Iridoidiniai ir acikliniai monoterpeno glikozidai, kankanozidai L, M, N, O ir P iš Cistanche Tubulosa

Cistanche tubulosa(SCHRENKAS) R. WGERAI(Orobanchaceae) yra daugiametis parazitinis augalas, augantis ant šaknųSalvadoraarbaCalotropisrūšys, paplitusios Šiaurės Afrikoje, Arabijoje ir Azijos šalyse.1) Šio augalo stiebai (japoniškai Kanka-nikujuyou) tradiciškai buvo naudojamiimpotencijos, nevaisingumo, lumbago ir kūno silpnumo gydymastaip pat kraujotaką skatinanti priemonė.1,2) Per mūsų tyrimus apie biologiškai aktyvias sudedamąsias dalis iš stiebųC. tubulosa, 3-6) anksčiau pranešėme apie dvidešimt keturis feniletanoidinius aminoglikozidus, įskaitant kankanosidus H1, H2, I, J1, J2, K1, ir K2ir du acilinti oligocukrai iš šviežių stiebųC. tubulosa. 5,6) Be to, pagrindinisfeniletanoidiniai glikozidai, echinakozidas, akteozidas ir izoakteozidasNustatyta, kad jie slopina aspartato aminotransferazės (AST) ir alanino aminotransferazės (druskos) koncentracijos padidėjimą pelių pažeistose kepenyse, kurias sukėlėD-galaktozaminas (D-GalN)/ lipopolisacharidas 25-100 mg/kg dozėmisper os(p.o.). Taip pat buvo išaiškinti struktūriniai feniletanoidinių glikozidų reikalavimai hepatoprotekciniam aktyvumui.5) Šiame tęstiniame tyrime apie sudedamąsias dalis šviežiuose stiebuoseC. tubulosa, mes toliau išskyrėme vienuolika iridoidinių glikozidų, įskaitant kankanosidus L (1), M (2), ir N (3), septyni acikliniai monoterpeno glikozidai, įskaitant kankanosidus O (4) ir P (5), trys fenilpropanoidai ir keturi lignanai. Šiame darbe nagrinėjama penkių naujų junginių išskyrimas ir struktūros išaiškinimas (1-5).

NATŪRALUS CISTANCHE TUBULOSA, SUMAŽINANTIS LYTINES DISFUNKCIJAS PHGS75% ECH 30% ACT 12%

Švieži C. tubulosa stiebai (auginami Urumqi, Sindziango provincijoje, Kinijoje) buvo ekstrahuoti metanoliu su grįžtamu šaldytuvu, kad gautų metanolio ekstraktą (8,36 % iš šviežių stiebų). Iš metanolinio ekstrakto H2O ir MeOH eliuuotos frakcijos (atitinkamai 5,63 % ir 2,73 %) buvo gautos naudojant Diaion HP-20 kolonėlės chromatografiją (H2O→MeOH), kaip aprašyta anksčiau.5) MeOH išeliuuota frakcija SiO2 ir ODS kolonėlės chromatografijos ir galiausiai HPLC, kad būtų gauti kankanosidai L (1, 0.0026 %), M (2, 0).{27 }}001 %), N (3, 0.00{{60}}7 %), O (4, 0.0{{90}}2{{105}}%) ir P (5, 0 .0002%), 6-deoksikatalpolas3,7) (6, 0.197%), barciozidas3,7) (7, { {147}}.0583 %), glurozidas3,7) (8, 0.0443 %), kankanoizidas A3) (9, 22,3 mg, 0,0010 %), musaenozido rūgštis3,7) ( 10, 0,0056 %), 8- epilogano rūgštis3,8) (11, 0,0023 %), 8-epideoksilogano rūgštis3,7) (12, 0,0004 %), genipozido rūgštis3,7) (13, 0,0040 %) ), kankanosidas E3) (14, 0,0026%), (2E,6Z)-8-bD-gliukopiranoziloksi-2, 6-dimetil-2, 6-oktadieno rūgštis3 ,9) (15, 31,0 mg, 0,0014%), (2E,6E)-3,7-dimetil-8-hidroksioktadien-1-il-ObD-gliukopiranozidas10) (16, 0,0082 %), 8-hidroksigeraniolis 8-O-bD-gliukopiranozidas11) (17, 0,0044 %), betulalbusidas A12) (18, 0,0004 %), spygliuočiai13) (19, 0,0002 %)), (švirkštas 13 20, 0,0015 %), sinapic aldehidas 4-ObD-gliukopiranozidas14) (21, 0,0001 %), ( )-pinorezinolis ObD-gliukopiranozidas4,8,15) (22, 0,0010 %), eukominas A3, 0,20. %), izoeukominas A17) (24, 0,0010 %) ir ( )-siringarezinolis ObD-gliukopiranozidas4,8,18) (25, 0,0044 %).

