Imuniteto trūkumo įveikimas naudojant Allogrooming

Paprasta santrauka:

Ištyrėme, ar dvi glaudžiai susijusios termitų rūšys skiriasi savo priklausomybe nuo socialinio ar individualaus imuniteto prieš dvi patogeninių grybų rūšis, kurios buvo surinktos iš tos pačios vietos. Mūsų rezultatai rodo, kad abipusis grooming (allogrooming) yra labai veiksmingas ribojant mirtinas infekcijas tiek, kad jis gali kompensuoti santykinai silpną individualią imuninę apsaugą. Susidūrę su patogenais, termitai naudoja alternatyvią socialinio atsiribojimo ir užkrečiamųjų ligų plitimo ribojimo strategiją, o vietoj to susirenka vienas kitą valyti. Šios elgsenos reakcijos intensyvumo kitimas rodo niuansuotą reakciją į grėsmės lygį.

cistanche papildo privalumai - padidina imunitetą

Santrauka:

Atrodo, kad alogrooms yra būtinas daugeliui socialinių gyvūnų, siekiant apsaugoti nuo įprastinio parazitų poveikio. Atrodo, kad socialiniuose vabzdžiuose labai svarbu pašalinti patogeninius skleidėjus iš odelės prieš pradedant infekcinį ciklą. Požeminių termitų atveju tai apima grybų sporas, dažniausiai sutinkamas dirvožemyje, pvz., Metarhizium conidia, kurios gali greitai sudygti ir prasiskverbti į odelę. Ištyrėme, ar skiriasi priklausomybė nuo socialinio ir įgimto imuniteto dviejuose glaudžiai susijusiuose požeminiuose termituose, siekiant apsaugoti nuo mirtinų infekcijų, kurias sukelia dvi lokaliai aptinkamos Metarhizium rūšys. Mūsų rezultatai rodo, kad santykinai silpnas vienos termitų rūšies įgimtas imunitetas kompensuojamas ilgalaikiu alogroomingu. Tai apima patobulintą alogomiją, reaguojant į konidijų koncentraciją, kuri atspindi įprastesnį odelės užteršimą, taip pat į stiprų odelių užteršimą, kuris sukelia tinklinį atsaką į avariją.

Raktiniai žodžiai:

socialinis imunitetas; įgimtas imunitetas; entomopatogenai; signalizacijos elgesys; galas

cistanche tubulosa - stiprina imuninę sistemą

Spustelėkite čia norėdami pamatyti Cistanche Enhance Immunity produktus

【Klauskite daugiau】 El. paštas:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

1. Įvadas

Socialiniai gynybos mechanizmai gali būti labai veiksmingi kovojant su jautrumu užkrečiamoms ligoms, nepaisant to, kad visuomeniškumas skatina jos plitimą [1, 2]. Atrodo, kad termitų ir skruzdėlių veiksmingų socialinių imuninės gynybos mechanizmų raida sumažino selektyvų spaudimą individualiems įgimtiems imuniniams mechanizmams [3–6]. Susidūrus su patogenais, socialinių vabzdžių ligų grėsmė priklausys nuo įgimtos priekinės apsaugos, įskaitant fizines infekcijos kliūtis, veiksmingumo. Daugelis grybelinių patogenų gamina nelytines sporas (konidijas), kurios gali tiesiogiai prasiskverbti į vabzdžių odelę. Socialinės imuninės gynybos priemonės, padedančios apsaugoti odelę, įskaitant alogomiją ir išskiriamus priešgrybelinius vaistus, yra ypač svarbios termitams, apsaugantiems nuo Metarhizium spp [7–9]. Metarhizium konidijos yra visur dirvoje, per kurią daugelis termitų juda ieškodami maisto ir pasiekia tokią koncentraciją, kuri išlaiko nuolatinę infekcijos grėsmę [10]. Maitinantys termitai, pavyzdžiui, Reticulitermes genties rūšys, juda per dirvą, kad išplėstų savo kolonijų arealą ir pasiektų daugybę maitinimosi vietų, kurios paprastai yra medienos ištekliai, esantys ant dirvožemio paviršiaus [11]. Jų kolonijų požeminiai tinklai gali siekti dešimtis metrų, juose gali būti daugiau nei šimtas tūkstančių individų, o tankis viršija šimtą kolonijų hektare [12]. Jie išsivystė iš protėvių, kurių kolonijos apsiribojo viename medžio gabale [13,14]. Dėl šio perėjimo padaugėjo susidūrimų su plėšrūnais, patogenais ir konkurentais, o tai sutapo su tam tikros darbuotojos kastos, kuri paprastai atsisako tiesioginio dauginimosi, raida. Tikėtina, kad geresnė higiena buvo labai svarbi šiam perėjimui ir vėlesnei radiacijai bei dabartinei termitų ekologinei sėkmei, kurių indėlis į medienos irimą gali viršyti mikrobų skaidymą [15,16] ir kurie, atrodo, yra pasirengę sparčiai plėstis visame pasaulyje, kylant temperatūrai [17]. . Pereinant prie pašarų paieškos selektyvaus spaudimo įgimtiems imuniniams genams atsipalaidavimas sutapo su dviejų genų, gaminančių išskiriamus priešgrybelinius baltymus, sustiprėjimu [6]. Atrodo, kad šie baltymai yra būtini norint pašalinti grybelines konidijas naudojant alogomiją. Priešingas selektyvus spaudimas atskirų įgimtų ir socialinių gynybos mechanizmų komponentams praeityje rodo, kad termitų priklausomybė nuo individualaus įgimto ir socialinio imuniteto, siekiant apsisaugoti nuo grybelinių ligų, ir toliau egzistuoja prisitaikantis kompromisas. Tai patvirtina pastebėjimas, kad įgimta imuninio geno ekspresija grupėse yra mažesnė nei Reticulitermes darbuotojų, kurie buvo paveikti Metarhizium konidijų [18]. Allogrooming sumažina poreikį aktyvuoti vidinę imuninę sistemą. Šiame tyrime mes ištyrėme socialinio ir įgimto imuniteto skirtumus dviejose požeminių termitų rūšyse prieš dvi vietines Metarhizium rūšis, kurios natūraliai susiduria viena su kita. Metarhizium rūšys buvo išskirtos iš dirvožemio po rąstais arba šalia jų, kuriuose buvo renkami termitai. Dvi termitų rūšys, Reticulitermes virginicus ir Reticulitermes flavipes, buvo surinktos iš tos pačios vietos Merilande. Nors atrodo, kad jie yra agonistai, jie dažnai randami ieškant maisto vienas šalia kito arba net kartais tame pačiame rąste. Atliekant Petri lėkštelės agonizmo tyrimus, tarprūšinė agresija tarp darbuotojų dažnai sukelia mirtinas žaizdas [19]. Anksčiau buvo įrodyta, kad R. virginicus darbuotojų odelių plovimo priešgrybelinis aktyvumas yra veiksmingesnis inaktyvuojant Metarhizium konidijas nei R. flavipes darbuotojų plovimai [20]. Tai rodo, kad nors šie du termitai yra glaudžiai susiję ir susiduria su tais pačiais patogenais, jų priklausomybė nuo individualaus įgimto ar socialinio imuniteto gali skirtis. Mes naudojome lyginamąjį metodą, norėdami ištirti, ar yra skirtumas tarp priklausomybės nuo socialinio ir įgimto imuniteto bei jo integravimo ir ar yra galimas kompromisas tarp jų. Sustiprėjęs socialinis imunitetas gali būti susijęs su mažiau veiksmingais įgimtais imuniniais mechanizmais, kurie gali apimti išskiriamų priešgrybelinių vaistų stiprumą ir atvirkščiai. Silpnesnį individualų imunitetą gali kompensuoti efektyvesnis socialinis imunitetas. Buvo ištirtas vėlyvosios stadijos termitų darbuotojų išgyvenimas dvylikos, porų ar pavienių gyvūnų grupėse po to, kai jie buvo užkrėsti Metarhizium robertsii arba Metarhizium brunneum grybais. 12 darbuotojų grupės buvo trumpam veikiamos didele grybelio doze. Ši potencialiai mirtina koncentracija sukelia panašius elgesio reakciją į tą, kuri stebima, kai termitai susiduria su sporuliuojančiu lavonu, kai kuriais atvejais žymiai padidindama pavojaus signalą, dėl kurio atsiranda greiti išilginiai svyravimo judesiai, LOM [21–23]. LOM dažnis per pirmąsias 12 minučių po to, kai termitai buvo veikiami skirtingų Metarhizium padermių ir rūšių konidijų, teigiamai koreliuoja su alogrooming priepuolių dažniu. Todėl LOM, kuriuos lengviau išmatuoti nei paskirstymą, gali būti naudojami kaip netiesioginis paskirstymo lygių matas. Atrodo, kad grybelio aptikimas atidėtas, kol termitų paviršiai bus užteršti konidijomis, o tai rodo, kad atpažinimo receptoriai, susiję su burnos dalimis, yra labai svarbūs padidėjusiam pavojaus signalui ir alogoroms. Poros ir pavieniai buvo veikiami maža grybelio doze, kuri labiau atspindi poveikį, su kuriuo susiduria termitai, kurdami galerijas per dirvą, priešingai nei tiesioginiai susidūrimai su sporuliuojančiais lavonais. Skirtingai nuo pavienių termitų, termitų poros yra beveik visiškai atsparios mirtinoms infekcijoms vartojant šią dozę per 10 dienų. Siekiant atskirti socialinį ir įgimtą imunitetą naudojant šią mažą dozę, termitų poros buvo atskirtos skirtingais laiko momentais netrukus po užkrėtimo grybelinėmis konidijomis, o šių porų išgyvenamumas buvo lyginamas su viengungiais, kurie neturėjo galimybių socialiai bendrauti po grybelinių iššūkių. Allogrooming ir LOM buvo pastebėti prieš termitų porų atsiskyrimo laiką. Be to, buvo išbandytas neapdorotų sveikų termitų ekstraktų priešgrybelinis aktyvumas, siekiant toliau įvertinti įgimto imuniteto skirtumus tarp dviejų termitų rūšių, reaguojant į dvi grybų rūšis.

