1 DALIS Feniletanolio glikozido liposoma, reguliuodama FAK/PI3K/Akt signalizacijos kelią, slopina PDGF sukeltą HSC aktyvaciją

Shi-Lei Zhang 1, Long Ma 1, Jun Zhao 2, Shu-Ping You 1, Xiao-Ting Ma 1, Xiao-Yan Ye ir Tao Liu 1,*

1 Toksikologijos skyrius, Visuomenės sveikatos mokykla, Sindziango medicinos universitetas, Sindziango uigūrų autonominis regionas, Xinyi kelias Nr. 393, Urumčis 830011, Kinija

2 Pagrindinė uigūrų medicinos laboratorija, Sindziango Materia Medica institutas, Sindziango uigūrų autonominis regionas, Tianšano rajonas, Xinhua pietinis kelias Nr. 140, Urumčis 830004, Kinija

Norėdami gauti daugiau informacijos, kreipkitės:Joanna.jia@wecistanche.com

Cistanche deserticola turi daug efektų, spustelėkite čia, kad sužinotumėte daugiau

Santrauka: Cistanche tubulosayra tradicinis kinų augalinis vaistas, plačiai naudojamas imunitetui reguliuoti, irfeniletanoidiniai glikozidai(CPhG) yra vienas iš pagrindinių komponentų, atsakingų už šią veiklą. Tačiau CPhG taikymą neigiamai veikia prastas jų įsisavinimas ir mažas vartojimas per burną. Tikslinis vaistų tiekimas yra svarbi farmacijos plėtros kryptis. Ankstesni tyrimai parodė, kad CPhG gali blokuoti signalizacijos takų laidumą TGF-p1/smad ir slopinti kepenų žvaigždžių ląstelių (HSC) aktyvavimą. Šio tyrimo tikslas buvo įvertinti CPhG liposomų poveikį prieš kepenų fibrozę, slopinant HSC aktyvaciją, skatinant apoptozę, blokuojant ląstelių ciklą, slopinant signalizacijos takų laidumą židininėje adhezijos kinazėje (FAK)/fosfatidilinozitolyje-3- kinazės (PI3K) / baltymų kinazės B (Akt), ir nustatyti, kad jie yra in vitro hepatoprotekcinis aktyvumas. In vitro atpalaidavimo tyrimai parodė, kad CPhG liposomos turi ilgalaikį atpalaidavimo poveikį, palyginti su vaistų CPhG. HSC proliferacija buvo slopinama po gydymo CPhG liposomomis (29,45, 14,72, 7,36 μg/ml), o IC50 reikšmės MTT tyrime buvo 42,54 Rg/ml. Skirtingos CPhG liposomų koncentracijos gali slopinti HSC proliferaciją, skatinti apoptozę ir blokuoti ląstelių ciklą. MTT metodas parodė akivaizdų HSC proliferacijos slopinimą po gydymo CPhG liposoma ir iš rekombinantinio žiurkės trombocitų gauto augimo faktoriaus-BB (rrPDGF-BB). Kolageno-1, metalopeptidazės inhibitoriaus 1 (TIMP-1), lygiųjų raumenų aktino (a-SMA) ir fosforilinto PI3K/Akt kiekis buvo sumažintas, o matricos metaloproteinazės -1 (MMP{) {23}}) buvo padidintas iš anksto apdorojant skirtingomis koncentracijomis CPhG liposomomis. Be to, 29, 45 Rg / ml CPhG liposomų gali sumažinti FAK baltymo ir fosforilinto PI3K ir Akt baltymų ekspresiją pasroviui nuo FAK dėl per didelio FAK geno ekspresijos. Šis eksperimentas rodo, kad CPhG liposomos gali slopinti HSC aktyvavimą, slopindamos FAK ir tada sumažindamos fosforilinto Akt / PI3K ekspresiją, taip suteikdamos naujų įžvalgų apie CPhG taikymą kepenų fibrozei.

