Nano pieno baltymų ir gleivių kompleksai: apibūdinimas ir priešvėžinis poveikis, 2 dalis

Norėdami gauti daugiau informacijos, kreipkitėstina.xiang@wecistanche.com

Spustelėkite nuorodą, kad sužinotumėte 1 dalį:https://www.xjcistanche.com/news/nano-milk-protein-mucilage-complexes-characte-55049142.html

3. Medžiagos ir metodai

3.1. Medžiagos

Plantago ovata (pagrindinis) luobelė ir nokstanti Ziziphus Spina-Christi(Nabeq) vaisiai buvo įsigyti iš Gizos, Egipto; pieno baltymų koncentratas (MP, 81,3 proc. baltymų) pirktas iš Fonterra kompanijos (Oklandas, Naujoji Zelandija). MPC esantys kazeino ir išrūgų baltymai daugiausia yra savo gimtosios ir panašios micelinės formos, kaip ir piene. Visos naudojamos cheminės medžiagos buvo analitinio grynumo.

3.2. Isabgol Husk gleivių (IHM) ir Nabeg gleivių (NabM) paruošimas

Isabgol lukštų gleivės (IHM) ir Nabeq gleivės (NabM) buvo paruoštos pagal metodą, aprašytą El-Maksoud ir kt. [5]. Trumpai tariant, izabgolio lukšto suspensija buvo paruošta ištirpinant 1, 2 g 100 ml distiliuoto vandens ir išgryninta acetono tirpalu. Gautas gelis buvo laikomas šaldytuve (4-5 laipsnis), kol buvo naudojamas.

NabM prinokę Nabeq vaisiai buvo kruopščiai nuplauti vandeniu iš čiaupo, kad būtų pašalinti nešvarumai. Švieži vaisiai buvo atskirti nuo sėklų ir sumaišyti su distiliuotu vandeniu santykiu 1:10 (m/t), supjaustę smulkiais gabalėliais. Mišinys buvo sumaišytas naudojant laboratorinį maišytuvą (Toshiba Mixie, Japonija) ir leistas 12 valandų stovėti šaldytuve.

Tada gleivinis ekstraktas buvo centrifuguojamas 2000 aps./min. greičiu 30 min. ir filtruojamas per muslino audinį. Susidariusios klampios tirpios gleivės nusodinamos acetonu. Gautos neapdorotos gleivės buvo laikomos šaldytuve iki panaudojimo.

Analitiniais tikslais gleivės buvo džiovinamos oro krosnyje 40 laipsnių temperatūroje ir sumalamos rutuliniu malūnu MM400 (Retsch, Vokietija). Buvo išmatuota psyllium husk mucilage miltelių (PHMP) ir Nabeq gleivių miltelių (NabMP) cheminė sudėtis. Drėgmės, baltymų, riebalų, pelenų, žalios skaidulos ir bendras angliavandenių kiekis buvo 8,49, 0,34, 0,21, 2,13, 1,53 ir 87,44 proc. PHMP ir 9,18, 4,72, 2,05, 2,69, 1,70 ir 78,26 proc. , atitinkamai. Gauti milteliai buvo laikomi vėsioje temperatūroje (4-5 laipsnis) iki tolesnės analizės.

Spustelėkite norėdami sužinoti daugiau informacijos

3.3. Pieno baltymų ir gleivių kompleksų (MPMC) paruošimas

Pieno baltymų (MP) kompleksai su IHM ir NabM buvo paruošti pagal Morr et al. su tam tikromis modifikacijomis [44]. Pieno baltymų koncentratas buvo ištirpintas distiliuotame vandenyje (10 proc.). Gautas pieno baltymų koloidas buvo sumaišytas su IHM ir NabM santykiu 1:3 (o/o). Mišinio pH sureguliuotas iki 10 ir paliktas 10 min. Po to pH sumažinamas iki 3,5 naudojant 0,1 N HCl ir paliekamas dar 10 min. Tada pH buvo sureguliuotas iki pH 4,6 naudojant 0,5 M NaOH, kad būtų surinktas MPMC filtruojant ant filtravimo popieriaus: MP ir gautas MPMC buvo džiovinamas liofilizuojant -45 ° C temperatūroje 24 valandas naudojant Novalyphe-NL500 liofilizatorių. , Savant Instruments, Holbrook, NY, JAV.

