1 dalis|Genetinė variacija įtakoja plazmos angiopoetiną{1}} ūminio inkstų pažeidimo subfenotipų vystymuisi

Pavanas K. Bhatraju1,2*, Maxas Cohenas1, Ryanas J. Nagao3,4, Ericas D. Morrell1, Susanna Kosamo1, Xin-Ya Chai1, Robin Nance5, Victoria Dmyterko1, Josephas Delaney5, Jasonas D. Christie6, Kathleen D. Liu7, Carmen Mikacenic1, Sina A. Gharib1, W. Conrad Liles8, Ying Zheng3,4, David C. Christiani9,10, Jonathan Himmelfarb2 ir Mark M. Wurfel1,2

Abstraktus

Fonas:Anksčiau mes nustatėme duūminisinkstassužalojimas(AKI) subfenotipai (AKI-SP1 ir AKI-SP2), turintys skirtingą prastų klinikinių baigčių ir atsako į vazopresoriaus terapiją riziką. Endotelio disfunkcijos plazmos biomarkeriai (naviko nekrozės faktoriaus receptorius-1, angiopoetinas-1 ir 2) išskyrė AKI subfenotipus.

Tačiau nežinoma, ar šie biomarkeriai yra tiesiog žymenys, ar priežastiniai tarpininkai kuriant AKI subfenotipus.

Metodai:Mes išbandėme ryšius tarp vieno nukleotido polimorfizmųAngiopoetinas-1, angiopoetinas-2,irNaviko nekrozės faktoriaus receptorius 1Agenų ir AKI-SP2 421 sunkiai sergančiam Europos protėvių subjektui. Buvo ištirta geriausių vieno nukleotido polimorfizmų (FDR < 0.05)="" cis-biomarkerio="" ekspresija="" ir="" tai,="" ar="" genetinę="" aki-sp2="" riziką="" lemia="" cirkuliuojantys="" biomarkeriai.="" taip="" pat="" baigėme="" tyrimus="" in="" vitro,="" naudodami="" žmogaus="" inkstų="" mikrovaskulines="" endotelio="" ląsteles.="" galiausiai,="" mes="" apskaičiavome="" plazmos="" biomarkerių="" inkstų="" klirensą,="" naudodami="" 20="" skirtingų="" laiko="" šlapimo="">

Rezultatai:Genetinis variantas, rs2920656C > T, šaliaANGPT2buvo susijęs su sumažėjusia AKI-SP2 rizika (šansų santykis, 0.45; 95 proc. PI, 0.31–0.66; pakoreguotas FDR=0.003) ) ir sumažėjęs angiopoetino kiekis plazmoje-2 (p = 0.002). Priežastinės išvados analizė parodė, kad kiekvienam nedideliam aleliui (T) rizika susirgti AKI-SP2 sumažėja 16 procentų. Plazmos angiopoetinas{5}} sukėlė 41,5 proc. su rs2920656 susijusios AKI-SP2 rizikos. Žmogaus inkstų mikrovaskulinės endotelio ląstelės, turinčios rs2920656 T alelį, gamino skaitiniu požiūriu mažesnį angiopoetino kiekį-2, nors tai nebuvo statistiškai reikšminga (p = 0.07). Galiausiai, analizės parodė, kad angiopoetinas-2 yra minimaliai pašalinamas iš kritinės būklės pacientų.

Išvada:Genetinio tarpininkavimo analizė suteikia patvirtinančių įrodymų, kad angiopoetinas{0}} vaidina priežastinį vaidmenį AKI-SP2 rizikai.

Raktiniai žodžiai: Ūminis inkstų pažeidimas, Genetika, Endotelis

Norėdami gauti daugiau informacijos, kreipkitės:emily.li@wecistanche.com

Cistanche deserticola apsaugo nuo inkstų ligos, spustelėkite čia, kad gautumėte mėginį

