Naujos rekombinantinės Niukaslio ligos viruso pagrindu esančios Ovo vakcinos apeina motinos imunitetą, kad užtikrintų visišką apsaugą nuo ankstyvo virusinio iššūkio 1 dalis

Santrauka:

Niukaslio liga (ND) yra viena iš ekonomiškai svarbiausių naminių paukščių ligų. Nepaisant intensyvių pastangų įgyvendinant dabartines vakcinacijos programas, ši liga vis dar pasitaiko visame pasaulyje ir sukelia didelį mirtingumą net vakcinuotuose pulkuose. Tai iš dalies buvo siejama su imuniteto atotrūkiu po išsiritimo dėl motininių antikūnų, kurie neigiamai veikia dažniausiai naudojamų gyvų vakcinų replikaciją. In ovo vakcinos turi daug privalumų ir suteikia galimybę išspręsti šią problemą.

Šiuo metu ovo ND vakcinose naudojamos rekombinantinės kalakutų herpesviruso (HVT) vektorinės vakcinos, ekspresuojančios Niukaslio ligos viruso (NDV) antigenus. Nors įrodyta, kad šios vakcinos yra veiksmingos, jos turi tam tikrų apribojimų, tokių kaip uždelstas imunogeniškumas ir nesugebėjimas po išsiritimo skirti antrąją HVT vakciną. Gyvų ND vakcinų naudojimas in ovo vakcinacijai šiuo metu netaikomas, nes tai susiję su dideliu embrionų mirtingumu. Šiame tyrime rekombinantinės NDV vektorinės eksperimentinės vakcinos, turinčios antisensinę paukščių interleukino 4 (IL4R) seką ir jų stuburus, skirtingomis dozėmis buvo sušvirkštos į 18-dienų senumo komercinius kiaušinius, turinčius aukštus motininių antikūnų titrus. Išperinti paukščiai buvo užkrėsti virulentine NDV 2 savaičių amžiaus. Vakcinos išsiskyrimas po išsiritimo, išgyvenimas po užkrėtimo, viruso išsiskyrimas ir humoralinis imuninis atsakas buvo vertinami keliais laiko momentais. Rekombinantine NDV (rNDV) vakcinuotų paukščių mirtingumas po išsiritimo žymiai sumažėjo, palyginti su laukinio tipo LaSota vakcina.

Visos rNDV vakcinos galėjo prasiskverbti į motinos imunitetą ir sukelti stiprų ankstyvą humoralinį imuninį atsaką. Be to, rNDV vakcinos apsaugojo nuo klinikinių ligų ir žymiai sumažino viruso išsiskyrimą po ankstyvo virulentinio NDV užkrėtimo praėjus dviem savaitėms po išsiritimo. Po užkrėtimo hemagliutinacijos slopinimo antikūnų titrai vakcinuotose grupėse išliko panašūs su titrais prieš užkrėtimą, o tai rodo, kad tiriamos vakcinos gali užkirsti kelią efektyviam užkrėtimo viruso replikacijai. Išgyvenamumas po išsiritimo po vakcinacijos rNDV-IL4R vakcinomis priklausė nuo dozės, o išgyvenamumas didėjo mažėjant dozei. Šis geresnis išgyvenamumas ir priklausomybės nuo dozės duomenys rodo, kad naujos susilpnintos in ovo rNDV vakcinos, kurios gali prasiskverbti į motinos imunitetą ir sukelti stiprų imuninį atsaką jau praėjus 14 dienų po išsiritimo, o tai užtikrina aukštą arba visišką apsaugą nuo virulentinio užkrėtimo. žada prisidėti prie Niukaslio ligos kontrolės.

Be žmonių skiepijimo, žmonės taip pat gali vartoti maistą ir papildus. Cistanche yra įvairių cheminių medžiagų, tokių kaip polisacharidai, steroidai, alkaloidai, flavonoidai ir kt. Šios medžiagos vaidina svarbų vaidmenį reguliuojant imuninę sistemą. Tarp jų polisacharidai gali skatinti imuninių ląstelių aktyvaciją ir dauginimąsi bei padidinti organizmo imunitetą; steroidai gali reguliuoti imuninių ląstelių funkciją ir sustiprinti imuninį atsaką; alkaloidai ir flavonoidai gali atsispirti oksidacijai, priešuždegiminiai, antibakteriniai ir toliau stiprina imunitetą. Todėl Cistanche turi didelį imuninės sistemos reguliavimo poveikį ir gali būti naudojamas kaip sveikas maistas ir vaistas imunitetui gerinti.

Spustelėkite cistanche naudą sveikatai

1. Įvadas

Niukaslio ligą (ND), niokojančią naminių paukščių ligą, kuri gali pasiekti 100 procentų negyvų paukščių mirtingumą, sukelia virulentiškos Niukaslio ligos viruso (NDV) padermės [1]. Ši viruso rūšis neseniai pervadinta į Avian orthoavulavirus 1, priklauso Paramyxoviridae šeimai [2,3]. Niukaslio ligos virusai turi viengrandį, nesegmentuotą, neigiamo jutimo RNR genomą, koduojantį mažiausiai šešis struktūrinius baltymus (30 – nukleoproteinas [NP] – fosfoproteinas [P] – matricos baltymas [M] – sulietas baltymas [F] – hemagliutinino-neuraminidazės [HN] ir didelės RNR polimerazės [L]-50 ) ir turi vieną iš trijų genomo dydžių (15 186, 15 192 ir 15 198 nukleotidų) [4, 5]. Niukaslio liga laikoma trečia pagal svarbą naminių paukščių liga visame pasaulyje [6] ir išlieka endeminė daugelyje Azijos, Afrikos ir Amerikos šalių [7].