Raktiniai žodžiai: feniletanoidiniai glikozidailiposoma; kepenų žvaigždžių ląstelės; platinimas; apoptozė; ląstelių ciklas; FAK/PI3K/Akt,

veiksniai, tokie kaip TGF-p1, alkoholis, toksinai ir steatozė, gali sukelti HSC aktyvavimą. PDGF taip pat gali sukelti HSC aktyvavimą [4]. Šiuo metu terapinės strategijos, skirtos HSC, siekiant užkirsti kelią kepenų fibrozei, apima HSC aktyvacijos, proliferacijos ir ląstelių ciklo slopinimą, taip pat HSC apoptozės stimuliavimą [5].

Cistanche tubulosa(Orobanchaceae šeima), parazitinis augalas, plačiai auginamas pietiniame Sindziango regione Kinijoje.C. tubulosaįrodyta, kad atlieka įvairias veiklas, įskaitant organizmo imuniteto stiprinimą, organizmo ištvermės gerinimą, inkstų maitinimą, impotencijos gydymą, intelekto didinimą;

1. Įvadas

jis taip pat turi antioksidacinių ir senėjimą stabdančių savybių [6]. Šiame augale yra feniletanoidinių glikozidų (CPhG), iridoidų ir polisacharidų, iš kurių CPhG yra vienos iš pagrindinių aktyvių bioaktyvių rūšių [7]. Ankstesniame tyrime nustatėme, kad CPhG gali blokuoti signalizacijos takų laidumą TGF-p1/smad, slopinti HSC aktyvaciją ir daryti prevencinį poveikį galvijų serumo albumino sukeltai kepenų fibrozei žiurkėms [7,8]. Tačiau CPhG gerai tirpsta vandenyje ir blogai tirpsta lipiduose ir yra veikiami išorinių veiksnių, tokių kaip rūgštingumas ir skilimo fermentai, kurie mažina CPhG stabilumą ir efektyvumą [9]. Sušvirkštus į skrandį, CPhG yra nestabilūs žiurkių virškinimo trakte, todėl gali lengvai atsirasti glikozidinių jungčių hidrolizė. Žiurkių biologinis prieinamumas per burną buvo tik 0,83 proc., todėl sunku nustatyti jo terapinį vaidmenį [10]. Todėl turime rasti saugų, veiksmingą, ilgalaikį ir tikslinį antifibrozinį vaistą HSC, kad pagerintume jų terapinį veiksmingumą. Nanodalelių vaistų tiekimo sistemos suteikia alternatyvią strategiją šiems trūkumams įveikti dėl jų pranašumų, įskaitant didelį vaistų įkrovimo pajėgumą ir ilgą kraujotaką [11]. Jie turi stiprų afinitetą kepenims ir gali tiesiogiai tiekti vaistus į ląsteles endocitozės ir sintezės būdu. Nemodifikuotos liposomos daugiausia pasiskirsto audiniuose arba organuose, kuriuos sukuria retikuloendotelinė sistema (RES) ir turi pasyvios įtakos kepenims [12]. Todėl CPhG liposomos buvo paruoštos membranos dispersija ir antrine kapsuliacija, kad būtų užtikrintas anti-fibrozės poveikis. Šiuo tyrimu siekėme ištirti CPhG liposomų poveikį HSC proliferacijai, apoptozei ir ląstelių ciklui bei jo mechanizmus.

2. Rezultatai

2.1. Fizinės CPhG liposomų savybės

Paruoštų CPhG liposomų fizinės savybės buvo tokios: dalelių dydis (216,7 ± 3,47) nm, Zeta potencialas (-55,6 ± 1,3) mV. Kaip parodyta 1 paveiksle, dalelės buvo apvalios, padengtos vienodo storio paviršiumi, o dalelių dydžio pasiskirstymas buvo vienodas. CPhG liposomų vaisto įkrovimo ir kapsuliavimo efektyvumas buvo (3,71 ± 0,32) procento ir (38,46 士 7,85) procento.

