8+ T-ląstelių atsakų vėžio imunoterapijos naudingumą. , 6 7 iškėlėme hipotezę, kad naviko lokalizuota, vaikystėje su vakcina susijusi CD4+ T-ląstelių atšaukimas gali paveikti CD4+ T ląstelių priešnavikines funkcijas. PVSRIPO (dabar žinoma kaip „Lerapolturev“), gyva susilpninta 1 tipo polioviruso (Sabin) vakcina, modifikuota 2,8 tipo žmogaus rinoviruso vidine ribosomų patekimo vieta, parodė ankstyvus veiksmingumo įrodymus sergant pasikartojančia glioblastoma (rGBM)9 ir pasikartojančia. , nerezekuojama melanoma10 11 po intratumorinio (it) vartojimo. Skiepijimas nuo poliomielito viruso (poliomielito) yra standartinio vaikų imunizacijos grafiko dalis visame pasaulyje, naudojant gyvą susilpnintą (Sabin) arba inaktyvuotą (IPOL) vakciną. PVSRIPO kodavimo seka yra identiška 1 tipo Sabin vakcinai. Visiems pacientams, gydomiems PVSRIPO, buvo patvirtintas jau esantis serumo anti-PVSRIPO/poliomielito antikūnų reaktyvumas.{21}} Be to, klinikinis PVSRIPO panaudojimas reiškia, kad likus mažiausiai 1 savaitei iki jo skyrimo, PVSRIPO buvo suaktyvintas trivalenčiu IPOL, dėl kurio serumas PVSRIPO neutralizuojasi. antikūnų padaugėja visiems pacientams.{23}} Priešnavikinis poliomielito viroterapijos poveikis apima neoplastinių ląstelių pažeidimus ir mieloidinių ląstelių subletalinę virusinę infekciją, skatinančią ilgalaikį I tipo interferono (IFN) signalą.12–15 Antipoliomielito imuninė atmintis greičiausiai trukdo PVSRIPO replikacijai. naviko viduje, bet gali suteikti alternatyvų priešnavikinį veikimo mechanizmą, atšaukdamas poliomielito vakcinai specifines T ląsteles. Naudodami pelių melanomos ir krūties vėžio navikų modelius parodome, kad jau egzistuojantis imunitetas poliomielitui sustiprina priešnavikinį poliomielito viroterapijos veiksmingumą, nes suaktyvina CD4+ T ląstelių priešnavikines funkcijas. Poliomielito ar stabligės prisiminimas sukėlė žymią CD4+ T ląstelę, 2 tipo įgimtą limfoidinę ląstelę (ILC2) ir eozinofilų antplūdį; tarpininkaujant priešnavikiniam veiksmingumui per CD8+ T ląsteles ir eozinofilus nepriklausomai nuo CD40L. Pacientų, sergančių rGBM, gydytų Lerapolturevu (PVSRIPO), grupėse didesnis poliomielitą neutralizuojančių antikūnų kiekis prieš gydymą buvo susijęs su ilgesniu išgyvenimu, o pacientams, sergantiems melanoma, po gydymo Lerapolturev buvo pastebėta periferinė eozinofilų indukcija. Taigi, poliomielito viroterapija ir su vaikystės vakcina susiję antigenai koordinuoja I ir II tipo priešnavikinį imunitetą per CD4+ T-ląstelių atšaukimą.
cistanche papildo privalumai - padidina imunitetą
MEDŽIAGOS IR METODAI
Išplėstinė medžiaga ir metodai pateikiami papildomoje informacijoje internete.
Pelės, ląstelių linijos, virusai, poli(I:C) ir in vivo laipsnio antikūnai
(Tokijas, Japonija). Laukinis tipas (wt) (#000664), CD8 išmuštas (k/o) (#002665), B ląstelių k/o (#002288), OT-I (#003831) ir CD45.1 C57BL/6 pelės (nr. 002014) buvo iš Džeksono laboratorijos. OT-I ir CD45.1 C57BL/6 pelės buvo sukryžmintos, kad būtų sukurtos CD45.{18}}OT-I pelės. B16.F10 (Amerikos tipo kultūros kolekcija), E0771 (G. Palmeris, Duke universitetas, JAV), E0771hCD155, B16.F10hCD155 ir B16. F10.9hCD155-OVA ląstelės buvo auginamos daug gliukozės turinčioje Dulbecco modifikuotoje erelio terpėje (DMEM, Gibco), turinčioje 10 % galvijų vaisiaus serumo (FBS) (Sigma-Aldrich). B16. F10.9hCD155-OVA, B16-F10hCD155 ir E0771hCD155 ląstelės buvo gautos anksčiau.12 13 Buvo patvirtinta, kad visos ląstelių linijos yra mikoplazmos neigiamos. Laboratorinio laipsnio PVSRIPO, pelėms pritaikytas PVSRIPO (mRIPO) ir UV inaktyvuotas PVSRIPO (UVP) buvo generuojami HeLa ląstelėse, po to gautas supernatantas buvo išvalytas pagal dydį, kaip aprašyta anksčiau.{47}} PVSRIPO buvo naudojamas vakcinacijai; UVP buvo naudojamas poliomielito kapsido (kurio turi poliomielito vakcinai specifinių epitopų) poveikiui išskirti; mRIPO yra pelėms pritaikyta PVSRIPO versija, kuri buvo naudojama norint patikrinti visą poliomielito viroterapijos poveikį pelėms. VacciGrade didelės molekulinės masės poli(I:C) (InvivoGen) buvo paruoštas pagal gamintojo instrukcijas. In vivo laipsnio antikūnai prieš interleukiną (IL)-5 (TRFK5) arba kontrolinį (HRPN), CD4 (GK1.5) arba kontrolinį (LTF-2), CD40L (MR-1) arba kontrolinė (#BP0091) ir CD40 (FGK4.5) arba kontrolinė (2A3) buvo iš Bio X Cell.
Vakcinos, imunizacijos ir viruso titrai
Jei nenurodyta kitaip, vakcinos naudojant PVSRIPO (1 × 107 apnašas formuojantys vienetai (pfu)/pelei), stabligės toksoidą (Tet) (MilliporeSigma; 0,5 µg/pelei) arba hemocianiną su rakto skylute limpet (KLH, Sigma) -Aldrich; 100 µg/pelei) buvo skiedžiamas fosfatiniu buferiniu tirpalu (PBS) su Alhydrogel (1:1; InvivoGen); 50 µl vakcinos buvo sušvirkšta abipusiai į keturgalvius raumenis. Kiekvienai vakcinai vienašališkai buvo skiriamos kombinuotos IPOL ir Tenivac (Sanofi Pasteur) imunizacijos. Vakcina buvo sustiprinta po 14 dienų. Norint nustatyti viruso titrus, navikai buvo surinkti, pasverti ir mechaniškai homogenizuoti 1 ml PBS. Homogenatas buvo tiriamas apnašų tyrimu.16
Pelės naviko modelio eksperimentai
Cistanche tubulosa-Antitumor pranašumai
Implantuojant B16, 2 × 105 ląstelės buvo implantuotos po oda į pelių patinų ir patelių šonus; E0771 implantams 5 × 105 ląstelės buvo implantuotos į ketvirtą pelių patelių pieno riebalų pagalvėlę. hCD155-tg C57BL/6 pelės buvo naudojamos kartu su mRIPO, siekiant pakartoti poliomielito viroterapiją (aktyvi viruso replikacija ± jau esantis imunitetas); tuo tarpu Wt C57BL/6 pelės, kurios nėra atsparios poliomielitui, buvo naudojamos kartu su UVP, siekiant atskirti poliomielito atšaukimo padarinius. Navikai buvo gydomi DMEM arba PBS (nešiklis), mRIPO (1 × 107 pfu), UVP (1 × 108 iš anksto inaktyvuoti pfu), Tet (0,5 µg) ir (arba) poli (I: C) (30 µg), kaip nurodyta. figūrų legendose. Gydymo grupės buvo atsitiktinai suskirstytos pagal naviko tūrį (apkabos matavimai, naudojant lygtį L × W × W/2) pirmąją gydymo dieną. Pelės buvo numarintos, kai naviko tūris viršijo 1000 mm3, nebent prieš tai buvo išopėjimas (kuris buvo nedažnas ir nesusijęs su jokiu konkrečiu gydymu), tokiu atveju pelės buvo pašalintos iš tyrimo. Grupių dydžiai buvo pagrįsti galios vertinimais iš bandomųjų eksperimentų arba ankstesnės patirties.12 Naviko matavimai buvo atlikti aklai su it gydymo grupe, pradedant po paskutinės it terapijos / antigeno dozės. Pelės, kurių pradinis naviko tūris atsitiktinės atrankos metu buvo išskirtinis (1 SD nuo vidurkio), buvo neįtrauktos.