ND kontrolė apima griežtą biologinį saugumą, kad būtų išvengta virulentinių NDV (vNDV) patekimo į paukštynus [8, 9] ir tinkamą vakcinų skyrimą [10]. Tačiau daugybė ND protrūkių visame pasaulyje [11] rodo, kad dabartinės vakcinos ir skiepijimo procedūros nėra visiškai veiksmingos. Be įprastų gyvų ir inaktyvuotų vakcinų, per pastaruosius du dešimtmečius buvo ištirtos kelios ND vakcinacijos koncepcijos, įskaitant vektorines, antigeno ir antikūnų komplekso, į virusą panašias daleles ir į rinkliavą panašias receptorių ligandų vakcinas [1, 8,9]. Taip pat buvo pasiūlyta, kad kelios paukščių vakcinos, sukurtos kartu išreikšti imunostimuliuojančius citokinus, pagerintų apsauginį imunitetą [12]. Kitas ištirtas metodas yra antigeniškai suderintų vakcinų naudojimas. Nors visos NDV laikomos vieno serotipo nariais [3,13], tarp padermių yra antigeninių skirtumų [14]. Ankstesni tyrimai su įvairaus amžiaus viščiukais parodė, kad viščiukai, paskiepyti štamais, kurie buvo antigeniškai suderinti su provokuojančiu virusu, išskyrė žymiai mažiau užkrečiamojo vNDV nei viščiukų, paskiepytų heterologinėmis vakcinomis [15–17]. Pažymėtina, kad pasyviai pernešti motinos anti-NDV antikūnai, nors ir apsaugo viščiukus svarbiomis ankstyvosiomis gyvenimo savaitėmis, trukdo šeimininko imuniteto vystymuisi po vakcinacijos [18].

In ovo vakcinacija yra metodas, kuris suteikia daug privalumų, pavyzdžiui, žymiai sumažina išlaidas, standartizuoja, masiškai naudoja vakciną, automatizuotą vakcinaciją perykloje, vienodą vakcinos tiekimą kiekviename kiaušinyje ir nepatiria streso paukščiams [19–21]. ir yra patrauklus imunizacijos metodas paukštininkystės pramonei [22]. Nuo 80 iki 90 procentų JAV auginamų viščiukų broilerių šiuo metu yra vakcinuojami ovo-vakcine 2–3 dienas prieš išsiritimą [23,24], o proceso automatizavimas leidžia paskiepyti iki 70,{9}} kiaušinių. skiepytis per valandą [23].

Pasauliniu mastu šis vakcinos skyrimo būdas taikomas 26 iš 30 pirmaujančių paukštienos auginimo šalių pasaulyje [23]. Šiuo metu yra keletas in-ovo vakcinų nuo ND, tačiau visos jos yra sukurtos naudojant ne NDV vektorius. Nustatyta, kad in ovo naudojamos paukščių raupų viruso (FPV) vektorių vakcinos, ekspresuojančios NDV F ir HN baltymus, apsaugo naminius paukščius nuo užkrėtimo vNDV [25, 26].

Tačiau rekombinantinės FPV-ND vakcinos nėra plačiai naudojamos dėl imuninių trukdžių, atsiradusių dėl ankstesnių FPV vakcinacijų ar ekspozicijos (FPV dažniausiai yra aplinkoje) ir dėl to, kad trūksta optimizavimo naudoti masiniais metodais [9]. Plačiausiai naudojamas vektorius rekombinantinei ND in ovo vakcinai gaminti yra Meleagrid alfaherpesvirusas 1, paprastai žinomas kaip kalakutų herpesvirusas (HVT) arba 3 serotipo Mareko ligos virusas [12,23]. Vien JAV 2018 m. buvo pagaminta 8,2 milijardo dozių rekombinantinių ŠVT (rHVT)-ND vakcinų, palyginti su 3,6 milijardo dozių įprastų ND vakcinų [27].

Be pranašumo, kad yra naudojamos in ovo, rHVT vakcinos, ekspresuojančios NDV baltymus, po vienkartinio panaudojimo sukelia stiprų ir ilgalaikį imunitetą [28]. Be to, juos laikinai veikia antikūnai prieš NDV, gauti iš motinos [8]. Tačiau rHVT-ND vakcinos turi tam tikrų apribojimų, pavyzdžiui, uždelstas imunitetas, o ankstesnė HVT vakcinacija neatspari tų pačių paukščių revakcinacijai nuo HVT [9, 29]. HV vakcinos yra susijusios su ląstelėmis ir turi būti laikomos bei transportuojamos skystame azote, o tai riboja jų naudojimą daugelyje šalių.

Naujų in ovo vakcinų perspektyva auga [23]. Buvo ištirti įvairūs vektoriai, skirti in ovo įvedimui, ir buvo pranešta apie daug žadančius rezultatus naudojant nereplikuojančius žmogaus adenoviruso [30] ir alfa viruso vektorius [31]. Nors įprasto komercinio naudojimo pažanga nebuvo padaryta, taip pat buvo dedamos pastangos kuriant naujas in ovo ne HVT NDV vektorizuotas vakcinas [32–35]. Gyvų ND vakcinų panaudojimas in ovo yra iššūkis. Nors gyvos ND vakcinos, pvz., LaSota, B1, Clone 30 ir Ulster, sukelia stiprų imuninį atsaką ir yra dažniausiai naudojamos vienos dienos jaunų viščiukų vakcinacijai, jos yra susijusios su dideliu embrionų mirtingumu. skiriamas 18 embrionų tautos dienų. Buvo pranešta apie 100 procentų mirtingumą nuo laukinio tipo mažai virulentiškų virusų ir 80 procentų nuo genetiškai susilpnintų gyvų virusų, naudojant in ovo, ir šiuo metu šiam vakcinos skyrimo būdui nenaudojamos jokios gyvos ND vakcinos [36, 37]. .

Neseniai buvo įrodyta, kad nauja rekombinantinė NDV (rNDV) vektorizuota eksperimentinė vakcina, kurioje yra antisensinio paukščio interleukino 4 intarpai (IL4), pavadinta ZJ1*l-IL4R, buvo perspektyvi in ​​ovo vakcinos kandidatė, įvertinus specifinio patogeno (SPF). ) embrionuotų vištų kiaušiniai (ECE) [38]. Šiuo tyrimu buvo siekiama toliau įvertinti šios rekombinantinės NDV vektorinės vakcinos ir jos rekombinantinio pagrindo (susilpnintos laukinio tipo viruso skilimo vietos) ir rekombinantinio LaSota-IL4R viruso tinkamumą 18-dienų senumo vakcinacijai in ovo. komerciniai kiaušiniai su aukštais motininių antikūnų titrais. Prekyboje parduodamos vakcinos LaSota ir rHVT-ND buvo įtrauktos kaip kontrolė. Be to, šiuo tyrimu buvo siekiama įvertinti tiriamų vakcinų apsauginį veiksmingumą nuo ankstyvų vNDV iššūkių. Čia parodomas šių rekombinantinių vakcinų gebėjimas veiksmingai įveikti motinos imunitetą, net ir mažomis dozėmis, ir sukelti stiprų imuninį atsaką. Eksperimentinės rNDV vakcinos parodė 100 procentų apsaugą po ankstyvo užkrėtimo vNDV.