2.2. In vitro išsiskyrimas iš CPhG liposomų ir CPhG

Apskaičiuotas kaupiamasis išsiskyrimo greitis buvo apskaičiuotas ir pavaizduotas kaip laiko funkcija CPhG liposomoms ir CPhG (2 pav.). Šiame tyrime; CPhG išsiskyrimo greitis po 12 valandų buvo normalizuotas iki 100 procentų, o CPhG liposomų išsiskyrimo greitis buvo beveik 100 procentų po 24 valandų, o CPhG išsiskyrimo greitis laikui bėgant didėjo. Duomenys buvo analizuojami naudojant skirtingus reguliuojamo atpalaidavimo mechanizmų pritaikymo modelius, įskaitant nulinės eilės, pirmos eilės ir Higuchi lygtis. Trijų išleidimo modelių pritaikytos lygtys ir koreliacijos koeficientai pateikti 1 lentelėje.

Geriausias modelis, tinkantis CPhG ir CPhG liposomoms, yra Higuchi ir pirmosios eilės lygtys. In vitro atliktas CPhG liposomų išsiskyrimo tyrimas neparodė jokio sprogimo efekto. Tirpimo parametrams T50 apskaičiuoti pasirinkta tinkamiausia pasiskirstymo funkcija (tirpimas 50 proc.). Rezultatai rodo, kad vidutinis CPhG liposomų sulaikymo laikas yra ilgesnis nei CPhG, o CPhG liposomų T50 yra 9,39 val. Palyginti su 1,69 h CPhG, CPhG liposomos turi akivaizdų ilgalaikio atpalaidavimo poveikį (2 lentelė).

Pirmiausia ištyrėme CPhG liposomų citotoksinį poveikį HSC su MTT tyrimu in vitro. HSC buvo veikiamos skirtingos CPhG liposomų koncentracijos, nuo 0 iki 117,79 卩g/mL 24 valandas. CPhG liposomos sumažino HSC gyvybingumą priklausomai nuo dozės, o jų IC50 vertė buvo 42,535 (pvz./mL. CPhG liposomų (29,45, 14,72 ir 7,36 ^g/mL) poveikis ląstelėms esant 24, 48 ir 72 valandos parodytos 3 paveiksle. Po gydymo CPhG liposomomis HSC proliferacija buvo reikšmingai slopinama skirtingais laiko momentais (3 pav.).

Laktato dehidrogenazės (LDH) išsiskyrimas iš HSC buvo aptiktas po 24 valandų gydymo skirtingomis CPhG liposomų koncentracijomis. Rezultatai pateikti 3 lentelėje. HSC, apdoroti CPhG liposomomis, neturėjo reikšmingos įtakos LDH išsiskyrimui.

2.4. CPhG liposomos sukelia HSC apoptozę ir sustabdo ląstelių ciklą

HSC buvo veikiami CPhG liposomomis (29, 45, 14, 72, 7, 36 卩g / ml) 24 valandas, o aneksino-V-FITC / PE dvigubas dažymas buvo atliktas siekiant aptikti apoptozę srauto citometrijos būdu, kaip parodyta 4a paveiksle. Bendra ląstelių apoptozė statistiškai padidėjo lyginant su kontroline grupe (p < 0,05).="" po="" 24="" valandų="" gydymo="" hsc="" kiekvienai="" dozių="" grupei,="" cphg="" liposomos="" (29,="" 45="" μg="" ml)="" gali="" sukelti="" vėlyvą="" hsc="" apoptozę,="" o="" vėlyvųjų="" apoptozinių="" ląstelių="" procentas="" buvo="" didesnis="" nei="" ankstyvųjų="" apoptozinių="" ląstelių.="" ankstyvųjų="" apoptozinių="" ląstelių="" dalis="" buvo="" daug="" didesnė="" nei="" vėlyvųjų="" apoptozinių="" ląstelių="" cphg="" liposomų="" (14,72="" ir="" 7,36|^="" g/ml)="" gydytose="" grupėse.="" šie="" rezultatai="" aiškiai="" rodo,="" kad="" cphg="" liposomos="" sukelia="" hepatocitų="" apoptozę,="" ypač="" vėlyvose="" hsc="" stadijose.="" be="" to,="" bendra="" apoptozė="" padidėjo="" vartojant="" cphg="" liposomų="" dozę.="" šie="" rezultatai="" rodo,="" kad="" cphg="" liposomos="" gali="" slopinti="" hsc="" aktyvaciją="" ir="" kepenų="" fibrozę,="" sukeldamos="" hsc="">