Srauto citometrinė navikų analizė
Augliai buvo surinkti laiko taškais, pažymėtais figūrų legendose ir atskirti RPMI{0}} terpėje (Thermo Fisher), turinčioje 100 µg/mL Liberase-TM (Sigma-Aldrich) ir 10 µg/mL DNRazės I (Roche) 30 minučių 37 laipsnių temperatūroje. , po to praleidžiama per 70 µM (Olympus Plastics) ląstelių sietelį, centrifuguojama ir plaunama PBS. Eksperimentams naudojant Zombie Aqua (BioLegend), ląstelės buvo nudažytos Zombie Aqua PBS (1:500) pagal gamintojo instrukcijas. Tada ląstelių suspensijos buvo inkubuojamos su 1:50 pelės TruStain FcX (BioLegend), o po to buvo atliktas specifinis dažymas PBS, kuriame yra 2% FBS. Tarpląstelinių transkripcijos faktorių, citokinų ir granzimo B dažymas buvo atliktas naudojant Foxp3 / Transkripcijos faktoriaus dažymo buferio rinkinį (Thermo Fisher) pagal gamintojo instrukcijas. Norėdami gauti informacijos apie naudojamas plokštes ir antikūnus, žr. papildomą informaciją internete. Duke Cancer Institute Flow Cytometry Core Facility Fortessa X20 duomenys buvo renkami; FCS failai buvo analizuojami naudojant FlowJo V.10 (BD Biosciences). Prijungimo strategijos pateikiamos papildomoje informacijoje internete; Izotipo kontrolė, fluorescencija atėmus vieną kontrolę ir palyginimas su nustatytomis neigiamomis ląstelių populiacijomis buvo naudojamos teigiamumui apibrėžti.
Su klinikiniais tyrimais susijusios analizės
PVSRIPO neutralizavimo titro tyrimai buvo atlikti pagal klinikinio tyrimo protokolą9, o abiejų rGBM klinikinių tyrimų vertės buvo naudojamos iš klinikinių tyrimų registravimo tyrimų. Anksčiau buvo pranešta apie I fazės rGBM (NCT01491893) poliomielito titrus, o išgyvenamumas buvo atnaujintas 2020 m. balandžio 29 d.; II fazės (NCT02986178) išgyvenamumas buvo atnaujintas 2021 m. balandžio 27 d. Melanomos (NCT03712358){8}} klinikinio tyrimo dalyvių baltųjų kraujo kūnelių procentas buvo nustatytas atlikus klinikinio pilno kraujo skaičiaus (CBC) tyrimus.
Statistinė analizė ir klinikinių tyrimų grupės
Tyrimui būdingi statistiniai testai nurodyti atitinkamose paveikslų legendose. Statistinei analizei atlikti buvo naudojamas GraphPad Prism V.8. Dviejų krypčių dispersijos analizė (ANOVA) buvo naudojama siekiant įvertinti naviko augimo skirtumą laikui bėgant tarp grupių, o ANOVA post hoc tyrimas buvo naudojamas daugkartiniams palyginimams įvertinti, nebent paveikslėlyje ir (arba) paveikslo legendoje nurodyta kitaip. Statistinė tikimybė (p<0.05) was used unless otherwise noted; all p values are two-tailed. All data points reflect individual mice or patients.
REZULTATAI
Imunizacija nuo poliomielito sustiprina poliomielito viroterapiją
Pirmiausia išbandėme antikūnų prieš poliomielitą gamybą (ty serokonversiją) pelėms, transgeniškoms žmogaus poliomielito viruso receptoriui CD155 (hCD{2}}tg), imunizuojant IPOL arba PVSRIPO (mėgdžioti 1 tipo Sabin) su alūno adjuvantu ir be jo ( Alhidrogelis; ALH), dalis licencijuotų vakcinų formulių (pvz., Pentacel, Pediarix, Kinrix).17 45 dienos nuo pirminės imunizacijos iki naviko implantacijos leido sukurti imunologinę atmintį.18 IPOL pasiekė ribotą serokonversiją, o PVSRIPO imunizacija sukėlė stipresnę vakciną. antikūnų atsakas; ALH sustiprino antikūnų atsaką į abu (internetinis papildomas paveikslas S1A, B). Norėdami apibendrinti aukštą anti-poliomielito antikūnų kiekį vėžiu sergantiems pacientams9, pasirinkome PVSRIPO + ALH (toliau – poliomielito) vakcinaciją, kad nustatytų esamo imuniteto nuo poliomielito vaidmenį PVSRIPO imunoterapijoje. Pelių navikų modeliai ir pelės, ekspresuojančios hCD155, anksčiau buvo sukurti, kad būtų galima patekti į PVSRIPO ir ją replikuoti, o PVSRIPO buvo pritaikytas pelių ląstelėms, kad būtų galima apibendrinti viruso replikaciją pelių vėžio ląstelėse (mRIPO).13 19 Ankstesniuose tyrimuose su poliomielito vakcina neskiepytais, singeniniai pelių navikų modeliai, vienai mRIPO injekcijai prireikė užprogramuoto ląstelių mirties baltymo-1 (PD1) / užprogramuoto mirties ligando-1 imunogeninio ovalbumino (OVA) baltymo blokados arba naviko ekspresijos, kad būtų užtikrintas ilgalaikis priešnavikinis poveikis .12 13 Tačiau mRIPO sukėlė ilgalaikį priešnavikinį veiksmingumą pelėms, imunizuotoms nuo poliomielito, sergant melanomos (B16) ir krūties (E0771) vėžio modeliais, palyginti su kontrolinėmis (KLH) imunizuotomis kolegomis (1A, B pav., S1C papildomas paveikslas internete) . Taigi ankstesnė imunizacija nuo poliomielito sustiprina priešnavikinį poliomielito viroterapijos veiksmingumą. Poliomielito viroterapija yra susijusi su T-ląstelių uždegimu naviko viduje.{22}} mRIPO replikacija navikuose buvo žymiai sumažinta nuo poliomielito imunizuotų pelių praėjus 2 dienoms ir 5 dienoms po gydymo (1C, D pav.), o tai atitinka daug neutralizuojančių antikūnų. titrai (internetinis papildomas paveikslas S1B). Tačiau po mRIPO terapijos pastebėjome padidėjusį bendrą imuninių ląstelių tankį (CD45.2+ ) nuo poliomielito imunizuotų pelių, daugiausia paaiškinama įprastų CD4+ T ląstelių ir mieloidinių ląstelių (CD11b+, Ly6GNeg, F4/80+ ) (1E pav., papildomi S2A, S3 paveikslai internete). Vėlesnė analizė atskleidė, kad padidėjęs CD11b+ mieloidinių ląstelių skaičius poliomielitu imunizuotose pelėse, gydomose mRIPO, buvo eozinofilai (1F pav.); dendritinių ląstelių (DC) lygis reikšmingai nepasikeitė. Padidėjęs naviko nekrozės faktoriaus (TNF), granulocitų makrofagų kolonijas stimuliuojančio faktoriaus (GM-CSF), IL-1 ir IL-17A lygis naviko homogenate ir didesnis IL-4 ir IL{ {51}} eksplantuotų naviką nusausinančių limfmazgių (TDLN) kultūrose iš poliomielitu imunizuotų pelių, gydytų mRIPO, po gydymo mRIPO buvo ryškus uždegiminis atsakas (papildomas S2B paveikslas internete). GM-CSF ir IL-5 yra žinomi eozinofilų gamybos ir prisitraukimo induktoriai20, o tai galbūt paaiškina eozinofilų antplūdį navikuose (1F pav.). Įprastos CD4+ T ląstelės ir eozinofilų infiltracija, reaguojant į poliomielitu imunizuotų pelių gydymą mRIPO, taip pat buvo stebimos atskirame modelyje E0771 (papildomas paveikslas internete S2C, D). Taigi, jau egzistuojantis imunitetas poliomielitui sustiprina uždegiminius atsakus į mRIPO, kurie yra susiję su padidėjusiu priešnavikiniu veiksmingumu.
