Monoterpeno sudedamosios dalys iš Cistanche Tubulosa – kankanozidų A–E ir kankanolio cheminės struktūros –

Kontaktai: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 El. paštas:audrey.hu@wecistanche.com

Haihui XIE, Toshio MORIKAWA, Hisashi MATSUDA, Seikou NAKAMURA, Osamu MURAOKA ir Masayuki YOSHIKAWA

Abstraktus

Buvo išskirti keturi nauji iridoidiniai glikozidai – kankanosidai A (1), B (2), C (3) ir D (4), chlorintas iridoidas kankanolis (5) ir aciklinis monoterpeno glikozidas kankanosidas E (6). iš džiovintų Cistanche tubulosa (SCHRENK) R. WIGHT (Orobanchaceae) stiebų metanolio ekstrakto kartu su 16 žinomų junginių. Šių naujų junginių (1–6) struktūros buvo nustatytos remiantis cheminiais ir fizikiniais bei cheminiais įrodymais.

Pagrindiniai žodžiai:Cistanche tubulosa; kankanosidas; kankanolio; iridoidas; monoterpenas; Orobanchaceae

Cistanche tubulosa(SCHRENK) R. WIGHT (Orobanchaceae)yra daugiametis parazitinis augalas, augantis ant Salvadora arba Calotropis rūšių šaknų ir paplitęs Šiaurės Afrikoje, Arabijoje ir Azijos šalyse.1) Šio augalo (japoniškai Kanka-nikujuyou) stiebai tradiciškai buvo naudojami impotencijai, sterilumui gydyti. , lumbago ir kūno silpnumas.2) Anksčiau iš Kinijos ir Pakistano C. tubulosa buvo išskirti keli iridoidai, monoterpenoidai, feniletanoidai ir lignanai. 1,3–7) Atliekant nuoseklius tyrimus apie biologiškai aktyvias sudedamąsias dalis iš kinų natūralių vaistų,8–18) keturi nauji iridoidiniai glikozidai, kankanozidai A (1), B (2), C (3) ir D (4). ), iš šio augalinio vaisto metanolio ekstrakto buvo išskirti chloruotas iridoidas kankanolis (5) ir aciklinis monoterpeno glikozidas kankanosidas E (6) kartu su 16 žinomų junginių, įskaitant 12 monoterpenų (7–18). Šiame darbe nagrinėjama naujų monoterpeno sudedamųjų dalių (1–6) išskyrimas ir struktūros išaiškinimas.

Cistanche tubulosa

Metanolinis ekstraktas iš džiovintų stiebųCistanche tubulosa(26,8 proc. šio augalinio vaisto) buvo atlikta normalios fazės ir atvirkštinės fazės silikagelio kolonėlės chromatografija ir pakartotinis HPLC, kad gautų kankanozidus A (1, 0.0{{10 }}54 proc. ), B(2, 0.030 proc. ), C (3, 0.00 27 proc. ), ir D (4, {{40}.0015 proc. ), kankanolio (5, 0.0{ {66}}34 proc. ), ir kankanosido E (6, 0.027 proc. ) kartu su musaenozido rūgštimi19) (7, 0.020 proc. ) , genipozido rūgštis19) (8, 0,030 proc.), 8-epilogano rūgštis7) (9, 0,033 proc.), glurozidas19) (10, 0,14 proc.), antiridas20) (11, 0,0079 proc.), ajugolis19) (12,033 proc.) proc.), barciozidas19) (13, 0,21 proc.), 6-deoksikatalpolas19) (14, 0,11 proc.), argiolis21) (15, 0,0030 proc.), cistaninas22,23) (16, 0,0040 proc.), cis (tachlorinas22) 17, 0,0035 proc. ), (2E,6Z)-8-bD-gliukopiranoziloksi-2, 6-dimetil-2, 6-oktadieno rūgštis24) (18, 0,0028 proc. ), D manitolis25) (4,19 p ercent ), uridinas25) (0,0069 proc.), (3R)-3-hidroksi-2- pirolidinonas26,27) (0,0020 proc.) ir (3R)-3-hidroksi-1-metilas{ {97}}pirolidinonas27) (0,0059 proc.).