Fonas

Ūmusinkstassužalojimas(AKI) paveikia 40–60 procentų pacientų, patenkančių į intensyviosios terapijos skyrių (ICU), ir prisideda prie prastų trumpalaikių ir ilgalaikių rezultatų. Iki šiol atlikti genetiniai tyrimai daugiausia dėmesio skyrė genetinių variantų sąsajoms ir AKI rizikai, lyginant atvejus (AKI) su kontrolėmis (nėra AKI). Tačiau ši sistema gali būti apribota, nesŪmusinkstassužalojimasyra labai nevienalytės su skirtingais nusodintuvais ir biologiniais profiliais. Sujungus tokius AKI pacientus, kad būtų padidintas imties dydis, gali susilpnėti genetiniai statistiniai signalai, kurie gali būti tik viename patofiziologiškai atskirame AKI populiacijos pogrupyje. Kitas apribojimas yra tas, kad AKI sunkios būklės populiacijose dažnai yra rimtų įžeidimų, tokių kaip sepsis, chirurgija, šokas, pneumonija ir trauma, komplikacija. Valdiklių naudojimas nekuriantŪmusinkstassužalojimasgali būti problemiškas. Kontrolės, turinčios didelės rizikos genetinį variantą, gali nesusirgti AKI, jei jos taip pat nepatirs panašaus ūmaus įžeidimo kaip ir atvejai, todėl jie būtų klasifikuojami kaip ne atvejai, susilpninantys bet kokį galimą asociacijos signalą. Biologiškai skirtingų AKI subfenotipų naudojimas genetinės asociacijos tyrimuose įveikia ankstesnius AKI fenotipų nustatymo apribojimus, ypač sutelkiant dėmesį į AKI populiaciją ir lyginant du biologiškai skirtingus subfenotipus.

Neseniai nustatėme du AKI subfenotipus (AKI-SP1 ir AKI-SP2), taikydami latentinės klasės analizės metodiką 29 klinikinių ir biomarkerio kintamųjų grupei dviejose nepriklausomose kritiškai sergančiose AKI populiacijose. Pažymėtina, kad AKI-SP2 buvo susijęs su blogesniais ligoninės rezultatais (pvz., mirštamumu, nauja dialize ir 7-parą inkstų neatsigavimu), palyginti su AKI-SP1. Toliau šiuos AKI subfenotipus nustatėme anksčiau atliktame daugiacentriame atsitiktinių imčių kontroliniame tyrime, vazopresino ir norepinefrino infuzijos pacientams, sergantiems septiniu šoku (VASST). VASST tyrime buvo tiriama, ar vazopresoriaus terapijos pasirinkimas pagerino septinį šoką patyrusių asmenų mirtingumą. Nors klinikinio tyrimo metu AKI populiacija neturėjo jokio mirštamumo nuo vazopresoriaus gydymo skirtumo, AKI-SP1 mirtingumas buvo pranašesnis vartojant vazopresiną, palyginti su AKI-SP2, kurio mirtingumas nesiskyrė. Mūsų žiniomis, tai yra pirmasis pavyzdys, kaip nustatyti sunkių ligonių gydymui jautrius AKI pogrupius.

Pažymėtina, kad nė vienas kintamasis nebuvo statistiškai geresnis už kitus kintamuosius, kad būtų galima nustatyti AKI-SP2 (1 lentelė). Priešingai, trijų kintamųjų modelis, naudojant plazmos angiopoetiną-2 (ANG-2), angiopoetiną-1 (ANG-1) ir tirpų naviko nekrozės faktoriaus receptorių{{8 }} (sTNFR-1), turėjo optimalų nuspėjamąjį našumą, kad būtų galima atskirtiŪmusinkstassužalojimassubfenotipai (C-statistika 0.93). Mažesnis ANG-2, mažesnis sTNFR-1 ir didesnis ANG-1 buvo susiję su mažesne AKI-SP2 rizika. Tyrimai su AKI gyvūnų modeliais parodė, kad šie plazmos biomarkeriai dalyvauja

AKI patofiziologija ir sunkumas. Tačiau nežinoma, ar šie plazmos biomarkeriai vaidina priežastinį vaidmenį vystant klinikiniusŪmusinkstassužalojimassubfenotipai. Nustačius priežastinius žymenis, būtų galima nustatyti vaistų kūrimo tikslus, siekiant užkirsti kelią arba gydytiŪmusinkstassužalojimassunkiai sergantiems pacientams ir galėtų padėti pacientui išskirstyti riziką.