Kankanozidų L (1), M (2) ir N (3) struktūros

Kankanozidas L (1) buvo gautas kaip balti milteliai su neigiamu optiniu sukimu ([a]D 26 - 45,7 MeOH). Jo IR spektras parodė stiprią sugerties juostą ties 3433 ir 1{{20}}80 cm- 1, o tai rodo glikozido fragmentą. Greitojo atomo bombardavimo (FAB)-MS 1 paleidimas teigiamų ir neigiamų jonų režimais parodė kvazimolekulinių jonų smailes, atitinkamai esant m/z 371 [M Na] ir 347 [M-H]-, o molekulinė formulė buvo nustatyta kaip C15H24O9 didelės raiškos FABMS matavimu. Rūgštinė 1 hidrolizė su 1,0 M druskos rūgštimi (HCl) atpalaidavo D-gliukozę, kuri buvo identifikuota HPLC analize naudojant optinio sukimosi detektorių.{22}}) 1 H- ir 13C-BMR spektrai (CD3OD, lentelės) 1, 2), kurie buvo priskirti įvairiais BMR eksperimentais,19) parodė signalus, priskirtinus keturiems metilenams [d 1,43 (1H, br dd, J= apie 5, 13 Hz, 4a-H), 1,73 ( 1H, br dd, J= apytiksliai 12, 14 Hz, 6a-H), 1,85 (1H, m, 4b-H), 1,93 (1H, br dd, J= apytiksliai 8). , 14 Hz, 6b-H), 3,50 (1H, ddd, J= 2,4, 12,5, 13,0 Hz, 3a-H), 3,83 (1H, br dd, J=

apytiksliai 5, 13 Hz, 3b-H), 3,78, 4,12 (kiekviena 1 H, abu d, J= 13,1 Hz, 10-H2)], du metinai [d 2,15 (1H, dd, J)=7.2, 8,9 Hz, 9-H) ir 2,23 (1H, m, 5-H)] ir acetalio grupę [d 4,81 (1H, d, J{{28) }},9 Hz, 1-H)] kartu su b-gliukopiranozilo fragmentu [d 4,70 (d, J= 7,9 Hz, 1 -H)]. Kaip parodyta 1 pav., 1 H–1 H koreliacinės spektroskopijos (1 H–1 H COSY) eksperimentas 1 parodė, kad yra dalinių struktūrų, parašytų paryškintomis linijomis. Atliekant heterobranduolinės kelių jungčių koreliacijos (HMBC) eksperimentą su 1, buvo pastebėtos ilgalaikės koreliacijos tarp šių protonų ir anglies (1-H ir 3-C, 8-C; {{ 49}}H ir 7-C; 8-C, 10-H ir 8-C; }}H2 ir 7-C, 8-C; 1 -H ir 1-C), kaip parodyta 1 pav. Toliau santykinė 1 stereostruktūra buvo apibūdinta fazės jautrumu Branduolinės Overhauserio patobulinimo spektroskopijos (fazei jautrus NOESY) eksperimentas, kuris parodė NOE koreliaciją tarp šių protonų porų (1-H ir 3aH; 3a-H ir 4a-H; 3b-H ir 4b-H; 4b-H). ir 5-H, 9- H ir 6b-H, 9-H ir 7-H; ir 10-H2), kaip parodyta 1 pav. 1 H- ir 13C-BMR spektrai buvo dedami su pagrindinės iridoidinės sudedamosios dalies 6-deoksikatalpolo (6) spektrais, išskyrus signalus, į sočiąją d-laktolio dalį. Galiausiai 6 hidrinimas davė 1, todėl kankanosido L stereostruktūra buvo išaiškinta kaip 3,4- dihidro-6-deoksikatalpolas (1).

