Melatoninas neleidžia T limfocitams įsiskverbti į hipertenzinių žiurkių inkstus, kuriuos sukelia daug druskos turinčios dietos, užkertant kelią CXCR3 ligando chemokinų ekspresijai

Daugiau informacijos:ali.ma@wecistanche.com

Arielis Bieris¹, Rawan Khashab², Yehonatanas Sharabi^1,2,3, Ehudas Grossmanas^1,2,3ir Avshalom Leibowitz^1,2,3,*

¹Medicine D, Chaim Sheba medicinos centras, Tel-Hashomer 5262000, Izraelis; arielbier@gmail.com (AB);Yehonatan.Sharabi@sheba.health.gov.il (YS); Ehud.Grossman@sheba.health.gov.il (EG)² Hypertension Unit, the Chaim Sheba Medical Center, Tel-Hashomer 5262000, Israel;rawankhasbab@gmail.com³Sackler medicinos fakultetas, Tel Avivo universitetas, Tel Avivas 6997801, Izraelis*

Anotacija: Ankstesniame tyrime mes tai parodėmemelatoninoneleidžiainkstasžala druskos sukeltos hipertenzijos modeliui mažinant oksidacinį stresą. Iškėlėme hipotezę, kad šis poveikis susijęs su melatonino imunomoduliacinėmis savybėmis. In vivo Study-Dahl druskai jautrios (DSS) žiurkės buvo šeriamos normaliu maistu, daug druskos turinčia dieta (HSD) arba HSD irmelatonino(30 mg/kg per dieną) savo vandenyje keturias savaites.Inkstaibuvo surinkti, kad būtų galima nedelsiant išskirti limfocitus ir apibūdinti srauto citometriją (CD3 plius CD4 plius ir CD3 plius CD8 plius) ir limfocitų chemoattraktantui (daugiausia CXCL).chemokinai) genų ekspresijos tyrimai. In vitro tyrimo su žiurkėmis mezangialinės ląstelės (RMC) buvo kultivuojamos daug druskos turinčioje terpėje be ir sumelatonino. HSD buvo susijęs su reikšminga CD4 plius ir CD8 plius T limfocitų renalinfiltracija, palyginti su kontroline. Melatoninas žymiai sumažino inkstų limfocitų infiltraciją. HSD žymiai padidino CXCL mRNR ekspresijąchemokinai.Į HSD pridėjus melatonino, šis poveikis buvo panaikintas. RMC ląstelių apdorojimas druska padidino CXCL10 ir CXCL11, bet ne CXCL9, ekspresiją. Pridedantmelatoninoprie auginimo terpės neleido šiam padidėjimui. Gydant HSD maitintas žiurkes melatoninu, sumažėjo inkstų limfocitų chemoattraktanto RNR ekspresija ir yra susijęs su reikšmingu inkstų T limfocitų infiltracijos sumažėjimu. Druska gali turėti tiesioginį poveikį chemokiną gaminančioms inkstų ląstelėms, o gydymas melatoninu susilpnėja.

Raktiniai žodžiai:melatonino; druskos; T-limfocitai; hipertenzija;inkstas; CXCL 9; CXCL 10; CXCL 11

1. Įvadas

Hipertenzija (HTN) yra pagrindinis modifikuojamas širdies ir kraujagyslių sistemos rizikos veiksnys. Dėl gyventojų senėjimo HTN paplitimas nuolat didėja ir pažengusiame amžiuje siekia iki 30 procentų [1]. Nepaisant įvairių medicininių gydymo galimybių, visame pasaulyje HTN kontrolė yra menka. Nekontroliuojamo HTN pasekmės yra pražūtingos, darančios didžiulį neigiamą poveikį visuomenės sveikatai [2].

HTN patogenezėje dalyvauja įvairūs elgesio, aplinkos ir genetiniai veiksniai. Didelis druskos kiekis vakarietiškose dietose yra pagrindinis HTN veiksnys ir yra susijęs su padidėjusiu sergamumu ir mirtingumu. Gairėse ir viešosiose iniciatyvose rekomenduojama sumažinti druskos suvartojimą plačiajai visuomenei. Tačiau ne kiekvienam asmeniui šis apribojimas gali būti naudingas, nes patofiziologija, siejanti druskos jautrumą su HTN, nėra visiškai suprantama ir jai reikia geresnio mechaninio supratimo [3]. Taigi naujos strategijos yra labai svarbios siekiant geresnio HTN supratimo ir kontrolės, todėl nedelsiant reikia naujų tyrimų paradigmų.

Nustatyta, kad uždegimas ir oksidacinis stresas yra susiję su esminio HTN patogeneze. Tiriant šiuos procesus inicijuojančius ir tęsiančius trigerius, daugelis eksperimentinių HTN modelių rodo, kad dalyvauja adaptyvus imuninis atsakas [4].

Spustelėkite norėdamiCistanche nauda ir šalutinis poveikis inkstų funkcijai

Užuominos, jungiančios adaptyvųjį imunitetą su HTN, egzistuoja jau nuo septintojo dešimtmečio. Tačiau tik pastaruoju metu, geriau išmanant imuninę sistemą, buvo galima pasiekti pažangos šia kryptimi. Novatoriškas Guzik ir kt. tyrimas. parodė, kad angiotenzino (Ang) II arba deoksikortikosterono (DOC) druskos HTN buvo sutirštėjusios rag1−/− pelėse, kuriose trūksta T ir B limfocitų, o T, bet ne B ląstelių perkėlimas gali atkurti BP atsaką [5]. Nuo šio dokumento buvo nustatyta, kad įvairūs įvairūs imuniteto komponentai yra svarbūs HTN patogenezei daugelyje įprastų gyvūnų modelių. T ląstelių vaidmuo druskos sukeltame HTN modelyje taip pat buvo plačiai ištirtas. Tyrimai in vitro rodo, kad druska gali paskatinti naivią T ląstelių diferenciaciją į TH17 ląsteles [6]. Daugybė in vivo darbų, susijusių su daug druskos turinčios dietos (HSD) sukeltų HTN modelių, tokių kaip Dhal druskai jautrios (DSS) žiurkės, rodo didelę inkstų T ląstelių infiltraciją [7–9].