2. Medžiagos ir metodai

2.1. Virusai

Virulentiška žąsis/China/ZJ1/2000 (ZJ1, GenBank registracijos numeris AF431744) NDV, VII.1.1 subgenotipo (buvęs VIId) narys, šiame tyrime buvo naudojamas kaip provokuojantis virusas. Rekombinantinis ZJ1 virusas (susilpninta ZJ1 versija) su mažai virulentiška skilimo vieta (ZJ1*L), kuris anksčiau buvo sukurtas mūsų laboratorijoje taikant atvirkštinę genetiką [39], buvo naudojamas kaip rekombinantinių ZJ1*L vakcinų kūrimo pagrindas ir kaip vakcina. virusas. Mažai virulentiška LaSota (LS) vakcinos padermė buvo naudojama kaip vakcinos kontrolė ir kaip pagrindas rekombinantinei LS-IL4R vakcinai sukurti. Visi virusai buvo gauti iš JAV Nacionalinio paukštininkystės tyrimų centro (USNPRC), JAV žemės ūkio departamento (USDA) Pietryčių naminių paukščių tyrimų laboratorijos (SEPRL) saugyklos. Be to, kaip kontrolė taip pat buvo naudojama komerciškai prieinama rHVT-ND vakcina (sulietų genų intarpas).

Šiame tyrime naudotos rekombinantinės NDV eksperimentinės vakcinos buvo sukurtos naudojant atvirkštinę genetiką, kaip aprašyta anksčiau [38, 39]. Trumpai tariant, paukščių IL4 koduojanti seka buvo klonuota į ZJ1*L ir LS stuburus atvirkštine orientacija (IL4R) tarp P ir M genų, sukuriant du rekombinantinius susilpnintus gyvus virusus – būtent ZJ1*L-IL4R ir LS- IL4R („GenBank“ prisijungimo numeriai atitinkamai MM680659 ir MM680665). Rekombinantiniai virusai buvo išgelbėti naudojant modifikuotą vaccinia virusą Ankara, ekspresuojantį T7 polimerazę (MVA/T7), vadovaujantis anksčiau paskelbtais protokolais [38–41]. Scheminis konstrukcijų vaizdas pateiktas papildomame S1A paveiksle. Šiame darbe toliau vartojamas terminas „DV vakcinos“ reiškia ZJ1*L, ZJ1*L-IL4R ir LS-IL4R.

Visų NDV darbiniai ištekliai buvo padauginti iš {{0}} į 11-dienų senumo SPF embrionuotus vištų kiaušinius (ECE) [42]. Šiame tyrime kiaušiniams sėti naudotos virusinės žaliavos buvo praskiestos smegenų širdies infuzijos (BHI) sultiniu (BD Biosciences, MD, JAV), kuriame yra 200 µg/mL gentamicino, 2{{22} }00 U/mL penicilino ir 4 µg/mL amfotericino B, iki trijų skirtingų tikslinių titrų, 105,5/0,1 ml, 104,5/0,1 ml ir 103,5/0,1 ml embriono infekcinės dozės (EID50), išskyrus LS , kuris buvo atskiestas iki 105,5/0,1 ml ir 104,5/0,1 ml EID50. Atskiestų gyvų vakcinų darbinių atsargų titrai buvo patvirtinti atgaline tvarka titruojant 9- iki 11-dienų senumo SPF ECE laikantis standartinių procedūrų, kaip nurodyta anksčiau. RHVT-ND vakcina buvo tiesiogiai atskiesta naudojant sacharozės fosfato glutamato albumino skiediklį rHVT vakcinoms, aprašytą USDA Veterinarijos biologijos tyrimo protokole [43].

2.2. Kiaušiniai

Šiam eksperimentui buvo maloniai paaukoti du šimtai šešiasdešimt du komerciniai (ne SPF) kiaušiniai iš Hy-Line Rockside W-36 veislės sluoksnių pulko (Mansfield, GA, JAV). Sluoksnio pulkas buvo reguliariai skiepijamas LaSota vakcina. Pulko imunitetas buvo reguliariai tikrinamas ELISA metodu, ir nors šie rezultatai nėra tiesiogiai paverčiami hemagliutinacijos slopinimo (HI) titrais, vidutinis anti-NDV antikūnų lygis tėviniame pulke buvo labai aukštas (ty 15 534 su teigiamu slenksčiu). 1159 pavyzdžiai). SPF ECE šaltinis (42 kiaušiniai) buvo SEPRL SPF White Leghorn pulkas. Visi kiaušinėliai 18 dienų buvo inkubuojami 37,5 ◦C temperatūroje ir 55–60 procentų santykinėje drėgmėje.

2.3. Vakcinacija

Komerciniai (n {{{10}}}}) ir SPF (n=42) kiaušinėliai po 18 embrionavimo dienų (DOE) buvo suskirstyti į 14 grupių po 21 kiaušinį. grupė (išskyrus BHI ir Hatch kontrolines grupes, kurios turėjo po 26 kiaušinėlius). Naudojant 1 ml, 24 G × 1/2 švirkštus, kiekvienas kiaušinis buvo pasėtas į alantoinę ertmę 0,1 ml praskiestos vakcinos arba BHI, išskyrus Hatch kontrolinę grupę, kurioje kiaušinėliai nebuvo manipuliuojami visi. Buvo trylika inokuliuotų kiaušinių grupių, suskirstytų į septynias eksperimentines ir šešias kontrolines grupes. Septynios eksperimentinės grupės buvo tokios: ZJ1*L-IL4R 104.5, ZJ1*L-IL4R 105.5, LS-IL4R 103.5, LS-IL4R 104.5, LS-IL4R 105.5, ZJ1*L 104.5, ZJ1*L 104.5 ir Z1J1*5. atitinkama EID50 inokuliato dozė 0,1 ml, kaip nurodyta grupės pavadinime. Be to, buvo sukurtos šešios kontrolinės grupės. Dvi kontrolinės komercinių kiaušinių grupės buvo pasėtos, kaip aprašyta aukščiau, atitinkamai BHI ir rHVT-ND. Dvi kontrolinės komercinių kiaušinių grupės buvo inokuliuotos, kaip aprašyta aukščiau, LS 104,5 ir LS 105,5 EID50 sėjimo 0,1 ml dozėmis. Dvi kontrolinės SPF kiaušinėlių grupės buvo pasėtos ZJ1*L 103.5 ir ZJ1*L-IL4R 103.5. Scheminis tyrimo plano vaizdas pateiktas papildomame S1B paveiksle, C.