Genetinės tarpininkavimo analizė yra vienas iš kelių priežastinių išvadų metodų, galinčių nustatyti galimą mechanizmą, pagal kurį nepriklausomas kintamasis (pvz., genetinis variantas) veikia rezultatą (pvz., AKI subfenotipus) per aiškinamąjį tarpininką (pvz., endotelio disfunkcijos biomarkerį). . Šis metodas buvo plačiai taikomas klinikiniuose duomenyse, siekiant suprasti priežastinius ligos mechanizmus. Iškėlėme hipotezę, kad cis kiekybinių požymių lokusai (QTL)ANGPT1, ANGPT2 ir TNFRSF1Agenai daro įtaką AKI subfenotipų vystymuisi, reguliuodami atitinkamų jų biologinių žymenų (ANG-1, ANG-2 arba sTNFR-1) cirkuliuojančius lygius.

Metodai

Tyrimo populiacijos

Anksčiau pranešėme apie AKI subfenotipų identifikavimą naudojant perspektyviai surinktą ICU kohortą: vieno nukleotido polimorfizmų (SNP), turinčių polinkį į pakitusią ūminio plaučių pažeidimo riziką (iSPAAR), nustatymas. iSPAAR populiacija yra genomo masto atvejo kontrolės tyrimas dėl ūminio kvėpavimo distreso sindromo (ARDS) rizikos, kuriame dalyvavo pacientai, sergantys ARDS ir be jų. Į iSPAAR populiaciją buvo įtraukti asmenys iš anksčiau baigtų atsitiktinių imčių kontrolinių tyrimų ir iš numatomos įtrauktos į ICU kohortą. Išsami informacija apie kiekvienos populiacijos, įtrauktos į iSPAAR, tyrimo planą buvo aprašyta anksčiau; Albuterolis, skirtas ūminiam plaučių pažeidimui gydyti (ALTA), gydymo skysčiais ir kateteriu tyrimas (FACTT), enterinė omega-3 riebalų rūgštis, gama-linoleno rūgštis ir antioksidantų papildymas esant ūminiam plaučių pažeidimui (OMEGA)

ir ūminio kvėpavimo sutrikimo (MEA) molekulinė epidemiologija Masačusetso bendrojoje ligoninėje. Į iSPAAR įtraukimas į studijas įvyko praėjus 48 valandoms po priėmimo į ICU. Tyrimo metu buvo surinkta DNR ir plazma genotipų nustatymui ir biomarkerio analizeiŪmusinkstassužalojimaskonstatavimas. AKI buvo apibrėžtas kaip kreatinino (SCr) padidėjimas serume, didesnis arba lygus 0,3 mg/dl arba 50 procentų nuo pradinio SCr. Pradinė SCr buvo apibrėžta kaip mažiausia vertė prieš įtraukiant į tyrimą. AKI taip pat buvo apibrėžtas naudojant modifikuotus šlapimo išsiskyrimo kriterijus (kasdien, o ne kas 6 valandas).

Norėdami nustatyti plazmos biomarkerių klirensą per inkstus, mes įtraukėme būsimąją grupę į Harborview medicinos ir chirurgijos intensyviosios terapijos skyrius, Kritinės ligos.ŪmusinkstassužalojimasKohorta (CŽV). Tiriamieji buvo tinkami įtraukti, jei jie atitiko 2 iš 4 sisteminio uždegiminio atsako sindromo kriterijų, turėjo kliniškai įtariamą infekciją ir turėjo nuolatinį šlapimo kateterį. Buvo baigtas nustatytas šlapimo surinkimas, kuris truko mažiausiai 2–4 valandas, o EDTA plazmos mėginiai buvo paimti šlapimo paėmimo pagal laiką pradžioje ir pabaigoje. Klirensas buvo apskaičiuotas naudojant formulę Klirensas(X) = U(X) * V/ P(X), kurU(X) parodo ištirpusios medžiagos koncentraciją šlapimeX, V rodo šlapimo kiekį per 2–4-h surinkimo laikotarpį irP (X) reiškia vidutinę ištirpusios medžiagos koncentraciją plazmojeX iš pradinio ir galutinio kraujo paėmimo.