Tarp daugelio fiziologinių procesų,melatoninodalyvavimas reguliuojant kraujospūdį yra šiek tiek intuityvus. Cirkadinis kraujospūdžio modelis skatina atlikti išsamius melatonino ir HTN tyrimus. Daugelis praeityje atliktų darbų, susijusių su žmonėmis ir eksperimentiniais modeliais, susiejo žemą melatonino kiekį su HTN [10]. Yra keletas klinikinių duomenų, rodančių, kad melatonino papildymas gali gydyti HTN, daugiausia pacientams, sergantiems naktiniu HTN [11]. Tačiau šių duomenų nenuoseklumas kelia klausimų, ar ne cirkadinės melatonino savybės taip pat yra susijusios su kraujospūdžio reguliavimu.

Priešuždegiminės ir antioksidacinės melatonino savybės rodo, kad melatoninas sąveikauja su imunine sistema. Nauji duomenys rodo, kad melatonino signalizacija yra svarbi T ląstelių vystymuisi, aktyvacijai, diferenciacijai ir atminčiai. Yra įrodymų, kadmelatoninomembraniniai ir branduoliniai receptoriai yra ant T ląstelių [12,13].Melatoninasveikia daugelio citokinų, dalyvaujančių imuniniame atsake, tokių kaip ainterferonas (IFN), kuris yra pagrindinis Th1 atsako reguliatorius, gamybą [14].

Kai kurių mokslininkų teigimu, oksidacinis stresas ir T ląstelių atsakas skatina HTN ir organų hipertenzinės žalos vystymąsi [15]. Ankstesniame darbe mes tai parodėmemelatoninosumažina vietinį (inkstų) oksidacinį stresą ir apsaugo nuo druskos sukeltos inkstų fibrozės bei proteinurijos druskai jautriame HTN žiurkės modelyje (DSS modelis) [16]. Kadangi oksidacinis stresas vaidina pagrindinį vaidmenį su HTN susijusiame adaptyviame imuniniame atsake, iškėlėme hipotezę, kad melatonino imunomoduliacinės savybės yra atsakingos už jo apsauginį vaidmenį HSD sukeltame HTN.

Šio tyrimo tikslas – įvertinti, armelatoninosumažina druskos sukeltą T ląstelių atsaką ir išaiškina už šį poveikį atsakingus mechanizmus.

2. Medžiagos ir metodai

2.1. Gyvūnai ir tyrimo protokolas

Tyrimo protokolą patvirtino institucinis gyvūnų etikos komitetas Sheba medicinos centre Izraelyje. Jų sveikatos būklė buvo stebima matuojant kūno svorį ir kasdien stebint kiekvieno gyvūno judėjimą ir sveikatos būklę. Keturių savaičių amžiaus Dahl druskai jautrių žiurkių patinai (RGD kat. Nr. 1582190, RRID: RGD_1582190) buvo laikomi gyvūnų patalpoje įprastuose narvuose (dvi žiurkės viename narve) 22 ◦C temperatūroje su 14 h šviesos/10 h tamsos ciklu. Žiurkės buvo laikomos normalia druskos dieta ir joms buvo duodama ad libitum gerti vandens iš čiaupo penkių dienų aklimatizacijos laikotarpiu. Tada žiurkės buvo suskirstytos į tris grupes (n=8) pagal dietą per 8 savaites. Etikos komiteto teigimu, gyvūnai, kuriems pasireiškė ligos ir kančios požymiai, turėjo būti paaukoti.

Kontrolinė grupė buvo šeriama standartine žiurkių čiaudo dieta (2018 SC; Teklad Envigo, Madison, WI, JAV) ir vandeniu iš čiaupo; daug druskos turinčios dietos (HSD) grupė buvo maitinama suderinta praturtinta druskos dieta (4 procentai) (TD.120485; Teklad Envigo, Madison, WI, JAV) ir vandentiekio vandeniu, omelatoninogrupė buvo šeriama ta pačia praturtinta druskos dieta (4 proc.) su melatoninu (M5250; Sigma, Rehovot, Izraelis) (30 mg/kg per dieną) geriamajame vandenyje. Periodiškai buvo matuojamas kūno svoris ir vandens suvartojimas. Tinkamas melatonino kiekis buvo ištirpintas kiekviename narve esančiame degtukų vandens poreikyje, kad kiekvienam gyvūnui būtų suteikta tinkama dozė. Nulinė diena apibrėžiama kaip HSD ir melatonino vartojimo pradžios diena. Tyrimo pabaigoje žiurkės buvo paaukotos giliai anestezuojant 3 procentų izofluranu (anestezijos gylis patvirtintas suspaudus užpakalinę pėdą) irinkstusbuvo nuimti. Abu inkstai buvo pašalinti ir perpjauti. Inkstai buvo paimti srauto citometrijos analizei, išskyrus kelias dalis, kurios buvo greitai pašalintos ir greitai užšaldytos skystame N2 ir laikomos –80 ◦C temperatūroje. RNR ekstrakcijai buvo naudojamos šaldytos medžiagos.

Cistanche-inkstų ligos simptomai

2.2. Realaus laiko kiekybinė atvirkštinės transkripcijos PGR

Genų mRNR ekspresijos lygiai buvo nustatytiinkstasaudinį realaus laiko kiekybine atvirkštine transkriptaze-PGR (qRT-PGR). Visa RNR buvo išskirta iš inkstų audinio naudojant NucleoSpin RNA Kit (MACHERY-NAGEL, Diuren, Vokietija). Atvirkštinė transkripcija buvo atlikta naudojant Applied Biosystems didelės talpos cDNAReverse Transcription Kit (Applied Biosystems, Foster City, CA, JAV). qRT-PGR reakcijos buvo atliktos naudojant Power SYBR Green PCR Master Mix (Applied Biosystems, Warrington, JK) ir Applied Biosystems 7500 realaus laiko PGR sistemą. Ciklo sąlygos buvo tokios: pirmas vienas 95 ◦C žingsnis 0.20 min., o po to 40 lydymosi stadijos ciklų 3 s esant 95 ◦C ir pratęstas 30 s 60 ◦C temperatūroje. Pasibaigus 40 ciklų, buvo atlikta lydymosi kreivė. Ribosominio baltymo šoninio kotelio subvieneto P0 (Rplp0) mRNR buvo naudojama kaip vidinė kontrolė. Gruntai išvardyti 1 lentelėje.

1 lentelė. Šiame tyrime naudotų žiurkių pradmenų sąrašas.