Figure 1 Polio immunization potentiates antitumor and inflammatory efficacy of polio virotherapy. (A) Polio or KLH-immunized hCD155-tg mice bearing hCD155-tg B16 or E0771 tumors were treated with DMEM (control) or mRIPO. (B) Survival cut-off was tumor volume >1000mm3; žr. internetinį papildomą S1C paveikslą; atstovas iš dviejų eksperimentų. (C) D-H eksperimentų schema. (D) naviko homogenizuoto viruso titrai po mRIPO; ND, neaptikta. (E) 7-osios dienos navikų srauto citometrijos analizė (n=13/grupės imitacija; n=14/grupė mRIPO). (F) Srauto citometrijos analizė mieloidinėms ląstelėms ir dendritinėms ląstelėms (DC: Ly6CNeg, F480Neg, CD11c+, IA/IE+) 11 dieną. (G) Aktyvinimo žymenys TIL 7 ir 12 dienomis; buvo sujungti iš dviejų eksperimentų; parodytos kartotinės vidutinės KLH-DMEM reikšmės. (H) TIL transkripcijos faktoriaus ekspresija 12 dieną; tie patys mėginiai kaip 12 (A) diena; parodyti reprezentatyvūs trijų pakartojimų duomenys. Išsamesnius duomenis rasite papildomuose S1–S4 paveiksluose internete. (E–H) Tukey post hoc testas p< 0.05 versus mock controls (*) or all other groups (#). Data bars and brackets indicate mean+SEM. mRIPO, mouse adapted PVSRIPO; DMEM, Dulbecco's Modified Eagle Medium; IFN, interferon; i.t., intratumor; KLH, hemocyanin keyhole limpet; OVA, ovalbumin; TIL, tumor-infiltrating lymphocyte; TNF, tumor necrosis factor.
Padidinti T-ląstelių funkciniai fenotipai poliomielitu imunizuotose pelėse, gydomose mRIPO
CD8+ ir CD4+ naviką infiltruojantys limfocitai (TIL) poliomielitu vakcinuotose pelėse po gydymo mRIPO išreiškė didesnį intracelulinio IFN-, TNF ir granzimo B kiekį, o tai reiškia, kad pagerėjo funkcinė būklė (1G pav. , internetinis papildomas paveikslas S4). TIL iš poliomielitu imunizuotų pelių, gydytų mRIPO, taip pat padidino transkripcijos faktorių T-bet, GATA3 ir ROR t ekspresiją; taip pat IRF4, T-ląstelių aktyvacijos ir funkcijos promotoriaus, indukcija (1H pav.).21 T-ląstelių išsekimo žymenų PD1 ir T ląstelių imunoglobulino bei mucino domeno turinčio baltymo 3 (TIM3) ekspresija CD{{20 }} Sumažėjo poliomielito vakcinuotų pelių, gydytų mRIPO, T ląstelių auglyje ir TDLN (internetinis papildomas paveikslas S2E). T-ląstelių aktyvacijos / diferenciacijos žymenų pokyčiai atitiko E0771 ortotopinio krūties vėžio modelį (papildomi skaičiai S2F, G). Taigi, prisiminimo atsakas į poliomielitą padidina funkcinius fenotipus TIL po intratumorinės poliomielito viroterapijos.
Poliomielito ir stabligės atšaukimo antigenai tarpininkauja priešnavikiniam veiksmingumui
Reovirusui specifinės atminties CD8+ T ląstelės tiesiogiai naikina reovirusu užkrėstas vėžio ląsteles onkolitinio reoviruso terapijos metu22, o stabligei specifinės atminties CD4+ T ląstelės naikina vėžines ląsteles, užkrėstas Listeria, ekspresuojančia Tet.23 Arba, uždegiminiai atsakai, kuriuos sukelia T-ląstelių prisiminimas naviko mikroaplinkoje (TME), taip pat gali sustiprinti imuninį stebėjimą.{8}} Iškėlėme hipotezę, kad atšaukimo sukeltas uždegimas paaiškino paryškintą poliomielito viroterapijos priešnavikinį veiksmingumą nuo poliomielito vakcinuotoms pelėms nuo viruso replikacijos... reikalingas viruso antigeno gamybai naviko ląstelėse, onkolizei ir antivirusiniam uždegimui12 – buvo smarkiai sumažintas pelių, imunizuotų nuo poliomielito (1D pav.). Norėdami ištirti poliomielito atšaukimo priešnavikinį poveikį TME, naudojome modelį, kuriame nebuvo hCD155 (pelės ir augliai; wt C57BL/6 pelės), ir gydėme navikus UV inaktyvuotu PVSRIPO (UVP), kad išvengtume virusinės infekcijos / replikacijos. Įtraukėme palyginimus su kitu su vakcina susijusiu atšaukimo antigenu Tet, kuris, kaip buvo įrodyta, tarpininkauja kitų tyrimų metu.{18}} Gydymas UVP veikė priešnavikinį veiksmingumą tik pelėms, imunizuotoms nuo poliomielito; Gydymas Tet sukėlė trumpalaikį priešnavikinį poveikį Tet imunizuotoms pelėms (2A–C pav., 1 papildomas failas internete). Natūralūs atšaukimo atsakai atsiranda esant vietiniam įgimtam imuniniam atsakui į patogeno replikaciją. Siekiant tai imituoti, Tet arba poliomielitu imunizuotos pelės buvo gydomos vien poli (I: C) arba kartu su UVP arba Tet. Šiame kontekste ir UVP, ir Tet sukėlė ryškų priešnavikinį poveikį (2D pav.). Šie duomenys atskleidžia, kad atminties T ląstelių atšaukimas TME – nepriklausomai nuo jų giminingo antigeno ekspresijos / pagrindinio histokompatibilumo komplekso (MHC) pateikimo piktybinėse ląstelėse – tarpininkauja priešnavikiniam veiksmingumui.
CD4+ T ląstelės tarpininkauja atšaukimo antigenų priešnavikiniam veiksmingumui
Norėdami nustatyti, kuris (-i) adaptyvusis skyrius (-iai) paaiškina poliomielito atšaukimo atsakų priešnavikinį veiksmingumą (nepriklausomai nuo viruso replikacijos), palyginome jo gydymą su UVP CD8+ T-ląstelių ir B-ląstelių k/o pelėms, palyginti su wt. pelėms (3A pav.). CD4 k/o pelės nebuvo tiriamos dėl CD4+ T ląstelių vaidmens, suteikiant tiek CD8+ T-ląstelių, tiek B ląstelių atsaką į vakcinaciją. Kaip ir tikėtasi, imunizacija nuo poliomielito WT ir CD8 k/o pelėms, bet ne B ląstelių k/o pelėms, paskatino anti-PVSRIPO antikūnų gamybą (3B pav.). B16 naviko augimas buvo panašus kiekviename genetiniame kontekste po netikro gydymo. Palyginti su wt pelėmis, UVP priešnavikinis veiksmingumas nuo poliomielito imunizuotoms pelėms buvo ribotas CD8 k/o pelėms vėlesniais laiko momentais, bet buvo sustiprintas B ląstelių k/o pelėms (3C pav.; p=0.007wt vs B-ląstelių k/o UVP apdorotos kreivės, dvipusė ANOVA). Be to, B-ląstelių k/o neapsaugojo nuo eozinofilų ar CD4+ TIL antplūdžio (papildomas S6A paveikslas internete), susijusiam su poliomielito atšaukimu (1 pav.). Taigi, priešnavikinis poliomielito atšaukimo veiksmingumas iš dalies priklauso nuo CD8+ T ląstelių ir yra ribojamas B ląstelių. Šie stebėjimai, kartu su padidėjusiu CD4+ TIL kiekiu po mRIPO terapijos poliomielitu imunizuotoms pelėms (1E pav.), reiškia, kad CD4+ T ląstelės lemia poliomielito atšaukimo atsakų priešnavikinį veiksmingumą. Taigi toliau išbandėme poliomielito atšaukimo priešnavikinį poveikį su trumpalaikiu CD4+ T-ląstelių išeikvojimu ir be jo (3D pav., pradedant 1-dienos pirminiu apdorojimu). Nepaisant didelio CD4+ T ląstelių išeikvojimo TDLN, CD4+ T-ląstelių išeikvojimas auglyje buvo neišsamus ir pirmiausia sumažėjo reguliuojamųjų T ląstelių (Treg) populiacijos, o tai galbūt paaiškina nedidelį priešnavikinį poveikį ir padidėjusį CD. 8+ T-ląstelių tankis po CD4+ T-ląstelių išeikvojimo (3D pav., S6B paveikslas internete). Nepaisant to, CD4+ T-ląstelių išeikvojimas beveik sumažino UVP priešnavikinį veiksmingumą nuo poliomielito imunizuotoms pelėms ir užkirto kelią eozinofilų prisitraukimui reaguojant į UVP (3D pav.); CD4+ T-ląstelių išeikvojimas taip pat užkirto kelią granzimo B indukcijai CD8+ T ląstelėse po UVP apdorojimo (papildomas paveikslas internete S6B). Visi šie radiniai rodo, kad priešnavikinis ir uždegiminis poliomielito atšaukimo poveikis priklauso nuo CD{52}} T ląstelių. Patvirtinant, kad poliomielitui specifinių CD{55}} T ląstelių pakanka, kad sustiprintų poliomielito viroterapijos priešnavikinį veiksmingumą (su aktyvia viruso replikacija), CD4+ T ląstelių perkėlimas iš poliomielitu imunizuotų pelių blužnies, bet ne Tet, sustiprino mRIPO priešnavikinį veiksmingumą (3E pav., internetinis papildomas S6C paveikslas).