NATŪRALUS CISTANCHE TUBULOSA, KAD PAŠALINGINTI PAŠTO PAŽADINIMO SUTRIKIMĄ PHGS75% ECH 30% ACT 12%

Kankanozidas M (2) buvo gautas kaip balti milteliai su neigiamu optiniu sukimu ([a]D 26 - 18,7 MeOH). IR spektras 2 parodė sugerties juostas ties 3433, 1736, 1655 ir 1076 cm- 1, priskirtinas hidroksilo, d-laktono, olefino ir eterio dalims. Teigiamų jonų FAB-MS spektras 2 parodė kvazimolekulinių jonų smailę esant m/z 353 [M Na], o molekulinė formulė buvo nustatyta kaip C15H22O8, atlikus didelės skiriamosios gebos teigiamų jonų FAB-MS matavimą. 2 rūgštinė hidrolizė su 1,0 M HCl atpalaiduota D-gliukoze. 2 1H ir 13CNMR spektrai (CD3OD, 1, 2 lentelės) rodė signalus, priskirtinus keturiems metilenams [d 1,66, 2,11 (kiekvienas 1H, abu m, 4-H2), 2,15, 2,75 (kiekvienas 1H, abu m, 6-H2), 4,29 (1H, ddd, J= 2.8, 8,4, 14,3 Hz, 3b-H), 4,32, 4,51 (kiekvienas 1H, abu d, J{{61 }},1 Hz, 10-H2), 4,35 (1H, ddd, J= 3.1, 6,7, 14,3 Hz, 3a-H)], du metinai [d 2,97 (1H, m, 5-H), 3,82 (1H, br s, 9-H)], olefinas [d 5,94 (1H, m, 7-H)] ir sočiųjų laktonų grupė (d C 174,9) kartu su bD-gliukopiranozilo fragmentu [d 4,32 (1H, d, J= 7,9 Hz, 1 -H)]. Kaip parodyta 1 pav., 1 H–1 H COZY eksperimentas ant 2 parodė, kad yra dalinių struktūrų, parašytų paryškintomis linijomis, o HMBC eksperimente buvo pastebėtos ilgalaikės koreliacijos tarp šių protonų ir anglies porų ({{ 103}}H ir 1-C; 9-C; 1-C; {{110} }}H2 ir 7-C, 8-C, 9-1 -H ir 10-C). Santykinė 2 stereostruktūra buvo apibūdinta fazei jautriu NOESY eksperimentu, kuris parodė NOE koreliaciją tarp šių protonų porų (3a-H ir 4a-H; 3b-H ir 4b-H; 4b-H ir 5- H; 5-H ir 6b-H, 9-H), kaip parodyta 1 pav. Taigi, 2 stereostruktūra buvo išaiškinta, kaip parodyta.