3.4. Fizikinės ir cheminės bei funkcinės charakteristikos

3.4.1.pH matavimas

Gautų produktų pH 10 procentų tirpale buvo matuojamas naudojant kalibruotą pH metrą (HANNA, HI 902 m, Vokietija).

3.4.2. Tūrinio tankio (BD), srieginio tankio (TD) ir Carr indekso nustatymas

MPMC milteliai buvo supilti į 50 ml matavimo cilindrą iki 25 ml, atitinkančio nepanaudotą tūrį, ir tada bakstelėkite 5-10 kartus, kol nebepastebėta, kad miltelių tūris atitiktų bakstelėjusį tūrį.

Tūrinis tankis, srieginis tankis ir Carr indeksas buvo nustatyti taikant šias lygtis [45]:

(1) BD=masė / nepanaudotas tūris

(2)TD=masė / išlietas tūris

(3) Carro indeksas (procentais )= (TD-BD) / TD × 100

3.4.3. Vandens absorbcijos indeksas (WAI) ir tirpumo vandenyje indeksas (WSD)

MP ir MPMC tirpumo vandenyje ir vandens sugerties indeksai buvo ištirti Yagc ir Gogus aprašytu metodu su tam tikromis modifikacijomis [46]. Mėginiai (0,5 g) buvo disperguoti 10 ml distiliuoto vandens 25 laipsnių temperatūroje centrifugos mėgintuvėlyje. Po 30 minučių pastovėjimo, mėgintuvėlį apverčiant kas 5 minutes, mėginiai buvo centrifuguojami 3500 aps./min. greičiu 15 min. Filtratas buvo perkeltas ant aliuminio plokštelės ir džiovinamas 3 valandas 105 laipsnių temperatūroje. Likusio gelio svoris buvo užregistruotas, o WSI ir WAI buvo nustatyti taip:

(4)WAI (g/g)= gelio svorio padidėjimas / sauso mėginio svoris

(5)WSI procentai=Sausų kietųjų medžiagų masė supernatante × 100/sauso mėginio masė

3.4.4. Pieno baltymų virškinamumas

Baltymų virškinamumas buvo nustatytas pagal Abd El-Ghany ir kt. [47]. Trumpai tariant, MP ir MPMC mėginiai buvo disperguoti distiliuotame vandenyje, kurio koncentracija buvo 6,38 mg/mL, o pH buvo sureguliuotas iki 8.0. Vienas mililitras šviežiai paruošto pradinio fermento tirpalo (1,6 mg/ml tripsino, 3,1 mg/mL chimotripsino ir 1,3 mg/mL ER aminopeptidazės1

(ERAP1) buvo sumaišytas su baltymų suspensija 37 laipsnių temperatūroje. PH buvo užregistruotas po 10 minučių, o fermento aktyvumas buvo nustatytas naudojant kazeiną kaip atskaitą. Baltymų virškinamumui apskaičiuoti buvo panaudota ši lygtis [47]:

(6) procentai virškinamumo=210.46-18.10 (pH)