Antigenų terapija sustiprina priešnavikinę CD{0}} T ląstelių funkciją
Nustatyta, kad navikui specifinės CD4+ T ląstelės tiesiogiai naikina naviko ląsteles, 25–27 veikia citotoksinėmis įgimtomis imuninėmis ląstelėmis28 29 ir padeda efektorinėms CD8+ T ląstelėms.1–{ {7}} Remiantis pastaruoju, antinavikinis atsišaukimo antigenų poveikis buvo pastebėtas po pristatymo į TME (2 ir 3 pav.), iš dalies priklausė nuo CD8+ T ląstelių (3C pav.) ir CD{{12 }} TIL pagerėjo polifunkciniai fenotipai po mRIPO terapijos pelėms, skiepytoms nuo poliomielito (1G pav.).
2 pav. Poliomielito ir stabligės atšaukimo antigenai tarpininkauja priešnavikiniam veiksmingumui. B16 (A) arba E0771 (B) naviką turinčios pelės, imunizuotos poliomielitu arba Tet, buvo gydomos augliu Tet arba UV inaktyvuotu PVSRIPO (UVP). (C) Atitinkamo amžiaus negyvos arba Tenivac ir IPOL imunizuotos pelės buvo gydomos PBS, Tet arba UVP. (D) Pelės, imunizuotos, kaip nurodyta (A, B), buvo gydomos į naviką imitacija, poli (I: C) (30 µg), poli (I: C) + Tet arba poli (I: C) + UVP, kaip parodyta. (A–D) parodytas reprezentatyvaus eksperimento, sudaryto iš mažiausiai dviejų pakartojimų, vidurkis + SEM; žvaigždutės rodo Dunnett testą p< 0.05 versus all other groups; online supplemental figure S5 presents extended data. IPOL, inactivated polio vaccine; i.t., intratumor; PBS, phosphate buffered saline; UVP, UV-inactivated PVSRIPO; Tet, tetanus toxoid.
Taigi toliau siekėme nustatyti, ar poliomielitas (UVP) ir Tet atšaukimas pagerina priešnavikinių CD{0}} T ląstelių funkciją. Šiuo tikslu mes perkėlėme CD45.1+OT-I CD8+ T ląsteles (specifines OVA) į poliomielito arba Tet vakcinuotas peles ir nustatėme UVP ir Tet sukelto atšaukimo poveikį B{ {7}}OVA OT-I TIL fenotipai (4A pav.). Atšaukimo atsakų sukėlimas navikoje po UVP arba Tet buvo susijęs su uždelstu naviko augimu ir padidėjusia endogeninių CD45.{11}} ląstelių, eozinofilų ir įprastų CD4+ T ląstelių infiltracija į naviką; pažymėtina, kad priešnavikinių OT-I T ląstelių lygis nebuvo reikšmingai padidėjęs (4B pav.). Tačiau į naviką įsiskverbiančių OT-I CD8+ T ląstelių analizė atskleidė sustiprintą granzimą B, TNF ir IFN-; ir sumažėjusi terminalinio išsekimo žymeklio TIM3 ekspresija po poliomielito arba Tet atšaukimo (4C pav.). Buvo pastebėta skirtinga su Th susijusio transkripcijos faktoriaus ekspresija tiek OT-I, tiek endogeninėse T ląstelėse, įskaitant GATA3, ROR t ir BCL6 (4C pav.). OT-I TIL transkriptominė analizė po poliomielito prisiminimo atskleidė padidėjusią granzimų ekspresiją; genai, susiję su T ląstelių aktyvacija, funkcija ar homeostaze (Taok3, CD86, CCR5, Egr2, Adgre1, Vdr, IRF4 ir BCL6); genai, susiję su Th1 imunitetu (Ptger4, Fgl2); taip pat genai, susiję su Th2 imunitetu (Alox15, Ccl8 ir GATA3) (4D paveikslas, internetinis papildomas 8C paveikslas). Šiuos pastebėjimus patvirtinome ištyrę poliomielito prisiminimo poveikį endogeniniam TRP2-specifiniam (endogeniniam B16 antigenui) CD8+ TIL B16 navikuose be OVA ekspresijos. TRP2-specifiniai CD8+ TIL rodė granzimo B padidėjimą ir sumažino TIM3 ekspresiją po poliomielito atšaukimo, priklausomai nuo CD4+ T ląstelių (internetinis S9 paveikslas). Kartu šie duomenys rodo, kad po poliomielito atšaukimo pagerėjo priešnavikinių T ląstelių citolitinis ir funkcinis fenotipas. Funkcionaliai demonstruojant sustiprėjusį priešnavikinį T-ląstelių imunitetą po to, kai jis buvo atšauktas, T ląstelės, išskirtos iš juo gydytų pelių blužnies, primena antigeną (UVP vakcinuoti nuo poliomielito arba Tet vakcinuoti nuo poliomielito), sulėtino naviko augimą po perkėlimo į natūralų recipientą (4E pav.). CD4+ T-ląstelės padeda skatinti priešnavikinių CD8+ T-ląstelių funkciją iš dalies per CD40L signalus į CD40 antigeną pristatančiose ląstelėse1, bet taip pat gali padėti nuo priešnavikinių CD8+ T ląstelių nepriklausomybės. CD40L.31 CD40L blokada neapsaugojo nuo UVP sukeltų eozinofilų, įprastinių CD4+ T ląstelių ar priešnavikinio OT-I T antplūdžio; jis taip pat nesuveikė priešnavikinio poveikio (papildomas S10 paveikslas internete). Be to, CD40 ligavimas neapibendrino eozinofilų antplūdžio, pastebėto po atšaukimo antigenų terapijos (internetinis papildomas paveikslas S10). Taigi CD4+ T-ląstelių atšaukimas sustiprina priešnavikinių CD{77}} T ląstelių priešnavikinę funkciją nepriklausomai nuo CD40L.
3 paveikslas CD4+ T ląstelės tarpininkauja priešnavikiniam poliomielito atšaukimo veiksmingumui. (A) Dizainas eksperimentams (B, C). (B) ELISA tyrimas prieš poliomielito antikūnus kiekviename genetiniame fone 0 dieną (n =4/grupė). (C) Vidutinis naviko tūris + SEM po imitacinio gydymo (kairėje) arba imitacinio gydymo, palyginti su UVP (dešinės plokštės) kiekvienam genotipo kontekstui; p reikšmės gautos iš dvipusės dispersijos analizės (ANOVA) UVP palyginimo su kontroline grupe. (D) Pelės, imunizuotos poliomielitu, buvo gydomos imitacine arba UVP, kaip nurodyta (A), intraperitoninėmis (ip) IgG (kontrolinės) arba CD4+ T-ląsteles ardančio antikūno injekcijomis (250 µg kas 3 dienas, pradedant nuo dienos). −1); parodytas auglio infiltruojančių CD4 T ląstelių ir eozinofilų vidutinis naviko tūris+SEMir srauto citometrinė analizė; n=9 vienai grupei; p reikšmė yra iš dviejų krypčių ANOVA, lyginant UVP IgG ir UVP CD4; (*) nurodo Tukey post hoc p<0.05. (E) CD4+ T cells from spleens of mice immunized with Tet (control) or polio were adoptively transferred to naïve B16 tumor-bearing recipients 1day-prior to intratumor treatment with DMEM or mRIPO. Mean tumor volume+SEM for mock or mRIPO treated mice for each CD4+ T-cell transfer condition; p values are from two-way ANOVA comparison of the two curves shown in each panel. See online supplemental figure S6 for extended data. DMEM, Dulbecco's Modified Eagle Medium; i.t., intratumor; UVP, UVinactivated PVSRIPO; Tet, tetanus toxoid; mRIPO, mouse adapted PVSRIPO; Tconv, conventional CD4+ T cells.