Cistanche tubulosa privalumai- stiprinti imuninę sistemą

2. Metodai

2.1. Tirti organizmus

Termitai R. flavipes ir R. virginicus bei grybai M. brunneum ir M. Roberts buvo surinkti iš antrinio augimo lapuočių miško Baltimorės grafystėje (Pleasant Hills ir Monkton), Merilando valstijoje. Termitų rūšys buvo nustatytos naudojant intra- ir tarpspecifinius agonizmo tyrimus [19] ir mitochondrijų rRNR sekas [4]. Metarhizium rūšys buvo išskirtos iš dirvožemio mėginių netoli termitų surinkimo vietų (<30 cm) using a baiting technique with Tenebrio molitor larvae [24]. The conidia and mycelia of two clonal lines of the species were used for DNA purification with a QIAGEN DNeasy Blood and Tissue kit. The 50 regions of translation elongation factor 1-alpha were PCR-amplified using PCR primers EF1T and EF2T [25]. These regions were Sanger-sequenced (Psomagen, Rockville, MD) for species identification. Foraging groups of R. flavipes and R. virginicus (>1000), o mediena, kuria jie maitinosi, buvo surenkama ir laikoma plastikiniuose induose tamsiomis, drėgnomis sąlygomis 25 ◦C temperatūroje. Tai pačiai rūšiai priklausantys termitai buvo renkami iš vietų, kurios buvo atskirtos mažiausiai 60 m atstumu, o tai paprastai pakanka, kad būtų užtikrinta, jog kolekcijos būtų iš skirtingų kolonijų [12]. Šios atskiros kolekcijos toliau vadinamos kolonijomis. 2018 ir 2019 m. vasarą termitai buvo renkami eksperimentams su 12 asmenų grupėmis, taip pat in vitro eksperimentams su neapdorotais termitų ekstraktais, o 2021 ir 2022 m. – eksperimentams su poromis ir pavieniais gyvūnais. Termitai buvo naudojami atitinkamuose eksperimentuose per 4 mėnesius nuo surinkimo. Darbuotojai buvo švelniai nuimti nuo medžio gabalų ir laikomi 12 55 mm skersmens Petri lėkštelėse, išklotose sudrėkintu filtravimo popieriumi (Whatman 1), 24 valandas aplinkos šviesoje, prieš naudojant juos mūsų eksperimentams. Tai leido jiems aklimatizuotis prie šviesos ir nuvalyti odelių paviršių nuo kietųjų dalelių, prieš patekdami į grybelį. Karių neįtraukėme, nes jie nevilioja lizdų, sudaro 1–2 % kolonijos ir nėra nuolat randami maisto ieškančiose grupėse.