Kankanozido A struktūra (1) Kankanozidas A (1) buvo gautas kaip amorfiniai milteliai ir pasižymėjo neigiamu optiniu sukimu ([a]D 25 107,4 laipsnio MeOH). IR spektras 1 rodė sugerties juostą ties 1647 cm 1 , priskirtiną olefino funkcijai, be stiprių absorbcijos juostų ties 341 0 ir 1 076 cm 1 , rodančiomis glikozido fragmentą. Atliekant teigiamų ir neigiamų jonų greitųjų atomų bombardavimą (FAB)-MS 1, kvazimolekulinių jonų smailės buvo stebimos esant m/z 369 (M Na) ir 345 (MH), o didelės skiriamosios gebos FAB-MS analizė atskleidė molekulinę 1 formulė yra C16H26O8. Rūgštinė 1 hidrolizė su 1,0 M druskos rūgštimi (HCl) atpalaidavo D-gliukozę, kuri buvo identifikuota HPLC analize naudojant optinio sukimosi detektorių.8,10-12,15-18) 1H- (CD3OD, 1 lentelė) ir 13C-BMR (2 lentelė) spektrai 1, kurie buvo priskirti įvairiais BMR eksperimentais,28) parodė signalus, priskirtinus dviem metilams [d 1,31 (s, 10-H3), 1,51 (br s, {{47}). }H3)], du metilenai [d 1,49, 2,02 (abu m, 6a- ir 6b-H), 1,64, 1,67 (abu m, 7b- ir 7a-H)], du metanai [d 2,21 (dd, J 2,7) , 9,5 Hz, 9-H), 2,71 (m, 5-H)] ir a,b-nesočiojo acetalio grupę [d 5,33 (d, J 2,7 Hz, 1-H) ), 5,95 (br s, 3-H)] kartu su b-gliukopiranozilo fragmentu [d 4,62 (d, J 7,9 Hz, 1 -H)]. Kaip parodyta 1 pav., 1 H–1H koreliacinės spektroskopijos (1 H–1 H COSY) eksperimentas 1 parodė, kad yra dalinių struktūrų, parašytų paryškintomis linijomis. Atliekant heterobranduolinių kelių jungčių koreliacijų (HMBC) eksperimentą su 1, buvo pastebėtos ilgalaikės koreliacijos tarp šių protonų ir anglies atomų (3-H, 1 -H ir 1-C; 11- H3 ir 3-C; 3-H, 5-H, 6-H2, 9-H, 11-H3 ir 4- C ; 11-H3 ir 5-C; 10-H3 ir 7-C; 1-H, 7-H2, 9-H, 10-H3 ir 8-C; 10-H3 ir 9-C; 7-H2 ir 10-C), kaip parodyta 1 pav. Fermentinė 1 hidrolizė su b-gliukozidaze davė aglikoną, kankageniną a (1a), kaip parodyta 3 pav. 13C BMR spektro palyginimas su 1a spektru atskleidė glikozilinimo poslinkį aplink 1- padėtį 1. [1: dC 94,1 (1-C), 134,6 (3-C), 53,3 (9-C); 1a: dC 92,9 (1-C), 135,3 (3-C), 54,7 (9-C)]. Taigi, bD-gliukopiranozilo fragmento 1 ryšys taip pat buvo išaiškintas kaip 1-1a padėtyje. Toliau santykinė 1 stereostruktūra buvo apibūdinta branduolinės Overhauserio stiprinimo spektroskopijos (NOESY) eksperimentu, kuris parodė NOE koreliaciją tarp šių protonų porų (1-H ir 10-H3; 3-H ir 11-H3; 5-H ir 6b-H, 9-H; 6b-H ir 7b-H; 7a-H ir 10-H3; 7b-H ir {{ 190}}H), kaip parodyta 2 pav. Galiausiai, absoliuti 1-padėties 1 konfigūracija buvo nustatyta taikant 1,1-disacharido 13C BMR glikozilinimo poslinkio taisyklę29), kuri buvo nustatyta. taikyti pusacetalio junginiams.30,31) Palyginus 1H-BMR analizę, įskaitant NOESY eksperimentą, patvirtinta, kad 1 pozicijos 1-stereostruktūra išlieka 1a. Nustatyta, kad glikozilinimo poslinkio reikšmės [Dd 1,2 ppm (1 -C) ir 0,9 ppm (1- C), piridine-d5] būdingos R, Rhemiacetalio deriniui, kuris atitiko absoliučią 1 stereostruktūrą kaip parodyta 3 pav. Todėl buvo nustatyta, kad absoliuti konfigūracija 1-1 padėtyje yra S konfigūracija, o absoliuti 1 stereostruktūra buvo išaiškinta, kaip parodyta.

Kankanozidų B (2) ir C (3) struktūros Kankanozidas B (2) taip pat buvo išskirtas kaip amorfiniai milteliai su neigiamu optiniu sukimu ([a]D 26 118,7 laipsnis MeOH). IR spektras 2 parodė sugerties juostas ties 3410, 1647 ir 1{{5{{80}}}85 cm 1, priskirtinas hidroksilo, olefino ir eterio funkcijoms. Molekulinė formulė C15H24O10 iš 2 buvo nustatyta pagal kvazimolekulinių jonų smailes teigiamų jonų FAB-MS ir didelės skiriamosios gebos FAB-MS. 2 rūgštinė hidrolizė su 1,0 M HCl atpalaidavo D-gliukozę, kuri buvo identifikuota HPLC analize naudojant optinio sukimosi detektorių.8,10-12,15-18) 1H- (CD3OD, 1 lentelė) ir 13C-BMR ( 2 lentelė) spektrai28) iš 2 parodė signalus, priskirtinus dviems metilenams [d 1,40 (DDD, J 5,2, 7,3, 13,5 Hz, 6a-H), 2,52 (DDD, J 7,0, 9,2, 13,5 Hz, 6b-H), , 3,99 (abu d, J 11,9 Hz, 10-H2)], keturi metanai [d 2,21 (dd, J 6,4, 8,6 Hz, 9-H), 2,83 (m, 5- H), 4,02 (dd, J 5,2, 7,0 Hz, 7-H), 5,49 (d, J 6,4 Hz, 1-H)] ir cisolefifino pora [d 4,95 (dd, J 4,0) , 6,1 Hz, 4-H), 6,22 (dd, J 1,8, 6,1 Hz, 3-H)] kartu su b-gliukopiranozilo dalimi [d 4,72 (d, J 7,9 Hz, 1 - H)]. Protonų ir anglies signalai 1H ir 13C-BMR duomenyse 2 buvo panašūs į 6-deoksikatalpolo (14) signalus, išskyrus signalus dėl 7- ir 8- pozicijų. Kaip parodyta 1 pav., 1 H–1 H COZY eksperimentas ant 2 parodė, kad yra dalinių struktūrų, parašytų paryškintomis linijomis, o HMBC eksperimente buvo pastebėtos ilgalaikės koreliacijos tarp šių protonų ir anglies porų ({{ 122}}H, 1 -H ir 1-C; 1-H ir 3-C; 10-H2 ir 7- C; 1-H , 7-H, 9-H, 10-H2 ir 8-C; 7-H, 10-H2 ir 9-C ; 7-H ir 10-C). Santykinė 2 stereostruktūra buvo apibūdinta NOESY eksperimentu, kuris parodė NOE koreliacijas tarp šių protonų porų (1-H ir 10-H2; 3- H ir 4-H; 5-H ir 6b-H, 9-H; 6b-H ir 7-H; 7-H ir 9-H), kaip parodyta 2 pav. Galiausiai 14 šarminis apdorojimas 5 procentų vandeniniu kalio hidroksidu (KOH) davė 2 ir 19, 32), todėl buvo išaiškinta 2 stereostruktūra.

