2 dalis.
Mar 05, 2022
Kontaktai: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 El. paštas:audrey.hu@wecistanche.com
Cheng Wei Lu 1,2, Tzu Yu Lin 1,2, Shu Kuei Huang 1 ir Su Jane Wang 3,*
Pls spustelėkite čia, grįžkite į 1 dalį
3.2 Terapinės pasekmės
Eksitotoksiškumas, patologinis procesas, kurį sukelia per didelis glutamato išsiskyrimas ir glutamato receptorių aktyvacija, yra pagrindinė neuronų mirties priežastis esant ūminiams ir lėtiniams smegenų sutrikimams, tokiems kaip insultas, trauminis smegenų sužalojimas, Parkinsono ir Alzheimerio ligos [13,41] ir gydymo strategijos. glutamato išsiskyrimo slopinimas gali būti daug žadančios neuroprotekcinės strategijos gydant tokias ligas. Įrodyta, kad echinakozidas prasiskverbia pro kraujo ir smegenų barjerą (BBB) ir pasižymi neuroprotekciniu poveikiu įvairiuose in vivo neurotoksiškumo modeliuose [8,10–12,42]. Nors šių neuroprotekcinių poveikių mechanizmas nėra visiškai suprantamas, buvo pranešta apie keletą galimų mechanizmų, įskaitant uždegiminio atsako slopinimą, mitochondrijų funkcijos stabilizavimą, antioksidaciją, laisvųjų radikalų pašalinimą ir neurotrofinės funkcijos imitavimą [5, 9, 12, 42]. Dabartiniame tyrime gebėjimasechinakozidassumažinti glutamato išsiskyrimą iš nervų galūnių taip pat gali iš dalies paaiškinti jo neuroprotekcinį mechanizmą. Tačiau ar šis poveikis prisideda prie akivaizdaus terapinio potencialoechinakozidasdėl smegenų sutrikimų, susijusių su glutamato eksitotoksiškumu, reikia tolesnių tyrimų.
Neuroprotekcinis poveikiscistankasjis echinakozidas
4.Medžiagos ir metodai
4.1. Chemikalai
Fura-2-acetoksimetilo esteris (Fura-2-AM) ir 3',3',3'-dipropiltiadikarbocianino jodidas [DiSC3(5)] buvo įsigyti iš Invitrogen (Karlsbadas, CA, JAV). o-konotoksinas MVIIC, rottlerinas, 2-[1-(3-dimetilaminopropil)indol-3-il]-3-(indol-3-il) maleimidas ( GF109203X), 5,6,7,13-tetrahidro- 13-metil-5-okso-12H-indolo[2,3-a]pirolo[3,{ {27}}c]karbazolo-12-propannitrilas (Go6976) ir N-[2-(p-bromcinamilamino)etil]-5-izochinolinsulfonamidas (H89) buvo įsigyti iš Tocris Bioscience (Bristolis, JK). ).Echinakozidas, dantrolenas, DL-treo-beta-benzil-oksiaspartatas (DL-TBOA), 7-chloro-5- (2-chlorofenilas)-1, 5-dihidro{ {10}},1-benzotiazepinas-2(3H)-onas (CGP37157), 2-(2-amino-3- metoksifenilas)-4H -1-benzopiranas-4-one) (PD98059), etilenglikolio bis(-aminoetilo eteris)-N,N,N/,N/-tetraacto rūgštis (EGTA) ir visi kiti reagentai buvo įsigyti iš Sigma- Aldrich Co. (St. Louis, MO, JAV).