Norint nustatyti CPhG liposomų poveikį HSC ląstelių ciklui, HSC buvo apdorotos CPhG liposomomis, kurių koncentracija buvo 29,45, 14,72 ir 7,36 µ/mL 24 valandas, ir analizuojama srauto citometrija (4b pav.). Rezultatai parodė, kad ląstelių dalis G0/G1 fazėje žymiai padidėjo (p < {{10}},05),="" o="" s="" fazės="" ląstelių="" procentas="" buvo="" reikšmingai="" didesnis.="" sumažintas="" (p="">< 0,05).="" be="" to,="" ląstelių="" dalis="" g2="" m="" fazėje="" buvo="" žymiai="" sumažinta,="" palyginti="" su="" kontroline="" grupe=""><0.05). taken="" together,="" these="" results="" exhibit="" the="" cell="" cycle="" modulatory="" activity="" of="" the="" cphg="" liposomes="" in="" hscs,="" which="" may="" relate="" to="" their="" anti-proliferative="" and="" apoptosis-inducing="">

2.5. C PhG liposomų veikimo mechanizmo (-ų) tyrimas in vitro

2.5.1. CPhG liposomos slopina HSC dauginimąsi rrPDGF-BB stimuliacijos būdu

Siekiant toliau tirti CPhG liposomų poveikį HSC rrPDGF-BB stimuliuojamai proliferacijai, buvo atliktas MTT tyrimas, siekiant išmatuoti HSC gyvybingumą, kurie buvo gydomi iš anksto nustatytomis CPhG liposomų koncentracijomis 24, 48 ir 72 valandas. 5 pav.).

Po 24 valandų gydymo HSC, stimuliuojamu rrPDGF-BB ir 29,45, 14,721 ir 7,36 µ/mL CPhG liposomų, kiekvienos dozės grupės ląstelių išgyvenamumas buvo atitinkamai 67,5 proc., 75,3 proc. ir 89,2 proc. Po 48 valandų išgyvenamumas ląstelėse buvo atitinkamai 49,2 proc., 58,6 proc. ir 73,5 proc.
kiekvienos dozės grupės. Po 72 valandų gydymo kiekvienos dozės grupės ląstelių išgyvenamumas buvo atitinkamai 45,3 proc., 59,2 proc. ir 79,2 proc. Rezultatai parodė, kad CPhG liposomos turėjo reikšmingą slopinamąjį poveikį rrPDGF-BB stimuliuojamiems HSC, ir šis slopinamasis poveikis tapo akivaizdesnis, kai dozė buvo padidinta. Manoma, kad slopinantis CPhG liposomų poveikis HSC prisideda prie CPhGliposomo antiproliferacijos aktyvumo.

2.5.2. CPhG liposomos slopina HSC aktyvaciją in vitro

Disse erdvėje esantys HSC gamina ECM komponentus, tokius kaip kolagenas{0}}, (s-SMA ir kolagenas III. Kitus veiksnius, reguliuojančius ECM vystymąsi, pvz., MMP ir TIMP, taip pat gamina HSC [5]. Norėdami toliau tirti HSC sukeltus rrPDGF-BB mechanizmus, įvertinome su ECM susijusių baltymų, įskaitant kolageną -1, Cosma, kolageną III, MMP-1 ir TIMP{{8}, ekspresiją. }. 6a paveiksle parodyta, kad CPhG liposomų (29,45, 14,72, 736 4g/mL) grupės gali sumažinti kolageno-1, a-SMA ir TIMP{18} mRNR ekspresijos lygius. } ir padidinti MMP-1 mRNR ekspresijos lygį labiau nei rrPDGF-BB grupė.