Po inokuliacijos kiaušiniai buvo patalpinti į Turbofan Hova-Bator inkubatorius (GQF Manufacturing Company Inc., GA, JAV), kurie vėliau buvo patalpinti į izoliatorius 2 gyvūnų biologinio saugumo lygio (ABSL-2) patalpoje. Inkubatoriai buvo reguliuojami termostatais, kad būtų palaikoma pastovi 37,5 ◦C temperatūra ir santykinė oro drėgmė nuo 55 iki 60 procentų.

2.4. Perėjimas, mėginių ėmimas, mirtingumas

Išsiritę 21 DOE, viščiukai buvo laikomi neigiamo slėgio izoliatoriuose (ABSL-2) ir jiems buvo suteikta galimybė ad libitum gauti maistą ir vandenį. Penki ne SPF viščiukai iš Hatch kontrolinės ir BHI grupių buvo numarinti ir iš karto po išsiritimo nuleisti kraujas, kad būtų nustatytas pradinis motinos anti-NDV HI antikūnų titras. Visi viščiukai buvo pasverti praėjus 1, 8 ir 13 dienų po išsiritimo (DPH). Iš kiekvieno paukščio BHI buvo paimti burnos ir ryklės ir kloakos tepinėliai 2 ir 4 DPH. Klinikiniai požymiai ir mirtingumas buvo registruojami du kartus per dieną visą laikotarpį po išsiritimo, o kraujo mėginiai buvo paimti 13 DPH.

2.5. Iššūkis

Dvylika paukščių iš kiekvienos grupės (išskyrus LS 1{{10}}5.5, kai visi paukščiai mirė 6 DPH) buvo perkelti į ABSL-3E įrenginį 13 DPH. Paukščiai buvo patalpinti į neigiamo slėgio izoliatorius ir leista aklimatizuotis 24 valandas prieš užkrėtimą. Visi paukščiai buvo užkrėsti 14 DPH virulentiniu ZJ1 NDV 106 EID50/0,1 ml okulo-nosiniu būdu. Paukščiai kasdien buvo stebimi dėl klinikinių požymių ir mirtingumo. Iš kiekvieno paukščio 2 ir 4 dienas po užkrėtimo (DPC) buvo paimti burnos ir ryklės ir kloakos tepinėliai. Visi išgyvenę paukščiai buvo pasverti ir nukraujuoti esant 14 DPC, o po anestezijos buvo numarinti gimdos kaklelio išnirimu 0,2 ml ketamino/ksilazino tirpalo (66 mg/ml ketamino ir 6,6 mg/ml ksilazino), įšvirkšto į raumenis su {{22} gauge adata}.

2.6. Realaus laiko RT-PCR

RNR buvo išskirta iš visų tamponų terpių, naudojant MagMAX 96 AI/ND viruso RNR izoliavimo rinkinį (Ambion, Inc. Austin, TX, JAV) su KingFisher magnetinių dalelių procesoriumi (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, JAV) vadovaujantis gamintojo instrukcijomis. , su inhibitorių pašalinimo modifikacija, aprašyta Das ir kt. [44]. Kiekybinė realaus laiko RT-PGR (rRT-PGR) NDV aptikimui, nukreipta į matricos (M) geną, buvo atlikta naudojant AgPath-ID vieno žingsnio RT-PGR rinkinį (Ambion) ir ABI 750{{31 }} Greita realiojo laiko PGR sistema (Applied Biosystems, Waltham, MA, JAV), naudojant pradmenis ir zondą, anksčiau aprašytus Wise ir kt. [45]. Tyrimo sąlygos buvo atvirkštinė transkripcija 10 min. 45 ◦C temperatūroje; pradinis denatūravimas 10 min. 95 ◦C temperatūroje; 40 denatūravimo ciklai 10 sekundžių 94 ◦C temperatūroje, pradmenų atkaitinimas 30 sekundžių 56 ◦C temperatūroje ir pradmenų pailginimas 10 sekundžių 72 ◦C temperatūroje. Bendras 25 µL kiekvieno mėginio reakcijos tūris buvo molekulinės klasės vanduo – 2,5 µL; 2X buferis – 12,5 µL; pirminis pradmuo – 0,25 µl (20 pmol/µL); atvirkštinis pradmuo – 0,25 µL (20 pmol/µL); zondas – 0,50 µl (6 pmol/µL); 25X fermentų mišinys – 1,0 µL; ir RNR šablonas – 8,0 µL. Viruso kiekybiniam įvertinimui buvo sudaryta standartinė kiekvieno viruso kreivė, iš kurios RNR buvo išgaunama iš tos pačios titruotos virusų, naudojamų kiaušiniams sėti (tamponų mėginiams, paimtiems po išsiritimo), arba užkrėtimo viruso (tamponų mėginiams, paimtiems po išsiritimo) -iššūkis).

Rezultatai pateikiami kaip EID50/ml. Apskaičiuota apatinė tyrimų aptikimo riba buvo nuo 101,7 iki 101,9 EID50/ml. Svarbu pažymėti, kad rRTPCR aptinka virusines nukleino rūgštis ir kad apskaičiuotos vertės nebūtinai atspindi infekcinius virusus. EID50/mL reikšmės nesiekia parodyti užkrečiamumo ir yra naudojamos siekiant palyginti virusų plitimą tarp grupių. Nepaisant to, kad buvo naudojamas inhibitorių pašalinimo nukleorūgščių ekstrahavimo protokolas, didelis RNR šablono tūris galėjo turėti įtakos skaičiavimams pagal standartinę kreivę. Pažymėtina, kad visose reakcijose buvo naudojamas tas pats kiekis RNR šablono, o galimi likučių inhibitoriai būtų vienodai paveikę visus rezultatus.

2.7. HI tyrimas

Hemagliutinacijos slopinimo (HI) tyrimas buvo naudojamas norint įvertinti antikūnų buvimą ir titrus serumo mėginiuose, surinktuose per visą eksperimentą. Taikant standartines procedūras [46], virusas, naudojamas kaip kiekvienos vakcinos pagrindas, buvo naudojamas kaip antigenas kiekvienai atitinkamai serumų grupei (ZJ1*L visoms ZJ1 grupėms ir LS visoms LS grupėms). Serumo mėginiams, paimtiems po užkrėtimo, virulentiškas ZJ1 virusas buvo naudojamas kaip antigenas HI tyrime. Titrai buvo apskaičiuoti kaip paskutinio HI teigiamo serumo praskiedimo atvirkštinė vertė, o mėginiai, kurių HI titrai yra log2 3 ir mažesni, buvo laikomi neigiamais.