Genotipavimo strategija

Genotipų nustatymas buvo atliktas 421 pacientui iš Europos protėvių naudojant Illumina 660 platformą (Illumina, San Diego, CA). Genotipo duomenų kokybė buvo kontroliuojama naudojant imties skambučių dažnio filtrą > 0.97, mažojo alelio dažnį (MAF) > 0.01 ir SNP skambučių dažnį > 0.95. Atlikus kokybės kontrolę, 238 SNP ±50 kilobaziųANGPT1, ANGPT2,irTNFRSF1Abuvo rasti. Po jungties disbalanso (LD) genėjimas r²iš {0}}.8, buvo pašalinti 48 SNP, todėl asociacijos testuose iš viso buvo panaudota 190 SNP. Priskyrimas buvo atliktas naudojant 1000 genomų projekto etaloninį skydelį, naudojant IMPUTE2 v2.3.0.

Plazmos baltymų įvertinimas

Plazmos ir šlapimo biomarkeriai buvo matuojami naudojant elektrochemiliuminescencinius imuninius tyrimus (Meso Scale Discovery (MSD), Rockville, MD), kaip aprašyta anksčiau. Kraujas buvo surinktas į EDTA apdorotus sterilius mėgintuvėlius, šlapimas buvo surinktas į sterilius konteinerius ir abu buvo nedelsiant centrifuguoti. Tada plazma ir šlapimas buvo padalyti į alikvotas ir užšaldyti –80 laipsnių temperatūroje. Mėginiai buvo saugomi skirtingą laiką, tačiau jie buvo atšildyti vienoje partijoje ir tik vieną kartą, kad būtų atlikti šio tyrimo biomarkerio matavimai. Visi biomarkerio matavimai buvo atlikti dviem egzemplioriais Harborview Pulmonary Research Laboratories.

In Silico analizės

Norėdami patikrinti SNP dėl QTL efektų išraiškos, užklausėme genotipo audinio išraiškos (GTEx) portalą.

Ląstelių kultūros

Žmogaus inkstų mikrovaskulinės endotelio ląstelės (HKME C) buvo išgrynintos iš vaisiaus inkstų po savanoriško nėštumo nutraukimo nuo 100 iki 135 dienų po pastojimo. Iš pacientų buvo gautas informuotas sutikimas dėl vaisiaus audinių naudojimo. Tada atsitiktinai pasirinkome 9 skirtingus donorus HKMEC, atšildydavome ir padengėme pusę milijono ląstelių T25 kolbose, padengtose 0,2 procento želatina ir laikomoje EBM-2 bazinėje terpėje, kurioje yra 1 procentas antibiotikų ir antimikotiko (Life Technologies), 10 procentų FBS, 100 ug/mL EKGS, 50 ug/mL heparino ir 20 ng/mL VEGF (R&D), 48 valandas iki susiliejimo. Po 48 valandų išvalėme genominę DNR iš HKMEC ir buvo surinkti ląstelių supernatantai. Sėkmingai nustatėme 8 donorų ląstelių genotipą.

Statistinė analizė

Pacientų demografiniai kintamieji pateikiami kaip vidurkis plius/-standartinis nuokrypis arba kaip mediana ir kvartiliai. Pirma, naudojome logistinę regresiją, kad patikrintume ryšį tarp 190 SNP ir AKI-SP2 vystymosi, palyginti su AKI-SP1, naudodami priedinį genetinį modelį (Golden Helix, MT). Mūsų modelis buvo naudojamas šiems kintamiesiems: amžius, lytis, sepsis ir pirmieji penki pagrindiniai komponentai. Pagrindiniams komponentams apskaičiuoti buvo naudojamas Eigenstrat metodas v4.2, o penki geriausi buvo įtraukti kaip kovariatoriai. Šansų santykiai (OR) pateikiami su 95 procentų pasikliautinomis intervalais. Analizuodami genetinius variantus ir AKI subfenotipus, mes pakoregavome kelis palyginimus, naudodami Benjamini-Hochberg klaidingų atradimų dažnio (FDR) slenkstį < 0,10,="" o="" tai="" reiškia,="" kad="" mažiau="" nei="" 10="" procentų="" asociacijų,="" kurių="" fdr="" vertė="" yra="" lygi="" arba="" mažesnė.="" šis="" lygis="" yra="" klaidingai="" teigiami="" [31].="" atliekant="" jautrumo="" analizę,="" priskiriamas="" genotipas="" buvo="" naudojamas="" norint="" nustatyti="" papildomus="" snp,="" susijusius="" su="">