Kankanozidas C (3) buvo išskirtas kaip amorfiniai milteliai su neigiamu optiniu sukimu ([a]D 26 34.0 laipsnis MeOH). 3 neigiamų jonų FAB-MS buvo pastebėta izotopų kvazimolekulinių jonų smailių pora, esant m/z 399 ir 401 (MH) . Didelės skiriamosios gebos FAB-MS matavimu nustatyta, kad 3 molekulinė formulė yra C15H25ClO10. 3 rūgštinė hidrolizė su 1,0 M HCl atpalaidavo D-gliukozę, kuri buvo identifikuota HPLC analize naudojant optinio sukimosi detektorių.8,10-12,15-18) 1H- (CD3OD, 1 lentelė) ir 13C-BMR ( 2 lentelė) spektrai28) iš 3 parodė signalus, priskirtinus trims metilenams [d 1,70 (br dd, J apytikriai 3, 13 Hz, 4a-H), 2,70 (br dd, J maždaug 6, 13 Hz, 4b-H) , 1,68 (br d, J maždaug 13 Hz, 6a H), 2,44 (m, 6b-H), 4,01, 4,04 (abu d, J 11,3 Hz, 10-H2)], penki metinai [d 2,47 (dd, J 2,5, 7,9 Hz, 9-H), 2,61 (m, 5- H), 3,94 (br s, 7-H), 5,10 (br d, J ca. 3 Hz, 3-H), 5,48 (d, J 2,5 Hz, 1-H)] ir b-gliukopiranozilo fragmentą [d 4,60 (d, J 8,0 Hz, 1 -H)]. Protonų ir anglies signalai 3 1H ir 13C-BMR spektruose buvo dedami ant 2, išskyrus signalus dėl 3- ir 4- padėčių. BD-gliukopiranozilo ir chloro funkcijos padėtis 3 buvo išaiškinta iš H-H COZY ir HMBC eksperimentų, kaip parodyta 1 pav. Todėl 3 plokštuminė struktūra buvo sukonstruota taip, kaip parodyta. Santykinė 3 stereostruktūra buvo nustatyta NOESY eksperimentu, kurio metu NOE koreliacijos buvo stebimos tarp šių protonų porų (1-H ir 3-H, 10-H2; 3- H ir 4a-H; 4b-H ir 5- H; 5-H ir 6b-H, 9-H; 6b-H ir 7-H; {{121} }H ir 9-H), kaip parodyta 2 pav.

Kankanozido D (4) ir kankanolio (5) struktūros Kankanozidas D (4) buvo išskirtas kaip amorfiniai milteliai su neigiamu optiniu sukimu ([a]D 25 30,6 laipsnis MeOH). IR spektras 4 parodė sugerties juostą ties 1655 cm 1 , priskirtiną olefino funkcijai, ir stiprias absorbcijos juostas ties 341 0 ir 1 078 cm 1 , o tai rodo jo glikozidinę struktūrą. Teigiamų jonų FAB-MS 4, kvazimolekulinio jonų smailė buvo pastebėta esant m/z 341 (M Na) . Molekulinė formulė C15H26O7 iš 4 buvo nustatyta didelės raiškos FAB-MS matavimu. Rūgštinė 4 hidrolizė su 1,0 M HCl atpalaiduota D-gliukoze,8,10-12,15-18), o (R)-rotundiškumas (4a) 33,34) buvo gautas fermentine hidrolize 4 su b-gliukozidaze. 1H-BMR (3 lentelė, CD3OD) ir 13C-BMR (4 lentelė) spektrai28) iš 4 parodė signalus, priskirtinus metilui [d 1,69 (s, 10-H3)], trims metilenams [d 1,41, 2,06 (abu m, 4-H2), 1,51, 2,01 (abu m, 6a- ir 6b-H), 2,23 (br dd, J maždaug 8, 15 Hz, 7a-H), 2,37 (br dd , J maždaug 8, 15 Hz, 7b-H)], metinas [d 2,90 (m, 5-H)] ir du metilenai, turintys deguonies funkciją {d [3,56 (DDD, J 2,8, 7,4) , 13,2 Hz), 3,97 (DDD, J 4,9, 8,0, 13,2 Hz), 3-H2], 4,04, 4,18 (abu d, J 12,2 Hz, 1-H2)} kartu su b- gliukopiranozilo dalis [d 4,25 (d, J 7,7 Hz, 1 -H)]. BD-gliukopiranozilo dalies padėtis 4-oje HMBC eksperimentu buvo išaiškinta kaip 3-padėtis (1 pav.). Remiantis šiais įrodymais, absoliuti 4 stereostruktūra buvo nustatyta kaip parodyta.

Kankanolis (5) buvo gautas kaip amorfiniai milteliai su teigiamu optiniu sukimu ([a]D 25 11,1 laipsnis). Cheminė jonizacija (CI)-MS 5 parodė izotopų jonų smailių porą, esant m/z 221 ir 223 dėl kvasimolekulinio jono (MH). Didelės skiriamosios gebos CI-MS matavimas 5 atskleidė, kad molekulinė formulė yra C9H13ClO4. 1H-BMR (1 lentelė, CD3OD) ir 13C-BMR (2 lentelė) spektrai28) iš 5 parodė, kad yra šios funkcijos: trys metilenai [d 1,60 (DDD, J 2,5, 5,5, 13,1). Hz, 4a-H), 1,80 (br dd, J maždaug 3, 13 Hz, 4b H), 1,83 (br d, J maždaug 12 Hz, 6a-H), 2,57 (m, 6b-H), 3,75 , 3,88 (abu d, J 9,2 Hz, 10-H2)], penki metinai [d 2,76 (dd, J 4,3, 8,0 Hz, 9-H), 2,50 (m, 5- H), 3,80 (br s, 7-H), 5,17 (br d, J maždaug 3 Hz, 3-H), 5,26 (d, J 4,3 Hz, 1-H) ]. Plokščioji 5 struktūra buvo patvirtinta 1 H–1 H COZY ir HMBC eksperimentais. Tai yra, 1 H–1 H COZY eksperimentas 5 parodė, kad yra dalinių struktūrų, parašytų paryškintomis linijomis, o HMBC eksperimente buvo stebimos ilgalaikės koreliacijos, kaip parodyta 1 pav. Santykinė 5 stereostruktūra buvo nustatyta NOESY eksperimentu, kurio metu NOE koreliacijos buvo stebimos tarp sekančių protonų porų (1-H ir 9-H; 3-H ir 4a-H; 4b-H ir {{ 93}} H; 5-H ir 6b-H, 9-H; 6b-H ir 7-H; 7-H ir 9-H), kaip parodyta 2 pav. Palyginus 1H ir 13C-BMR duomenis 5 su 14a duomenimis, kurie buvo gauti apdorojant 14 5 procentų vandeniniu HCl, kaip parodyta 1 diagramoje, 35) chloro padėtis. 5 grupė buvo palaikoma kaip 3-pozicija. Be to, acetilinant 5 acto anhidridu (Ac2O) ir piridinu, gaunamas 3,{119}}oksidas (5a), o 14a – diacetatas (14b) tomis pačiomis acetilinimo sąlygomis. Šie įrodymai taip pat leido mums patvirtinti, kad chloro funkcijos padėtis yra 3b padėtis (3 diagrama). Todėl 5 stereostruktūra buvo nustatyta kaip parodyta.