2.8. Statistinės analizės

Prism v.7.{7}}3 (GraphPad Software Inc., La Jolla, CA, JAV) programinė įranga buvo naudojama duomenims analizuoti, o nuokrypiai buvo nustatyti naudojant ROUT testą. D'Agostino-Pearson normalumo testas buvo atliktas siekiant įvertinti, ar kiekvienos grupės vertės buvo gautos iš Gauso skirstinio. Remiantis normalumo pasiskirstymu, daugkartiniam grupių palyginimui buvo naudojamas neparametrinis Kruskal – Wallis testas su Dunno posttestu. Statistiniais tikslais visiems tepinėlių mėginiams, iš kurių virusai nebuvo aptikti, buvo suteikta 1 log žemiau kiekvieno viruso aptikimo ribos. Išgyvenamumo kreivės buvo analizuojamos naudojant Log-rank (Mantel-Cox) testą. Statistiniam reikšmingumui nustatyta p reikšmė < 0,05.

3. Rezultatai

3.1. Galimybė išperinti, išgyventi po išsiritimo ir kūno svoris

Visų grupių, išperėtų iš komercinių kiaušinių, išgyvenamumas po išsiritimo pavaizduotas kaip išgyvenimo kreivės 1 paveiksle (atskirtos 1A ir B paveiksluose, kad būtų aišku ir išvengta grafikos perkrovos). Kombinuotas grafikas pateikiamas papildomame S2 paveiksle. Kontrolinė „Hatch“ grupė (neužskieta) buvo įtraukta į projektą, siekiant užtikrinti, kad nebūtų nenormalaus išsiritimo ar mirtingumo po išsiritimo, nesusijusio su kiaušinių skiepijimu.

Kaip ir tikėtasi, labai mažas (rHVT-ND) arba visai (Hatch ir BHI) mirtingumas po išsiritimo buvo pastebėtas trijose kontrolinėse grupėse. Priešingai, LS kontrolinių grupių išgyvenamumas buvo 57,1 proc. ir 0 proc., kai buvo panaudotos atitinkamai 104,5 ir 105,5 dozės, apie ką anksčiau buvo pranešta įprastoms gyvoms ND vakcinoms. LS-IL4R 105.5 grupėje neišsirito du kiaušiniai, o LS 104.5 grupėje neišsirito vienas kiaušinis. Kitose grupėse buvo pastebėtas įvairus mirtingumas, priklausomai nuo vakcinos ir inokuliacijos dozės. ZJ1*L-IL4R 104,5 ir 105,5 grupių išgyvenamumas buvo atitinkamai 90,5 ir 71,4 proc., o ZJ1*L 104,5 ir 105,5 grupėse išgyvenamumas buvo atitinkamai 80,9 ir 76,2 proc., tačiau skirtumai buvo 1A pav. nėra statistiškai reikšmingas. Išgyvenamumas LS-IL4R 103,5 grupėje buvo 95,2 proc. LS-IL4R 104,5 ir 105,5 grupėse išgyvenamumas buvo atitinkamai 85,7 ir 66,7 procento (1B pav.).

Eksperimentinių ZJ1*L, ZJ1*L-IL4R ir LS-IL4R vakcinų grupių bei Hatch, BHI ir rHVT-ND kontrolinių grupių išgyvenamumo skirtumų nebuvo, tačiau procentinė išgyvenamumo dalis šiose kontrolinėse grupėse buvo daug didesnė. , pastebėta neigiama koreliacija tarp vakcinos dozės ir išgyvenimo po išsiritimo (išgyvenamumas didėjo mažėjant vakcinos dozei). LS 1{{10}}5,5 kontrolinės grupės išgyvenamumas reikšmingai skyrėsi, palyginti su eksperimentinėmis grupėmis (p reikšmės tarp 0.0001 ir 0,02). LS 104.5 kontrolinės grupės, nors ir statistiškai nesiskyrė, išgyvenamumas buvo žymiai mažesnis, palyginti su eksperimentinėmis grupėmis, vartojusiomis tą pačią dozę. Dviejų LS kontrolinių grupių išgyvenamumas reikšmingai skyrėsi, palyginti su Hatch, BHI ir rHVT-ND kontrolinėmis grupėmis (p reikšmės nuo 0,0001 iki 0,04). Klinikiniai požymiai nebuvo pastebėti nė vienoje grupėje po išsiritimo. Grupėse, kuriose buvo mirtingumas po išsiritimo, kasdien tikrinant paukščius buvo rasta negyvi.

Visi paukščiai buvo pasverti 1, 8 ir 13 dieną po išsiritimo (1 lentelė). Esant 1 DPH, vidutinis paukščio kūno svoris daugumoje grupių buvo nuo 38,5 iki 42,6 gramo (g). Reikšmingi kūno svorio skirtumai buvo tik tarp rHVT-ND ir ZJ1*L-IL4R 104,5 grupių iš vienos pusės ir ZJ1*L 104,5 ir kontrolinės LS 1{{4{{42} }}}4,5 nuo kitos (dviejų pirmųjų grupių paukščiai svėrė daugiau nei kontrolinės grupės paukščiai) (p reikšmės atitinkamai tarp 0.0001 ir 0,017). Esant 8 DPH, dviejų ZJ1*L grupių ir LS-IL4R 104.5, LS-IL4R 105.5 grupės ir kontrolinės LS grupės (vidutinis svoris 50–63 g) kūno svoris buvo žymiai mažesnis, palyginti su paukščiais iš Liuko. BHI, ir rHVT-ND kontrolinės grupės (vidutinis svoris 77–82 g) (p reikšmės nuo 0,0001 iki 0,03). Tos pačios grupės, kurios reikšmingai skyrėsi nuo kontrolinių 8 DPH (išskyrus LS-IL4R 104,5), turėjo žymiai mažesnį kūno svorį nei kontrolinės Hatch, BHI ir rHVT-ND grupės, taip pat 13 DPH (p reikšmės tarp 0,0001 ir 0,01). Paukščiai iš inokuliuotų SPF kontrolinių grupių į šį palyginimą nebuvo įtraukti, nes SPF kiaušiniai (ir iš jų išsiritę paukščiai) tradiciškai yra mažesni ir lengvesni nei komerciniai kiaušiniai.