Antra, mes naudojome tiesinę regresiją, koreguodami pagal amžių, lytį ir sepsį, kad nustatytų ryšius tarp geriausių SNP ir log.₂transformuotos biomarkerio koncentracijos. Trečia, atlikome priežastinių išvadų analizę, kad patikrintume ryšį tarp genetinių variantų ir AKI-SP2 bei galimą asociacijos tarpininkavimą plazmos biomarkerio koncentracijomis. Tarpininkavimo analizė atlikta naudojant netiesinį struktūrinių lygčių modeliavimo įgyvendinimą, įdiegtą tarpininkavimo pakete STATA [32, 33]. Papildoma priežastinės išvados analizės informacija pateikiama internetiniame priede. Ketvirta, logistinės regresijos būdu nustatėme ryšį tarp genetinių variantų ir AKI sunkumo, išmatuoto didžiausiu kreatinino kiekiu serume. Papildoma informacija apie medžiagas ir metodus pateikiama internetiniame priede. Analizėje įvertinome 190 SNP ir naudojome konservatyvųjįp-reikšmėiš 0.05/190 =2.6 × 10^{− 4}. Atsižvelgiant į tai, kad maždaug 40 procentams ICU pacientų išsivysto AKI, o numatomas kontrolės (AKI-SP1) ir atvejo (AKI-SP2) santykis yra 1,5, numatomas imties dydis yra 421, o MAF yra mažiausiai { {16}}.30, turėsime 81 procento galią, kad aptiktume santykinę riziką, kuri yra 1,5 ar didesnė [34]. Analizės buvo baigtos naudojant STATA (15 versija) ir Goldenhelix (4.0 versija). Visus tyrimus patvirtino Vašingtono universiteto Žmogaus dalykų skyrius. Iš visų įtrauktų dalykų buvo gautas rašytinis informuotas sutikimas.

Rezultatai

Populiacijų charakteristikos Iš 425 pacientų iš patvirtinimo grupės ankstesniame darbe 421 turėjo genotipų nustatymo duomenis. Demografiniai rodikliai ir pradinės klinikinės charakteristikos aprašytos 1 lentelėje. Visi tiriamieji buvo kilę iš Europos. Iš viso 267 (63 proc.) buvo priskirti AKI-SP1 ir 154 (37 proc.) AKI-SP2. Tiriamųjų, kuriems išsivystė AKI-SP2, ligos sunkumas buvo didesnis (vidutinis ūminės fiziologijos ir lėtinės sveikatos įvertinimo (APACHE) III balas, 111 ± 26 ir 74 ± 24), buvo didesnė sepsio tikimybė (84 proc., palyginti su 66 proc.) ir buvo labiau linkę gydyti vazopresoriais (79 proc., palyginti su 42 proc.), palyginti su AKI-SP1.

Genetinė variacija šalia ANGPT2, rs2920656, yra susijusi su AKI-SP2

Iš 190 SNP ±50 kilobazių genų 72 buvo netoli ANGPT1, 100 buvo netoli ANGPT2 ir 18 buvo šalia TNFRSF1A geno. Mes nustatėme vieną SNP, atitinkantį FDR < 0,05,="" kuris="" buvo="" susijęs="" su="" aki-sp2,="" palyginti="" su="" aki-sp1="" (2="" lentelė="" ir="" 1="" pav.).="" nebuvo="" pastebėta="" jokių="" reikšmingų="" asociacijų="" su="" snp="" angpt1="" arba="" tnfrsf1a="" arba="" šalia="" jų="" (s2="" ir="" s3="" lentelės).="" snp,="" rodantis="" stipriausią="" ryšį="" su="" aki-sp2="" rizika,="" buvo="" rs2920656="" (or,="" 0,45;="" 95="" proc.="" pi,="" 0,31–0,66;="" p="">< 1,4="" ×="" 10–5;="" fdr="0,003)." šis="" introninis="" snp="" yra="" ≈="" 30="" kb="" pasroviui="" nuo="" angp="" t2="" 3′="" padėties="" ir="" paaiškina="" maždaug="" 3="" procentus="">