3.5. PHM ir NabM fenolio frakcijos

Gleivių mėginių fenoliniai junginiai, naudojant HPLC analizę, buvo atlikti pagal protokolą, aprašytą Elsayed ir kt. [48]. Trumpai tariant, gleivių ekstraktas buvo analizuojamas naudojant Agilent 1260 serijos HPLC sistemą (Agilent Technologies Inc., Santa Clara, CA, JAV). Atskyrimas buvo atliktas naudojant C18 kolonėlę (100 mm × 4,6 mm id, 5 um). Judančioje fazėje buvo (A) vanduo, 0,2 procento H3PO4, (B)metanolis ir (C) acetonitrilas, kurio srautas buvo 0,6 ml/min. Gradiento eliutas buvo pagal kitą schemą: 0-11 min (96 proc. A., 2 proc. B);11-13 min (50 proc. A, 25 proc. B);13-17min (40 proc. procentai A, 30 procentų B);17-20.5 min (50 procentų B, 50 procentų C);ir 20.{27}} min (96 procentai A, 2 procentai B). Aptikimo bangos ilgis (UV) detektorius, 284 nm) buvo nustatytas ties 284 nm. Įpurškimo dydis buvo 20 μL, o kolonėlės temperatūra buvo palaikoma 30 laipsnių. Junginiai buvo žinomi palyginus jų sulaikymo laiką su autentiškais standartais. Junginio kiekiui įvertinti buvo panaudotos kalibravimo kreivės.

3.6.Bendras fenolio ir flavonoidų kiekis MP ir MPMC

Polifenolio kiekis nustatytas Folin-Ciocalteu metodu su tam tikromis modifikacijomis [5]. Trumpai tariant, 2,8 ml mili-Q vandens, kuriame yra 10 mg MP arba MPMC, buvo sumaišyti su 2 ml 2% natrio karbonato ir 0,1 ml 50% Folin-Ciocalteau reagento. Po 30 minučių inkubacijos kambario temperatūroje reakcijos mišinio absorbcija buvo išmatuota esant 750 nm, lyginant su dejonizuotu vandeniu kaip tuščias mėginys, naudojant spektrofotometrą (Hitachi, modelis 100-20). Galo rūgštis (GA) buvo naudojama kaip standartinis fenolio junginys ir buvo sudaryta septynių taškų standartinė kreivė (0-200 mg/L). Rezultatai buvo išreikšti miligramais galo rūgšties ekvivalentais gramui baltymo (GAE/g).

Flavonoidaikiekis buvo nustatytas naudojant aliuminio chlorido metodą, kaip anksčiau aprašė Abedelmaksoud ir kt. su kai kuriais pakeitimais [5]. Trumpai tariant, 2,8 ml mili-Q vandens, kuriame yra 10 mg MP arba MPMC, buvo sumaišytas su 0,1 ml 10 procentų aliuminio chlorido heksahidrato ir 0,1 ml 1 M kalio acetato. Po 40 minučių inkubacijos kambario temperatūroje, reakcijos mišinio absorbcija buvo išmatuota esant 415 nm, lyginant su dejonizuotu vandeniu kaip tuščias mėginys. Kvercetinas buvo naudojamas kaip standartas, naudojant septynių taškų standartinę kreivę (0-50 mg/L). Bendras flavonoidų kiekis buvo išreikštas miligramais kvercetino ekvivalentais (QE/g).

3.7. MP ir MPMC antioksidacinis aktyvumas

Bendras MP ir MPMC laisvųjų radikalų pašalinimo pajėgumas buvo įvertintas naudojant tris skirtingus antioksidantų tyrimus: stabilus 2, 2-difenil-1-pikrilhidrazilas (DPPH), azino-bis(3-etilbenzotiazolinas{{5). }}sulfoninės rūgšties (ABTS) ir hidroksilo radikalų (HS) radikalų, kaip anksčiau aprašė El-Maksoud ir kiti [5].

3.8. MP ir MPMC aminorūgščių profilis

Baltymų mėginiai buvo rūgštimi hidrolizuoti naudojant 6 N HCl pagal Peksa ir kt. [49. Aminorūgščių nustatymui buvo naudojamas automatinis aminorūgščių analizatorius (AAA 400, INGOs Ltd.).