4.2. Gyvūnai
Buvo naudojami dviejų mėnesių Sprague-Dawley žiurkių patinai. Gyvūnai buvo laikomi standartizuotomis aplinkos sąlygomis (22 ± 1 oC; 50 procentų santykinė oro drėgmė; 12 h šviesos/tamsos ciklas) ir jiems buvo suteikta neribota prieiga prie maisto ir vandens. Gyvūnai buvo nužudyti nukirtus galvą, o smegenų žievė buvo greitai pašalinta esant 4 oC temperatūrai. Eksperimentines procedūras patvirtino Fu Jen institucinis gyvūnų priežiūros ir naudojimo komitetas (A10259), vadovaudamasis Nacionalinių sveikatos institutų laboratorinių gyvūnų priežiūros ir naudojimo vadovu. Buvo dedamos visos pastangos siekiant sumažinti gyvūnų kančias ir naudoti minimalų gyvūnų skaičių, reikalingą patikimiems rezultatams gauti.
4.3. Sinaptosominiai preparatai
Sinaptosomos buvo išgrynintos iš žiurkių smegenų žievės, naudojant nepertraukiamus Percoll gradientus, kaip aprašyta anksčiau [43, 44]. Trumpai tariant, audinys buvo homogenizuotas terpėje, kurioje yra 0,32 M sacharozės (pH 7,4), homogenatas centrifuguojamas 10 min 3000 × g (5{{25}). }00 aps./min. JA 25.5 rotoriuje; Beckman Coulter, Inc., Majamis, FL, JAV) ir 4 oC, o supernatantas vėl centrifuguojamas 12 min 14 500 × g greičiu (11, 000 aps./min. JA 25.5 rotoriuje). Nuosėdos buvo švelniai resuspenduojamos 0,32 M sacharozės tirpale (pH 7,4), o šios sinaptosominės suspensijos alikvotinė dalis (2 ml) buvo dedama ant 3 ml Percoll nepertraukiamo gradiento, kuriame yra 0,32 M sacharozės, 1 mM EDTA, 0,25 mililitrų ir 0,25 mililitrų DL. 3 proc., 10 proc. ir 23 proc. Percoll (pH 7,4). Po centrifugavimo esant 32 500 × g (16 500 aps./min. JA 20.5 rotoriuje) 7 minutes 4 oC temperatūroje, sinaptosomos buvo išgaunamos iš 10–23 procentų Percoll juostų ir praskiestos iki 30 ml galutinio tūrio. HEPES buferinė terpė (140 mM NaCl, 5 mM KCl, 5 mM NaHCO3, 1 mM MgCl2﹒ 6H2O, 1,2 mM Na2HPO4, 10 mM gliukozės ir 10 mM HEPES (pH 7,4)). Po tolimesnio centrifugavimo 27, 000 × g (15 000 aps./min. JA 25.5) 10 min., sinaptosomų nuosėdos buvo resuspenduojamos 3 ml HEPES buferinės terpės, o baltymų kiekis buvo nustatytas naudojant Bradfordo testą. Galiausiai 0, 5 mg sinaptosomų suspensijos buvo praskiesta 10 ml HEPES buferinės terpės ir centrifuguojama 3000 × g (5000 aps./min. JA 20.1 rotoriuje) 10 min. Supernatantas buvo išmestas, o granulės, kuriose yra sinaptosomos, buvo laikomos ant ledo ir naudojamos per 4–6 valandas.