4 pav. Intratumor atšaukimo antigenų terapija sustiprina priešnavikinę CD8+ T-ląstelių funkciją. (A) Pelėms, imunizuotoms nuo poliomielito arba Tet (Tenivac), buvo implantuoti B16-OVA navikai, po to buvo perkeltos aktyvuotos OT-I (CD45.1+ ) ląstelės ir apdorotos Tet arba UVP. . (B) imuninių ląstelių (B) ir TIL pogrupių (C) naviko tūrio ir srauto citometrijos analizės; internetiniame papildomame paveikslėlyje S7 pavaizduotas OT-I TIL blokavimas. (D) Buvo analizuojami OT-I TIL transkriptai, išskirti iš poliomielitu imunizuotų pelių praėjus 12 dienų po gydymo (DMEM arba UVP). Vidutinis normalizuotas skaičius rodomas nuorašų, kurie labai skyrėsi po klaidingo aptikimo dažnio p vertės koregavimo dviejuose atskiruose eksperimentuose (atitinkamai viršutiniame skydelyje, n=4/grupe ir n{14}}/grupe). ) arba su (C) susijusioms ypatybėms, kurios priartėjo prie reikšmingumo abiejuose duomenų rinkiniuose, įskaitant granzimus, IRF4, BCL6 ir GATA3 (apatinis skydelis); n=4 pakartojimai/grupė rodomi šilumos žemėlapyje. Internete pateikiamas papildomas paveikslas S8B ir C pateikia normalizuotą atskirų mėginių ir išplėstinių duomenų skaičių. (E) Naviko progresavimas naiviose pelėse, perkeltose su T ląstelėmis iš pelių blužnies A–C. Rodomas vidutinis naviko tūris+SEM; p reikšmė yra iš dvipusės dispersijos analizės. Visos duomenų juostos žymi vidurkį+SEM; šilumos žemėlapiai (C) buvo normalizuoti pagal nesuderinto antigeno kontrolės vidurkį; Tukey post hoc testas p<0.05 relative to all other groups (#) or respective DMEM control (*). (A–C) pooled results from two experiments; data in (E) were repeated twice. DMEM, Dulbecco's Modified Eagle Medium; TIM3, T cell immunoglobulin and mucin domain-containing protein 3; IFN, interferon; i.t., intratumor; OVA, ovalbumin; PD1, programmed cell death protein-1; UVP, UV inactivated PVSRIPO; Tet, tetanus toxoid; TIL, tumor-infiltrating lymphocytes; TNF, tumor necrosis factor.
Į naviką infiltruojantys eozinofilai žmogaus navikuose yra atvirkščiai susiję su Tregs
Kitų priešnavikinių imuninių efektorių įsijungimas per citokinų sekreciją yra pagrindinis nuo CD40L nepriklausomas CD4+ T ląstelių mechanizmas.31 32 Poliomielito kapsidas (UVP) ir viroterapija (mRIPO) nuolat sukelia stiprią eozinofilų infiltraciją. 1, 3 ir 4 pav.), priklausomai nuo CD4+ T ląstelių (3D pav.). Auglio eozinofilų antplūdis yra susijęs su imunoterapijos atsaku33–35, o naujausi darbai parodė, kad CD4+ T ląstelės naudoja priešnavikines eozinofilų funkcijas po PD1 blokados per IL-5.36 Pirmiausia paklausėme, ar eozinofilų tankis koreliuoja su CD4+ T ląstelių ar kitų žmogaus navikų TME ypatybių, užklausant visos vėžio duomenų rinkinį iš Vėžio genomo atlaso (TCGA).37 Naudojant CIBERSORT38 ląstelių infiltratų prognozę, 37 kiekvieno vėžio tipo mėginiai. buvo suskirstyti pagal aptiktų eozinofilų genų ekspresijos parašų buvimą ar nebuvimą (5A pav., S11,12 paveikslas internete); Sėklidžių lytinių ląstelių navikai (TGCT) ir Uveal melanoma (UVM) buvo neįtraukti dėl ribotų atvejų, kai buvo praturtintas eozinofilais (n<3). While limited association of eosinophil presence was observed with CD8+ or CD4+ T-cell enrichment, eosinophil presence was associated with significantly lower Treg signatures across all cancer types (figure 5A, online supplemental figure S11B, C). Eosinophil presence was associated with longer survival in Low-Grade Glioma (LGG), where eosinophil density was also the highest (online supplemental figure S11A), but not in other tumor types (figure 5B, online supplemental figure S11D). Importantly, significant differences in Treg density on stratification by eosinophil enrichment were observed within several cancer types, with heterogenous relationships between CD4+ and CD8+ T-cell density (online supplemental figure S12). Notably, eosinophil influx was associated with reduced Treg proportions after polio recall in our studies (figures 1E and 4B, online supplemental figure S2). Together, these data may reflect a role for eosinophils in countering tumor-infiltrating Tregs.
cistanche tubulosa - stiprina imuninę sistemą
Spustelėkite čia norėdami pamatyti Cistanche Enhance Immunity produktus
【Klauskite daugiau】 El. paštas:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692
II tipo priešnavikinis imunitetas po poliomielito imunizuotų pelių gydymo mRIPO
Toliau siekėme nustatyti eozinofilų infiltracijos reikšmę po poliomielito atšaukimo pelėms. Eozinofilai yra II tipo imuninio atsako mediatoriai, kurie vaidina antihelmintinį imunitetą ir alerginį uždegimą.39 Eozinofilų prisitraukimą gali sąlygoti kiti II tipo imuniniai mediatoriai, įskaitant ILC2, kurie koordinuoja Th2 atsaką tiesiogiai sąveikaudami su CD{4} } T ląstelės 40 ekspresuoja transkripcijos faktorių GATA3 ir eozinofilus skatinantį citokiną IL-5, tačiau neturi T ląstelių receptorių ekspresijos. Iš tiesų, GATA3+ CD3Neg ląstelių padaugėjo pelių navikuose po to, kai jas prisiminė (5C pav.), galbūt tai atspindi ILC2 antplūdį. Toliau išbandėme, kaip eozinofilai veikia poliomielito viroterapiją (mRIPO) nuo poliomielito imunizuotose pelėse, ir tiesiogiai matavome ILC2. Eozinofilų išeikvojimas (neutralizuojant IL-541) sumažino priešnavikinį mRIPO poveikį pelėms, turinčioms B16-OVAhCD155, nuo poliomielito imunizuotoms pelėms (5D pav., E); nesumažino CD4+ T ląstelių antplūdžio; tačiau blokavo Treg proporcijos sumažinimą (5F pav.). Be to, poliomielito viroterapija (mRIPO) sukėlė ILC2 antplūdį (5F pav.) ir pakeitė ILC2 fenotipus poliomielitu imunizuotose pelėse, kurių IL-5 sumažėjo ir PD1 bei granzimo B ekspresija buvo sukelta (5G pav.). Be vaidmens kontroliuojant eozinofilų kiekį, IL-5 taip pat yra labai svarbus B-ląstelių diferenciacijai.42 Tačiau kadangi priešnavikinis poliomielito atšaukimo poveikis nepriklauso nuo B ląstelių (3C pav.), ir dėl nuolat stipraus eozinofilų įsiskverbimo į poliomielitą, darome išvadą, kad IL-5 neutralizavimas sumažina priešnavikinį poliomielito atšaukimo poveikį dėl eozinofilų išeikvojimo. Visi šie duomenys rodo priešnavikinį eozinofilų vaidmenį ir ILC2 su pakitusiais fenotipais įdarbinimą po poliomielito atšaukimo ir reiškia, kad eozinofilai reguliuoja jo Treg tankį.
Jau esami antikūnai prieš poliomielitą yra susiję su ilgesniu išgyvenimu po gydymo Lerapolturev (PVSRIPO); periferinių eozinofilų padaugėja po Lerapolturevo
In trials of Lerapolturev in rGBM9 and melanoma,10 all patients were confirmed seropositive for anti-PVSRIPO neutralizing antibodies (from polio vaccine crossreacting antibodies) at the time of enrollment, a feature anticipated to correlate with pre-existing PVSRIPO specific CD4+ T-cell immunity. We queried both phase I (n=61)9 and II (n=72 at the time of data cut-off) clinical rGBM cohorts for the relationship between pretreatment Lerapolturev neutralizing antibodies and survival. In both cohorts, patients living >18 mėnesių po Lerapolturevo (tipinė rGBM išgyvenimo mediana yra ~ 9 mėnesiai)9 43 turėjo žymiai didesnį neutralizuojančių antikūnų titrus prieš gydymą (6A, B pav.). Siekdami išsiaiškinti, ar pacientams, gydomiems poliomielito viroterapija, gali atsirasti II tipo imuninis atsakas, išanalizavome išilginius CBC, gautus iš nedidelio Lerapolturev dozės didinimo tyrimo, sergant pasikartojančia, nerezekuojama melanoma (I fazė, n{6}}). .10 11 Šie duomenys atskleidė padidėjusį eozinofilų kiekį kraujyje po Lerapolturevo vartojimo 8 iš 12 pacientų (6C pav.), o tai sutapo su neutrofilų sumažėjimu (10 iš 12 pacientų). Šie radiniai gali rodyti, kad jau egzistuojantis imunitetas prisideda prie poliomielito viroterapijos priešnavikinio veiksmingumo ir kad poliomielito viroterapija sukelia II tipo imuninį atsaką vėžiu sergantiems pacientams.