3.9. Reologinės savybės

Mėginiai buvo paruošti taip, kaip aprašyta Barneso [50], su tam tikrais pakeitimais. 2,5 % (m/m) tirpalo klampumas, esant pH 7, buvo nustatytas esant 25±1 laipsniui, naudojant Brookfield viskozimetrą (DV-II plus Pro, Rheocalc Software, Vokietija). Įtempis (σ) ir klampumas (n) buvo pavaizduoti kaip šlyties greičio funkcija. Buvo apskaičiuotas galios dėsnio modelio nuoseklumo indeksas (K) ir srauto elgsenos indeksas (n):

n reikšmė lygi 1 Niutono skysčiams ir svyruoja nuo 0 iki 1 skysčiams, kurie skiedžia šlyties poveikį, ir didesnę nei 1 šlyties tirštinimo skysčiams [51].

3.10. Diferencinė nuskaitymo kalorimetrija (DSC)

MP ir MPMC šiluminės savybės buvo išmatuotos naudojant diferencialinį nuskaitymo kalorimetrą (PerkinElmer, JAV). Mėginiai (4-6 mg) buvo sudėti į aliuminio plokštelę ir užsandarinti. Tada kiekviena keptuvė buvo įkaitinta iki 350 laipsnių sausų azoto dujų srautu 20 ml min-I, kai šildymo greitis 10 laipsnių min{5}}. Iš DSC termogramos endoterminės smailės buvo apskaičiuota denatūracijos pradžios temperatūra, maksimali perėjimo temperatūra ir skilimo taškas [52]. Buvo nustatyta pereinamojo laikotarpio entalpijos vertė (AH) iš ploto po endotermine smaile DSC kreivėje, o tuščia aliuminio keptuvė buvo naudojama kaip atskaita.

3.11. Furjė transformacijos infraraudonųjų spindulių spektroskopija (FTIR)

Infraraudonųjų spindulių spektrai nuo 600 iki 3500 cm-I buvo išmatuoti 25 laipsnių kampu, naudojant FTIR spektrofotometrą (QFA Flex, JAV), taikant susilpninto bendro atspindžio metodą, naudojant 4 cm-I skiriamąją gebą ir 10 nuskaitymų per sekundę.

3.12. Transmisijos elektronų mikroskopija

MP ir MPMC mikrostruktūra buvo vizualizuota naudojant perdavimo elektronų mikroskopą (JEOL, JEM 1400 Flash, Japonija) esant 80 kV. Taikyta krio stadija neigiamo dažymo metodu [53].