Kankanozido E (6) struktūra Kankanozidas E (6) buvo išskirtas kaip amorfiniai milteliai su neigiamu optiniu sukimu ([a]D 25 20.0 laipsnis MeOH). IR spektras 6 rodė sugerties juostas ties 3410, 1647, 1085 cm1, priskirtinos glikozidinėms ir karbonilinėms funkcijoms, o jo UV spektras rodė sugerties maksimumą ties 211 nm (log e 4,63), o tai rodo, kad yra nesočiosios karboksirūgšties. Molekulinė formulė C16H28O8 iš 6 buvo apibūdinta teigiamų ir neigiamų jonų FAB-MS ir didelės skiriamosios gebos MS matavimu. 6 išsiskyrusios D-gliukozės,8,10-12,15-18) rūgštinė hidrolizė, o (2E,6R)-8-hidroksi-2,6-dimetil- 2-oktano rūgštis (6a) 36) buvo gautas fermentine hidrolize 6 su b-gliukozidaze. 1H-BMR (3 lentelė, CD3OD) ir 13C-BMR (4 lentelė) spektrai28) iš 6 parodė, kad yra (2E,6R)-8-hidroksi-2,6- dimetil-2-oktano rūgšties fragmentas [d 0,95 (d, J 6,4 Hz, 10-H3), 1,30, 1,48 (abu m, 5-H2), 1,45, 1,70 (abi m, { {70}}H2), 1,65 (m, 6-H), 1,81 (s, 9-H3), 2,22 (2H, m, 4-H2), 3,61, 3,94 (abu m, 8-H2), 6,78 (dd, J 1,2, 7,3 Hz, 3-H)] kartu su bD-gliukopiranozilo dalimi [d 4,26 (d, J 7,6 Hz, 1 -H)] . Palyginus anglies signalus 6 13C-BMR spektre su 6a signalais, glikozilinimo poslinkis buvo pastebėtas maždaug 8-padėtyje 6. Gliukozidinės jungties padėtis taip pat buvo patvirtinta HMBC eksperimentais, kaip parodyta 1 pav. Taigi absoliuti 6 stereostruktūra buvo išaiškinta kaip (2E,6R)-8-b-D-gliukopiranoziloksi-2,6-dimetil-2-oktano rūgštis.

cistanche ekstrakto nauda

Eksperimentinis

Fiziniams duomenims gauti buvo naudojami šie instrumentai: specifiniai sukimai, Horiba SEPA{0}} skaitmeninis poliarimetras (l 5 cm); UV spektrai, Shimadzu UV-1600 spektrometras; IR spektrai, Shimadzu FTIR-8100 spektrometras; EI-MS, CI-MS ir didelės skiriamosios gebos CI-MS, JEOL JMS-GCMATE masės spektrometras; FAB-MS ir didelės raiškos MS, JEOL JMS-SX 102A masės spektrometras; 1H-BMR spektras, JEOL EX-270 (270 MHz) ir JNM-LA500 (500 MHz) spektrometrai; 13C-BMR spektrai, JEOL EX-270 (68 MHz) ir JNM-LA500 (125 MHz) spektrometrai su tetrametilsilanu kaip vidiniu etalonu; ir HPLC detektorius, Shimadzu RID{27}}A lūžio rodiklis ir SPD{28}}Avp UV-VIS detektoriai. HPLC kolonėlė, YMC-Pack ODS-A (250 x 4,6 mm id) ir (250 x 20 mm id) kolonėlės buvo naudojamos atitinkamai analitiniais ir paruošiamaisiais tikslais.

Chromatografijai buvo naudojamos šios eksperimentinės sąlygos: įprastos fazės silikagelio kolonėlės chromatografija, silikagelis BW-200 (Fuji Silysia Chemical, Ltd., Aichi, Japonija, 15{{10}}-35). 0 tinklelis); atvirkštinės fazės silikagelio kolonėlės chromatografija, Chromatorex ODS DM1020T (Fuji Silysia Chemical, Ltd., Aichi, Japonija, 100–200 akių); TLC, iš anksto padengtos TLC plokštelės silikageliu 60F254 (Merck, 0,25 mm) (įprasta fazė) ir silikageliu RP- 18 F254S (Merck, 0,25 mm) (atvirkštinė fazė); atvirkštinės fazės HPTLC, iš anksto padengtos TLC plokštelės silikageliu RP-18 WF254S (Merck, 0,25 mm); ir aptikimas buvo pasiektas purškiant 1 % Ce(SO4)2–10 % vandeniniu H2SO4, po to kaitinant.

Augalinė medžiaga

Džiovinti Cistanche tubulosa (SCHRENK) R. WIGHT stiebai 2005 m. sausio mėn. buvo įsigyti Urumči, Sindziango provincijoje, Kinijoje per Eishin Trading Co., Ltd. Osaka, Japonija, o botaninį identifikavimą atliko profesorius Jia Xiaoguang iš Sindziango tradicinės kinų instituto. ir etnologiniai vaistai. Šio augalo kvito pavyzdys (2005.01.2005 Sindziangas-01) yra mūsų laboratorijoje.