2.2. Išgyvenimas ir pavojaus signalas dvylikos grupėms

12 R. flavipes arba R. virginicus darbuotojų grupės buvo veikiamos didele 10 6 konidijų mL−1 doze 0.05 % Tween 80 (MilliporeSigma) , Burlingtonas, MA, JAV) arba 0,05 % Tween 80 kontrolėms. Tween 80 buvo įtrauktas, kad padėtų suskaidyti konidijų gumulėlius ruošiant suspensiją. Dieną prieš šiuos gydymo būdus visi 12 termitų buvo pažymėti mažu spalvoto emalio dažų taškeliu jų pilvo nugarinėje pusėje, kad būtų galima juos individualiai identifikuoti. Allogrooming dažai pašalino kelis asmenis, tačiau mirties metu šiuos asmenis vis tiek buvo galima individualiai identifikuoti ištyrus išgyvenusius ir pagal natūralius individualius darbuotojų pokyčius, pavyzdžiui, pilvo tamsios spalvos laipsnį. Termitai, naudojami kiekvienam 12 užkrėstų termitų pakartojimui, buvo iš skirtingų kolonijų. Tiek R. flavipes, tiek R. virginicus buvo panaudotos penkios kolonijos (n=480 darbininkų). Eksperimentai su M. Roberts kolonijomis buvo pakartoti po trijų mėnesių, siekiant patikrinti išgyvenimo nuoseklumą. Iš viso buvo 60 12 arba 11 termitų kopijų (n=709). 11 egzempliorių termitas mirė prieš patekdamas į grybelį, o tai, atrodo, atsirado dėl elgesio žymint dažus. Termitai buvo veikiami konidijomis, paruoštomis iš M. Roberts arba M. brunneum kloninės kultūros. Darbuotojai buvo įpilami į 1,5 ml mėgintuvėlius, kuriuose yra 500 µL konidijų skiedimų arba 0,05 % Tween 80 kontroliniams mėginiams, su nedideliu plastikiniu piltuvu ir švelniai maišomi 10 s, kad būtų užtikrintas visiškas panardinimas. Tada darbuotojai buvo nusodinti ant filtravimo popieriaus, kad sugertų skysčių perteklių, perkelti į 55 mm skersmens Petri lėkštes, išklotas sudrėkintu filtravimo popieriumi (Whatman 1), ir 12 min. Mirtingumas buvo stebimas kasdien dvi savaites. Negyvi asmenys buvo pašalinti, paviršius sterilizuotas 70% etanoliu ir dedamas ant drėgno filtravimo popieriaus Petri lėkštelėse (55 mm), palaikomose 24 ◦C ir 100% drėgnumo temperatūroje, siekiant patvirtinti Metarhizium infekciją (žaliojo muskardino augimas po 3–4 dienų). Bendras LOM skaičius, stebimas vaizdo įrašuose per 12 minučių, buvo įvertintas kiekvienam termitui. LOM truko 2–7 sekundes ir turėjo sustoti, o vėliau vėl būti vertinami kaip atskiri įvykiai [23].

2.3. Išgyvenimas ir bendravimas poroms ir pavieniams

Termitų porų išgyvenamumas buvo lyginamas su pavieniais gyvūnais po mažos dozės (104 konidijų ml-1 ) konidijų, kurios nesukėlė per didelio mirtingumo ir greičiausiai atspindi koncentraciją, su kuria susiduria termitai judėdami dirvožemyje [10] . Poros ir pavieniai buvo lyginami siekiant įvertinti socialinių gynybos mechanizmų teikiamą išgyvenimą. Iš pradžių 12 darbuotojų grupės buvo užkrėstos grybeliais arba be jų, kaip aprašyta aukščiau, išskyrus tai, kad konidijų suspensijos, kurių kiekis buvo maždaug 107 konidijų ml-1, buvo paruoštos 0,1% Tween 80 ir energingai maišomos prieš skiedžiant steriliu vandeniu iki 104 konidijų ml-1. Tween 80 nebuvo įtrauktas į skiedimus, nes atskirų konidijų suspensijos gali būti palaikomos mažomis koncentracijomis ir todėl, kad paviršiaus aktyvioji medžiaga gali trukdyti konidijų sukibimui su odelėmis. Šie asmenys nebuvo pažymėti dažais. Iškart po gydymo ir dar prieš termitams atsiradus galimybei sąveikauti, jie buvo suskirstyti į poras arba pavienius 24-šulinėlių plastikinių ląstelių kultūros plokštelių šulinėlius (CELLTREAT Scientific, Pepperell, MA). Kiekvienas šulinys buvo išklotas sudrėkintu filtravimo popieriumi (Whatman 1). Kiekvienam termitų ir grybų deriniui (n=4) keturios termitų poros buvo atskirtos į pavienius po 15 min., 2 val., 5,5 val., 8 val. ir 27 val. (n=160) ir kiekvienam. termitų ir grybų derinys 12 termitų, kurie niekada neturėjo galimybės sąveikauti, buvo suskirstyti į grybeliu apdorotus arba kontrolinius pavienius (n=96). Šie atskiri termitai taip pat buvo suskirstyti į 24-šulinėlių plokšteles, išklotas filtravimo popieriumi. Vėliau termitų mirtingumas buvo stebimas dešimt dienų, o negyvi asmenys buvo pašalinti, kad būtų patvirtinta Metarhizium infekcija. Viena kolonija buvo naudojama tiek R. flavipes, gydytiems M. robertsii arba M. brunneum, tiek R. virginicus, gydytiems M. robertsii arba M. brunneum (n=256). Šešios neapdorotos poros taip pat buvo laikomos 24-šulinėlių plokštelėse 10 dienų kiekvienai rūšiai. Atskiras eksperimentas su tomis pačiomis kolonijomis buvo skirtas alogrooming registravimui prieš porų atsiskyrimo laiką 15 min., 2 val., 5,5 val., 8 val. ir 27 val. Šešios skirtingos kiekvienos termitų rūšies poros buvo apdorotos kiekvienu grybu arba vandeniu, kad būtų galima kontroliuoti, ir 15 minučių iki atskyrimo laiko taškų (n=180) buvo įvertintas alogroomas. Alogrooming įvykiai buvo vertinami, kai dviejų termitų burnos ir kūno kontaktas susijęs su burnos dalių (palpų) judėjimu, ir buvo užregistruota kiekvieno nepertraukiamo alogrooming įvykio trukmė. Allogrooming įvertinimą įvertino vienas stebėtojas, kuris buvo aklas, kuriam termitai buvo gydomi. LOM taip pat buvo įvertinti, bet buvo nereikšmingi ir nebuvo naudojami analizei. Savęs priežiūros nepastebėta.