3.13. Biologiniai MP ir MPMC tyrimai

3.13.1.In vitro priešvėžinė veikla

Visos šiame eksperimente naudotos ląstelių linijos buvo gautos iš Amerikos tipo kultūrų kolekcijos (ATCC, Manassas, VA, JAV). Šiame tyrime buvo naudojamos dvi žmogaus vėžinių ląstelių linijos: pieno liaukos adenokarcinoma (MCF{{0}}, ATCCHTB-22TM) ir kepenų ląstelių karcinoma (HepG2, ATCC4 HB-8065TM). Palyginimui taip pat buvo ištirtos ne vėžinės odos fibroblastų BJ-1(ATCC⑧ CRL-2522TM) ir epitelio krūties MCF-12F(ATCC CRL-10782TM) ląstelių linijos. Ląstelių linijos buvo auginamos Dulbecco modifikuotoje Eagle terpėje (DMEM/didelis gliukozės kiekis, HyCloneTM, JAV), papildytos 10 procentų galvijų vaisiaus serumo (FBS, Gibco, Brazilija), 100 V/mL penicilino, 100 ug/mL streptomicino ir 25 ng. ml amfotericino B (Sigma, Oakville, ON, Kanada) ir kultivuojamas 37 laipsnių temperatūroje su 5 % CO, drėgname inkubatoriuje. Auginimo terpė buvo keičiama kas antrą dieną nauja terpe. Kai ląstelės pasiekė 70 procentų susiliejimą, jos buvo atskirtos naudojant 0,25 procento Trypsin-EDTA (1X) Gibco, Kanada, ir perkeltos į naują auginimo kolbą. Po antrojo pasėjimo ląstelės buvo tripsinizuojamos ir pasodintos į 96-šulinėlių plokštelę, kurios koncentracija buvo 2 × 10* ląstelių / duobutėje. Po 24 valandų inkubavimo terpė buvo dekantuota, o ląstelės du kartus plaunamos PBS, tada apdorojamos 200 μL auginimo terpės, kurioje yra skirtingos koncentracijos baltymų mėginiai (1, 5, 10 ir 20 ug/ml). Doksorubicino HCl (4 ug/mL) buvo naudojamas kaip teigiama kontrolė, o ląstelės, apdorotos nepapildyta terpe, buvo paimtos kaip neigiama kontrolė. Plokštelės buvo inkubuojamos 37 ° C temperatūroje 24 valandas irpriešvėžinismėginių aktyvumas buvo nustatytas naudojant neutralios raudonos spalvos įsisavinimo testą pagal Repetto ir kt. [54]. Trumpai tariant, pasibaigus inkubaciniam laikotarpiui, terpė buvo pakeista 150 uL neutralių raudonų dažų (100 mg / ml), ištirpinto terpėje be serumo, ir ląstelės buvo inkubuojamos 37 ° C temperatūroje 3 valandas. Tada ląstelės buvo nuplaunamos PBS ir buvo pridėta 150 μL eliuavimo terpės (EtOH/AcCOOH, 50–1), po to švelniai kratant 10 minučių, kad būtų užtikrintas visiškas ištirpimas. Absorbcija buvo matuojama esant 540 nm, naudojant mikrotitravimo plokštelių skaitytuvą (BioTek, 96 Well Plates, ELX808, JAV).

kur Ac yra kontrolinės medžiagos absorbcija, o As yra mėginio absorbcija. Kiekvienam mėginiui apskaičiuota ląstelių žūties procentas, pateiktas kaip citotoksiškumas (procentai), ir koncentracija, kuri sunaikina 50 procentų ląstelių (IC50).

3.13.2. P53, Bax, kaspazės-3 ir Bcl-2 baltymų lygio nustatymas

Pagrindinių apoptozės baltymų žymenų ląstelių lygiai buvo nustatyti praėjus 24 valandoms po apdorojimo MP ir MPMC ICso. Trumpai tariant, Hep G-2, MCF-7, Bj-1 ir MCF-12F ląstelės buvo pasėtos po 5 × 10* ląstelių/šulinėlių į 6-šulinėlį lėkštės. Po 24 valandų inkubavimo su mėginiais 37 laipsnių temperatūroje ląstelės buvo surinktos ir lizuojamos, tada centrifuguojamos 10, 000rpm 20 minučių 4 laipsnių temperatūroje. Baltymų koncentracija supernatante buvo kiekybiškai įvertinta Bradfordo tyrimu [55]. Kaspazės{16}} aktyvumas buvo analizuojamas naudojant kolorimetrinio tyrimo rinkinį (Abcam, ab39401) pagal gamintojo instrukcijas [56]. Trumpai tariant, į 50 ul kaspazės substrato buvo pridėta 10 mg baltymo, o galutinis tūris buvo sureguliuotas iki 200 μL, naudojant reakcijos buferį 37 laipsnių temperatūroje, o mišinys inkubuojamas 1 valandą tamsoje, po to matuojamas kaspazės kiekis{24} } koncentracija esant 405 nm.

Proapoptotinio žymens p53, susijusio X(Bax) ir antiapoptozinio žymens B-ląstelių limfomos -2(Bcl-2) lygis buvo nustatytas ląstelių lizatuose, naudojant su fermentais susietą imunosorbentinį tyrimą, paprastą žingsnį. ELISA pagal gamintojo instrukcijas (ab207225, ab119506 ir ab199080; Abcam, JAV) [57,58].