2.3. T ląstelių išskyrimas iš inkstų

Išėmus inkstų kapsulę, duinkstusbuvo susmulkinti ir erzinti 2 ml švirkšto stūmokliu per 100 µm ląstelių sietelį RPMI 1640, kuriame yra 2 mML-glutamino, 10 procentų FBS, 10 ug/mL DNazės 1 (kamieninių ląstelių technologijos, Kembridžas, MA , JAV) ir 0,1 procento IV tipo kolagenazės (CLS 4, Worthington Decatur, AL, JAV). Tirpalas buvo inkubuojamas 25 minutes 37 °C temperatūroje. Tada į inkstų homogenatą įpiltas plovimo tirpalas (DPBS/2 proc. FBS/2 mM EDTA), kad būtų pasiektas 45 ml tūris, ir filtruojamas per 70 µm ląstelių filtrą. Tirpalas centrifuguojamas 400 x g/7 min. ir granulės buvo suspenduotos 5 ml plovimo tirpale ir filtruojamos per 40 µm ląstelių sietelį ir pakartotinai centrifuguojamos 400 x g/7 min. Nuosėdos buvo resuspenduotos 3 ml FBS (10 mM EDTA) ir sluoksniuotos ant Histopaque -1083 (Sigma, Rehovot, Izraelis) ir centrifuguojamos 20 ◦ C temperatūroje 400 × g/30 min., išjungus stabdį. Mononuklearinių ląstelių sluoksnis, esantis virš Histopaque, buvo pašalintas, du kartus perplautas plovimo tirpalu ir suspenduotas 5 ml plovimo tirpale srauto citometrinei analizei.

2.4. Srauto citometrija

Iš kiekvienos grupės,inkstusbuvo ištirtos 5–7 žiurkės. Kiekvienam mėginiui buvo paimta 1 × 106 ląstelių. Izoliuotos mononuklearinės ląstelės buvo inkubuojamos su tarpląsteliniais žymenimis: anti-CD3 (Thermo Fisher Scientific Cat# 12-0030-82, RRID:AB_465493) ir jo izotipo kontrole (Thermo Fisher Scientific Cat# 12-4742-41, RRID). :AB_10753770), anti-CD4 (Thermo FisherScientific Cat# 17-0040-80, RRID:AB_1210581) ir jo izotipo kontrolė (Thermo Fisher Scientific Cat# 17-4724-81, RRID: AB_470188), anti-CD8 (Thermo Fisher Scientific Cat# 25-0084-82, RRID:AB_10548361) ir jo izotipo kontrolė (Thermo Fisher Scientific Cat# 25-4714-80,RRID: AB_657914). Visos ląstelės buvo analizuojamos srauto citometrijos metodu (BD FACSCalibur Flow Cytometry System, RRID: SCR_000401), naudojant FlowJo programinę įrangą (FlowJo, RRID: SCR-008520).

Cistanche-inkstų funkcija

2.5. Ląstelių kultūros

Mezanialinė žiurkės ląstelių linija RMC (ATCC Cat# CRL{{0}}, RRID: CVCL_0506) buvo gauta iš ATCC®. Ląstelė buvo kultivuojama Dulbecco modifikuotoje Eagle terpėje (01-055-1A, biologinės pramonės, Beit HaEmek, Izraelis) su 4 mM L-glutamino, sureguliuotu taip, kad būtų 1,5 g/l natrio bikarbonato ir 4,5 g/l gliukozės, ir papildyta 0,4 mg/mLG418 ir 15 procentų galvijų vaisiaus serumo. Melatoninas buvo gautas iš Sigma (M5250 Rehovot, Izraelis). 250 mMmelatoninožaliavos buvo pagamintos etanolyje. Ląstelės buvo kultivuojamos normaliomis arba daug druskos (į terpę pridedant 80 mM NaCl) be melatonino arba su melatoninu (0,5 mM). Gydymas melatoninu buvo atliktas 45 minutes prieš įdedant NaCl į terpę. Visi eksperimentai buvo atlikti 6 šulinėlių plokštelėse su 3 × 105 ląstelių viename šulinyje ir buvo atlikti 6 nepriklausomais tyrimais.

2.6. Statistinė analizė

Duomenys pateikiami kaip vidurkis ± SEM. Statistinė analizė atlikta naudojant IBMSPSS Statistics, RRID: SCR_019096. Vienpusė dispersinė analizė (ANOVA) ir posthoc Tukey metodas nagrinėjo skirtumus tarp grupių. Realaus laiko qPCR duomenys buvo analizuojami naudojant DataAssist, RRID: SCR_014969.

3. Rezultatai

3.1. Melatoninas apsaugo žiurkes, vartojančias HSD

Šio tyrimo metu žiurkių amžius buvo 4–13 savaičių. Šiame amžiuje žiurkių savijautą rodo svorio padidėjimas, kurį parodė kontrolinė grupė [17]. Tačiau HSD grupė pasiekė plato 30 dieną ir pridėjusmelatoninoHSD pagerino šį reiškinį (1A pav.). HSD grupėje buvo didelis mirtingumas, kai eksperimentiniu laikotarpiu 50 procentų žiurkių mirė arba turėjo klinikinę būklę, dėl kurios reikėjo eutanazijos pagal gyvūnų etikos komiteto taisykles. Melatonino papildai žymiai užkirto kelią žiurkių mirtingumui, kai tik viena iš aštuonių žiurkių mirė 58 dieną eksperimento laikotarpio pabaigoje (1B pav.).

Figūra 1.Melatoninaspagerėjo kraujospūdis ir išgyvenimas sergant HSD. DSS žiurkės 9 savaites buvo gydomos HSD su melatoninu ir be jo. Daug druskos turinti dieta sumažino kūno svorį nuo 36 dienos, o melatoninas sumažino šį poveikį (A). HSD padidino mirtingumą nuo 4 dienos 0. Gydant HSD-fedratus melatoninu, pagerėja jų išgyvenimas. (B). (n=8) *-p Mažiau arba lygu 0.05 druska ir druska plius melatoninas, palyginti su kontrole. #-p Mažiau arba lygu 0,05 druskos, palyginti su kontrole ir druska ir melatoninu. HSD – daug druskos turinti dieta.

3.2. Melatoninas apsaugo nuo HSD sukeltos inkstų T ląstelių infiltracijos

Mes išskyrėme ląsteles išinkstasir nukreipė juos į T ląstelių žymeklį CD3. CD3 plius ląstelės buvo sujungtos su CD4 ir CD8. Tiek CD3 ir CD4 plius, tiek CD3 plius CD8 plius HSD buvo žymiai didesni (atitinkamai 5,18 ± 1,62 ir 4,6 ± 0,75 proc.), palyginti su kontroline (0,16 ± {{18}). }.{{20}}atitinkamai 2 ir 0,95 ± 0,15 proc.) irmelatoninoHSD papildymas sumažino CD3 plius CD4 plius ir CD3 plius CD8 plius ląstelių skaičių iki kontrolinio lygio (atitinkamai 0.68 ± 0.21 ir 1.37 ± 0.45) (pav. 2A–D).