Cistanche tubulosa privalumai- stiprinti imuninę sistemą

2.4. In vitro priešgrybelinė veikla

Dvylika darbuotojų iš 5 R. flavipes arba R. virginicus kolonijų buvo šaltai imobilizuoti 1,5 ml Eppendorf mėgintuvėliuose ir į kiekvieną mėgintuvėlį įpilta 120 µl šalto, sterilaus vandens. Šiame tyrime naudojami abiejų rūšių darbuotojai buvo maždaug tokio paties dydžio (ilgis 4–5 mm). Termitai buvo homogenizuoti plastikiniu grūstuvu, o ekstraktas centrifuguojamas esant 16, 000 g 2 min. Supernatantas buvo sterilizuotas 0,22 µm Ultrafree filtrais (MilliporeSigma, Burlington, MA, JAV). Dešimt µl filtrato buvo inkubuojami 24 valandas su 10 µL, kuriame yra 100 M. robertsii arba M. brunneum konidijų, ir 20 µL 100 µg mL-1 ampicilino, kad būtų išvengta bakterinio užteršimo. Kontroliniuose mėginiuose vietoj neapdoroto ekstrakto buvo 10 µl sterilaus vandens. Du kiekvieno inkubuoto mišinio pakartojimai buvo paskleisti ant bulvių dekstrozės agaro (PDA), papildyto 50 µg ml-1 ampicilino (60 mm Petri lėkštelėse), ir inkubuojami kambario temperatūroje tamsoje 4–5 dienas. Priešgrybelinis aktyvumas buvo matuojamas lyginant kolonijas formuojančius vienetus (CFU) neapdoroto ekstrakto apdorojime su kontrolinėmis grupėmis.

2.5. Statistika

Kaplan-Meier vidutinių išgyvenimo laiko įverčiai buvo naudojami poromis išgyvenamumo palyginimui. Mirties rizikos koeficientai (HR) buvo apskaičiuoti naudojant Cox regresijos analizę. Mes naudojome Cox regresiją, kad ištirtume mirtingumo skirtumus tarp individų, turinčių LOM arba neturinčių LOM, ir kontroliuoti kitus kategorinius kintamuosius (grybelinį gydymą ar kontrolę, grybų rūšis, termitų rūšis, kilmės kolonijas). LOM buvo suskirstyti į kategorijas, kaip nėra arba jos yra asmenims dėl nukrypimų dažnio ir normalumo trūkumo. Atliekant išgyvenamumo analizę su termitų poromis ir pavieniais gyvūnais, HR buvo pagrįstas konidijomis apdorotų porų (atskirtų skirtingais laiko momentais) ir konidijomis gydytų pavienių gyvūnų palyginimu. Todėl šie HR yra išgyvenimo matas, kurį užtikrina socialiniai gynybos mechanizmai, tuo pačiu kontroliuojant atskirus gynybos mechanizmus. Ryšys tarp laiko, praleisto kaip pora, ir ŠSD pokyčio buvo matuojamas naudojant Pearsono koreliacijas. LOM pasiskirstymas tarp skirtingų gydymo būdų buvo lyginamas su Kruskal-Wallis testu su Bonferroni pataisymais, kad būtų galima atlikti kelis bandymus, kad būtų galima palyginti porą. Vidutinis CFU arba alogrooming įvykių trukmė buvo lyginama su ANOVA testu su Bonferroni pataisymais, kad būtų galima palyginti porą. Statistiniams testams naudojome IBM SPSS Statistics (28 versija).

3. Rezultatai

3.1. Iššūkių grupių iš dvylikos išgyvenimas ir pavojaus signalas

The Cox regression model of survivorship that included categorical variables for fungal treatment, LOMs, termite species, fungi species, and a colony of origin was significant (Chi-square = 246.29, df = 12, p < 0.001). Challenged termites were 9.28 times more likely to die than untreated termites (Wald = 143.05, p < 0.001) while controlling for the other variables. Termites that displayed LOMs (n = 422) were 1.52 times more likely to survive (Wald = 8.30, p = 0.004) than individuals that did not display LOMs (n = 286). R. virginicus workers were 2.08 times more likely to die than R. flavipes workers (Wald = 6.31, p = 0.012). Fungal species did not contribute significantly to the model (Wald = 0.841, p = 0.359). The colony of origin contributed significantly to the model (Wald = 50.16, p < 0.001), which is consistent with previously reported colony variation in Reticulitermes resistance to Metarhizium infections [24]. Survivorship did not differ between the same colony when the experiment was repeated 3 months later with workers that were exposed to M. Roberts (Breslow pairwise comparison, Chi-square = 0.342, p = 0.559). Most deaths in the challenged termites were attributable to Metarhizium infection (>90 % patvirtinimo). M. Roberts užsikrėtusiems termitams buvo pastebėtos 129 mirtys tarp 237 individų, o vidutinis R. virginicus išgyvenimo laikas (9,1 0 dienos) buvo žymiai mažesnis nei R. flavipes (10). 98 dienos) (Breslow=10.05, df=1, p=0.002) (1 pav.). M. brunneum užsikrėtusių termitų mirtis buvo 79 tarp 120 individų, o vidutinis R. flavipes išgyvenimo laikas (9,70 dienos) buvo mažesnis nei R. virginicus (10,68 dienos), bet ne reikšmingai (Breslow=2 .74, df=1, p=0.098). LOM pasiskirstymas (2 pav.) tarp grybelinių ir kontrolinių gydymo būdų labai skyrėsi (Kruskal-Wallis=176.897, df=5, p < 0,001). LOM dažnis reikšmingai nesiskyrė tarp gydymo M. brunneum ir atitinkamų jų kontrolinių R. flavipes (koreguotas p=0.097) ir R. virginicus (pataisytas p=1).000 ). Tačiau LOM dažnis buvo žymiai didesnis gydant M. Roberts, palyginti su atitinkamais R. flavipes (koreguotas p < 0,001) ir R. virginicus (koreguotas p < 0,001) kontroliniais preparatais (2 pav.). Gydant M. Robertsu, R. flavipes LOM dažnis buvo žymiai didesnis nei R. virginicus LOM (koreguotas p < 0,001). Tačiau gydant M. brunneum, R. flavipes LOM dažnis reikšmingai nesiskyrė nuo R. virginicus LOM (pataisytas p=1.000). Priešingai nei M. brunneum, 12 termitų grupės, užkrėstos M. Roberts konidijomis, sukėlė reikšmingą elgesio atsaką.

3.2. Iššūkių porų ir vienišių išgyvenimas

Termitų porų, išsiskyrusių skirtingu laiku netrukus po patogeno užkrėtimo, išgyvenamumas buvo lyginamas su užkrėstų pavienių gyvūnų išgyvenimu, turinčiu mirties rizikos koeficientą (HR). HR lygus 1 atitinka vienodą išgyvenamumą atskirtose porose ir pavieniuose gyvūnuose per dešimt dienų. Reikšmės, mažesnės už vieną, rodo, kad atskirtose porose mirtingumas yra mažesnis, palyginti su pavieniais. Koreliacija tarp laiko, praleisto kaip pora, ir ŠSD sumažėjimo buvo reikšminga tik R. flavipes, gydytų M. Robertsu (r=−0.978, p=0). {7}}04) arba M. brunneum (r=−0.983, p=0.003), o ne R. virginicus gydyti M. Roberts (r=−0,643, p=0.242) arba M. brunneum (r=−0,812, p=0.095). Tai taip pat atsispindi R2 vertėse, gautose iš tiesinės regresijos, parodytos 3 paveiksle (apskaičiuojant Pearsono koreliacijas ir R2 reikšmes, laikas buvo transformuotas logaritmiu). Negydytose porose (6 poros kiekvienai termitų rūšiai) mirtis nebuvo pastebėta ir 16 gydytų porų (po 4 poras kiekvienam termitų ir grybų deriniui), kurios niekada nebuvo atskirtos per 10 dienų.