3.13.3.DNR žala, kurią sukelia apsauga nuo oksidacinio streso

DNR pažeidimo tyrimas buvo atliktas taip, kaip anksčiau aprašė Leba ir kt. [59] su nedideliais pakeitimais. Trumpai tariant, 3 μL ribonukleazės inhibitoriaus plazmidės RNH1 (NM_203387) 10 ug/μL žmogaus pažymėto ORF klono buvo sumaišyti su Fentono reagentu (5 mM H2O2 ir 0,3 mM). FeSO4 ir 0,6 mM EDTA）, o galutinis tūris buvo sureguliuotas iki 25 μL naudojant fosfatinį buferį (H2POA, 8,3 mM, pH 7,4). Tada tirpalas buvo inkubuojamas 20 minučių 37 laipsnių temperatūroje. Norint įvertinti MP ir MPMC antioksidacinę apsaugą nuo DNR pažeidimo, kurį sukelia Fenton reagentas, prieš inkubaciją buvo pridėta 5 ug/mL MP/NabM, MP/IHM ir MP. RNH1 plazmidės DNR (3 μL, 10 ug/μL) buvo naudojama kaip DNR apsaugos kontrolė.

3.13.4.PGR pagrįstas genominės DNR pažeidimo tyrimas

Homo sapiens metilentetrahidrofolato reduktazės (MTHFR) genas buvo amplifikuotas naudojant PGR iš kraujo genomo, anksčiau išskirto iš sveikų kraujo mėginių, naudojant standartinį DNR ekstrahavimo rinkinį [60]. DNR buvo inkubuojama 10 minučių su Fenton reagentu, papildytu MP arba MPMC, arba be jo. 198-bp fragmentas buvo amplifikuotas naudojant į priekį5'-TGAAGGAGAAGGTGTCTGCGGGA-3' ir atvirkštinius 5'-AGGACGGTGCGGTGAGAGTG-3' pradmenis. Naudojant 50 ng apdorotos DNR, PGR amplifikacija buvo atlikta po kito termociklerio (94 laipsnių 5 min., po to 25 denatūravimo ciklai, 30 s 94 laipsnių temperatūroje; atkaitinimas, 30 s 60 laipsnių temperatūroje ir pratęsimas, 30 s 72 laipsniais). 25 ciklai ir 1 paskutinis pratęsimo ciklas 72 laipsnių kampu 5 min. PGR reakcijos mėginiai buvo panaudoti agarozės gelio elektroforezei (2 proc.).

3.13.5. Genų ekspresijos profiliavimas naudojant RT-qPCR

Pagrindinių pro ir antiapoptotinių žymenų genų genų ekspresijos analizė buvo atlikta naudojant HepG-2, MCF-7, Bj-1 ir MCF-12F ląsteles, paveiktas IC50. duomenys (3 lentelė) 72 val. Trumpai tariant, visa RNR buvo išgauta naudojant Total RNA Purification Kit (QIAGEN., Thorold, ON, Kanada) pagal gamintojo instrukcijas. cDNR

sintezė buvo atlikta taip, kaip anksčiau aprašė Aboul-Sound ir kt. [61]. Amplifikacijos programos ir PGR amplikono specifiškumas buvo atlikti ir įvertinti naudojant Rotor-Gene O 5-Plex HRM terminį ciklą (Qiagen, Vokietija) su Quanti-Tect SYBR-Green PCR rinkiniu (Qiagen, Vokietija), kaip buvo dokumentuota anksčiau. laikantis standartinių protokolų [61]. Buvo naudojami šie pradmenys: Hs_P53_1 SG QuantiTect pradmenų tyrimas (QT00060235); Hs_CASP3_1_SG Quan-tiTect pradmenų tyrimas (QT00023947); B-ląstelių limfomos 2 Hs_BCL2_1_SG QuantiTect pradmenų tyrimas (QT00025011);Bcl-2-kaip baltymas Hs_BAX_1_SG QuantiTect pradmenų tyrimas ( QT00031192); ir 18S rDNR namų priežiūros (HK) geno Hs_RRN18S_1_SGQuantiTect pradmenų tyrimas (QT00199367). PGR terminio ciklo programa ir genų ekspresijos analizė, siekiant nustatyti kartotinį pokytį, palyginti su 18S genu, iš esmės buvo atlikta, kaip buvo pranešta anksčiau [61].