2 pav. Melatoninas neleidžia T ląstelėms įsiskverbti įinkstas. T ląstelės buvo išskirtos iš žiurkių inkstų ir buvo tiriamos CD3. CD3-teigiamos ląstelės buvo apsaugotos nuo CD4 ir CD8. Melatoninas (C) sumažino CD3 plius CD4 plius ir CD3 plius CD8 plius, palyginti su HSD be melatonino (B), nesiskiriant nuo kontrolinės grupės (A). Visų žiurkių analizė parodyta (D) (n=7–8). HSD – daug druskos turinti dieta. *-p Mažiau arba lygu 0.05 palyginti su kontrole. #-p Mažiau arba lygus 0,05, palyginti su druska ir melatoninu.

3.3. Melatoninas sumažina tam tikrus inkstų chemokinus, kurie buvo reguliuojami HSD

T ląstelių pritraukimą į uždegiminius audinius reguliuoja vietinė chemokine ekspresija. Todėl mes išmatavome dviejų chemokinų šeimų ekspresiją žiurkėseinkstus: chemokino (CXC motyvo) ligandų (CXCL) šeima ir chemokino (C-Cmotif) ligandų (CCL) šeima.

CXCL šeimai CXCL 9, 10 ir 11, kurie pritraukia T ląsteles į tikslinį audinį, naudojant T ląstelių CXCR3 receptorių, buvo žymiai padidintos HSD žiurkėms. Papildymasmelatoninoiki HSD sumažino jų ekspresiją iki kontrolinio lygio. Tas pats modelis buvo aptiktas CXCL 1 ir 16. Tačiau CXCL12 atveju HSD nebuvo aptiktas padidintas reguliavimas (3A pav.).

CCL šeimai CCL 2, 4, 12, 17, 19 ir CX3CL1 neparodė HSD padidėjimo. CCL3 buvo padidintas HSD, tačiau reikšmingų pokyčių nenustatyta, kai į dietą buvo įtrauktas melatoninas. CCL7 atveju reikšmingas HSD reguliavimas ir reikšmingas sumažinimas pridedantmelatoninobuvo aptiktas HSD (3B pav.).

3 pavinkstųchemokinaiHSD su melatoninu ir be jo. Žiurkėms buvo nustatyta chemokino (CXC motyvo) ligando (CXCL) šeimos (A), chemokino (CC motyvo) ligandų šeimos ir CX3CL1 (B) ekspresija. (n=7–8) *-p Mažiau arba lygu 0.05 palyginti su kontrole. #-p Mažiau arba lygus 0,05, palyginti su druska ir melatonizmu. HSD – daug druskos turinti dieta.

3.4. Tiesioginis melatonino poveikis RMC mezangialinei ląstelių linijai

Tada mes sutelkėme dėmesį į CXCL9, 10 ir 11, kurie pritraukia T ląsteles prisijungdami prie CXCR3 receptoriaus. Mes nustatėme jų išraiškąchemokinaiRMC ląstelėse, kurios yra žiurkės mezangialinė ląstelių linija.

Mes apdorojome ląsteles 80 mM NaCl be ir su 0,5 mMmelatonino. Ši NaCl koncentracija reikšmingai padidino CXCR10 raišką 2,4 ± 0.26- karto, palyginti su kontroline medžiaga, o pridėjus 0,5 mM melatonino žymiai sumažėjo ši išraiška yra 1,4 ± 0.{{10}} kartus, palyginti su kontroline medžiaga (4A pav.). CXCL11 atveju 80 mM NaCl reikšmingai padidino ekspresiją 3 ± 048- kartus, palyginti su kontroline medžiaga, o pridėjus 0,5 mM melatonino ši išraiška žymiai sumažėjo iki 1,8 ± 0.{22 }} kartus, palyginti su kontroline medžiaga (4B pav.). CXCL9 nebuvo aptiktas RMC ląstelėse.

4 pav. Druska padidino CXCL10 ir CXCL11 ekspresiją mezangialinėje ląstelių linijoje, kur gydymas melatonu sumažino jos ekspresiją. RMC (žiurkių mezangialinė ląstelių linija) buvo apdorota druska 80 mM su 0, 5 mM melatoninu ir be jo. CXCL10 (A) ir CXCL11 (B) buvo sureguliuoti apdorojant druska ir pridedantmelatoninosumažinti šį reguliavimą. Grafikai pateikia 6 nepriklausomus bandymus. *-p Mažiau arba lygu 0.001, palyginti su kontroliniu #-p Mažiau arba lygu 0.005 palyginti su druska 80 mM ir melatonino 0,5 mM. $-p Mažiau arba lygus 0,05, palyginti su druska 80 mM ir melatoninu 0,5 mM.

4. Diskusija

Teigiamas poveikismelatoninoHTN buvo įrodyta ankstesniuose tyrimuose ir buvo pasiūlyta kaip galimas gydymui atsparaus HTN gydymo būdas [18]. Pirmajame tyrime daugiausia dėmesio skyrėme oksidaciniam stresui ir atskleidėme, kad melatoninas mažina HSD sukeltą oksidacinį stresą. Šiame tyrime daugiausia dėmesio skyrėme adaptaciniam imuniniam poveikiui ir parodėme, kad melatoninas pagerina HSD maitinamų žiurkių išgyvenimą. Šis poveikis yra susijęs su T ląstelių, prasiskverbiančių į inkstus, sumažėjimu ir sumažėjusiu inksto reguliavimuinkstaschemokino ekspresija.

Istoriniai duomenys rodo, kad DSS žiurkėms, vartojančioms HSD, išsivysto sunkus HTN ir jų mirtingumas didesnis [19]. Pats Dahlas, kurdamas modelį, pranešė, kad kai DSS žiurkėms buvo taikomas HSD (8 proc. NaCl) nujunkymo metu (21–23 dienų amžiaus), joms greitai išsivystė HTN ir visos mirė iki 16-osios šėrimo druska savaitės [20]. Vėliau, po kai kurių padermės modifikacijų, Rapp ir kt. pranešė, kad visos žiurkės mirė per aštuonias savaites nuo HSD (8 proc. NaCl) [21]. Mūsų tyrime dalyvavusių žiurkių mirtingumas buvo didelis, tačiau jie nepasiekė 100 procentų, tikriausiai dėl mažesnio druskos procento (4 procentai) jų racione. Nepaisant to, akivaizdu, kadmelatoninopapildai žymiai užkirto kelią mirtingumui.