1 pav. 12 grupių išgyvenamumas. Rf atitinka R. flavipes, Rv su R. virginicus, Mr su M. robertsii ir Mb su M. brunneum. Reikšmingi išgyvenamumo skirtumai lyginant porą buvo pagrįsti Breslow testais (apibendrintais Wilcoxon testais). * Reikšmingas skirtumas tarp gydymo būdų, NS reikšmingo skirtumo tarp gydymo būdų nėra (p< 0.025 Bonferroni adjusted α). The distribution of LOMs (Figure 2) among fungal and control treatments was significantly different (Kruskal–Wallis = 176.897, df = 5, p < 0.001). The frequency of LOMs was not significantly different between M. brunneum treatments and their respective controls for R. flavipes (adjusted p = 0.097) and R. virginicus (adjusted p = 1.000). However, the frequency of LOMs was significantly greater for M. robertsii treatments compared to their respective controls for R. flavipes (adjusted p < 0.001) and R. virginicus (adjusted p < 0.001) (Figure 2). For the M. robertsii treatment, the frequency of R. flavipes LOMs was significantly greater than R. virginicus LOMs (adjusted p < 0.001). However, for the M. brunneum treatment, the frequency of R. flavipes LOMs was not significantly different from R. virginicus LOMs (adjusted p = 1.000). In contrast to M. brunneum, groups of 12 termites challenged with M. robertsii conidia resulted in a significant behavioral response. 

1 pav. 12 grupių išgyvenamumas. Rf atitinka R. flavipes, Rv su R. virginicus, Mr su M. robertsii ir Mb su M. brunneum. Reikšmingi išgyvenamumo skirtumai lyginant porą buvo pagrįsti Breslow testais (apibendrintais Wilcoxon testais). * Reikšmingas skirtumas tarp gydymo būdų, NS reikšmingo skirtumo tarp gydymo būdų nėra (p< 0.025 Bonferroni adjusted α). For the survivorship of pathogen-challenged single termites (Figure 4), 47 deaths were observed among 48 individuals, and the mean survival time for R. flavipes (4.21 days) was significantly lower than for R. virginicus (6.17 days)(Breslow, chi-square = 33.927, df = 1, p < 0.001). This relationship held for both species of fungi: For M. robertsii exposure, the mean survival time for R. flavipes (4.25 days) was significantly lower than for R. virginicus (5.83 days) (chi-square = 16.133, df = 1, p < 0.001); For M. brunneum exposure, the mean survival time for R. flavipes (4.17 days) was significantly lower than for R. virginicus (6.50 days) (chi-square = 20.994, df = 1, p < 0.001). 3.3. Antifungal Activity of Crude Extracts The two species of fungi were analyzed separately (the viability of conidia on PDA differs between the two species). For M. robertsii, mean colony-forming units (CFUs) among fungal and control treatments were significantly different (F = 18.08, df = 2, p < 0.001) (Figure 5a). Crude extracts of R. virginicus but not R. flavipes workers showed significant antifungal activity against M. robertsii compared to the control (adjusted p < 0.001 and p = 1.000, respectively). The antifungal activity of R. virginicus extracts against M. robertsii was significantly greater than the antifungal activity of R. flavipes extracts against M. robertsii (adjusted p < 0.001). For M. brunneum, mean CFUs (Figure 5b) among fungal and control treatments were significantly different (F = 27.26, df = 2, p < 0.001). Crude extracts of R. virginicus but not R. flavipes showed significant antifungal activity against M. brunneum compared to the control (adjusted p < 0.001 and p = 0.072, respectively). The antifungal activity of R. virginicus extracts against M. brunneum was significantly greater than the antifungal activity of R. flavipes against M. brunneum (adjusted p < 0.001).

3.3. Neapdorotų ekstraktų priešgrybelinis aktyvumas

Dviejų rūšių grybai buvo analizuojami atskirai (konidijų gyvybingumas PDA skiriasi tarp dviejų rūšių). M. robertsii vidutiniai kolonijas formuojantys vienetai (CFU) tarp grybelinių ir kontrolinių gydymo būdų labai skyrėsi (F=18.08, df=2, p < 0 .001) (5a pav.). Neapdoroti R. virginicus ekstraktai, bet ne R. flavipes darbuotojai, parodė reikšmingą priešgrybelinį aktyvumą prieš M. robertsii, palyginti su kontroline medžiaga (pataisytas p < 0.001 ir p=1.{{ 10}}). R. virginicus ekstraktų priešgrybelinis aktyvumas prieš M. robertsii buvo žymiai didesnis nei R. flavipes ekstraktų priešgrybelinis aktyvumas prieš M. robertsii (pataisytas p < 0,001). M. brunneum vidutiniai CFU (5b pav.) tarp grybelio ir kontrolinio gydymo labai skyrėsi (F=27.26, df=2, p < 0,001). Neapdoroti R. virginicus ekstraktai, bet ne R. flavipes, parodė reikšmingą priešgrybelinį aktyvumą prieš M. brunneum, palyginti su kontroline medžiaga (atitinkamai pakoreguotas p < 0,001 ir p=0,072). R. virginicus ekstraktų priešgrybelinis aktyvumas prieš M. brunneum buvo žymiai didesnis nei R. flavipes priešgrybelinis aktyvumas prieš M. brunneum (koreguotas p < 0,001).

2 pav. Signalizacijos atsakas į grybelio iššūkį. Boxplots parodo LOM pasiskirstymą (LOM įvertintos 709 dažais pažymėtų asmenų). Dėžutės atitinka atstumą tarp viršutinio ir apatinio kvartilių nuo medianos (IQR). Ūsai atitinka 1,5 × IQR. Apskritimai ir žvaigždutės žymi nuokrypius, viršijančius atitinkamai 1,5 × IQR arba 3 × IQR. Skirtingos raidės rodo reikšmingus skirtumus tarp grybų ir kontrolinio gydymo paskirstymo (Bonferroni pakoreguotas). Rf atitinka R. flavipes, Rv – R. virginicus, Mr – M. robertsii ir Mb – M. brunneum.