Ekstrahavimas ir izoliacija

Džiovinti C. tubulosa stiebai (50 kg) buvo susmulkinti į miltelius ir tris kartus ekstrahuoti metanoliu su grįžtamuoju srautu 3 valandas. Išgarinus tirpiklį sumažintame slėgyje, gautas metanolinis ekstraktas (1340 g, 26,8 proc. iš šio augalinio vaisto). Metanolinis ekstraktas (160 g) buvo atliktas normalios fazės silikagelio kolonėlės chromatografija [3,2 kg, CHCl3-MeOH-H2O (10 : 3 : 1 → 7 : 3 : 1, žemesnė sluoksnis→6 : 4 : 1)MeOH], kad gautųsi šešios frakcijos [Fr. 1 (5.{85}}4 g), kun. 2 (9,84 g), kun. 3 (7,80 g), kun. 4 (13,28 g), kun. 5 (113,6{{104}} g), ir kun. 6 (7,61 g)]. 1 frakcija (5.00 g) buvo atskirta atvirkštinės fazės silikagelio kolonėlės chromatografija [150 g, MeOH-H2O (40 6: 60→ 5{{ 162}} : 50→60 : 40, v/v)→MeOH], kad gautųsi penkios frakcijos [Fr. {{50}} (83{{201}} mg), kun. 1-2 (590 mg), kun. 1-3 (180 mg), kun. 1-4 (124 mg) ir kun. 1-5 (3200 mg)]. Kun. {{60}} (830 mg) toliau buvo atskirtas HPLC [MeOH-H2O (10 : 90, v/v)] ir gautas kankanolis (5, 20). mg, 0,0034 proc.), argiolio (15, 18 mg, 0,0030 proc.), cistanino (16, 24 mg, 0,0040 proc.) ir kun. 1-1-2 (62 mg), kuris toliau buvo atskirtas HPLC [MeOH-H2O (2:98, v/v)] ir gautas (3R)-3-hidroksi-2-pirolidinonas (0,0020 proc. ) ir (3R)-3-hidroksi-1-metil-2-pirolidinonas (0,0059 proc.). Kun. 1-2 (590 mg) buvo išgrynintas HPLC [MeOH-H2O (35:65, v/v) ir CH3CN-H2O (20:80, v/v)] ir gautas cistanchlorinas (17, 21 mg, 0,0035). procentai). 2 frakcija (9,72 g) buvo apdorota atvirkštinės fazės silikagelio kolonėlės chromatografija [290 g, MeOH-H2O (20 : 80 → 30 : 70 → 40 : 60 → 60 : 40, v/v) → MeOH]. septynios frakcijos [kun. 2-1 (1986 mg), kun. 2-2 (1563 mg), kun. 2-3 (3931 mg), kun. 2-4 (375 mg), kun. 2-5 (486 mg), kun. 2-6 (460 mg) ir kun. 2-7 (336 mg)]. Kun. 2-1 (466 mg) buvo atskirtas HPLC [MeOH-H2O (5:95, v/v)] ir gautas uridinas (0,0069 proc.). Kun. 2-2 (535 mg) buvo atskirtas HPLC [MeOH-H2O (10 : 90, v/v)], kad gautų antiridą (11, 15 mg, 0,0079 proc.) ir 6-deoksikatalpolą (14, 214). mg, 0,11 proc.). Kun. 2-3 (535 mg) buvo atskirtas HPLC [MeOH-H2O (20:80, v/v)], kad gautų glurozidą (10, 110 mg, 0,14 proc.) ir barciozidą (13, 164 mg, 0,21 proc.) . Kun. 2-4 (375 mg) buvo atskirtas HPLC [MeOH-H2O (30:70, v/v)], kad gautų kankanozidus A (1, 32 mg, 0,0054 proc.) ir D (4, 9 mg, 0,0015 proc. ). Kun. 2-6 (460 mg) toliau buvo atskirtas HPLC [MeOH-H2O (45 : 55, v/v)], kad gautų kankanosidą E (6, 161 mg, 0,027 proc.) ir (2E,6Z){{192 }}bD-gliukopiranoziloksi-2,6-dimetil-2, 6-oktadieno rūgštis (18, 17 mg, 0,0028 proc.). 3 frakcija (7,60 g) buvo apdorota atvirkštinės fazės silikagelio kolonėlės chromatografija [230 g, MeOH-H2O (20 : 80 → 40 : 60 → 50 : 50 → 60 : 40, v/v) → MeOH]. penkios frakcijos [kun. 3-1 (2652 mg), kun. 3-2 (593 mg), kun. 3-3 (3610 mg), kun. 3-4 (190 mg) ir kun. 3-5 (336 mg)]. Kun. 3-1 (480 mg) buvo išgrynintas HPLC [MeOH-H2O (10:90, v/v)], kad gautų kankanosidą B (2, 19 mg, 0,018 proc.), genipozido rūgštį (8, 32 mg, 0,030). proc.), ir ajugolio (12, 12 mg, 0,011 proc.). 4 frakcija (13,10 g) buvo apdorota atvirkštinės fazės silikagelio kolonėlės chromatografija [390 g, MeOH-H2O (10 : 90 → 20 : 80 → 30 : 70 → 40 : 60 → 50 : 50, v/v) → MeOH] gauti septynias frakcijas [Fr. 4-1 (6114 mg), kun. 4-2 (430 mg), kun. 4-3 (1058 mg), kun. 4-4 (170 mg), kun. 4-5 (2595 mg), kun. 4-6 (1635 mg) ir kun. 4-7 (1064 mg)]. Kun. 4-2 (430 mg) toliau buvo atskirtas HPLC [MeOH-H2O (5:95, v/v)], kad gautų 2 (70 mg, 0,012 proc.) ir kankanosidą C (3, 16 mg, 0,0027 proc.) . Kun. 4-6 (1058 mg) taip pat buvo atskirtas HPLC [MeOH-H2O (15:85, v/v)], kad gautų musaenozido rūgštį (7, 116 mg, 0,020 proc.) ir 8-epilogano rūgštį (9, 193 mg, 0,033 proc.). 5 frakcija (15,15 g) buvo apdorota atvirkštinės fazės silikagelio kolonėlės chromatografija [455 g, MeOH-H2O (0 : 100 → 10 : 90 → 20 : 80 → 40 : 60 → 50 : 50, v/v) → MeOH ] duoti septynias trupmenas [kun. 5-1 (9311 mg), kun. 5-2 (1114 mg), kun. 5-3 (306 mg), kun. 5-4 (347 mg), kun. 5-5 (1620 mg), kun. 5-6 (1453 mg) ir kun. 5-7 (1106 mg)]. Kun. 5-1 (9311 mg) buvo kristalizuotas iš MeOH ir gautas D-manitolis (3337 mg, 4,19 proc.).