AKI-SP2 (R2) kūrimas. Kadangi tik nedaugelis tiriamųjų buvo homozigotiniai rs2920656 (n=26), mes taip pat išbandėme ryšius tarp rs2920656 ir AKI-SP2 dominuojančiame genetiniame modelyje, kuris davė nuoseklų. rezultatai (ARBA, 0,42; 95 proc. PI, 0,28–0,64; p < 1,4="" ×="" 10-6).="" mes="" taip="" pat="" išbandėme="" papildomas,="" galimai="" stipresnes,="" asociacijas="" angpt2="" lokuse,="" naudodami="" priskirtus="" genotipus,="" tačiau="" neradome="" jokių="" stipresnių="" asociacijų,="" nei="" pastebėta="" naudojant="" rs2920656="" (s4="" lentelė).="" atlikdami="" jautrumo="" analizę,="" išbandėme,="" ar="" įtraukiami="" kritinės="" būklės="" pacientai="">Ūmusinkstassužalojimasturės įtakos genetinei asociacijai. Sugrupavome pacientus, neturinčius AKI, ir AKI-SP1 ir nustatėme, ar rs292{14}}656 vis dar buvo stipriai susijęs su sumažėjusia AKI-SP2 rizika. Šioje analizėje 839 pacientai neturėjo AKI arba AKI-SP1, o 154 - AKI-SP2. Rizika vėl susirgti AKI-SP2 žymiai sumažėjo, kai buvo bent vienas T alelis rs2920656 (AR 0.31; 95 proc. PI, 0.19–0.52; p < 0,001)="" (s5="" lentelė).="" kitoje="" jautrumo="" analizėje="" išbandėme,="" ar="" rs2920656="" buvo="" susijęs="" su="" sumažėjusia="" aki-sp2="" rizika="" kiekviename="" iš="" keturių="" skirtingų="" tyrimų,="" kurie="" buvo="" įtraukti="" į="" ispaar.="" kiekviename="" iš="" trijų="" atsitiktinių="" imčių="" kontrolinių="" tyrimų="" (alta,="" factt="" ir="" omega)="" ir="" icu="" numatomos="" kohortos="" (mea)="" taškinis="" įvertinimas="" atitiko="" nedidelį="" rs2920656="" alelį,="" rodantį="" sumažėjusią="" aki-sp2="" išsivystymo="" riziką="" (s6="" lentelė).="" ).="" taigi,="" rs2920656="" buvo="" toliau="" analizuojamas,="" siekiant="" nustatyti="" ryšį="" su="" plazmos="" biomarkerio="">

rs2920656 T alelis yra susijęs su sumažėjusiu plazmos ANG-2

Toliau išanalizavome ryšį tarp rs2920656 ir plazmos ANG-2 koncentracijų. Koreguojant amžių, lytį ir sepsį, kiekviena rs2920656 T alelio kopija buvo susijusi su sumažėjusia log2 plazmos ANG-2 koncentracija (= – 0,09; 95 proc. PI {{9} },15, − 0,04; P=0,002). Tiriamiesiems, kuriems buvo homozigotinis C alelis, nustatyta didžiausia plazmos ANG-2 koncentracija (40 683 pg/ml; tarpkvartilis diapazonas (IQR) 19,374-73, 205), o tiriamųjų, homozigotinių T aleliui, koncentracija buvo mažiausia. plazmos ANG-2 koncentracija (28 308 pg/ml (IQR 14,340-42, 944). Be to, iš 100 SNP, tirtų šalia ANGP T2 geno srities, rs29206565 buvo labiausiai susijęs su plazmos ANG -2 koncentracijos (2 pav.).