5 pav. Eozinofilai atvirkščiai asocijuojasi su Tregs žmogaus navikuose; mRIPO sukelia II tipo priešnavikinį imunitetą nuo poliomielito imunizuotoms pelėms. (A) CIBERSORT atskyrė T-ląstelių pogrupius vėžio genomo atlaso vėžio tipuose (n=29), suskirstytuose pagal eozinofilų būklę, p reikšmės iš suporuoto t-testo. (B) ŠSD (išgyvenamumas) ± 95 % CI pagal eozinofilų būklę pagal vėžio tipą; buvo neįtraukti vėžio tipai, kurių mirčių skaičius yra mažesnis nei 20; p reikšmės yra iš Mantel-Cox log-rank testo. (C) GATA3+ CD3Neg ląstelių procentinė dalis pagal duomenis 4C paveiksle, p reikšmės yra iš nesuporuoto t-testo. (D) Dizainas (E–H): imunizuotos nuo poliomielito, B16-OVAhCD155 naviką turinčios hCD155-transgeninės pelės buvo gydomos imitacine arba PVSRIPO ± eozinofilų išeikvojimu (anti-IL-5 arba kontrolinis IgG, 1 mg per savaitę). Vidutinis naviko tūris + SEM (E), eozinofilų ir ILC2 tankis navikuose (F) ir naviką infiltruojančių ILC2 fenotipas (lineageNegCD90+ CD127+ CD25+ ), palyginti su neigiamu CD Rodomos 90+ langeliai palyginimui (G). (E) (*) Dvipusė dispersijos analizė p<0.05; (F–G) (*)Tukey's post hoc test p< 0.05 versus mock+IgG control. Online supplemental figure S11–S13 presents extended data. IL, interleukin; ILC2, type 2 innate lymphoid cell; i.p., intraperitoneal; i.t., intratumor; OVA, ovalbumin; PD1, programmed cell death protein-1; UVP, UV-inactivated PVSRIPO; Tet, tetanus toxoid; Tregs, regulatory T cells; mRIPO, mouse-adapted PVSRIPO.
Kinijos žolė cistanche augalas-Antitumor
DISKUSIJA
Šis darbas atskleidžia vėžio imunoterapijos potencialą, atsirandantį dėl naviko lokalizuoto CD{1}} T ląstelių atšaukimo. CD4+ T-ląstelių pagalba yra labai svarbi norint sukurti visiškai funkcionalų priešnavikinį CD8+ T-ląstelių imunitetą1 44 ir ilgalaikę atmintį.2 45 Priešnavikinis CD{10}} Po atšaukimo T ląstelės pasižymėjo didesniais polifunkciniais fenotipais, T-ląstelių perkėlimas iš atšaukimo antigenu gydytų pelių sulėtino naviko augimą anksčiau negyvusiems recipientams, o UVP priešnavikinis poveikis buvo silpnesnis poliomielitu imunizuotoms pelėms, kurioms trūko CD{14}} T ląstelių. Tai rodo, kad aprūpinimas CD4+ T-ląstelėmis padeda priešnavikinėms CD8+ T ląstelėms. Iš tiesų, pagalba CD4+ T-ląstelėms yra susijusi su išsekimo žymeklio reguliavimu, padidėjusia TNF/IFN-/granzimo B ekspresija ir Tbet/IRF4 indukcija „pagalbinėse“ efektorinėse T ląstelėse3 – visa tai įvyko sergant poliomielitu. imunizuotų pelių viroterapija. Tokia T-ląstelių pagalba greičiausiai yra daugialypė, įskaitant „licencijavimą“ DC; CD4+ citokinų (pvz., IL-21, IFN- ) T-ląstelių sekrecija; TME perprogramavimas; arba dėl teigiamo įdarbintų eozinofilų poveikio CD8+ T-ląstelių imuninei priežiūrai.36 46 Galbūt dėl poliomielitą neutralizuojančių antikūnų aktyvumo, ribojančio CD4+ T-ląstelių aktyvaciją, sumažinant atšaukimo antigeno prieinamumą. arba išlikimas, B ląstelės veikė priešnavikinį poliomielito atšaukimo poveikį. Mūsų tyrimuose poliomielito prisiminimas nuolat sukėlė stipresnį priešnavikinį ir uždegiminį atsaką nei Tet. Viena iš galimybių yra ta, kad tai yra dėl esamo imuniteto, sukelto po poliomielito ir Tet vakcinacijos, intensyvumo ir (arba) kokybės skirtumų mūsų modelių sistemose. Šiai galimybei patvirtinti, priešnavikinis Tet ir UVP poveikis buvo panašus, kai pelės buvo imunizuotos klinikinio laipsnio IPOL vakcina (2C pav.), kuri sukėlė silpnesnį imunitetą nuo poliomielito nei imunizacijos nuo poliomielito strategija (PVSRIPO+ALH), naudojama kitiems eksperimentams. mūsų tyrimas (internetinis papildomas paveikslas S1B). Tačiau taip pat gerai žinoma, kad antigeno pobūdis (pvz., epitopų tankis, kuris greičiausiai yra didesnis poliomielito kapside) gali turėti įtakos adaptyviam imuniniam atsakui. 47 48 Poliomielito prisiminimo priešnavikinis veiksmingumas tik iš dalies priklausė nuo CD8+ T ląstelių. Prisiminkite, kad antigenų terapija sukėlė eozinofilų ir ILC2 antplūdį, o eozinofilų išeikvojimas sumažino priešnavikinį poveikį poliomielitu imunizuotoms pelėms, gydomoms mRIPO. Pabrėžiant konteksto svarbą, buvo įrodyta, kad ir eozinofilai, ir ILC2 tarpininkauja protumorogeniniam poveikiui.{43}} Sergant astma, CD4+ T ląstelės įtraukia eozinofilus51 per ILC2.52 ILC2 ekspresuoja II klasės MHC ir skleidžia Th2 atsaką helmintų infekcijos.40 Sergant vėžiu, naviko eozinofilų infiltracija yra susijusi su imunoterapijos atsaku, 33 34 eozinofilai palaiko CD8+ T-ląstelių imuninę priežiūrą46, o ILC2 prisideda prie antinavikinio veiksmingumo prieš PD1. 35 53 Mūsų darbas rodo, kad CD4+ T ląstelės gali suaktyvinti eozinofilų ir galbūt ILC2 priešnavikines funkcijas. Kaip CD4+ T-ląstelių atšaukimas pritraukia eozinofilus į naviką, dar nėra iki galo nustatyta, tačiau naujausi darbai pateikia galimą paaiškinimą, rodydami, kad PD1 blokados metu IL-5 išskiria CD4+ T ląstelės skatina eozinofilų išplitimą ir jų prisitraukimą.36 Be to, naviko homogenatų ir TDLN eksplantų citokinų analizė po poliomielito viroterapijos taip pat atskleidė padidėjusį eozinofilų augimą skatinantį GM-CSF ir IL-5 nuo poliomielito imunizuotų pelių (internetinis papildomas paveikslas S2B). ).