6 pav. CPhG liposomų poveikis kolageno -1, a-SMA, TIMP-1 ir MMP-1 ekspresijai HSC. (a) Kolageno -1, a-SMA, TIMP-1 ir MMP-1 mRNR ekspresija HSC (RT-PGR tyrimas). (b) Kolageno {{10}} ir a-SMA baltymų ekspresija. A – kontrolinė grupė; B, rrPDGF-BB apdorota grupė; C, rrPDGF-BB ir CPhG liposoma 29,45 g/ml apdorota grupė; D, rrPDGF-BB ir CPhG liposoma 14,72 (_ig/mL gydoma grupė; E, rrPDGF-BB ir CPhG liposoma 7.3 6 卩g/m L gydoma d grupė; Duomenys išreikšti kaip vidutinis 土 SD .** p < 0,01,="" žymiai="" skiriasi="" nuo="" rrpdgf-bb="" aktyvuotų="" hsc="" grupės.="" #="" p="">< 0,05,="" reikšmingai="" skiriasi="" nuo="" kontrolinės="" grupės.="" 6-aktinas="" buvo="" naudojamas="" kaip="" vidinė="">

CPhG liposomos taip pat padidino MMP -1 mRNR lygį. A-SMA ir kolageno -1 kiekis buvo labai išreikštas rrPDGF-BB aktyvuotuose HSC. Priešingai, CPhG liposomos sumažino a-SMA ir kolageno kiekį-1 (6b pav.). Ypač esant didelei koncentracijai (29,45 ^g/ml), CPhG liposoma sumažino padidėjusį kolageno -1 ir a-SMA ekspresiją per rrPDGF-BB.

2,53 CPhG liposomos slopina PI3K/Akt signalizacijos kelią

PI3K/Akt yra svarbus signalo perdavimo kelias, kurį tarpininkauja tirozino kinazės receptoriai. PI3K/Akt signalizacijos kelias veikia kaip jutiklis, reaguodamas į ekstraląstelinius dirgiklius ir tarpininkauja ląstelių signalams, todėl vaidina lemiamą vaidmenį ląstelių apoptozėje ir proliferacijoje, paveikdamas pasroviui esančių efektorinių molekulių aktyvumą [13]. Siekiant patikrinti, ar PI3K / Akt kelias dalyvauja CPhG liposomų antiproliferaciniame poveikyje HSC, PI3K / Akt ekspresijos ir fosforilinimo lygiai buvo ištirti Western blot analize. Rezultatai parodė, kad p-PI3K ir p-Akt lygiai HSC nuolat mažėjo po 24 valandų gydymo CPhG liposomomis, o tai rodo, kad CPhG liposomų proliferaciją slopinantis poveikis HSC yra susijęs su PI3K/Akt kelio deaktyvavimu. , kaip parodyta 7 paveiksle.

2.5.4. CPhG liiposomos gali sumažinti PI3K / Akt kelio baltymų ekspresiją rrPDGF-BB tarpininkaujamos FAK per didelės ekspresijos plazmidės HSC

FAK yra svarbus genas, reguliuojantis PI3K / Akt signalizacijos kelią. Aktyvuotas FAK gali fosforilinti PI3K, o tai dar labiau veda prie Akt fosforilinimo. FAK tarpininkauja tirozino-baltymų kinazės receptoriaus, integrino ir kitų kelių signalų perdavimui į ląsteles, kurios yra kelių tarpląstelinių takų jungtis ir centras HSC aktyvacijos metu. Todėl spėliojome

kad CPhG liposomos gali slopinti PI3K / Akt signalizacijos kelio aktyvumą, pablogindamos FAK aktyvavimą. Vėliau šią hipotezę patvirtinome parodydami per didelę FAK geno ekspresiją.

(pEX{{0}}NC) plius CPhG liposoma 29,45 Lg/mL grupėje reikšmingai sumažėjo (p < 0,01).

estern blotavimas su specifiniais pirminiais antikūnais. ** p < 0.01,="" žymiai="" skiriasi,="" palyginti="">

rrPDGF-BB stimuliacija ir pEX-3-FAK grupė. plius p < 0.05,="" reikšmingai="" skiriasi,="" palyginti="" su="" rrpdgf-bb="" gydyta="" grupe.="" &="" p="">< 0,01,="" žymiai="" skiriasi="" nuo="" rrpdgf-bb="">

plius pEX{0}}NC grupė. -aktinas buvo naudojamas kaip vidinė kontrolė.