1 paveikslas. Viščiukų išgyvenimas po išsiritimo po komercinių kiaušinių inokuliacijos 18 embriono dienų eksperimentinėmis in ovo NDV vakcinomis. Hy-Line Rockside W-36 kiaušinėliai buvo užkrėsti rekombinantiniais virusais ir LaSota. Trys kontrolinės grupės buvo inokuliuotos BHI arba rHVT-ND vakcina arba nesokuliuotos (Hatch kontrolinė grupė). Paukščiai buvo stebimi 13 dienų po išsiritimo. Išgyvenamumo kreivės pateiktos dviem paveikslėliais: (A) kontrolinės grupės ir ZJ1*L grupės ir (B) kontrolinės grupės ir LS-IL4R grupės. Skirtingos viršutinio indekso raidės rodo statistiškai reikšmingus skirtumus tarp grupių (p reikšmė < 0.05). Grupės santrumpos: HATCH – kiaušiniai nesokėti; BHI – kiaušiniai, užkrėsti BHI; rHVT-ND – rekombinantine HVT vakcina inokuliuoti kiaušiniai; ZJ1*L – kiaušiniai, užkrėsti rekombinantiniu ZJ1*L virusu, kurio skilimo vieta buvo pakeista, kad būtų mažo virulentiškumo; ZJ1*L-IL4R – kiaušiniai, užkrėsti rekombinantiniu mažai virulentišku ZJ1*L su interleukino-4 genu, įterptu atvirkštine kryptimi; LS – kiaušiniai, užkrėsti LaSota štamu; LS-IL4R – kiaušiniai, užkrėsti rekombinantiniu LaSota virusu su interleukino -4 genu, įterptu atvirkštine kryptimi. Viruso dozė, kurią gavo kiekvienos grupės kiaušiniai, vaizduojama kaip skaičius po grupės pavadinimo EID50 vienam kiaušiniui.

1 lentelė. Vidutinis viščiukų svoris (ir standartiniai nuokrypiai) praėjus 1, 8 ir 13 dienų po išsiritimo po komercinių kiaušinių pasėjimo eksperimentinėmis in ovo vakcinomis 18 dienų po embriono ir 14 dienų po užkrėtimo virulentine Niukaslio liga virusas.

3.2. Vakcinos virusų išsiskyrimas po vakcinacijos, kaip parodyta rRT-PGR

Esant 2 DPH, reikšmingų virusų išsiskyrimo skirtumų tarp vakcinų grupių nebuvo. (2A pav.). Panašiai, esant 4 DPH, skirtumai tarp grupių nebuvo statistiškai reikšmingi. (2B pav.). Viruso plitimo neaptikta nė vienam iš Hatch ir BHI kontrolinių paukščių.

2 paveikslas. Vidutinis vakcinos išsiskyrimas po išsiritimo iš viščiukų, išsiritusių iš komercinių kiaušinių, užkrėstų eksperimentinėmis in ovo vakcinomis 18 embrionų gimimo dieną. Kiekvienas duomenų taškas atspindi vieną paukščio ir NDV titrus, aptiktus burnos ir ryklės (OP) ir kloakos (CL) tamponuose skirtingomis dienomis po išsiritimo (DPH). Išsiliejimas pateikiamas atskirai 2 dienas po išsiritimo (A) ir 4 dienas po išsiritimo (B). Juostos rodo standartinius vidurkio nuokrypius. Visiems tamponams, iš kurių virusas nebuvo aptiktas, buvo suteikta skaitinė vertė 1 log žemiau kiekvieno atitinkamo viruso aptikimo ribos. RRT-PGR aptikimo riba pateikiama kaip horizontali punktyrinė linija (naudojama žemiausia riba). Grupės santrumpos: HATCH – kiaušiniai nesokėti; BHI – kiaušiniai, užkrėsti BHI; rHVT-ND – rekombinantine HVT vakcina inokuliuoti kiaušiniai; ZJ1*L – kiaušiniai, užkrėsti rekombinantiniu ZJ1*L virusu, kurio skilimo vieta buvo pakeista, kad būtų mažo virulentiškumo; ZJ1*L-IL4R – kiaušiniai, užkrėsti rekombinantiniu mažai virulentišku ZJ1*L su interleukino-4 genu, įterptu atvirkštine orientacija; LS – kiaušiniai, užkrėsti LaSota štamu; LS-IL4R – kiaušiniai, užkrėsti rekombinantiniu LaSota virusu su interleukino-4 genu, įterptu atvirkštine kryptimi. Viruso dozė, kurią gavo kiekvienos grupės kiaušiniai, vaizduojama kaip skaičius po grupės pavadinimo EID50 vienam kiaušiniui.

3.3. Humoralinis imuninis atsakas po išsiritimo

Serumo mėginių, surinktų ties 13 DPH (įstrižomis juostelėmis užpildytų juostelių), analizė HI tyrimu (nustatant hemagliutinacijos antikūnus prieš NDV) parodyta 3 paveiksle. Norint nustatyti pasyviai perkeltų anti-NDV motininių HI antikūnų titrą komerciniuose kiaušiniuose, dešimt viščiukai buvo nuleidžiami iš karto po išsiritimo (0 DPH). HI titrai perėjimo metu svyravo tarp log2 5 ir log2 8, o vidutinis log2 7.17 (3 pav., punktyrinė horizontali raudona linija). Antikūnai, esantys 13 DPH Hatch, BHI ir rHVT-ND grupėse (vidutiniškai log2 4.7), yra liekamieji motinos antikūnai, nes šios grupės buvo arba neskiepytos, arba paskiepytos rHVT-ND vakcina, kuri nesukelia HI antikūnų prieš NDV. Antikūnų titrai ZJ1*L, ZJ1*L-IL4R ir LS 104.5 grupėse buvo žymiai didesni, palyginti su Hatch, BHI ir rHVT-ND kontrolinėmis grupėmis. Nebuvo pastebėta jokių reikšmingų skirtumų tarp skirtingų vakcinų, turinčių tą patį pagrindą, dozių grupių. LS-IL4R grupių HI titrai po vakcinacijos buvo mažesni, palyginti su ZJ1*L-IL4R ir ZJ1*L grupėmis, nors šie skirtumai nebuvo statistiškai reikšmingi. Pažymėtina, kad nors skaičiai buvo šiek tiek didesni, paukščių HI titrai po vakcinacijos visose LS-IL4R grupėse reikšmingai nesiskyrė nuo titrų, išmatuotų kontrolinių nevakcinuotų paukščių.