6 pav. Jau esami antikūnai prieš poliomielitą yra susiję su ilgesniu išgyvenimu po gydymo Lerapolturev (PVSRIPO); periferinių eozinofilų padaugėja po Lerapolturevo. (A, B) Išankstinis gydymas Lerapolturev serumo neutralizavimo titrai buvo išmatuoti atliekant pasikartojančios glioblastomos (rGBM) I fazės (A, Ph1, NCT01491893) ir II fazės (B, Ph2, NCT02986178) tyrimus. Išgyvenamumas po atskyrimo pagal vidutinį neutralizacijos titrą (1:2000), kartu su vidutiniu + SEM titru išgyvenusiems pacientams
Taip pat aptikome atvirkštinį ryšį tarp naviko eozinofilų antplūdžio ir Treg tankio žmogaus navikuose, o gydymas antigenais sumažino Treg, kurie kovariavo su eozinofilų antplūdžiu, dalį, o tai reiškia abipusį eozinofilų vaidmenį kontroliuojant CD{0}} T-ląstelę. biologija. Norint tiksliai nustatyti, kaip eozinofilai tarpininkauja priešnavikiniam poveikiui po CD4+ T-ląstelių atšaukimo, ir ar ILC2 prisideda prie šio proceso, reikia atlikti tolesnius tyrimus. Vien tik eozinofilų tankio skirtumai daugeliui vėžio tipų nėra prognozuojami, išskyrus LGG, kur eozinofilų lygis taip pat buvo didžiausias tarp visų kitų navikų tipų. Įdomu tai, kad buvo pranešta apie neigiamą koreliaciją tarp periferinių eozinofilų ir gliomos laipsnio54; o kvėpavimo takų alergijos ir atopija yra susijusios su mažesniu gliomos dažniu.55 Mes naudojome poliarizuojančios Th2 vakcinacijos strategijas, atitinkančias klinikinį poliomielito ir stabligės vakcinų naudojimą, kad iššifruotume CD4+ T-ląstelių atkūrimo priešnavikinį potencialą. Nors kanoniškai Th1/Tc1, Th2/Tc2 ir Th17/Tc17 poliarizacijos yra viena kitą paneigiančios, antigenų terapija šiame kontekste sukėlė Th1 (CD8+ T-ląstelių įsitraukimą, Tbet/IFN ekspresiją CD{{). 20}} T ląstelės); Th2 (eozinofilų/ILC2 pritraukimas, GATA3 ekspresija CD4+ T ląstelėse); ir mažesniu mastu Th17 (ROR t ekspresija CD4+ /CD8+ T ląstelėse) poliarizuojančių savybių. Šie duomenys papildo vis daugiau įrodymų, kad įvairios CD4+ T-ląstelių poliarizacijos, be Th1, gali sukurti suderinamą ir produktyvų priešnavikinį imuninį atsaką.56–58 Mūsų darbas rodo, kad nors jau egzistuojantis imunitetas riboja viruso replikaciją viduje. navikas, jis sustiprina priešnavikinį poliomielito viroterapijos veiksmingumą. Šio darbo apribojimas yra tas, kad jis buvo atliktas pelių sistemose, kurios neužfiksuoja nei poliomielito / Tet atminties CD4+ T-ląstelių atsakų, nei žmonių TME heterogeniškumo. Be to, dėl spartaus naudojamų navikų modelių augimo gydymo pradžios metu navikai buvo palyginti maži. Nepaisant to, tai rodo, kad mūsų stebėjimai yra pritaikyti žmonėms, prieš gydymą poliomielitą neutralizuojančių antikūnų titrai buvo didesni pacientams, sergantiems rGBM, kurie gyveno ilgiau po poliomielito viroterapijos, o eozinofilų kiekis kraujyje padidėjo daugumos melanoma sergančių pacientų (8/12) po gydymo poliomielito viroterapija (Lerapolturevas). Kaip įspėjimas, aukštesni neutralizuojančių poliomielito antikūnų titrai gali atspindėti geresnę imuninę funkcinę būklę. Nors negalime atmesti šios galimybės, šie duomenys bent jau atskleidžia, kad jau esantis imunitetas netrukdo sėkmingai gydyti poliomielito viroterapija pacientams. Mūsų pastebėjimai taip pat rodo, kad norint sustiprinti priešnavikinį poliomielito atšaukimo poveikį, gali būti reikalingas daugkartinis Lerapolturev dozavimas. Iš tiesų, melanoma sergančių pacientų, gydytų Lerapolturevu, atsakas susibūrė į grupę, kuriai buvo skiriama daugiausiai gydymo būdų.10 Atsižvelgiant į didžiulę CD4+ T ląstelių svarbą vėžio imunoterapijoje,1 32 visomis pastangomis siekiama juos panaudoti. CD4+ T-ląstelių pagalba navikuose, pvz., naudojant CD40 agonistinius antikūnus59 arba peptidines vakcinas, įskaitant MHC II klasės epitopus44, kurios pagrindžia neoantigenui specifinį CD4+ ir CD8+ T. ląsteles.60 Mūsų darbas atskleidžia potencialą panaudoti vaikystėje vakcinai būdingas atminties CD4+ T ląsteles, kad būtų galima panaudoti daugialypius priešnavikinius CD4+ T ląstelių mechanizmus.
NUORODOS
1 Borst J, Ahrends T, Bąbała N ir kt. Cd4+ T ląstelės padeda vėžio imunologijoje ir imunoterapijoje. Nat Rev Immunol 2018;18:635–47.
2 Ahrends T, Busselaar J, Severson TM ir kt. CD4+ T ląstelės padeda sukurti atminties CD8+ T ląsteles, turinčias įgimtą ir nuo pagalbos nepriklausomą atmintį. Nat Commun 2019;10:5531.
3 Ahrends T, Spanjaard A, Pilzecker B ir kt. CD4+ t ląstelės padeda vykdyti citotoksinių t-ląstelių efektoriaus programą, įskaitant koinhibitorinių receptorių reguliavimą ir padidėjusį audinių invaziškumą. Imunitetas 2017;47:848–61.
4 Schenkel JM, Fraser KA, Beura LK ir kt. T ląstelių atmintis. nuolatinės atminties CD8 T ląstelės sukelia apsauginį įgimtą ir adaptyvų imuninį atsaką. Mokslas 2014;346:98–101.
5 Ariotti S, Hogenbirk MA, Dijkgraaf FE ir kt. T ląstelių atmintis. odos nuolatinės atminties cd8+t ląstelės sukelia viso audinio patogeno perspėjimo būseną. Mokslas 2014;346:101–5.
6 Rosato PC, Wijeyesinghe S, Stolley JM ir kt. Virusui būdingos atminties t ląstelės užpildo navikus ir gali būti pakartotinai panaudotos naviko imunoterapijai. Nat Commun 2019;10:567.
7 Çuburu N, Bialkowski L, Pontejo SM ir kt. Anti-citomegalovirusinio imuniteto panaudojimas vietinei imunoterapijai nuo solidžių navikų. Proc Natl Acad Sci USA 2022;119:e2116738119.
8 Gromeier M, Lachmann S, Rosenfeld MR ir kt. Tarpgeneriniai polioviruso rekombinantai, skirti piktybinei gliomai gydyti. Proc Natl Acad Sci USA 2000;97:6803–8.
9 Desjardins A, Gromeier M, Herndon JE 2nd ir kt. Pasikartojanti glioblastoma, gydoma rekombinantiniu poliomielito virusu. N Engl J Med 2018;379:150–61.
10 Beasley GM, Nair SK, Farrow NE ir kt. I fazės intratumorinio PVSRIPO tyrimas pacientams, sergantiems neoperuojama, gydymui atsparia melanoma. J Imunother Cancer 2021;9:e002203.
11 Beasley GM, Brown MC, Farrow NE ir kt. Multimodalumo analizė suteikia prognostinę naudą iš T-ląstelių infiltruoto naviko mikroaplinkos ir periferinės imuninės būklės pacientams, sergantiems melanoma. J Imunother Cancer 2022;10:e005052.
12 Brown MC, Mosaheb MM, Mohme M ir kt. Virusinė ląstelių infekcija naviko mikroaplinkoje tarpininkauja priešnavikinei imunoterapijai per selektyvią tbk1-irf3 signalizaciją. Nat Commun 2021;12:1858.
13 Brown MC, Holl EK, Boczkowski D ir kt. Vėžio imunoterapija su rekombinantiniu poliovirusu sukelia IFN dominuojančią dendritinių ląstelių ir naviko antigenui specifinių CTL aktyvaciją. Sci Transl Med 2017;9:eaan4220.
14 Holl EK, Brown MC, Boczkowski D ir kt. Rekombinantinis onkolitinis poliomielito virusas, PVSRIPO, turi stiprų citotoksinį ir įgimtą uždegiminį poveikį, tarpininkaujant žmogaus krūties ir prostatos vėžio ksenografijos modeliams. Oncotarget 2016;7:79828–41.
15 Yang Y, Brown MC, Zhang G ir kt. Poliomielito viroterapija nukreipta į piktybinės gliomos mieloidinį infiltratą su difuzine mikroglijos aktyvacija, apimančia CNS. Neuro Oncol 2023: noad052.
16 Brown MC, Bryant JD, Dobrikova EY ir kt. Virusinės, nuo 7-metil-guanozino dangtelio nepriklausomos transliacijos ir onkolizės indukcija, veikiant mitogeno aktyvuotai baltymų kinazei sąveikaujančiai kinazei, veikiant serino / arginino turtingai baltymų kinazei. J Virol 2014;88:13135–48.
17 Hawken J, Troy SB. Adjuvantai ir inaktyvuota poliomielito vakcina: sisteminga apžvalga. Vakcina 2012;30:6971–9.
18 Swain SL. Poliarizuotų th1 ir th2 atminties ląstelių generavimas ir išlikimas in vivo. Imunitetas 1994;1:543–52.
19 Mosaheb MMet al. Genetiškai stabilūs polioviruso vektoriai aktyvuoja dendritines ląsteles ir pagrindinį priešnavikinį CD8 T ląstelių imunitetą. Nat Commun 2020;11:524.
20 Blanchard C, Rothenberg ME. Eozinofilų biologija. Adv Immunol 2009; 101:81–121.
21 Mittrücker HW, Matsuyama T, Grossman A ir kt. Reikalavimas transkripcijos faktoriui lsirf/irf4 brandaus b ir t limfocitų funkcijai. Mokslas 1997;275:540–3.
22 Groeneveldt C, Kinderman P, van Stigt Thans JJC ir kt. Iš anksto sukeltas reovirusui specifinis t-ląstelių imunitetas padidina reoviruso terapijos priešvėžinį veiksmingumą. J Imunother Cancer 2022;10:e004464.