cistanche gali kovoti su vėžiu

3. Diskusija

Nustatyta, kad CPhG pasižymi įvairiu biologiniu aktyvumu, įskaitant priešuždegiminį poveikį [14,15], anti-osteoporozę [16,17], raminamąjį poveikį [18], anti-nuovargį [19], neuroprotekcinį poveikį. 20], ir hepatoprotekcinis aktyvumas [21,22]. Yang ir kt. nustatė, kad išrašas išC. tubulosagali žymiai sulėtinti eksperimentinės cheminės kepenų fibrozės progresą, slopindama kolageno sintezę ir mažindama oksidacinį stresą [22]. Tačiau CPhG veiksmingumas kaip

nuo karščio apsaugančias priemones riboja prastas jų pralaidumas ir mažas biologinis prieinamumas [23]. Todėl būtina išplėsti CPhG taikymą kuriant veiksmingą tiekimo sistemą, kad būtų galima įveikti šias nesėkmes.

Pastaraisiais metais tiek vaistų tyrimai, tiek klinikiniai tyrimai patvirtino, kad nanodalelių naudojimas kaip vaistų nešiklis gali pagerinti vaistų veiksmingumą in vivo. Liposomos yra vienos iš svarbiausių nanodalelių [24].

Liposomos gali būti naudojamos kaip vaistų nešikliai, siekiant sėkmingai tiekti priešuždegiminius vaistus, vaistus nuo vėžio, antibiotikus, priešgrybelinius vaistus ir kitas skirtingų kategorijų vaistus [25]. Liposomos taip pat gali pagerinti vaisto stabilumą, padidinti vaisto tirpumą ir skatinti biologinį suderinamumą [26]. Kita vertus, tyrimai parodė, kad kietų nanodalelių (10-1000 nm diapazone) vaistų tiekimo sistema kepenyse gali sukoncentruoti 80 procentus vaisto dozės, todėl vaistas patenka į vidų. kepenų ląstelės [27]. Jing Zhu ir kt. nustatė, kad galanino liposomos turi gerą poveikį kepenims [28]. Todėl pasyvus nano-kiniškų vaistų poveikis gali būti naudojamas kepenų ligoms ar kitoms ligoms gydyti. Šiame tyrime paruoštų CPhG liposomų, kurioms būdingas tam tikras kepenų nukreipimo laipsnis, dalelių dydis yra (216,7 ± 3,47) nm. Vaistų atpalaidavimo elgsena yra svarbi nanovaistų tiekimo sistemų savybė. Kadangi CPhG gerai tirpsta vandenyje, kaip atpalaidavimo terpė naudojamas PBS buferinis tirpalas (pH=6.0). Iš išsiskyrimo kreivės matyti, kad prieš 2 valandas CPhG liposomų išsiskyrimo procentas buvo mažesnis nei 40 procentų, staigaus išsiskyrimo nebuvo ir buvo tam tikras ilgalaikio atpalaidavimo efektas, palyginti su CPhG išsiskyrimu. Pagal pritaikytą išsiskyrimo kreivės lygtį CPhG liposomų išsiskyrimas fosfatinio buferio tirpale esant pH=6,0 atitinka Higuchi lygtį.

cistanchegalianti-apoptozė

Sergant lėtinėmis kepenų ligomis, nuolatinis HSC aktyvinimas sukelia kepenų fibrozę [29]. Todėl HSC aktyvacijos, proliferacijos ir ląstelių ciklo slopinimas arba HSC apoptozės sukėlimas gali būti naujas tikslinio kepenų fibrozės gydymo pradžios taškas [30-33]. Daugelis tyrimų parodė, kad apoptozė yra raktas į kepenų fibrozės atšaukimą skatinant apoptozę [34]. Kepenų fibrozės vystymasis priklauso nuo HSC aktyvacijos, kuri gali pasiūlyti galimybę slopinti HSC aktyvaciją ir sukelti apoptozę, siekiant užkirsti kelią kepenų fibrozei arba ją gydyti [35, 36]. LDH yra ląstelės citozolyje esantis fermentas, kuris išskiriamas auginimo terpėje, kai pažeidžiama ląstelės membrana. Dėl šių priežasčių in vitro atlikome ląstelių gyvybingumo, LDH kiekio ląstelėse ir CPhG liposomų veikiamų HSC apoptozės ir ląstelių ciklo tyrimus. Rezultatai parodė, kad CPhG liposomos stipriai slopina HSC gyvybingumą ir dauginimąsi ir padidina apoptozinių ląstelių procentą priklausomai nuo koncentracijos. Be to, ląstelių ciklo rezultatai rodo, kad CPhG liposomos gali sukelti ląstelių ciklo sustabdymą G1 fazėje. Rezultatai rodo, kad CPhG liposomų raktas siekiant išvengti ir gydyti kepenų fibrozę yra reguliuoti ląstelių proliferaciją, apoptozę ir ląstelių ciklą. Palyginti su tuščia kontroline grupe, kiekvienos grupės LDH kiekis palaipsniui didėja. Tačiau reikšmingo skirtumo (p > 0,05) nebuvo, o tai rodo, kad nors CPhG liposomų paveiktų HSC aktyvumas mažėja, dauguma ląstelių membranų lieka nepažeistos. CPhG liposomų sukeliamas HSC proliferacijos slopinimas nėra susijęs su vaistų toksiškumu ląstelėms.