3 pav. Prieš ir po užkrėtimo HI antikūnų titrai (ir standartinis nuokrypis) iš viščiukų, išsiritusių iš komercinių kiaušinių, užkrėstų eksperimentinėmis in ovo vakcinomis 18 dienų po embriono ir ankstyvo užkrėtimo virulentiniu Niukaslio ligos virusu 14 dienų po išsiritimo. Įstrižainės juostelėmis užpildytos juostos rodo titrus prieš bandymą 13 dienų po išsiritimo. Kietos medžiagos užpildytos juostos rodo titrus po užkrėtimo praėjus 14 dienų po užkrėtimo. Statistiškai reikšmingi skirtumai tarp skirtingų grupių pateikiami mažosiomis raidėmis virš kiekvienos grupės (p vertė<0.05). The level of maternal antibodies on the day of hatch (0 DPH) is presented as a horizontal dotted line. Group abbreviations: HATCH—eggs not inoculated; BHI—eggs inoculated with BHI; rHVT-ND—eggs inoculated with recombinant HVT vaccine; ZJ1*L—eggs inoculated with the recombinant ZJ1*L virus whose cleavage site was modified to be of low virulence; ZJ1*L-IL4R—eggs inoculated with the recombinant low virulent ZJ1*L with the interleukin-4 gene inserted in reverse orientation; LS—eggs inoculated with the LaSota strain; LS-IL4R—eggs inoculated with the recombinant LaSota virus with the interleukin-4 gene inserted in reverse orientation. The virus dose that the eggs in each group received is represented as a number after the group name in EID50/per egg.

3.4. Klinikiniai požymiai ir išgyvenimas po ankstyvo CDV iššūkio

Kontrolinėse grupėse pirmieji pastebėti klinikiniai požymiai buvo Hatch ir BHI grupėse esant 3 DPC. Trims Hatch grupės paukščiams ir vienam BHI grupės paukščiams buvo sunku kvėpuoti. Esant 4 DPC, BHI ir liuko grupėse buvo pastebėtos susiraukšlėjusios plunksnos ir galvos drebulys, o esant 5 DPC rHVT-ND grupėje; pastarojoje grupėje dviem paukščiams taip pat buvo užregistruota ataksija ir sunkus tortikolis. Hatch kontrolinės grupės paukščiai pasireiškė letargija esant 5 DPC, o dviem BHI grupės paukščiams buvo paralyžius. Letargija ir paralyžius buvo pastebėti rHVT-ND grupėje 6 ir 7 DPC. Hatch ir BHI kontrolinėse grupėse, pradedant nuo 9 DPC, buvo pastebėti opisthotonos, tortikollis ir pasunkėjęs kvėpavimas. RHVT-ND grupėje tortikolis buvo pastebėtas jau 5 DPC, pasunkėjęs kvėpavimas ir ataksija prasidėjo 6 DPC, o opistotonas prasidėjo 13 DPC. Iki 14 DPC visi paukščiai, išskyrus du Hatch, vieną BHI ir du rHVT-ND paukščius (atitinkamai 83,3 proc., 91,6 proc. ir 83,3 proc. sergamumo), arba nugaišo, arba jiems atsirado daugiausia neurologinių klinikinių požymių, tokių kaip ataksija, opistotonija, tortikolis, tremoras. , ir paralyžiuoja. Paukščiai, kuriems pasireiškė sunkūs klinikiniai požymiai, nustojo valgyti ar gerti arba gulėjo gulėti, buvo numarinti ir kitą dieną pranešta kaip nugaišę, kad būtų skaičiuojamas išgyvenimo laikas. Klinikinių požymių nepastebėta nė vienoje iš ZJ1*L ir ZJ1*L-IL4R grupių. Nežymūs klinikiniai opisthotonos arba tortikollis požymiai buvo pastebėti vienam paukščiui (8,4 proc. sergamumas) kiekvienoje LS-IL4R grupėje ir LS 104,5 grupėje esant 14 DPC.

Išgyvenamumas po užkrėtimo virulentiniu ZJ1 NDV pavaizduotas kaip išgyvenamumo kreivės 4 paveiksle. Nors visos grupės, paskiepytos rekombinantinėmis vakcinomis ir LS, išgyveno 100 proc., Hatch, BHI ir rHVT-ND grupių paukščiai išgyveno 58,3 proc. išgyvenamumas atitinkamai 58,3 proc. ir 66,6 proc. Išgyvenamumas po užkrėtimo Hatch ir BHI kontrolinėse grupėse buvo žymiai mažesnis, palyginti su eksperimentinėmis vakcinų grupėmis. Pažymėtina, kad nors inokuliuotų grupių paukščių kūno svoris svyravo po išsiritimo, palyginti su Hatch, BHI ir rHVT-ND kontroliniais gyvūnais, visi rNDV vakcinuoti paukščiai (282–328 g) viršijo neskiepytų paukščių kūno svorį. kontroliniai paukščiai po užkrėtimo (255–266 g) (1 lentelė). Tačiau reikšmingo kūno svorio skirtumo tarp nė vienos iš tirtų grupių nepastebėta.

4 pav. Viščiukų išgyvenamumas po komercinių kiaušinių pasėjimo 18 dienų embrionų gimimo eksperimentinėmis in ovo vakcinomis ir ankstyvo užkrėtimo virulentiniu Niukaslio ligos virusu 14 dienų po išsiritimo. Paukščiai buvo stebimi 14 dienų po užkrėtimo. Skirtingos viršutinio indekso raidės rodo statistiškai reikšmingus skirtumus tarp grupių (p reikšmė < 0.05). Grupės santrumpos: HATCH – kiaušiniai nesokėti; BHI – kiaušiniai, užkrėsti BHI; rHVT-ND – rekombinantine HVT vakcina inokuliuoti kiaušiniai; ZJ1*L – kiaušiniai, užkrėsti rekombinantiniu ZJ1*L virusu, kurio skilimo vieta buvo pakeista, kad būtų mažo virulentiškumo; ZJ1*L-IL4R – kiaušiniai, užkrėsti rekombinantiniu mažai virulentišku ZJ1*L su interleukino-4 genu, įterptu atvirkštine kryptimi; LS – kiaušiniai, užkrėsti LaSota štamu; LS-IL4R – kiaušiniai, užkrėsti rekombinantiniu LaSota virusu su interleukino-4 genu, įterptu atvirkštine kryptimi. Viruso dozė, kurią gavo kiekvienos grupės kiaušiniai, vaizduojama kaip skaičius po grupės pavadinimo EID50 vienam kiaušiniui.