Tarpininkavimo analizė rodo, kad ANG{0}} yra priežastinis ryšys kuriant AKI-SP2

Ištyrėme, ar nėra įrodymų, kad ryšys tarp rs2920656 ir AKI-SP2 rizikos priklauso nuo ANG-2 koncentracijos plazmoje (3 pav.). Bendras rs2920656 poveikis AKI-SP2 buvo bendras=− 0,16 vienam aleliui (95 proc. PI -0.24, − 0 .10, p=1.0 × 10−4), o tai rodo, kad kiekvienam genetinio varianto nedideliam aleliui (T aleliui) rizika susirgti AKI-SP2 sumažėja 16 procentų. Priežastinio tarpininkavimo analizė aptiko reikšmingą netiesioginį rs2920656 poveikį AKI-SP2, kurį sąlygojo ANG-2 koncentracija plazmoje (netiesioginis, –0,07 vienam aleliui; 95 proc. PI -0.11, -0,03; p { {34}}.001), o tai reiškia, kad poveikio dalis tarp rs2920656 ir AKI-SP2, kurią sąlygoja ANG-2 koncentracija, yra 41,5 proc.

Rs2920656 T alelis yra susijęs su sumažėjusiu AKI sunkumu po 7 dienų

Tada išbandėme rs2920656 ryšį su tradiciniais AKI sunkumo kriterijais, tokiais kaip didžiausias kreatinino kiekis serume ir kreatinino kiekio padidėjimas serume per 7 dienas nuo įtraukimo į tyrimą. Dominuojančiame genetiniame modelyje rs2920656 T alelis buvo susijęs su kreatinino koncentracijos serume sumažėjimu – 0,44 mg/dL (95 proc. PI, – 0.77). , − 0.10), p=0.01) pakoregavus pagal amžių, lytį, kūno masės indeksą ir sepsio būklę. Mažasis rs2920656 alelis taip pat buvo susijęs su kreatinino padidėjimo serume sumažėjimu nuo pradinės vertės iki 7 dienos (= – 0,25, 95 proc. PI, – 0,46, – 0,03; p=0,03)

rs2920656 T alelis yra susijęs su mažesniu ANG-2 ląstelių kultūroje

Mes atlikome in vitro eksperimentus ir in silico analizes, kad nustatytų rs2920656 funkcinę reikšmę. Iš 8 skirtingų žmogaus vaisiausinkstasaudiniųrs2920656 mėginiai, 2 buvo CC, 5 buvo CT ir 1 buvo TT. Dominuojančiame genetiniame modelyje ANG-2 koncentracija buvo didžiausia endotelio ląstelėse iš donorų, homozigotinių C alelio atžvilgiu, ir mažesnė T alelio nešiotojų, p=0.07 (4 pav.). GTEx projekto duomenų bazėje rs2920656 nebuvo susietas su ANGPT2 geno ekspresija. Tačiau kiti du SNP (rs41311412 ir rs2515591), kurių LD yra vidutinio sunkumo (r2=0.23 ir D'=0.86) su rs2920656, buvo susiję su sumažėjusia ANGPT2 geno ekspresija (p.=4.1 × 10−5 ) blauzdikaulio arterijoje – audinyje, kuris yra labai praturtintas endotelio ląstelėmis (S7 lentelė).

Plazmos ANG-2 minimaliai pašalinama per inkstus, siekiant nustatyti, ar nėra skirtumųinkstasfunkcijagali turėti įtakos ANG{{0}} koncentracijai plazmoje, matavome ANG-2 inkstų klirensą kritinės būklės tiriamiesiems, sergantiems AKI ir be jo. Atliekant 20 skirtingą šlapimo mėginių ėmimą su užregistruotais plazmos mėginiais, kreatinino koncentracijos serume mediana buvo 086 mg/dL, o tarpkvartilis intervalas (IQR) – 0,69–1,45 mg/dL. Vidutinė ANG-2 koncentracija plazmoje buvo 10 261 pg/mL (IQR 6210–19 115 pg/mL). Priešingai, ANG-2 šlapime buvo 50-karto mažesnės, o mediana buvo 206 pg/mL (IQR 11–839 pg/mL). Apskaičiuotas ANG-2 inkstų klirensas buvo < 1="" ml/min.,="" renkant="" šlapimą="" pagal="" laiką,="" o="" tai="" rodo,="" kad="" ang-2="" koncentracija="" plazmoje="" nepadidėja="" vien="" dėl="" pablogėjusio="" aki="" (3="">