Svorio padidėjimas yra žiurkių gerovės 4–13 savaičių amžiaus rodiklis. DSS žiurkės kilusios iš Sprague Dawley, kuri yra gerai apibūdinta padermė. Manoma, kad žiurkės amžiaus, kurį naudojome savo eksperimentuose, nuosekliai priauga svorio [22]. Daugelyje tyrimų su gyvūnais svorio mažinimas laikomas vienu iš eksperimento „galinių taškų“ [23]. Iš kelių tyrimų aišku, kad dėl HSD DSS žiurkėms priauga mažesnis svoris, palyginti su kontroline grupe [24,25]. Remdamiesi šiais tyrimais, mes taip pat stebėjome svorio skirtumus tarp grupių. Čia žiurkės nepriaugo svorio po keturių savaičių HSD. Melatoninas taip pat sustabdė šį HSD poveikį, nes žiurkės, kurios buvo gydomos melatoninu, ir toliau priaugo svorio, nors ir mažiau nei kontrolinės.

GebėjimasmelatoninoXX amžiaus aštuntojo dešimtmečio pabaigoje buvo atrastas kraujospūdžio mažinimas gyvūnų modeliuose [26–28]. Nuo to laiko buvo pranešta keliuose kituose modeliuose, pavyzdžiui, kad didelė fruktozės dieta sukelia metabolinį sindromą spontaniškai hipertenzija sergančioms žiurkėms [29, 30]. Mūsų tyrimai šioje srityje yra pirmieji, kurie parodė, kad melatoninas vaidina vaidmenį druskos sukeltame HTN, užkertant kelią organų pažeidimams ir sumažinant mirtingumą.

Šiame tyrime parodėme, kad HSD sukelia T limfocitų infiltraciją įinkstas, procesas, kurį DSS žiurkėms aprašė daugiausia Mattsono grupė [31–33]. Pagrindinis šio infiltracijos proceso vaidmuo DSS modelyje buvo įrodytas naujausiu tyrimu, kurio metu buvo pastebėta, kad DSS žiurkės, kurioms trūksta T ląstelių, yra apsaugotos nuo HTN, sukeltas HSD ir splenocitų pernešimo, sustiprina druskai jautrų HTN [34].

Melatoninas gali paveikti T ląsteles įvairiais aspektais (apžvalgą žr. [35]). Šis tyrimas pirmą kartą parodėmelatoninosumažina CD4 plius ir CD8 plius Tląstelių traukąinkstasHSD. Šis melatonino poveikis gali būti mechanizmas, pabrėžiantis jo naudą šiame modelyje.

Melatonino gebėjimas sumažinti T ląstelių infiltraciją buvo aprašytas eksperimentiniame autoimuninio encefalomielito (EAE) pelių modelyje. Įrodyta, kad EAE melatoninas sumažina CD4 plius T ląstelių ir Th17 ląstelių infiltraciją į CNS [36, 37].

T ląstelių pritraukimą prie konkretaus audinio daugiausia reguliuoja vietinė didelė koncentracijachemokinaikurie yra chemotaktiniai citokinai, kontroliuojantys migracijos modelius ir imuninių ląstelių padėtį. Dvi didelės chemokinų šeimos, sukeliančios T ląstelių infiltraciją, yra CXC motyvo ligando (CXCL) ir CC motyvo ligando (CCL) chemokinų šeimos [38].

Cistanche inkstų funkcijos sutrikimui pagerinti

Savo tyrime neradome pastovaus CCL šeimos atsako į HSD ir įmelatonino. Iš devyniųchemokinaišioje šeimoje buvo pastebėta, kad tik CCL7 ir CLL21 padidino savo ekspresiją dėl HSD, o melatonino papildymas sumažino. HSD padidino CCL3 ekspresiją, tačiau melatoninu gydytose žiurkėse sumažėjimo nenustatyta. Neseniai atliktas to paties modelio tyrimas parodė, kad HSD padidina CCL2 reguliavimąinkstasnaudojant RNA-Seq metodą [39]. Tačiau šiame tyrime buvo patikrintas lygis 3 ir 21 dienomis po dietos pradžios. Savo tyrime mes išbandėme lygius po aštuonių savaičių. Gali būti, kad chemokino ekspresija pasikeičia HSD laikotarpiu.

Ir atvirkščiai, daugumos CXCL šeimos, įskaitant CXCL 1, 9, 10, 11 ir 16, lygis padidėjo HSD gydytų žiurkių organizme irmelatoninopapildymas panaikino šį padidėjimą.Tik CXCL12 nepadidėjo atsakas į HSD.

CXCL9, CXCL10 ir CXCL11, pavadinti „interferono indukuojamais CXC chemokino receptoriaus 3 ligandais“, yra indukuojami IFN- ir yra CXC chemokino receptoriaus 3 (CXCR3) ligandai. In vivo tyrimai parodė jų svarbą aktyvuojant ir pritraukiant T limfocitus į tikslinį organą [40–42]. Youn ir kt. žmonėms, sergantiems hipertenzija, nustatyta T ląstelių infiltracija ir padidėjęs visų trijų CXCR3 kiekis kraujyje.chemokinai, o tai rodo, kad CXCR3 ir jo ligandai yra svarbūs T ląstelėms, dalyvaujančioms žmogaus HTN [43]. Kitas tyrimas parodė, kad hipertenzija sergantiems pacientams CXCL10 yra padidėjęs, o jo lygis yra susijęs su jų kraujospūdžio reikšmėmis [44].

Dėl šių tyrimų daugiausia dėmesio skyrėme CXCL9, CXCL10 ir CXCL11. Mes kultivavome mezangialinę žiurkės ląstelių liniją ir apdorojome jas 80 mM NaCl ir 0,5 mM melatoninu. Nustatėme, kad CXCL 10 ir 11 ląstelėse yra sureguliuotas, o melatoninas panaikina šį padidėjimą. Mūsų rezultatai rodo, kad druskos poveikis padidina CXCL 10 ir 11, ir priešingas poveikismelatonino, abu buvo tiesiogiai aptikti mezangialinėse ląstelėse. Priešingai, CXCL9 šiose ląstelėse nebuvo aptikta.