PDGF yra svarbiausias veiksnys, turintis įtakos HSC dauginimuisi. PDGF receptoriai (PDGF-Ra ir -p) priklauso tirozino kinazės receptorių šeimai. PDGF-AA jungiasi tik su PDGF-Ra, o PDGF-B grandinės jungiasi ir dimerizuojasi su PDGF-Ra ir -p [37]. Ligandui prisijungus prie PDGF-R, receptoriai dimerizuojasi, o tai vėliau sukelia vidinės tirozino liekanos fosforilinimą ir kelių pasroviui esančių signalizacijos takų aktyvavimą, galiausiai sukeldamas aktyvuotų HSC proliferaciją ir migraciją. Šis procesas sukelia per didelę kolageno ir kitų ECM gamybą ir nusėdimą, taip skatinant kepenų fibrozės vystymąsi ir progresavimą [38]. Breitkopf ir kt. parodė, kad per didelė PDGF-BB ekspresija kepenyse sukelia HSC proliferaciją ir kepenų fibrozę [39]. Savo tyrime mes naudojome rrPDGF-BB kaip stimuliatorių, kad suaktyvintume HSC, o kiekviena dozuota CPhG liposomų grupė gali slopinti HSC proliferaciją ir parodyti akivaizdų dozės ir poveikio ryšį. Manoma, kad slopinantis CPhG liposomų poveikis HSC prisideda prie CPhG liposomų antiproliferacijos aktyvumo.

HSC aktyvacija yra susijusi su daugeliu ląstelių genų ekspresijos modelių pokyčių. Visų pirma, kolageno -1 ir a-SMA genų ekspresijos pokyčiai labiausiai koreliuoja su aktyvuotų HSC fibrozės savybėmis [40]. MMP yra nuo cinko priklausomos endopeptidazės, kurios vaidina svarbų vaidmenį skaidant visus ECM baltymų komponentus fiziologinėmis ir patologinėmis sąlygomis. MMP ir TIMP tarpininkauja atitinkamai ECM sintezei ir skaidymui. MMP gali skatinti ECM degradaciją. Subtilus balansas tarp MMP ir TIMP lemia kepenų fibrozės atsiradimą [29]. Palyginti su rrPDGF-BB grupe, TIMP-1, a-SMA ir kolageno-1 ekspresija CPhG liposomų grupėse žymiai padidėjo, o MMP-9 ekspresija sumažėjo. Gydymas CPhG liposomomis žymiai pakeitė rrPDGF-BB sukeltas nenormalias išraiškas HSC. Šie duomenys rodo, kad CPhG liposomos galbūt slopina ECM susidarymą, atkurdamos pusiausvyrą tarp MMP ir TIMP, taip padidindamos MMP{11}} lygį ir sumažindamos TIMP-1, a-SMA ir kolageno{14}} ir potencialiai skatinančio tarpląstelinės matricos degradaciją.