Žinomi junginiai (7–18) buvo identifikuoti palyginus jų fizikinius duomenis ([a]D, IR, 1H-BMR, 13C-BMR, MS) su nurodytomis reikšmėmis 1,7,19-24,26,27) arba komercinių mėginių.25) Kankanozidas A (1): amorfiniai milteliai, [a]D 25 107,4 laipsnio (c 1,50, MeOH). Didelės skiriamosios gebos teigiamų jonų FAB-MS: apskaičiuota C16H26O8Na (M Na) 369,1525; Rasta 369,1522. IR (KBr): 3410, 2940, 1647, 1076 cm1. 1H-BMR (500 MHz, CD3OD ir piridino-d5) d: pateikta 1 lentelėje. 13C-BMR (125 MHz, CD3OD ir piridino-d5) d C: pateikta 2 lentelėje. Teigiamų jonų FAB-MS: m /z 369 (M Na). Neigiamų jonų FAB-MS: m/z 345 (MH).

Kankanozidas B (2): amorfiniai milteliai, [a]D 26 118,7 laipsnio (c 0.10, MeOH). Didelės skiriamosios gebos teigiamų jonų FAB-MS: apskaičiuota C15H24O10Na (M Na) 387,1267; Rasta 387,1261. IR (KBr): 3410, 2940, 1647, 1085 cm1. 1H-BMR (500 MHz, CD3OD) d: pateikta 1 lentelėje. 13C-BMR (125 MHz, CD3OD) dC: pateikta 2 lentelėje. Teigiamų jonų FAB-MS: m/z 387 (M Na). Neigiamų jonų FAB-MS: m/z 363 (MH).

Kankanozidas C (3): amorfiniai milteliai, [a]D 26 34.0 laipsnis (c 1.00, MeOH). Didelės skiriamosios gebos neigiamų jonų FAB-MS: apskaičiuota C15H24ClO10 (MH) 399,1058; Rasta 399.1077. IR (KBr): 3410, 2964, 1159, 1078, 1048, 949 cm1. 1H-BMR (500 MHz, CD3OD) d: pateikta 1 lentelėje. 13C BMR (125 MHz, CD3OD) dC: pateikta 2 lentelėje. Neigiamų jonų FAB-MS: m/z 399, 401 (MH).

Kankanozidas D (4): amorfiniai milteliai, [a]D 25 30,6 laipsnio (c 0,50, MeOH). Didelės skiriamosios gebos teigiamų jonų FAB-MS: apskaičiuota C15H26O7Na (M Na) 341,1204; Rasta 341,1210. IR (KBr): 3410, 2940, 1655, 1078, 1040 cm1. 1H-BMR (500 MHz, CD3OD) d: pateikta 3 lentelėje. 13C-BMR (125 MHz, CD3OD) dC: pateikta 4 lentelėje. Teigiamų jonų FAB-MS: m/z 341 (M Na). Neigiamų jonų FAB-MS: m/z 317 (MH).

Kankanolis (5): amorfiniai milteliai, [a]D25 11,1 laipsnio (c 1,40, MeOH). Didelės skiriamosios gebos CI-MS: apskaičiuota C9H14ClO4 (MH) 221,0580; Rasta 221.0582. IR (KBr): 3399, 3004, 1165, 1096, 1059, 1048, 955 cm1. 1H-BMR (500 MHz, CD3OD) d: pateikta 1 lentelėje. 13C-BMR (125 MHz, CD3OD) d C: pateikta 2 lentelėje. CI-MS m/z (procentais): 221 (MH) (5 ), 223 (MH) (2), 185 (88), 167 (100), 149 (71) ir 57 (49).

Kankanozidas E (6): amorfiniai milteliai, [a]D 25 20,0 laipsnio (c 2.00, MeOH). Didelės skiriamosios gebos teigiamų jonų FAB-MS: apskaičiuota C16H28O8Na (M Na) 371,1682; Rasta 371,1690. UV [MeOH, nm (log e)]: 215 (4,16). IR (KBr): 3410, 2940, 1647, 1085, 1043 cm1. 1H-BMR (500 MHz, CD3OD) d: pateikta 3 lentelėje. 13C-BMR (125 MHz, CD3OD) dC: pateikta 4 lentelėje. Teigiamų jonų FAB-MS: m/z 371 (M Na). Neigiamų jonų FAB-MS: m/z 347 (MH).

cistanche ekstrakto nauda

1-4 ir 6 rūgštinė hidrolizė su 1 M HCl

1–4 arba 6 (kiekvienas po 1,5 mg) tirpalas 1 M HCl (0,5 ml) kaitinamas su grįžtamu šaldytuvu 3 valandas. Po aušinimo reakcijos mišinys buvo supiltas į ledinį vandenį ir neutralizuotas Amberlite IRA-400 (OH forma), o derva pašalinta filtruojant. Tada filtratas ekstrahuojamas EtOAc. Vandeninis sluoksnis buvo tiriamas HPLC tokiomis sąlygomis: HPLC kolonėlė, Ka jutiklis LC NH{{10}}, 4,6 mm id 250 mm (Tokyo Kasei Co., Ltd., Tokijas, Japonija); aptikimas, optinis sukimas [Shodex OR-2 (Showa Denko Co., Ltd., Tokijas, Japonija)]; judrioji fazė, CH3CN–H2O (75:25, v/v); kolegos greitis 0,8 ml/min; kolonėlės temperatūra, kambario temperatūra. Vandeniniame sluoksnyje esančios D-gliukozės identifikavimas atliktas palyginus jos sulaikymo laiką ir optinį sukimąsi su autentiško mėginio sulaikymo trukme: tR 12,3 min (teigiamas optinis sukimasis)

1, 4 ir 6 fermentinė hidrolizė su b-gliukozidaze

1 (7,7 mg) tirpalas H2O (1,5 ml) buvo paveiktas b-gliukozidaze (50 mg, iš Almond, Oriental Yeast Co., Tokijas, Japonija) ir tirpalas maišomas 37 laipsnių temperatūroje. 3 d. Į reakcijos mišinį įdėjus EtOH, tirpiklis pašalintas sumažintame slėgyje, o likutis išgrynintas HPLC [MeOH-H2O (55:45, v/v)], kad būtų gautas kankageninas a (1a, 2,3 mg, 56 proc.). . Taikant panašią procedūrą, (R)-rotundiolis33,34) (4a, 1,2 mg, 69 proc.) ir (2E,6R)-8-hidroksi-2,6-dimetilas{{30} }oktano rūgštis36) (6a, 6,8 mg, 62 proc.) buvo gauta atitinkamai iš 4 (3,5 mg) ir 6 (20,4 mg).