Mūsų tyrimas turi apribojimų. Mūsų FACS rezultatuose daugelis CD3 plius buvo dvigubai neigiami tiek CD4, tiek CD8. Tie patys rezultatai buvo gauti Mattsono tyrime nuo 2010 m. [31]. Tačiau naujesniuose Mattsono grupės tyrimuose CD3 ir CD4-CD8-ląstelių buvo labai mažai [32,33,45,46]. Reikšmingas dvigubai neigiamų CD3 ląstelių sumažėjimas galėjo atsirasti dėl to, kad buvo pridėtas CD45 žymeklis ir tik analizuojamos ląstelės, kurios buvo CD45 teigiamos, o tai buvo atlikta vėlesniuose Mattsono tyrimuose. Gali būti, kad didelė CD3 ir CD 4-CD8- populiacija yra artefaktas. Tačiau CD3 plius CD4 plius ir CD3 plius CD8 plius ląstelių populiacijos artefaktas nežinomas.

5. Išvados

Apibendrinant galima pasakyti, kad dieta, kurioje yra daug druskos, yra susijusi su T ląstelių infiltracija įinkstusDSS žiurkių. Druska taip pat padidino specifinių T ląstelių chemoatraktantų ekspresiją inkstuose. Gydymas sumelatonino(30 mg/kg per parą) panaikino šį poveikį (melatoninosumažina HSD sukeltą T ląstelių infiltraciją į inkstus kartu su CXCL3 ligando chemokino ekspresijos sumažėjimu).

Mūsų in vitro tyrimas rodo, kad druska ir melatoninas gali reguliuoti chemoatraktanto ekspresiją, tiesiogiai paveikdamiinkstasląstelės.

Autoriaus indėlis: Conceptualization, AL; formalioji analizė, AB ir RK; tyrimas, RK;metodika, AB ir AL; rašymas – originalus juodraštis, AB ir AL; rašymas – peržiūra ir redagavimas, YSand EG Visi autoriai perskaitė ir sutiko su paskelbta rankraščio versija.

Finansavimas: Šis tyrimas negavo išorės finansavimo.

Institucinės peržiūros tarybos pareiškimas: Tyrimo protokolą patvirtino institucinis gyvūnų etikos komitetas Sheba medicinos centre, protokolas Nr. 1219/19/ANIM ir Sveikatos apsaugos ministerijos protokolas Nr. 16418.

Informuoto sutikimo pareiškimas: Netaikoma.

Duomenų prieinamumo pareiškimas: šiame tyrime pateiktus duomenis galima gauti atitinkamo autoriaus prašymu.

Padėka: Autoriai dėkoja Zehavai Shabtai už puikią techninę pagalbą ir Michaelui Kanovskiui už redakcines paslaugas.

Interesų konfliktai: autoriai pareiškia, kad nėra interesų konflikto.

Nuorodos

1. Olsen, MH; Angell, SY; Asma, S.; Boutouyrie, P.; Mėsainis, D.; Chirinos, JA; Damasceno, A.; Delles, C.; Gimenez-Roqueplo, AP; Hering, D.; ir kt. Kvietimas imtis veiksmų ir gyvenimo trukmės strategija, skirta įveikti pasaulinę padidėjusio kraujospūdžio naštą dabartinėms ir būsimoms kartoms: Lanceto komisija dėl hipertenzijos. Lancet 2016, 388, 2665–2712. [CrossRef]

2. O'Brien, E. Lanceto komisija dėl hipertenzijos: pasaulinės padidėjusio kraujospūdžio naštos sprendimas dabartinėms ir būsimoms kartoms. J. Clin. Hipertenzija 2017, 19, 564–568. [CrossRef]

3. O'Donnell, M.; Mentė, A.; Yusuf, S. Natrio suvartojimas ir širdies ir kraujagyslių sveikata. Circ. Res. 2015, 116, 1046–1057. [CrossRef]

4. Schiffrin, EL Mažųjų arterijų remodeliavimosi mechanizmai, antihipertenzinis gydymas ir imuninė sistema sergant hipertenzija.Klin. Ištirti. Med. 2015, 38, E394–E402. [CrossRef]

5. Guzikas, TJ; Hoch, NE; Ruda, KA; McCann, LA; Rahmanas, A.; Dikalovas, S.; Goronzy, J.; Weyand, C.; Harrison, DG Tląstelių vaidmuo angiotenzino II sukeltos hipertenzijos ir kraujagyslių disfunkcijos genezėje. J. Exp. Med. 2007, 204, 2449–2460. [CrossRef][PubMed]

6. Kleinewietfeld, M.; Manzelis, A.; Titze, J.; Kvakanas, H.; Josefas, N.; Linkeris, RA; Muller, DN; Hafler, DA Natrio chloridas skatina autoimuninę ligą, indukuodamas patogenines TH17 ląsteles. Gamta 2013, 496, 518–522. [CrossRef]

7. Mattsonas, DL; Lundas, H.; Guo, C.; Rudemilleris, N.; Geurts, AM; Jacob, H. Genetinė rekombinaciją aktyvinančio geno 1 mutacija Dahl druskai jautriose žiurkėse sumažina hipertenziją ir inkstų pažeidimus. Esu. J. Physiol. Regul. Sveikasis skaičius. Komp. Physiol. 2013, 304, 407–414.[CrossRef]

8. Mattson, DL. Infiltruojančios imuninės ląstelėsinkstassergant druskai jautria hipertenzija ir inkstų pažeidimu. Esu. J. Physiol. Ren. Physiol. 2014, 307. [CrossRef] [PubMed]

9. Lu, X.; Crowley, SD uždegimas esant druskai jautriai hipertenzijai ir inkstų pažeidimui. Curr. Hipertenzijos Rep. 2018, 20. [CrossRef][PubMed]

10. Baker, J.; Kempinski, K. Role ofmelatoninoreguliuojant kraujospūdį: papildomas antihipertenzinis vaistas. Clin. Exp. Pharm.Physiol. 2018, 45, 755–766. [CrossRef] [PubMed]

11. Grossman, E.; Laudonas, M.; Zisapel, N. Melatonino poveikis naktiniam kraujospūdžiui: atsitiktinių imčių kontroliuojamų tyrimų metaanalizė. Vasc. Rizikos sveikatai vadybininkas. 2011, 7, 577–584. [CrossRef] [PubMed]