cistanche žolė
4.4. Glutamato išsiskyrimas
Glutamato išsiskyrimas buvo tiriamas naudojant internetinę fluorimetriją, kaip aprašyta anksčiau [45, 46]. Sinaptosominės granulės buvo resuspenduotos HEPES buferinėje terpėje (0,5 mg/mL) ir iš anksto inkubuojamos 37 oC temperatūroje 10 min., dalyvaujant 16 uM galvijų serumo albumino, kad surištų visas laisvas riebalų rūgštis, išsiskyrusias iš sinaptosomų išankstinio inkubavimo metu. 2- ml sinaptosomų alikvotinė dalis buvo perkelta į maišomą kiuvetę, kurioje yra 2 mM NADP plius, 50 vienetų glutamato dehidrogenazės ir 1,2 mM CaCl2, o NADPH fluorescencija buvo išmatuota Perkin-Elmer LS{14. }} spektrofluorimetras (PerkinElmer Life and Analytical Sciences, Waltham, MA, JAV), kai sužadinimo ir emisijos bangos ilgiai yra atitinkamai 340 ir 460 nm. Kadangi sinaptosomos nėra atsparios elektrinei stimuliacijai, gliutamato išsiskyrimui skatinti buvo naudojamas kalio kanalų blokatorius 4-aminopiridinas. 4-aminopiridinas destabilizuoja membranos potencialą ir manoma, kad jis sukelia pasikartojančią spontanišką Na ir kanalo priklausomą depoliarizaciją, kuri labai artima sinapsinio terminalo depoliarizacijai in vivo, dėl kurios suaktyvėja nuo įtampos priklausomi Ca2 plius kanalai ir išsiskiria neuromediatorius [47] ]. Duomenys buvo gauti 2 s intervalais. Kiekvieno eksperimento pabaigoje buvo pridėtas egzogeninio glutamato standartas (5 nmol). Fluorescencijos pokyčio, gauto naudojant standartinį pridėjimą, vertė buvo naudojama skaičiuojant išleistą glutamatą kaip glutamato nanomolius viename miligrame sinaptosominio baltymo (nmol/mg). Tekste nurodytos išsiskyrimo vertės yra lygiai, pasiekiami esant pastoviai būsenai po 5 min. depoliarizacijos (nmol/mg/5 min). Kaupiami duomenys buvo analizuojami naudojant Lotus 1-2-3 skaičiuokles (IBM, White Plains, NY, JAV) ir MicroCal Origin (OriginLab Corporation, Northampton, MA, JAV).
4.5. Plazmos membranos potencialas
Plazmos membranos potencialas buvo nustatytas naudojant membranos potencialui jautrius dažus DiSC3(5) [48]. Sinaptosomos buvo resuspenduotos HEPES buferinėje terpėje ir 2 ml alikvotinės dalys buvo perkeltos į maišomą kiuvetę, kurioje yra 5 uM DiSC3(5) 37 oC temperatūroje Perkin-Elmer LS-55 spektrofluorometru (PerkinElmer Life and Analytical Sciences, Waltham, MA, Waltham). , JAV). Leidžiant mišiniui susibalansuoti 3 minutes, fluorescencija buvo nustatyta, kai sužadinimo ir emisijos bangos ilgiai buvo atitinkamai 646 ir 674 nm. Duomenys buvo renkami 2 s intervalais. Suvestiniai duomenys buvo analizuojami naudojant MicroCal Origin (OriginLab Corporation, Northampton, MA, JAV) ir išreikšti fluorescencijos vienetais.
4.6. Citozolinis Ca2 plius koncentracija ([Ca2 plius ]C)
[Ca2 plius ]C buvo matuojamas naudojant Ca2 plius indikatorių fura-2. Sinaptosomos (0,5 mg/mL) buvo iš anksto inkubuojamos HEPES buferinėje terpėje, kurioje yra 5 uM fura-2 ir 0,1 mM CaCl2, 30 min 37 oC temperatūroje maišomame mėgintuvėlyje. . Po fura-2 pakrovimo sinaptosomos buvo centrifuguojamos mikrocentrifugoje 30 s esant 3000 × g (5000 aps./min.). Sinaptosominės granulės buvo pakartotinai suspenduotos HEPES buferinėje terpėje, o sinaptosomų suspensija buvo maišoma termostatuotoje kiuvetėje Perkin-Elmer LS-55 spektrofluorometre (PerkinElmer Life and Analytical Sciences, Waltham, MA, JAV). CaCl2 (1 mM) buvo pridėta po 3 min., o dar po 10 min. Fluorescencijos duomenys buvo kaupiami esant 340 ir 380 nm sužadinimo bangos ilgiams (emisijos bangos ilgis 505 nm) 2 s intervalais. [Ca2 plius ]C (nM) buvo apskaičiuotas naudojant kalibravimo procedūras [49] ir anksčiau aprašytas lygtis [50]. Suvestiniai duomenys buvo analizuojami naudojant MicroCal Origin (OriginLab Corporation, Northampton, MA, JAV).