Kankageninas a (1a): balti milteliai, [a]D 25 18,4 laipsnio (c 0.20, MeOH). Didelės skiriamosios gebos EI-MS: apskaičiuota C10H16O3 (M ) 184,1099; Rasta 184.1106. IR (KBr): 3410, 2940, 1684 cm1. 1H-BMR (500 MHz, CD3OD) d: pateikta 1 lentelėje. 13C-BMR (125 MHz, CD3OD) dC: pateikta 2 lentelėje. EI MS: m/z (procentais): 184 (M, 37) , 95 (100).

14 šarminis apdorojimas 5 procentų vandeniniu KOH

14 (23.{2}} mg) tirpalas 5% vandeniniame KOH (1.{5}} ml) maišomas 8 0 laipsnių temperatūroje 2 valandas. Reakcijos mišinys buvo neutralizuotas Amberlite HCR-W2 (H forma). Pašalinus tirpiklį iš filtrato sumažintame slėgyje, susidaro likutis, kuris buvo išgrynintas HPLC [MeOH-H2O (5:95, v/v)], gaunant 2 (4,0 mg, 16 proc.) ir 1932) (10,5 mg). , 43 proc.).

14 apdorojimas rūgštimi 5 procentų vandeniniu HCl

14 (25.{2}} mg) tirpalas 5% vandeniniame HCl (2.{5}} ml) maišomas kambario temperatūroje 3 valandas. Reakcijos mišinys supilamas į ledinį vandenį ir visas reakcijos mišinys ekstrahuojamas EtOAc. EtOAc ekstraktas iš eilės plaunamas prisotintu vandeniniu NaHC03 ir sūrymu, po to išdžiovinamas bevandeniais MgSO4 milteliais ir filtruojamas. Pašalinus tirpiklį iš filtrato sumažintame slėgyje, susidarė likutis, kuris buvo atskirtas HPLC [MeOH-H2O (20: 80, v/v)] ir gaunamas 14a (4,0 mg, 25 proc.).

14a

Balti milteliai, [a]D 20 21,5 laipsnio (c 0,30, MeOH). Didelės skiriamosios gebos CI-MS: apskaičiuota C9H14ClO4 (MH) 221,0580; Rasta 221.0587. IR (KBr): 3410, 2962, 1365, 1152, 1055, 945 cm1. 1H-BMR (500 MHz, CD3OD) d: pateikta 1 lentelėje. 13C-BMR (125 MHz, CD3OD) d C: pateikta 2 lentelėje. CI-MS: m/z (procentais): 221 (MH) ( 7), 223 (MH) (3), 203 (M H2O) (97), 205 (M H2O) (33), 185 (7), 167 (12), 159 (32), 121 (27), 110 (48), 95 (64), 85 (100), 67 (56) ir 57 (65).

5 ir 14a acetilinimas

5 (2,5 mg) tirpalas piridine (0,5 ml) buvo paveiktas acto rūgšties anhidridu (Ac2O, 0,4 ml) ir mišinys maišomas kambario temperatūroje 12 valandų. Reakcijos mišinys supilamas į ledinį vandenį ir visas reakcijos mišinys ekstrahuojamas EtOAc. EtOAc ekstraktas iš eilės buvo plaunamas 5 procentų vandeniniu HCl, prisotintu vandeniniu NaHC03 ir sūrymu, tada džiovinamas bevandeniais MgSO4 milteliais ir filtruojamas. Pašalinus tirpiklį iš filtrato sumažintame slėgyje, susidarė likutis, kuris buvo išgrynintas HPLC [MeOH-H2O (35:65, v/v)] ir gaunamas 5a (2,3 mg, 77 proc.). Taikant panašią procedūrą, 14b (2,7 mg, 87 proc.) taip pat buvo paruoštas ir išgrynintas HPLC [MeOH-H2O (55:45, v/v)] iš 14a (2,1 mg).

5a

Balti milteliai, [a]D 20 1,8 laipsnio (c 0,18, MeOH). Didelės skiriamosios gebos CI MS: apskaičiuota C11H15O5 (MH) 227,0919; Rasta 227.0925. IR (KBr): 2962, 1734, 1374, 1258, 1237, 1169, 1103, 1053, 947 cm1. 1H-BMR (500 MHz, CD3OD) d: pateikta 1 lentelėje. 13C-BMR (125 MHz, CD3OD) d C: pateikta 2 lentelėje. CI-MS m/z (procentais): 227 (MH) (28 ), 209 (M H2O) (4), 184 (3), 166 (45), 149 (22), 138 (38), 122 (44), 94 (31), 85 (100) ir 57 (34). ).

14b

Balti milteliai, [a]D 20 23,7 laipsnio (c 0,06, MeOH). Didelės skiriamosios gebos CI-MS: apskaičiuota C13H18ClO6 (MH) 305,0792; Rasta 305.0790. IR (KBr): 1744, 1376, 1243, 1231, 1001, 941 cm1. 1H-BMR (500 MHz, CD3OD) d: pateikta 1 lentelėje. 13C-BMR (125 MHz, CD3OD) d C: pateikta 2 lentelėje. CI-MS: m/z (procentais): 305 (MH) ( 2), 307 (MH) (1), 263 (MH C2H3O) (6), 265 (MH C2H3O) (3), 245 (30), 203 (8), 185 (100), 167 (7), 149 (33), 121 (26), 95 (15), 85 (37) ir 57 (93).