Kankanozidas N (3) buvo išskirtas kaip balti milteliai su neigiamu optiniu sukimu ([a]D 25 - 24.6 MeOH). Teigiamų jonų FAB-MS 3, kvazimolekulinio jonų smailė buvo pastebėta esant m/z 371 [M Na]. Molekulinė formulė C16H28O8 buvo nustatyta didelės raiškos FAB-MS matavimu. 3 rūgštinė hidrolizė su 1.{14}} M HCl atpalaiduota D-gliukoze. 1H ir 13C-BMR duomenys (CD3OD, 1, 2 lentelės) parodė signalus, priskirtinus metilui [d 1.07 (3H, d, J= 7.2 Hz, {{ 28}}H3)], keturi metilenai {d 1,37, 1,87 (kiekvienas 1H, abu m, 7-H2), 1,65, 1,81 (kiekvienas 1H, abu m, 6-H2), [3,65 ( 1H, dd, J= 9,1, 9,8 Hz), 3,90 (1H, dd, J= 5,9, 9,8 Hz), 11-H2] ir [3,70 (1H, dd, J= 3,3, 12,0 Hz), 3,88 (1H, m), 3-H2]}, keturi metanai [d 1,69 (1H, m, 4-H), 1,75 (1H, m, 9-H), 2,06 (1H, m, 8-H), 2,16 (1H, m, 5-H)] ir pusacetalio grupė [d 4,67 ( 1H, d, J= 7,4 Hz, 1-H)] kartu su bD-gliukopiranozilo fragmentu [d 4,26 (1H, d, J= 7,9 Hz, {{101) }}H)]. 3 iridoidinė struktūra buvo išaiškinta 1 H–1 H COZY ir HMBC eksperimentais, o santykinė stereostruktūra buvo apibūdinta fazei jautriu NOESY eksperimentu, kaip parodyta 1 pav. Taigi, 3 stereostruktūra buvo išaiškinta, kaip parodyta.

NATŪRALUS CISTANCHE TUBULOSA SPRENDIMAS SEKSUALIAI PROBLEMAI PHGS75% ECH 30% ACT 12%

Kankanozidų O (4) ir P (5) struktūros

Kankanozidai O (4) ir P (5), C16H26O8 taip pat buvo gauti kaip balti milteliai su neigiamais optiniais sukimais (4: [a]D 23 - 26.1; 5: [a]D 21 - 32). 7 abu MeOH). 4 ir 5 IR spektrai rodė sugerties juostas ties 3433, 1696, 1647 ir 1076 cm- 1 4 ir 3434, 1701, 1647 ir 1{ {95}}76 cm- 1 5, priskiriamos glikozidinėms, karboksilo ir olefino funkcijoms. Jų UV spektrai parodė bendrą sugerties maksimumą ties 217 nm, o tai rodo, kad abiejuose yra a, b-nesočiosios karboksirūgšties liekanos. Rūgštinė 4 ir 5 hidrolizė atpalaidavo D-gliukozę, o fermentinės hidrolizės būdu su gliukozidaze 4 ir 5 gavo (2E,6E)-8-hidroksi-2,6-dimetilą{{37} },6-oktadieno rūgštis20) (4a) ir (2E,6E)-8-hidroksi-3,7- dimetil-2,{{ 47}}oktadieno rūgštis21) (5a). 4 1H ir 13C-BMR duomenys (CD3OD, 2, 3 lentelės) parodė signalus, priskirtinus dviem metilams [d 1,71 (3H, br s, 10-H3), 1,81 (3H, d, J{{). 66}},0 Hz, 9-H3)], trys metilenai {d 2,19 (2H, brt, J= apie 7 Hz, 5-H2), 2,36 (2H, m, 4-H2), [4,24 (1H, dd, J= 7,6, 12,0 Hz), 4,33 (1H, dd, J= 6,2, 12,0 Hz), { {96}}H2]} ir du tripakeisti olefinai [d 5,41 (1H, ddd, J= 1.2, 6,2, 7,6 Hz, 7-H), 6,75 (1H, tq, J{ {111}}.2, 1,0 Hz, 3-H)] kartu su b-Dgliukopiranozilo dalimi [d 4,34 (d, J= 7,8 Hz, 1 -H)]. Palyginus anglies signalus 13C-BMR spektre 4