12. Pozo, D.; Delgado, M.; Fernandez-Santos, JM; Calvo, JR; Gomarizas, RP; Martin-Lacave, I.; Ortizas, GG; Guerrero, JM Mel1a-melatonino receptoriaus mRNR ekspresija T ir B limfocitų pogrupiuose iš žiurkės užkrūčio liaukos ir blužnies. Fasebas J. Off. Publ. Fed.Am. Soc. Exp. Biol. 1997, 11, 466–473. [CrossRef]

13. Guerrero, JM; Pozo, D.; García-Mauriño, S.; Osuna, C.; Molinero, P.; Calvo, JR Branduolinių receptorių įtraukimas į sustiprintą melatonino IL-2 gamybą Jurkat ląstelėse. Ann. NY Akad. Sci. 2000, 917, 397–403. [CrossRef] [PubMed]

14. Farez, MF; Mascanfroni, ID; Méndez-Huergo, SP; Taip, A.; Murugaijanas, G.; Garo, LP; Balbuena Aguirre, ME; Patel, B.;Ysrraelit, MC; Zhu, C.; ir kt.MelatoninasPrisideda prie išsėtinės sklerozės atkryčių sezoniškumo. Cell 2015, 162, 1338–1352.[CrossRef] [PubMed]

15. Kirabo, A.; Fontana, V.; de Faria, APC; Loperena, R.; Galindo, CL; Wu, J.; Bikineeva, AT; Dikalovas, S.; Xiao, L.; Chen, W. ir kt. DC izoketa modifikuoti baltymai aktyvina T ląsteles ir skatina hipertenziją. J. Clin. Ištirti. 2014, 124, 4642–4656. [CrossRef][PubMed]

16. Leibowitz, A.; Volkovas, A.; Vološinas, K.; Šemešas, C.; Baršakas, I.; Grossman, E. Melatoninas neleidžiainkstassužalojimas didelės druskos dietos sukeltos hipertenzijos modelyje, mažinant oksidacinį stresą. J. Pineal Res. 2016, 60, 48–54. [CrossRef] [PubMed]

17. Hawkins, P.; Mortonas, DB; Burman, O.; Dennisonas, N.; Sąžiningumas, P.; Jennings, M.; Lane, S.; Middleton, V.; Roughan, JV; Wells, S. ir kt. Laboratorinių gyvūnų gerovės vertinimo protokolų apibrėžimo ir įgyvendinimo vadovas: Vienuoliktoji BVAAWF/FRAME/RSPCA/UFAW jungtinės tobulinimo darbo grupės ataskaita. Lab. Anim. 2011, 45, 1–13. [CrossRef]

18. Šimko, F.; Reiteris, RJ; Paulius, L.Melatoninaskaip racionali alternatyva konservatyviam atsparios hipertenzijos gydymui.Hypertens Res. 2019, 42, 1828–1831. [CrossRef] [PubMed]

19. Rapp, JP Dahl druskai jautrios ir druskai atsparios žiurkės. Hipertenzija, 1982, 4, 753–763. [CrossRef]

20. Dahl, LK; Knudsenas, KD; Heine, MA; Leitl, GJ Lėtinio druskos pertekliaus vartojimo poveikis. Eksperimentinės žiurkių hipertenzijos modifikavimas keičiant dietą. Circ. Res. 1968, 22, 11–18. [CrossRef] [PubMed]

21. Rapp, JP; Dene, H. Dahl druskai jautrių ir druskai atsparių žiurkių inbredinių padermių raida ir charakteristikos. Hipertenzija 1985,7, 340–349. [CrossRef]

22. Broeris, M.; Grace, M.; Kotz, CM; Koya, V. Lyginamoji Sprague Dawley žiurkių augimo charakteristikų analizė, gauta iš skirtingų šaltinių. Lab. Anim Res. 2015, 31, 166–173. [CrossRef]

23. Talbot, SR; Biernatas, S.; Bleichas, A.; van Dijk, RM; Ernstas, L.; Häger, C.; Hilgers, SOA; Koegelis, B.; Koska, I.; Kuhla, A.; ir kt. Kūno svorio mažinimo apibrėžimas kaip humaniškas baigtis: kritinis įvertinimas. Lab. Anim 2020, 54, 99–110. [CrossRef] [PubMed]

25. Geschka, S.; Kretschmer, A.; Šarkovska, Y.; Jevgenovas, OV; Lawrenz, B.; Hucke, A.; Hocher, B.; Stasch, J.-P. Tirpios guanilatciklazės stimuliavimas apsaugo nuo fibrozinio audinio remodeliavimosi ir pagerina druskai jautrių Dahl žiurkių išgyvenimą. PLoS ONE 2011, 6, e21853. [CrossRef] [PubMed]

25. Wang, Y.; Mu, JJ; Liu, FQ; Renas, KY; Xiao, HY; Yang, Z.; Yuan, ZY Druskos sukeltas epitelio ir mezenchiminio perėjimas Dahls druskai jautriose žiurkėse priklauso nuo padidėjusio kraujospūdžio. Braz. J. Med. Biol. Res. Rev Bras. Pesquisa Med. E Biol. 2014, 47, 223–230.[CrossRef]

26. Holmsas, SW; Sugden, D. Proceedings: Melatonino poveikis pinealektomijos sukeltai hipertenzijai žiurkėms. Br. J. Pharm.1976, 56, 360P–361P.

27. Zanobonis, A.; Zanoboni-Muciaccia, W. Eksperimentinė hipertenzija pinealectomized žiurkėms. Life Sci. 1967, 6, 2327–2331. [CrossRef]

28. Zanobonis, A.; Forni, A.; Zanoboni-Muciaccia, W.; Zanussi, C. Pinealektomijos poveikis arteriniam kraujospūdžiui ir maisto bei vandens suvartojimui žiurkėse. J. Endokrinolis. Ištirti. 1978, 1, 125–130. [CrossRef] [PubMed]

29. Pechánová, O.; Zicha, J.; Paulis, L.; Zenebe, W.; Dobesová, Z.; Kojsová, S.; Jendekova, L.; Sládková, M.; Dovinová, I.; Simko, F. ir kt. N-acetilcisteino ir melatonino poveikis suaugusioms spontaniškai hipertenzinėms žiurkėms, kurioms nustatyta hipertenzija. Euras. J.Pharmcol. 2007, 561, 129–136. [CrossRef] [PubMed]