Padėkos

Šį tyrimą rėmė 21-oji COE programa, projektas „Academic Frontier“ ir Japonijos švietimo, kultūros, sporto, mokslo ir technologijų ministerijos subsidija moksliniams tyrimams. Autoriai dėkoja profesoriui Xiaoguang Jia Sindziango tradicinių kinų ir etnologinių vaistų institute Urumqi mieste, Kinijoje, už augalinės medžiagos identifikavimą.

cistanche nauda

Nuorodos ir pastabos

1) Kobayashi H., Oguchi H., Takizawa N., Miyase T., Ueno A., Usmanghani K., Ahmad M., Chem. Pharm. Bull., 35, 3309-3314 (1987).

2) Sindziango mokslo ir technologijų spauda, ​​Sindziango pagrindinių vaistinių augalų kultūros metodai, Sindziango tradicinių kinų ir etnologinių vaistų leidimas, 2004 m., p. 84–88.

3) Du N., Zhou P., Wang J., Liu C., Li W., Zhongguo Yaoke Daxue Xue bao, 24, 46-48 (1993).

4) Xue D., Zhongguo Zhongyao Zazhi, 22, 170-171 (1997).

5) Song Z., Mo S., Chen Y., Tu P., Li W., Zhao Y., Zheng J., Zhongguo Zhongyao Zazhi, 25, 728–730 (2000).

6) Song Z., Tu P., Zhao Y., Zheng J., Zhongcaoyao, 31, 808-810 (2000).

7) Yoshizawa F., Deyama T., Takizawa N., Usmanghani K., Ahmad M., Chem. Pharm. Bull., 38, 1927-1930 (1990).

8) Matsuda H., Morikawa T., Tao J., Ueda K., Yoshikawa M., Chem. Pharm. Bull., 50, 208-215 (2002).

9) Morikawa T., Matsuda H., Toguchida I., Ueda K., Yoshikawa M., J. Nat. Prod., 65, 1468-1474 (2002).

10) Tao J., Morikawa T., Toguchida I., Ando S., Matsuda H., Yoshikawa M., Bioorg. Med. Chem., 10, 4005-4012 (2002).

11) Morikawa T., Tao J., Ando S., Matsuda H., Yoshikawa M., J. Nat. Prod., 66, 638-645 (2003).

12) Tao J., Morikawa T., Ando S., Matsuda H., Yoshikawa M., Chem. Pharm. Bull., 51, 654-662 (2003).

13) Matsuda H., Morikawa T., Xie H., Yoshikawa M., Planta Med., 70, 847-855 (2004).

14) Sun B., Morikawa T., Matsuda H., Tewtrakul S., Harima S., Yoshikawa M., J. Nat. Prod., 67, 1464-1469 (2004).

15) Morikawa T., Sun B., Matsuda H., Wu LJ, Harima S., Yoshikawa M., Chem. Pharm. Bull., 52, 1194-1199 (2004).

16) Xie H., Wang T., Matsuda H., Morikawa T., Yoshikawa M., Tani T., Chem. Pharm. Bull., 53, 1416-1422 (2005).

17) Morikawa T., Xie H., Matsuda H., Yoshikawa M., J. Nat. Prod., 69 (2006) spaudoje.

18) Morikawa T., Xie H., Matsuda H., Wang T., Yoshikawa M., Chem. Pharm. Bull., 54, 506-513 (2006).

19) Kobayashi H., Karasawa H., Miyase T., Fukushima S., Chem. Pharm. Bull., 33, 3645-3650 (1985).

20) Otsuka H., Phytochemistry, 33, 617-622 (1993).

21) Zhao W., Yang G., Xu R., Qin G., Phytochemistry, 41, 1553-1555 (1996).

22) Kobayashi H., Karasawa H., Miyase T., Fukushima S., Chem. Pharm. Bull., 32, 1729-1734 (1984).

23) Xu Z., Yang S., Yang J., Lu R., Zhongcaoyao, 30, 244-246 (1999).

24) Wang SJ, Pei YH, Hua HM, Chin. Chem. Lett., 12, 343-344 (2001).

25) Tie žinomi junginiai buvo identifikuoti palyginus jų fizinius duomenis su komerciškai gautais mėginiais.

26) Pires R., Burger K., Tetrahedron, 53, 9213-9218 (1997).

27) Kamal A., Ramana KV, Ramana AV, Babu AH, Tetrahedron: Asymmetry, 14, 2587-2594 (2003).

28) 1-6 ir giminingų junginių (19, 1a, 5a, 14a, 14b) 1H ir 13C-BMR spektrai buvo priskirti naudojant neiškraipytą sustiprinimą poliarizacijos perdavimo būdu (DEPT), dvigubo kvantinio filtro koreliacijos spektroskopija ( DQF COSY), heterobranduolinės daugybinės kvantinės koherencijos (HMQC) ir daugiabranduolinio daugialypės jungties ryšio (HMBC) eksperimentai.

29) Nishizawa M., Kodama S., Yamase Y., Kayano K., Hatakeyama S., Ya mada H., Chem. Pharm. Bull., 42, 982-984 (1994).

30) Yoshikawa M., Ueda T., Matsuda H., Yamahara J., Murakami N., Chem. Pharm. Bull., 42, 1691-1693 (1994).

31) Matsuda H., Shimoda H., Uemura T., Ueda T., Yamahara J., Yoshikawa M., Chem. Pharm. Bull., 47, 1753-1758 (1999).

32) Damtoft S., Jensen SR, Nielsen BJ, Phytochemistry, 24, 2281-2283 (1985).

33) Watanabe K., Takada Y., Matsuo N., Nishimura H., Biosci. Biotech. Biochem., 59, 1979-1980 (1995).

34) Takikawa H., Yamazaki Y., Mori K., Eur. J. Org. Chem., 229-232 (1998).

35) Kitagawa I., Fukuda Y., Taniyama T., Yoshikawa M., Chem. Pharm. Bull., 39, 1171-1176 (1991).

36) Yamaguchi K., Shinohara C., Kojima S., Sodeoka M., Tsuji T., Biosci. Biotech. Biochem., 63, 731-735 (1999).