3.14.Statistinė analizė

Gauti rezultatai išreikšti kaip vidurkis ± standartinis nuokrypis. Statistika buvo gauta naudojant SPSSsoftware 11.5 (SPSS, Inc.Chicago, IL, USA). Reikšmingiems visų mėginių skirtumams nustatyti buvo naudojamas Dunkano kelių diapazonų testas, o skirtumai buvo laikomi reikšmingais p.<>

4. Išvados

Apibendrinant, šis tyrimas atskleidė, kad maišant pieno baltymus supolisacharidaidėl tirpalo pH diferenciacijos yra tinkamas kompleksavimo metodas. Gauti pieno baltymų gleivių kompleksai (MPMC) turi žymiai didesnį fenolio irflavonoidųDSC rezultatai parodė, kad MP kompleksavimas su polisacharidais žymiai padidino terminį stabilumą, pasikeitus denatūravimo temperatūrai. Funkcinėms grupėms nustatyti buvo atliekamos FTIR analizės, ištirtas paruoštų kompleksų srauto elgesys. Pieno baltymų WSI ir WAI padidėjo kompleksuojant su NabM arba IHM. TEM buvo naudojamas paruoštų kompleksų mikrostruktūrai vizualizuoti. Kita vertus, tikimasi, kad gauti pieno baltymų kompleksai su izabgolio lukštų gleivėmis (HM) arba Nabeq gleivėmis (NabM) viršys natūralius pieno baltymus antioksidaciniu ir priešvėžiniu poveikiu. Apibendrinant, MPMC išreiškė unikalias priešvėžines savybes prieš modelio krūties vėžio ir kepenų karcinomos ląstelių linijas (atitinkamai MCF7 ir HEPG2), kaip įrodyta neutralios raudonos spalvos įsisavinimo tyrimu.

MPMC patobulino abuantioksidantasir antiproliferacinis aktyvumas. Kaspazės yra pagrindiniai reguliuojantys baltymai, kurie yra susiję su apoptozės indukcija. Kaspazės 3 baltymo ir mRNR nuorašų reguliavimas (9A, B pav.) kontroliuoja kitus baltymus apoptozės kelyje, kuriam būdingas mitochondrijų membranos žlugimas su Bax sukeltu citochromo c išsiskyrimu ir kaspazės 9 aktyvavimu, dėl kurio vėliau įsijungia kaspazė 3. Padidėjęs Casp3, p53 ir Bax reguliavimas kartu su Bcl-2 ekspresijos mažinimu atskleidė, kad MPMC sukelta apoptozės indukcija, kai padidinus p53 reguliavimą, bus skatinama Bax ekspresija, o tai, savo ruožtu, sukels citochromo c leidimas, po kurio seka kaspazė-9 ir -3 aktyvinimas. Be to, žinoma, kad Bcl-2 slopina citochromo c išsiskyrimą. Mūsų tyrime buvo įrodyta, kad MPMC sukeltas Bcl-2 sumažinimas palengvina neprieštaraujamą Bax sukeltą citochromo c išsiskyrimą ir vėlesnę apoptozę.

Baltymų ir polisacharidų kompleksų priešvėžinis poveikis suteikia daugiau informacijos apie šių kompleksų pritaikymą kuriant įperkamus ir veiksmingus vėžio gydymo būdus, turinčius minimalų šalutinį poveikį.