30. Leibowitz, A.; Peleg, E.; Sharabi, Y.; Šabtai, Z.; Shamiss, A.; Grossman, E. Vaidmuomelatoninožiurkių, sergančių metaboliniu sindromu, hipertenzijos patogenezėje. Esu. J. Hypertens 2008, 21. [CrossRef] [PubMed]

31. De Miguel, C.; Das, S.; Lundas, H.; Mattson, DL T limfocitai tarpininkauja hipertenzijai irinkstasDahl druskai jautrių medžiagų pažeidimai. Esu. J. Physiol. Regul. Sveikasis skaičius. Komp. Physiol. 2010, 298, R1136–R1142. [CrossRef] [PubMed]

32. Evansas, LC; Petrova, G.; Kurtas, T.; Yang, C.; Bukowy, JD; Mattsonas, DL; Cowley, AW Padidėjęs perfuzijos slėgis skatina inkstų T-ląstelių infiltraciją Dahl druskai jautrioje žiurkėje. Hipertenzija 2017, 70, 543–551. [CrossRef]

33. Abais-Battad, JM; Alsheikh, AJ; Panas, X.; Fehrenbachas, didžėjus; Dasinger, JH; Lundas, H.; Robertsas, ML; Kriegel, AJ; Cowley, AWJ; Kidambi, S.; ir kt. Dietos poveikis Dahl druskai jautriai hipertenzijai, inkstų pažeidimui ir T limfocitų transkriptui.Hypertens 2019, 74, 854–863. [CrossRef] [PubMed]

34. Fehrenbachas, didžėjus; Dasinger, JH; Lundas, H.; Zmaj, J.; Mattson, DL Splenocitų perkėlimas pablogina druskai jautrias hipertenzijas. Exp. Physiol. 2020, 105, 864–875. [CrossRef] [PubMed]

35. Ren, W.; Liu, G.; Chen, S.; Yin, J.; Wang, J.; Tanas, B.; Wu, G.; Bazeris, FW; Pengas, Y.; Li, T.; ir kt. Melatonino signalizacija T ląstelėse: funkcijos ir programos. J. Pineal Res. 2017, 62. [CrossRef]

36. Álvarez-Sánchez, N.; Cruz-Chamorro, I.; López-González, A.; Utrilla, JC; Fernández-Santos, JM; Martínez-López, A.; Lardone, PJ; Guerrero, JM; Carrillo-Vico, A. Melatoninas kontroliuoja eksperimentinį autoimuninį encefalomielitą, pakeisdamas T efektoriaus ir reguliavimo pusiausvyrą. Smegenų elgesys. Imunitetas. 2015, 50, 101–114. [CrossRef]

37. Chen, S.-J.; Huang, S.-H.; Chen, J.-W.; Wang, K.-C.; Yang, Y.-R.; Liu, P.-F.; Linas, G.-J.; Sytwu, H.-K.Melatoninaspadidina interleukino 10 ekspresiją ir slopina chemotaksę, kad slopintų uždegimą in situ ir sumažintų eksperimentinio autoimuninio encefalomielito sunkumą. Tarpt. Imunofarmakolas. 2016, 31, 169–177. [CrossRef] [PubMed]

38. Griffith, JW; Sokol, CL; Blizgesys, po KrChemokinaiir chemokinų receptoriai: ląstelių padėties nustatymas šeimininko gynybai ir imunitetui.Annu. Rev. Immunol. 2014, 32, 659–702. [CrossRef] [PubMed]

39. Alsheikh, AJ; Dasinger, JH; Abais-Battad, JM; Fehrenbachas, didžėjus; Yang, C.; Cowley, AWJ; Mattson, DL CCL2 tarpininkauja ankstyvai inkstų leukocitų infiltracijai druskai jautrios hipertenzijos metu. Esu. J. Physiol. Ren. Physiol. 2020, 318, F982–F993. [CrossRef][PubMed]

40. Liu, L.; Callahan, MK; Huangas, D.; Ransohoff, RM chemokino receptorius CXCR3: netikėta mįslė. Curr. Į viršų. Dev. Biol.2005, 68, 149–181. [CrossRef] [PubMed]

41. Jaunikis, JR; Blizgesys, AD CXCR3 ligandai: perteklinės, bendradarbiavimo ir antagonistinės funkcijos. Immunol. Cell Biol. 2011, 89 207–215. [CrossRef] [PubMed]

42. Van Raemdonck, K.; Van den Steenas, PE; Liekens, S.; Van Damme, J.; Struyf, S. CXCR3 ligandai ligoje ir terapijoje. Cytokine Growth Factor Rev. 2015, 26, 311–327. [CrossRef] [PubMed]

43. Younas, J.-C.; Yu, HT; Limas, BJ; Koh, MJ; Lee, J.; Chang, D.-Y.; Choi, YS; Lee, S.-H.; Kang, S.-M.; Jang, Y.; ir kt. Imunosenzuojančios CD8 plius T ląstelės ir 3 tipo CXC chemokino receptoriaichemokinaipadidėja sergant žmonių hipertenzija. Hipertenzija, 2013, 62, 126–133.[CrossRef] [PubMed]

44. Stumpfas, C.; Auer, C.; Yilmaz, A.; Lewczuk, P.; Klinghammeris, L.; Schneideris, M.; Danielis, WG; Schmiederis, RE; Česnakai, CD Serumo Th1 chemoattraktanto interferono gama indukuojamo baltymo (IP) 10 kiekis yra padidėjęs pacientams, sergantiems esmine hipertenzija. Hypertens Res. 2011, 34, 484–488. [CrossRef] [PubMed]

45. Rudemiller, NP; Lundas, H.; Priestley, JRC; Endresas, BT; Prokopas, JW; Jokūbas, HJ; Geurts, AM; Cohenas, EP; Mattson, DL SH2B3 (LNK), genomo masto asociacijos tyrimo kandidato į hipertenziją, mutacija susilpnina Dahl druskai jautrią hipertenziją per uždegiminį moduliavimą. Hipertenzija 2015, 65, 1111–1117. [CrossRef] [PubMed]

46. ​​Wade, B.; Petrova, G.; Mattson, DL Imuninių veiksnių vaidmuo angiotenzino II sukeltai hipertenzijai ir inkstų pažeidimams Dahlsalt jautrioms žiurkėms. Esu. J. Physiol. Regul. Sveikasis skaičius. Komp. Physiol. 2018, 314, R323–R333. [CrossRef] [PubMed]