4.7. Western blotavimas
Sinaptosomos buvo homogenizuotos lizės buferyje (10 mM HEPES buferis, pH 7,4), 1 proc. Triton X-100 ir proteazės inhibitorių mišinyje. Lizatai buvo nuskaidrinti centrifuguojant, o baltymų koncentracija buvo nustatyta naudojant baltymų tyrimo rinkinį (Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA, JAV). Vienodai kiekiai baltymų buvo atskirti natrio dodecilsulfato-poliakrilamido gelio elektroforeze (SDS-PAGE) ir perkelti į nitroceliuliozės membraną. Membranos buvo užblokuotos Tris buferiniu fiziologiniu tirpalu, kuriame buvo 5 procentai neriebaus pieno, ir inkubuojamos su atitinkamu pirminiu antikūnu (fosfoproteinų kinazė C (panelėje), 1:3000, NOVUS Biologicals Inc., Beverly, MA, JAV) per naktį 4 oC. Po trijų plovimų Tris buferiniu tirpalu, membrana buvo apdorota antriniu krienų peroksidazės konjuguotu antikūnu (1:3000) 1 valandą kambario temperatūroje. Tada membranos buvo plaunamos mažiausiai tris kartus Tris buferiniu fiziologiniu tirpalu ir vizualizuotos naudojant patobulintą chemiliuminescencijos sistemą (Amersham, Buckinghamshire, JK). Mėginių alikvotinė dalis buvo pakrauta ir tiriama anti-PKC antikūnu, kad būtų galima aptikti PKC kaip įkrovos kontrolę. Ekspresijos arba fosforilinimo lygis buvo įvertintas pagal juostos tankį, kuris buvo kiekybiškai įvertintas densitometrija. Densitometrinis juostų kiekybinis nustatymas buvo analizuojamas naudojant Syngene programinę įrangą (Synoptics, Kembridžas, JK).
4.8. Statistinė analizė
Duomenys buvo gauti iš vieno sinaptosominio preparato ir nebuvo nepriklausomi vienas nuo kito. Norint patikrinti vaisto ir kontrolės poveikio reikšmę, buvo naudojamas dviejų krypčių Stjudento t testas. Kai prireikė papildomo palyginimo (pvz., ar antrasis gydymas turėjo įtakos echinakozido veikimui), buvo naudojama vienpusė ANOVA, po kurios buvo atliktas Tukey testas. Analizė buvo atlikta naudojant programinę įrangą SPSS (17.0; SPSS Inc., Chicago, IL, JAV). Duomenys išreiškiami kaip vidurkis ± SEM; visų statistinių priemonių reikšmingumas buvo įvertintas esant p <>
cistanche
5. Išvados
Tai pirmasis tyrimas, įrodantis, kad echinakozidas slopina glutamato išsiskyrimą iš žiurkių smegenų žievės sinaptosomų, sumažindamas Ca2 ir Cav2.2 ir Cav2.1 kanalų srautą, ir šis išsiskyrimo slopinimas greičiausiai priklauso nuo proteinkinazės C kelio slopinimo, bent jau dalis. Šis atradimas yra vertingas, nes suteikia naują įžvalgą apie echinakozido veikimo mechanizmus smegenyse.
Padėka: šis darbas buvo paremtas Mokslo ir technologijų ministerijos dotacija (MOST 103-2320-B-030-001 MY3).
Autoriaus indėlis: Tzu Yu Lin ir Su Jane Wang sumanė ir sukūrė eksperimentus; Cheng Wei Lu atliko eksperimentus; Cheng Wei Lu ir Shu Kuei Huang analizavo duomenis; Su Jane Wang parašė darbą.
Interesų konfliktai: autoriai pareiškia, kad nėra interesų konflikto.
cistanche žolelių ekstraktas
Nuorodos
1. Tu, PF; Wang, B.; Deyama, T.; Zhang, ZG; Lou, ZC. Herba cistanchis feniletanoidinių glikozidų analizė RP-HPLC. Acta Pharm. Nuodėmė. 1997, 32, 294–300.