3.5. Atsikratymas po iššūkio, kaip parodyta rRT-PCR

Esant 2 DPC, Hatch, BHI ir rHVT-ND kontrolinių grupių paukščiai išskiria didelius viruso titrus (1{{20}}5,3–5,7 EID50/mL) per burną, o visos vakcinos grupės buvo mažesni nei 104 EID50/mL vidutiniai skilimo titrai (5A pav.). Viruso plitimo per kloaką rezultatai visose grupėse buvo mažesni už aptikimo ribą. Esant 2 DPC, paukščiams visose ZJ1*L ir ZJ1*L-IL4R grupėse ir LS-IL4R 105.5 grupėse per burną buvo aptikta žymiai mažiau virusinės RNR, palyginti su Hatch, BHI ir rHVT-ND kontrolinių grupių paukščiais. (p reikšmės svyravo tarp 0,001 ir 0,02). Esant 4 DPC, išsiskyrimas per burną Hatch, BHI ir rHVT-ND grupėse buvo didelis (106,2–6,9 EID50/ml) (5B pav.).

Priešingai, visose vakcinų grupėse, esant 4 DPC, buvo pastebėtas mažesnis išsiskyrimas, palyginti su 2 DPC, didžiausias vidutinis titras buvo 102,9 EID50/mL ZJ1*L 104,5 grupėje ir mažiausias vidutinis titras 101,5 EID50/mL ZJ1*. l-IL4R 104.5 grupė (kai kuriems paukščiams virusinė RNR neaptikta). Visos eksperimentinės rNDV vakcinos grupės per burną išskirdavo žymiai mažiau virusų, palyginti su Hatch, BHI ir rHVT-ND kontrolinėmis grupėmis (p vertės nuo<0.0001 to 0.03). No significant differences in oral shedding were observed among the experimental rNDV vaccine groups. The birds in the rNDV vaccine groups shed significantly less virus through the cloacal route compared with the Hatch, BHI, and rHVT-ND control groups (p values from <0.0001 to 0.007). The differences in the titers were not significant among the experimental rNDV vaccine groups and the LS control group.

5 paveikslas. Vidutinis viščiukų viruso išsiskyrimas po užkrėtimo po komercinių kiaušinių pasėjimo eksperimentinėmis in ovo vakcinomis 18 dienų nuo embriono ir ankstyvo užkrėtimo virulentiniu Niukaslio ligos virusu 14 dienų po išsiritimo. Kiekvienas duomenų taškas parodo NDV titrus, aptiktus burnos ir ryklės (OP) ir kloakos (CL) tamponuose skirtingomis dienomis po užkrėtimo (DPC). Išsiliejimas pateikiamas atskirai 2 dienas po užkrėtimo (A) ir 4 dienas po užkrėtimo (B). Juostos rodo standartinius vidurkio nuokrypius. Visiems tamponams, iš kurių virusas nebuvo aptiktas, buvo suteikta skaitinė reikšmė 1 log žemiau aptikimo ribos. RRT-PGR aptikimo riba pateikiama kaip horizontali punktyrinė linija.

Statistiškai reikšmingi skirtumai tarp skirtingų grupių pateikiami mažosiomis raidėmis virš kiekvienos grupės (p reikšmė < 0.05). Grupės santrumpos: HATCH – kiaušiniai nesokėti; BHI – kiaušiniai, užkrėsti BHI; rHVT-ND – rekombinantine HVT vakcina inokuliuoti kiaušiniai; ZJ1*L – kiaušiniai, užkrėsti rekombinantiniu ZJ1*L virusu, kurio skilimo vieta buvo pakeista, kad būtų mažo virulentiškumo; ZJ1*L-IL4R – kiaušiniai, užkrėsti rekombinantiniu mažai virulentišku ZJ1*L su interleukino-4 genu, įterptu atvirkštine kryptimi; LS – kiaušiniai, užkrėsti LaSota štamu; LS-IL4R – kiaušiniai, užkrėsti rekombinantiniu LaSota virusu su interleukino-4 genu, įterptu atvirkštine kryptimi. Viruso dozė, kurią gavo kiekvienos grupės kiaušiniai, vaizduojama kaip skaičius po grupės pavadinimo EID50 vienam kiaušiniui.

3.6. Serologija po iššūkio

Visiems Hatch, BHI ir rHVT-ND kontrolinių grupių paukščiams buvo padidėjęs (daugiau nei dvigubai) HI antikūnų titras esant 14 DPC (virš log2 10), palyginti su titrais prieš užkrėtimą esant 13 DPH (log{ {6}}.7). Titrų skirtumai šiose trijose grupėse prieš ir po užkrėtimo buvo reikšmingi (p vertė<0.0001) (Figure 3, solid bars). In contrast, the post-challenge HI titers in all experimental rNDV vaccine groups and the LS control group did not change significantly compared with the pre-challenge titers of the same groups. In all groups, the differences between pre-and post-challenge antibody titers were within a log (except LS-ILR4 103.5, in which the difference was log2 1.8).

3.7. Inokuliuotos SPF kontrolinės grupės

SPF kontrolinių grupių išgyvenamumas po išsiritimo buvo 66,7 proc. grupėje, kuriai buvo inokuliuota ZJ1*L 103,5, ir 57,1 proc. grupėje, kuri buvo inokuliuota ZJ1*L-IL4R 103,5 (papildomas paveikslas S3A). Aktyvus viruso išsiskyrimas buvo aptiktas SPF kontrolinių grupių paukščiuose abiem būdais, o burnos ir ryklės tepinėlių mėginiuose buvo nustatyti didesni titrai (žr. papildomą S3B paveikslą). Inokuliuotų SPF kontrolinių paukščių HI titrai po vakcinacijos buvo didesni nei Hatch, BHI ir rHVT-ND kontrolinių grupių titrai ir pasiekė vidutines log2 7.08 ir log2 7 reikšmes. 58, esant 13 DPH, atitinkamai ZJ1 * L-IL4R 103.5 ir ZJ1 * L-IL4R 103.5 grupėse (žr. papildomą S3C paveikslą). Jokių klinikinių požymių ar mirtingumo po užkrėtimo dviejose SPF kontrolinėse grupėse nepastebėta (išgyvenimo kreivių žr. papildomą S3D paveikslą). Paukščiai iš inokuliuotų SPF kontrolinių grupių išmetė žymiai mažiau viruso per burną esant 2 DPC ir 4 DPC, palyginti su kontrolinėmis grupėmis (p vertės nuo<0.0001 to 0.009) (see Supplementary Figure S3E). The post-challenge antibody titers in both inoculated SPF control groups did not change significantly compared with the pre-challenge titers of the same groups (see Supplementary Figure S3C).

For more information:1950477648nn@gmail.com