3.4. Bendravimas tarp iššūkių turinčių porų

Alogroom priepuolių dažnis labai sumažėjo dėl grybelinių ligų (iššūkio vidurkis {{0}},55, kontrolinis vidurkis=8,80, t=−4,461, p < {{20}}.001). Tačiau vidutinė alogromingo trukmė labai padidėjo dėl grybelinių ligų (iššūkio vidurkis=19,01 s, kontrolinis vidurkis=5,62 s, t=4,876, p < 0,001). Kiekvienos sąveikos tarp termitų porų derinimo priepuolių trukmė labai skyrėsi gydymo ir kontrolės metu (F=7.166, df=5, p < 0,001) (6 pav.). Alogrooming trukmė vienam įvykiui buvo reikšmingai ilgesnė R. flavipes poroms, gydytų M. robertsii (koreguotas p < 0,001) arba M. brunneum (koreguotas p=0,037), palyginti su kontroline, bet ne R. virginicus porų, gydytų su M. robertsii (pakoreguotas p=1.000) arba M. brunneum (pakoreguotas p=1.000), palyginti su kontrolėmis.

3 pav. Dviejų termitų išgyvenamumas, palyginti su vienu, buvo lyginamas su mirties rizikos koeficientais (n=80 porų, 96 pavieniai). Rf atitinka R. flavipes, Rv – R. virginicus, Mr – M. robertsii ir Mb – M. brunneum. Apskaičiuojant R2 reikšmes, laikas buvo transformuotas logaritmiškai.

4 pav. Pavienių termitų išgyvenimas po grybelio užkrėtimo (n=96). Rf atitinka R. flavipes, Rv – R. virginicus, Mr – M. robertsii ir Mb – M. brunneum. Daugiau informacijos apie statistinius gydymo skirtumus rasite tekste. Reikšmingi išgyvenamumo skirtumai lyginant porą buvo pagrįsti Breslow testais (apibendrintais Wilcoxon testais). * Reikšmingas skirtumas tarp gydymo būdų (p < 0.025 Bonferroni pakoreguotas).

5 pav. Neapdoroto ekstrakto priešgrybelinis aktyvumas prieš M. robertsii (a) ir M. brunneum (b). Virš juostų esančios reikšmės rodo vidutinius CFU (± SD), o skirtingos raidės rodo reikšmingus skirtumus (Bonferroni pakoreguota). Rf atitinka R. flavipes, o Rv – R. virginicus. Analizei buvo naudojami du pakartojimai iš 5 kolonijų iš kiekvienos termitų rūšies, 6 pakartojimai Rf kontrolei ir 2 pakartojimai Rv kontrolei.

6 pav. Vienos sąveikos derinimo trukmė (n=161 derinimo įvykių). Virš juostų esančios reikšmės rodo vidutinę derinimo sąveikos trukmę (± SD), o skirtingi raidžių deriniai rodo reikšmingus skirtumus (Bonferroni pakoreguotas). Rf atitinka R. flavipes, Rv – R. virginicus, Mr – M. robertsii, o Mb – M. brunneum.

4. Diskusija

R. flavipes labiau nei R. virginicus remiasi socialiniais gynybos nuo vietinių grybelinių patogenų mechanizmais. R. flavipes darbuotojams, kuriems buvo užkrėstas bet kurios Metarhizium rūšys, buvo stipri neigiama koreliacija tarp laiko, kurį du termitai praleido kartu, ir jų mirties tikimybės, palyginti su pavieniais termitais. Mirties rizikos santykis, palyginti su pavieniais termitais, sumažėjo per maždaug per dvi valandas (3 pav.). Todėl ankstyva socialinė sąveika yra labai svarbi išgyvenimui, kai R. flavipes darbuotojai susiduria su maža Metarhizium konidijų koncentracija. Priešingai, R. virginicus darbuotojai parodė silpną ryšį tarp dviejų termitų kartu praleisto laiko ir jų mirties tikimybės. Be to, priešingai nei R. virginicus, R. flavipes darbuotojų poros žymiai padidino alogroom priepuolių trukmę po grybelio užkrėtimo (6 pav.). Tikėtina, kad konidijų aptikimas ant lizdo draugų odelių lėmė šį padidėjimą. Atrodo, kad veiksmingesnis konidijų pašalinimas nuo odelių paviršių, padidinant alogrooming priepuolių trukmę, lemia didesnį R. flavipes socialinį imunitetą. Mūsų rezultatai taip pat rodo, kad R. virginicus labiau nei R. flavipes priklauso nuo individualių įgimtų gynybos nuo vietinių grybelinių patogenų mechanizmų. Pavienių R. flavipes darbuotojų, užkrėstų bet kuria iš Metarhizium rūšių, mirtingumas buvo žymiai didesnis nei R. virginicus darbuotojų mirtingumas (4 pav.). Anksčiau buvo įrodyta, kad R. virginicus darbuotojų odelių plovimo priemonių priešgrybelinis aktyvumas prieš Metarhizium konidijas yra žymiai stipresnis nei R. flavipes darbuotojų aktyvumas [20]. Neapdorotų sveikų termitų ekstraktų priešgrybelinis aktyvumas taip pat buvo stipresnis R. virginicus nei R. flavipes (5 pav.). Šie ekstraktai apima žarnyno simbiontų junginius, kurie kartu su termitų priešgrybeliniais junginiais taip pat gali padėti pašalinti nurytas konidijas [26]. R. virginicus darbuotojų mirties rizikos santykio kitimas ir silpna jų koreliacija su atsiskyrimo laiku atitinka didesnę priklausomybę nuo įgimtų imuninės gynybos mechanizmų, kurie skiriasi tarp individų, o ne nuo socialinių imuninių mechanizmų. R. flavipes taip pat parodė didesnę priklausomybę nuo socialinio imuniteto, kai 12 darbuotojų grupės buvo trumpam veikiamos didelėmis M. robertsii konidijų koncentracijomis. Iš karto po M. robertsii konidijų poveikio abiejų termitų rūšys parodė padidėjusį LOM. Šis pavojaus aktyvumas buvo žymiai didesnis R. flavipes nei R. virginicus (2 pav.), o atsparumas mirtinoms infekcijoms taip pat buvo žymiai didesnis nei R. virginicus (1 pav.). Priešingai, buvo padidėjęs, bet silpnas pavojaus atsakas į M. brunneum conidia. Atsižvelgiant į šį rezultatą, anksčiau buvo įrodyta, kad padidėjęs R. flavipes pavojaus signalas, reaguojant į skirtingų Metarhizium padermių ir rūšių konidijas, yra susijęs su padidėjusiu alogroomingumu ir išgyvenimu [23]. R. flavipes darbuotojai gali turėti žemesnę ribą nei R. virginicus darbuotojai, kad jie atpažintų ir bendrai bei veiksmingai reaguotų į odelių užteršimą M. robertsii konidijomis. M. robertsii, kuri yra labiausiai paplitusi Metarhizium rūšis mūsų tyrimo vietoje [24], gali kelti grėsmę R. flavipes, kuriai reikalingas stiprus socialinis imuninis atsakas, nes šis termitas turi gana silpną įgimtą imuninę apsaugą nuo jo. Tikėtina, kad priešgrybelinių junginių, susijusių su seilių liaukų sekrecija, veiksmingumas bus esminis šiame tyrime pastebėtai individualiai apsaugai [20]. Šie junginiai yra ant darbuotojų paviršiaus prieš grybelines problemas, nes jie yra konstituciškai išreikšti ir nuolat skleidžiami baziniais alogromingo lygiais, o tai integruoja individualią ir socialinę apsaugą. Šis geštaltas greičiausiai apima mažą į defenziną panašų priešgrybelinį peptidą termiciną, kuris išskiriamas į seilių liauką ir yra labai svarbus apsisaugant nuo mirtinų infekcijų, kurias sukelia Metarhizium [27]. Šiame tyrime naudotas R. flavipes ir R. virginicus iš tos pačios surinkimo vietos Merilende tyrimas atskleidė, kad termicinai neseniai susidūrė su selektyviu nuvalymu, dėl kurio sumažėjo nukleotidų polimorfizmas, ir šis sumažėjimas buvo didesnis R. flavipes nei R. virginicus [28].