su 4a nurodytais glikozilinimo poslinkis buvo pastebėtas 8- padėtyje (d C 4: 65,5; 4a: 59,4). Gliukozido jungties padėtis taip pat buvo patvirtinta HMBC eksperimentais, kaip parodyta 2 pav. Taigi, 4 stereostruktūra buvo išaiškinta kaip (2E,6E)-8-bD-gliukopiranoziloksi-2,{{ 16}}dimetil-2,6-oktadieno rūgštis. Kita vertus, 5 1H ir 13C-BMR duomenys (CD3OD, 2, 3 lentelės) parodė, kad yra (2E,6E)-8-hidroksi{{30}} ,7-dimetil-2,6-oktadieno rūgšties fragmentas [d 1,70 (3H, br s, 10-H3), 2,14 (3H, br s, 9- H3), 2,24 (2H, m, 4-H2), 2,27 (2H, m, 5-H2), 4,05, 4,20 (kiekvienas 1 H, abu br d, J= apytiksl. 12 Hz, 8-H2), 5,47 (1H, tq, J= 7.1, 0,9 Hz, 6-H), 5,67 (1H, br s, 1-H )] kartu su bD-gliukopiranozilo dalimi [d 4,23 (d, J= 7.7 Hz, 1 -H)]. BD-gliukopiranozilo fragmento jungiamumas 5 buvo išaiškintas remiantis HMBC eksperimentais, kaip parodyta 2 pav. Be to, buvo pastebėtas tipiškas glikozilinimo poslinkis signalams 8- padėtyje (d C 5: 75,6; 5a: 68.8). remiantis aukščiau minėtais įrodymais, nustatyta, kad 5 stereostruktūra yra (2E,6E)-8-bD-gliukopiranoziloksi-3,7-dimetilas-2,{103 }}oktadieno rūgštis.

Sudedamųjų dalių poveikis naviko nekrozės faktoriaus a (TNF-a) sukeltam citotoksiškumui L929 ląstelėse

Yra žinoma, kad TNF-a tarpininkauja įvairiems organų pažeidimams, indukuodamas ląstelių apoptozę. Kalbant apie kepenis, biologinis TNF-a poveikis buvo susijęs su kepenų pažeidimu, kurį sukelia kepenų toksinai, išemija/reperfuzija, virusinis hepatitas ir alkoholis.22-24) Todėl TNF-a laikoma svarbus tikslas ieškant priešuždegiminių ir hepatoprotekcinių medžiagų. Remdamiesi pirmiau minėta koncepcija, mes ištyrėme natūraliai susidarančių produktų apsaugines sudedamąsias dalis nuo TNF-a sukeltos ląstelių mirties L929 ląstelėse, TNF-a jautrioje ląstelių linijoje.25) Anksčiau mes pranešėme

kad kai kurios Piper chaba, 26-29) Boesenbergia rotunda, 30, 31) Punica granatum, 32) Helichrysum arenarium, 33-35) ir Sapindus rarak, 36-38) sudedamosios dalys turi slopinamąjį poveikį. TNF-a sukelto citotoksiškumo L929 ląstelėse. Kadangi C. tubulosa feniletanoidinės sudedamosios dalys (pvzechinakozidas, akteozidas ir izoakteozidas5) taip pat slopino šį citotoksiškumą, toliau tyrėme iridoido, fenilpropanoido ir lignano sudedamąsias dalis, kaip parodyta 4 lentelėje. Dėl to kankanosidas A (9, slopinimas: 16,3± 2.0% esant 1 00 mM), musaenozido rūgštis (10, 44,7± 8,7 %), 8-epigamo rūgštis (11, 10,7± 0,4 %), 8-hidroksi geraniolis 8-ObD- Nustatyta, kad gliukopiranozidas (17, 21,3 ± 2,4 %) ir ( )-pinorezinolis ObD-gliukopiranozidas (22, 22,3 ± 1,6 %) pasižymėjo reikšmingu aktyvumu. Nors jų aktyvumas buvo silpnesnis nei echinakozido (IC50= 31,1 mM), akteozido (17,8 mM) ir izoaceteozido (22,7 mM), pagrindinių feniletanoido sudedamųjų dalių.5)

NATŪRALUS CISTANCHE TUBULOSA LYTINEI FUNKCIJAI GERINTI PHGS75% ECH 30% ACT 12%