23 Selvanesan BCet al. Listeria tiekia stabligės toksoidinį baltymą į kasos navikus ir sukelia pelių vėžio ląstelių mirtį. Sci Transl Med 2022;14:eabc1600.
24 Tähtinen S, Feola S, Capasso C ir kt. Išnaudojant esamą imunitetą, siekiant sustiprinti onkolitinio vėžio imunoterapiją. Cancer Res 2020;80:2575–85.
25 Cachot A, Bilous M, Liu YC ir kt. Specifinės naviko citolitinės cd4 t ląstelės tarpininkauja imunitetui prieš žmogaus vėžį. Sci Adv 2021;7:eabe3348.
26 Oh DY, Kwek SS, Raju SS ir kt. Intratumorinės cd4+ t ląstelės tarpininkauja priešnavikiniam citotoksiniam poveikiui žmogaus šlapimo pūslės vėžiui. Cell 2020; 181:1612–25. 27 Quezada SA, Simpson TR, Peggs KS ir kt. Į naviką reaguojančios CD4 (+) T ląstelės sukuria citotoksinį aktyvumą ir išnaikina didelę nusistovėjusią melanomą po perkėlimo į limfopeninius šeimininkus. J Exp Med 2010;207:637–50.
28 Perez-Diez A, Joncker NT, Choi K ir kt. Cd4 ląstelės gali būti veiksmingesnės atmetant naviką nei CD8 ląstelės. Kraujas 2007;109:5346–54.
29 Corthay A, Skovseth DK, Lundin KU ir kt. Pirminis priešnavikinis imuninis atsakas, kurį sukelia CD4+ T ląstelės. Imunitetas 2005;22:371–83.
30 Church SE, Jensen SM, Antony PA ir kt. Navikui specifinės CD4+ T ląstelės palaiko efektorines ir atminties naviko specifines CD8+ T ląsteles. Eur J Immunol 2014;44:69–79.
31 Lu Z, Yuan L, Zhou X ir kt. Cd40-Nepriklausomi T ląstelių keliai padeda pradėti CD8 (+) citotoksinius T limfocitus. J Exp Med 2000;191:541–50.
32 Hung K, Hayashi R, Lafond-Walker A ir kt. Pagrindinis CD4 (+) T ląstelių vaidmuo priešnavikiniame imuniniame atsake. J Exp Med 1998;188:2357–68.
33 Simon SCS, Hu X, Panten J ir kt. Eozinofilų kaupimasis numato atsaką į melanomos gydymą imuninės kontrolės taško inhibitoriais. Onkoimunologija 2020; 9: 1727116.
34 Mackensen A, Meidenbauer N, Vogl S ir kt. Įvaikintos T-ląstelių terapijos, naudojant antigenui specifines CD8+ T ląsteles, skirtas metastazavusia melanoma sergančių pacientų gydymui, I fazės tyrimas. J Clin Oncol, 2006; 24:5060–9.
35 Jacquelot N, Seillet C, Wang M ir kt. Bendrai slopinančios molekulės PD-1 blokada atskleidžia nuo ILC2- priklausomą priešnavikinį imunitetą sergant melanoma. Nat Immunol 2021; 22:851–64.
36 Blomberg OS, Spagnuolo L, Garner H ir kt. IL-5-gaminančios cd4+ t ląstelės ir eozinofilai bendradarbiauja, kad sustiprintų atsaką į imuninės kontrolės taško blokadą sergant krūties vėžiu. Cancer Cell 2023;41:106–23.
37 Thorsson V, Gibbs DL, Brown SD ir kt. Vėžio imuninis kraštovaizdis. Imunitetas 2018;48:812–30.
38 Newman AM, Steen CB, Liu CL ir kt. Ląstelių tipo gausos ir ekspresijos nustatymas iš masinių audinių naudojant skaitmeninę citometriją. Nat Biotechnol 2019;37:773–82.
39 Lloyd CM, Snelgrove RJ. 2 tipo imunitetas: plečiame savo požiūrį. Sci Immunol 2018;3:eaat1604.
40 Oliphant CJ, Hwang YY, Walker JA ir kt. MHCII tarpininkaujantis dialogas tarp 2 grupės įgimtų limfoidinių ląstelių ir cd4(+) t ląstelių stiprina 2 tipo imunitetą ir skatina parazitinių helmintų išstūmimą. Imunitetas 2014;41:283–95.
41 Moynihan KD, Opel CF, Szeto GL ir kt. Didelių nusistovėjusių pelių navikų naikinimas kombinuota imunoterapija, kuri apima įgimtą ir adaptyvų imuninį atsaką. Nat Med 2016;22:1402–10.
42 Kouro T, Takatsu K. IL-5- ir eozinofilų sukeltas uždegimas: nuo atradimo iki gydymo. Int Immunol 2009;21:1303–9.
43 Barthel FP, Johnson KC, Varn FS ir kt. Suaugusiųjų difuzinės gliomos išilginės molekulinės trajektorijos. Gamta 2019;576:112–20.
44 Alspach E, Lussier DM, Miceli AP ir kt. MHC-II neoantigenai formuoja naviko imunitetą ir atsaką į imunoterapiją. Gamta 2019;574:696–701.
45 Laidlaw BJ, Craft JE, Kaech SM. Daugialypis CD4 (+) T ląstelių vaidmuo CD8 (+) T ląstelių atmintyje. Nat Rev Immunol 2016;16:102–11.
46 Arnold IC, Artola-Boran M, Gurtner A ir kt. GM-CSF-IRF5 signalizacijos ašis eozinofiluose skatina priešnavikinį imunitetą aktyvindama 1 tipo T ląstelių atsaką. J Exp Med 2020;217:e20190706.
47 Bachmann MF, Rohrer UH, Kündig TM ir kt. Antigenų organizavimo įtaka B ląstelių reagavimui. Mokslas 1993;262:1448–51.
48 Link A, Zabel F, Schnetzler Y ir kt. Įgimtas imunitetas tarpininkauja folikuliniam dalelių, bet netirpių baltymų antigenų transportavimui. J Immunol 2012; 188:3724–33.
49 Trabanelli S, Chevalier MF, Derré L ir kt. Ilc2 priešnavikinis ir priešnavikinis vaidmuo. Semin Immunol 2019; 41:101276.
50 Simon SCS, Utikal J, Umansky V. Priešingi eozinofilų vaidmenys sergant vėžiu. Cancer Immunol Immunother, 2019; 68:823–33.
51 Lloyd CM, Hessel EM. T ląstelių funkcijos sergant astma: daugiau nei tik T (H) 2 ląstelės. Nat Rev Immunol 2010;10:838–48.
52 Smith SG, Chen R, Kjarsgaard M ir kt. Padidėjęs aktyvuotų 2 grupės įgimtų limfoidinių ląstelių skaičius pacientų, sergančių sunkia astma ir nuolatine kvėpavimo takų eozinofilija, kvėpavimo takuose. J Allergy Clin Immunol 2016; 137:75–86.
53 Moral JA, Leung J, Rojas LA ir kt. Ilc2S sustiprina PD-1 blokadą, aktyvindamas audinių specifinį vėžio imunitetą. Gamta 2020;579:130–5.
54 Huang Z, Wu L, Hou Z ir kt. Eozinofilai ir kiti periferinio kraujo biomarkeriai klasifikuojant gliomą: preliminarus tyrimas. BMC Neurol 2019;19:313.
55 Ostrom QT, Lu D, Lu R ir kt. Autoimuniteto ir atopijos paplitimas JAV suaugusiesiems, sergantiems glioblastoma ir meningioma. Neuro Oncol 2022;24:1807–9.
56 Tuzlak S, Dejean AS, Iannakone M ir kt. Padeda pakeisti ląstelių poliarizaciją iš pavienių citokinų į kompleksą. Nat Immunol 2021;22:1210–7.
57 Nishimura T, Iwakabe K, Sekimoto M ir kt. Skirtingas antigenui specifinių T pagalbininkų 1 tipo (Th1) ir Th2 ląstelių vaidmuo naviko likvidavime in vivo. J Exp Med 1999;190:617–27.
58 Lorvik KB, Hammarström C, Fauskanger M ir kt. Adoptyvus navikui būdingų Th2 ląstelių perkėlimas išnaikina navikus, sukeldamas in situ uždegiminį imuninį atsaką. Cancer Res 2016;76:6864–76.
59 Vonderheide RH. Cd40 agonistų antikūnai vėžio imunoterapijoje. Annu Rev Med 2020;71:47–58. 60 Ott PA, Hu Z, Keskin DB ir kt. Imunogeninė asmeninė neoantigeninė vakcina pacientams, sergantiems melanoma. Gamta 2017;547:217–21.