FAK yra savotiškas židinio sukibimo kompleksas. PDGF taip pat gali aktyvuoti FAK, sąveikaudamas su ECM baltymu per integriną [41]. Židinio sukibimo kompleksas suteikia tiesioginį ekstraląstelinės aplinkos vientisumo jutiklį. Suaktyvinus FAK, suaktyvėja PI3K. Įrodyta, kad PI3K dalyvauja kelių tipų ląstelių proliferacijoje [42]. Jo lemiamas vaidmuo HSC buvo parodytas naudojant PI3K specifinius inhibitorius LY294002 ir wortmannin, kad blokuotų PDGF sukeltą mitogenezę ir chemotaksę, nepažeidžiant PDGF receptorių autofosforilinimo [43]. PI3K įdarbinamas į dimerizuotus fosforilintus PDGF receptorius, kurie aktyvuoja proteinkinazę C (PKC), Akt ir p70S6 kinazes (p70S6K) [44]. Buvo pranešta, kad dominuojantis neigiamas FAK (Ad-FAKCD) buvo naudojamas blokuoti FAK aktyvumą ir slopinti PI3K aktyvaciją, kurią sukelia PDGF ir HSC proliferacija po gydymo PDGF [45]. Todėl iškėlėme hipotezę, kad FAK / PI3K / Akt kelias yra galimas CPhG liposomų taikinys.

Mūsų rezultatai rodo, kad lyginant su rrPDGF-BB stimuliacija ir X-3-FAK grupe, FAK, fosforilinto PI3K ir fosforilinto Akt baltymų ekspresijos lygiai buvo sumažėję stimuliuojant rrPDGF-BB ir X-3-FAK. plius CPhG liposoma 29,45 Lg/mL grupė. Šie rezultatai rodo, kad gydymas CPhG liposomomis 29, 45 Lg / ml gali sumažinti FAK baltymo ir fosforilintų PI3K ir Akt baltymų ekspresiją pasroviui nuo FAK.

Gilėjant tradicinės kinų medicinos chemijos ir farmakologijos tyrimams, rasta ir patvirtinta vis daugiau tradicinės kinų medicinos veikliųjų medžiagų. Paklitakselis, artemizininas ir kiti vaistai visame pasaulyje buvo plačiai pripažinti kaip pirmos eilės vaistai nuo susijusių ligų. Tačiau tuo pat metu nustatyta, kad nors daugelio kinų medicinos ingredientų farmakologinis poveikis in vitro yra labai stiprus, jie prastai tirpsta vandenyje, trumpas pusinės eliminacijos laikas, prastas stabilumas, mažas biologinis prieinamumas, toksiškas šalutinis poveikis ir daugelis kitų. kitos problemos, kurios labai riboja jų medicininį ir klinikinį pritaikymą. Nanovaistų tiekimo sistema yra nauja vaistų tiekimo sistema, turinti didelį plėtros potencialą ir yra šiuolaikinių farmacijos tyrimų pagrindinis taškas. Jo taikymas tiriant ir kuriant naujas tradicinės kinų medicinos formas ne tik pagerina tradicines kinų medicinos formas, bet ir tam tikru mastu pagerina tradicinių kinų vaistų gydomąjį poveikį bei padidina vaistų stabilumą in vivo. Be to, nemodifikuotas liposomas daugiausia sugeria AEI, priklausomai nuo jų dalelių dydžio, paviršiaus savybių ir kitų veiksnių. Jie taip pat pasyviai nukreipti į kepenis. Siekiant pagerinti įprastų liposomų kepenų taikymo efektyvumą, tikslinio audinio koncentraciją galima padidinti sujungiant specifinius ligandus ar specifines funkcines grupes.

Todėl būsimuose tyrimuose turėtume skirti dėmesio fizinėms ir cheminėms CPhG ekstrahavimo ir gryninimo savybėms, tokioms kaip tirpumas, stabilumas, rūgštingumas ir šarmingumas, taip pat biofarmaceutikos ir farmakokinetikos tyrimams. Turėtume sukurti unikalią formulių kūrimo teoriją, paruošimo technologijos platformą ir CPhG kokybės vertinimo metodą, taip pat sukurti įvairias CPhG nanovaistų pakrovimo sistemas, kad CPhG būtų panaudoti kuo kruopščiau. Visapusiškai išnaudoti šiuos privalumus bus mūsų būsimų tyrimų kryptis.