cistanche tubulosa - stiprina imuninę sistemą

R. flavipes pažeidimas galėjo būti ir galbūt bus sunkesnis, nes R. virginicus turi veiksmingesnius įgimtus imuninius mechanizmus, kurie sumažino jo priklausomybę nuo termicinų, apsaugančių nuo neseniai kilusios grybelinės epidemijos. Kita vertus, prisitaikantys termitų evoliucijos apribojimai (genetinės variacijos stoka) galėjo palikti R. flavipes silpnesnius ginklus naujos grybelinės epidemijos akivaizdoje. Apribojimas dėl adaptyvių termicinų pokyčių, esant stipriam selektyviniam slėgiui, taip pat akivaizdus Australijos Nasutitermes [29]. Atrodo, kad stochastinis genų dubliavimosi procesas išlaisvino šį suvaržymą skirtingose ​​​​nasute linijose, todėl pasikartojo dviejų terminicinų, turinčių skirtingus molekulinius krūvius, evoliucija. Tai galėjo būti naudinga priešgrybelinei apsaugai, nes du gnybtai su skirtingomis įkrovimo savybėmis riboja grybelių atsparumo jiems evoliuciją. Termitai, kuriems pasireiškė nerimas (LOM) po didelės konidijų dozės, buvo mažiau linkę mirti per dvi savaites nei asmenys, kuriems nebuvo jokio pavojaus. LOM teigiamai koreliuoja su R. flavipes darbuotojų agregacija ir alogrooming [23], o tai rodo, kad šiame tyrime sunerimę asmenys paprašė daugiau prižiūrėti lizdus. LOM retai pranešama atliekant tyrimus, tiriančius Metarhizium infekcijas termituose, ir neįvertina, kad jie vaidina signalą apie patogeno poveikį [30]. Tačiau jie gali būti praleisti, nes jie nepasireiškia pavieniuose individuose, jų iš esmės nesukelia tam tikros Metarhizium padermės ir rūšys, po užkrėtimo praeina maždaug 3 minutes, kol jie padaugėja, ir išnyksta maždaug po 30 minučių [22, 23]. Mūsų rezultatai rodo, kad LOM praneša avarinį įspėjimą po to, kai buvo paveiktas didelės konidijų dozės, kurios aptinkamos alogroom metu. Tačiau LOM nebūtini aktyviam elgsenos atsakui, nes alogroom trukmė pailgėjo po mažos dozės poveikio, kai LOM buvo nereikšmingi.

5. Išvados

Atrodo, kad LOM yra neatidėliotinos reakcijos į stiprų odelių užterštumą dalis, kuri naudoja tinklinį ryšį, kad greitai pašalintų ir sunaikintų daugumą konidijų, kol jos dar nespėjo tvirtai prisitvirtinti ir sudygti, o tai užtrunka maždaug 12 valandų [31]. Tikėtina, kad toks atsakas į ekstremalias situacijas bus brangus. Sustiprintas R. flavipes socialinis imunitetas, reaguojant į M. robertsii, gali būti adaptyvus kompromisas, kurio R. virginicus neturi daryti tokiu pat mastu, nes jis turi veiksmingesnius įgimtus imuninius mechanizmus. Susidūrus su nedideliu patogenų poveikio lygiu, kurį nuolatos turi atlaikyti pašarų ieškoję darbuotojai, atrodo, kad sodinimas taip pat kompensuoja silpnus įgimtus imuninius mechanizmus.

Nuorodos

1. Cremer, S.; Traukite, CD; Fuerst, MA Socialinis imunitetas: kolonijų lygio apsaugos nuo ligų atsiradimas ir raida. Annu. Kunigas Entomol. 2018, 63, 105–123. [CrossRef] [PubMed] 2. Cremer, S.; Armitage, SA; Schmid-Hempel, P. Socialinis imunitetas. Curr. Biol. 2007, 17, R693–R702. [CrossRef] [PubMed]

3. Evansas, JD; Aronšteinas, K.; Chen, YP; Hetru, C.; Imleris, JL; Jiang, H.; Kanostas, M.; Thompsonas, GJ; Zou, Z.; Hultmark, D. Imuniniai keliai ir gynybos mechanizmai bitėse Apis mellifera. Vabzdys Mol. Biol. 2006, 15, 645–656. [CrossRef] [PubMed]

4. Harpuras, BA; Zayed, A. Paspartinta socialinių vabzdžių įgimto imuniteto baltymų evoliucija: adaptyvi evoliucija ar atsipalaidavęs suvaržymas? Mol. Biol. Evol. 2013, 30, 1665–1674. [CrossRef] [PubMed]

5. Jis, S.; Sieksmeyeris, T.; Che, Y.; Mora, MAE; Stiblikas, P.; Banasiakas, R.; Harrisonas, MC; Šobotnik, J.; Wang, Z.; Johnstonas, PR; ir kt. Įrodymai apie sumažėjusią imuninių genų įvairovę ir aktyvumą termitų evoliucijos metu. Proc. R. Soc. Ser. B 2021, 288, 20203168. [CrossRef]

6. Bulmeris, MS; Stefano, AM termitų eusocialumas ir kontrastingas selektyvus spaudimas socialiniam ir įgimtam imunitetui. Behav. Ecol. Sociobiol. 2022, 76, 1–12. [CrossRef]

7. Yanagawa, A.; Shimizu, S. Termito Coptotermes formosanus Shiraki atsparumas Metarhizium anisopliae dėl priežiūros. BioControl 2007, 52, 75–85. [CrossRef]

8. Rozengaus, RB; Traniello, JF; Bulmeris, MS Termitų ekologija, elgesys ir atsparumo ligoms raida. Termitų biologijoje: šiuolaikinė sintezė; Bignell, DE, Roisin, Y., Lo, N., red.; Springeris: Londonas, JK, 2011 m.; 165–192 p.

9. Žukovskaja, M.; Yanagawa, A.; Forschler, BT Priežiūros elgesys kaip apsaugos nuo vabzdžių ligų mechanizmas. Vabzdžiai 2013, 4, 609–630. [CrossRef]

10. Milner, RJ. Metarhizium anisopliae padermių atranka ir apibūdinimas dirvožemio vabzdžių kontrolei Australijoje. Biologinėje skėrių ir žiogų kontrolės srityje; Lomer, CJ, Prior, C., red.; CAB International: Wallingford, JK, 1991; 200–207 p.

11. Traniello, JF; Leutholdas, RH Termitų mitybos elgesys ir ekologija. Termituose: evoliucija, socialumas, simbiozės, ekologija; Abe, T., Bignell, DE, Higashi, M., Higashi, T., Abe, Y., red.; Springeris: Dordrechtas, Nyderlandai, 2000 m.; 141–168 p.

12. Vargo, E.; Husseneder, C. Požeminių termitų biologija: Reticulitermes ir Coptotermes molekulinių tyrimų įžvalgos. Annu. Kunigas Entomol. 2009, 54, 379–403. [CrossRef]

13. Abe, T. Termitų gyvybės tipų evoliucija. In Evolution and Coadaptation in Biotic Communities; Kowana, S., Connell, JH, Hidaka, T., red.; Tokijo universiteto leidykla: Tokijas, Japonija, 1987 m.; 128–148 p.

14. Shellman-Reeve, JS. Termitų eusocialumo spektras. Vabzdžių ir voragyvių socialinio elgesio evoliucija; Choe, JC, Crespi, BJ, red.; Cambridge University Press: Kembridžas, JK, 1997 m.; 52–93 p.

15. Griffiths, HM; Eggleton, P.; Hemingas-Schroederis, N.; Svinfildas, T.; Woon, JS; Allison, SD; Comes, DA; Ashton, LA; Parr, CL Anglies srautas ir miško dinamika: padidėjęs negyvos medienos irimas tropinių atogrąžų miškų medžių kritimo tarpuose. Glob. Chang. Biol. 2001, 27, 1601–1613. [CrossRef]

16. Guo, C.; Tuo, B.; Ci, H.; Janas, ER; Cornelissen, JH Dinaminis grįžtamasis ryšys tarp medžių funkcinių savybių, termitų populiacijų ir negyvos medienos apyvartos. J. Ecol. 2021, 109, 578–1590. [CrossRef]

17. Zanne, AE; Flores-Moreno, H.; Powell, JR; Cornwell, WK; Dalling, JW; Ostinas, AT; Classen, AT; Eggleton, P.; Okada, KI; Parr, CL; ir kt. Termitų jautrumas temperatūrai turi įtakos pasauliniam medienos irimo greičiui. Mokslas 2022, 377, 1440–1444. [CrossRef] [PubMed]

18. Liu, L.; Wang, W.; Liu, Y.; Saulė, P.; Lei, C.; Huang, Q. Alogrooming elgesio įtaka individualiam įgimtam požeminio termito Reticulitermes chinensis (Isoptera: Rhinotermitidae) imunitetui. J. Insect Sci. 2019, 19, 6. [CrossRef] [PubMed]

19. Polizzi, JM; Forschler, BT Intra- ir tarpspecifinis agonizmas Reticulitermes flavipes (Kollar) ir R. virginicus (Banks) ir arenos bei grupės dydžio poveikis laboratoriniuose tyrimuose. Vabzdžiai Sociaux 1998, 45, 43–49. [CrossRef]

20. Hamiltonas, C.; Lay, F.; Bulmeris, MS Požeminių termitų profilaktinės išskyros ir išorinės priešgrybelinės apsaugos priemonės. J. Insect Physiol. 2011, 57, 1259–1266. [CrossRef]

21. Rozengaus, RB; Jordanas, C.; Lefebvre, ML; Traniello, JFA Patogeno pavojaus elgesys termite: nauja bendravimo su socialiniais vabzdžiais forma. Sci. Nat. 1999, 86, 544–548. [CrossRef]

22. Myles, TG Reticulitermes flavipes aliarmas, agregacija ir gynyba reaguojant į natūraliai susidarantį Metarhizium anisopliae izoliatą. Sociobiologija 2002, 40, 243–256.

23. Bulmeris, MS; Franco, BA; Fields, EG Požeminių termitų socialinis pavojaus signalas ir higieninės reakcijos į grybelinius patogenus. Vabzdžiai 2019 m., 10, 240. [CrossRef]

24. Denier, D.; Bulmeris, MS Požeminių termitų jautrumo mirtinoms infekcijoms, kurias sukelia vietiniai Metarhizium dirvožemio izoliatai, kitimas. Vabzdžiai Sociaux 2015, 62, 219–226. [CrossRef]

25. Bischoff, JF; Rehner, SA; Humber, RA Metarhizium anisopliae linijos daugialokus filogenija. Mycologia 2018, 101, 512–530. [CrossRef]

27. Rozengaus, RB; Schultheis, KF; Yalonetskaya, A.; Bulmeris, MS; DuComb, WS; Bensonas, RW; Thottam, JP; Godoy-Carter, V. Iš simbiontų kilusios -1, 3-gliukanazės socialiniame vabzdėlyje: Mutualizmas už mitybos ribų. Priekyje. Microbiol. 2014, 5, 607. [CrossRef] [PubMed]

27. Hamiltonas, C.; Bulmeris, MS Molekulinė priešgrybelinė apsauga požeminiuose termituose: RNR trukdžiai atskleidžia galų ir GNBP vaidmenis in vivo prieš natūraliai aptinkamą patogeną. Dev. Komp. Immunol. 2012, 36, 372–377. [CrossRef] [PubMed]

28. Bulmeris, MS; Lay, F.; Hamilton, C. Adaptive evoliucija požeminių termitų priešgrybeliniuose peptiduose. Vabzdys Mol. Biol. 2010, 19, 669–674. [CrossRef] [PubMed]

29. Bulmeris, MS; Crozier, RH dubliavimas ir įvairinimas tarp termitų priešgrybelinių peptidų. Mol. Biol. Evol. 2004, 21, 2256–2264. [CrossRef]

30. Moranas, MN; Aguero, CM; Eyer, PA; Vargo, EL Gelbėjimo strategija termite: Darbuotojai, paveikti grybelinio patogeno, vėl integruojami į koloniją. Priekyje. Ecol. Evol. 2022, 10, 840223. [CrossRef]

31. Davis, HE; Meconcelli, S.; Radekas, R.; McMahon, DP termitai formuoja savo kolektyvinę elgesio reakciją pagal infekcijos stadiją. Sci. Rep. 2018, 8, 14433. [CrossRef]