2. Dalby-Brown, L.; Barnettas, H.; Landbo, AK; Meyer, AS; Molgaard, P. Alkalamidų, kavos rūgšties darinių ir polisacharidų frakcijų iš Echinacea purpurea sinerginis antioksidacinis poveikis žmogaus mažo tankio lipoproteinų oksidacijai in vitro. J. Agrič. Food Chem. 2005, 53, 9413–9423. [CrossRef] [PubMed]
3. Dapas, B.; Dall'Acqua, S.; Bula, R.; Agostinis, C.; Perissutti, B.; Invernizzi, S.; Grassi, G.; Voinovich, D. Imunomoduliacija, sąlygota vaistažolių sirupo, kuriame yra standartizuoto ežiuolės šaknų ekstrakto: bandomasis sveikų žmonių citokinų genų ekspresijos tyrimas. Fitomedicina 2014, 21, 1406–1410. [CrossRef] [PubMed]
4. Jis, WJ; Iltis, TH; Tu, PF Echinakozido farmakologinės veiklos tyrimų pažanga. Kinija J. Chin. Mater. Med. 2009, 34, 476–479.
5. Dengas, M.; Zhao, JY; Tu, PF; Jiang, Y.; Li, ZB; Wang, YH Echinacoside gelbsti SHSY5Y neuronų ląsteles nuo TNFalpha sukeltos apoptozės. Euras. J. Pharmacol. 2004, 505, 11–18. [CrossRef] [PubMed]
6. Koo, KA; Sung, SH; Parkas, JH; Kim, SH; Lee, KY; Kim, YC In vitro neuroprotekcinė feniletanoidinių glikozidų veikla iš Callicarpa dichotomos. Planta Med. 2005, 71, 778–780. [CrossRef] [PubMed]
7. Wang, YH; Siuanas, Zhejiangas; Tianas, S.; Du, GH echinakozidas apsaugo nuo 6-hidroksidopamino sukeltos mitochondrijų disfunkcijos ir uždegiminių reakcijų PC12 ląstelėse, sumažindamas ROS gamybą. Evid. Remiantis papildymu. Altern. Med. 2015, 2015, 189239. [CrossRef] [PubMed]
8. Zhu, M.; Lu, C.; Li, W. Laikinas echinakozido poveikis yra pakankamas, kad suaktyvintų Trk signalizaciją ir apsaugotų neuronų ląsteles nuo rotenono. J. Neurochem. 2013, 124, 571–580. [CrossRef] [PubMed]
9. Gengas, X.; Tianas, X.; Tu, P.; Pu, X. Echinakozido neuroprotekcinis poveikis Parkinsono ligos pelių MPTP modelyje. Euras. J. Pharmacol. 2007, 564, 66–74. [CrossRef] [PubMed]
10. Wei, LL; Chen, H.; Jiang, Y.; Tu, PF; Zhong, M.; Du, J.; Liu, F.; Wang, L.; Liu, CY Echinakozido poveikis vidurinės smegenų arterijos okliuzijos žiurkių aktyviosios masės histio-centriniam lygiui. Biomed. Aplinka. Sci. 2012, 25, 238–244. [PubMed]
11. Wu, CR; Linas, HC; Su, MH Vandeninių Cistanche tubulosa ekstraktų panaikinimas nuo elgesio trūkumų į Alzheimerio ligą panašių žiurkių modelio: Amiloido nusėdimo ir centrinio neurotransmiterio funkcijos reikšmė. BMC papildymas. Altern. Med. 2014, 14, 202. [CrossRef] [PubMed]
12. Zhao, Q.; Gao, J.; Li, W.; Cai, D. Echinakozido neurotrofinis ir neurogelbėjimo poveikis poūmiame Parkinsono ligos MPTP pelės modelyje. Brain Res. 2010, 1346, 224–236. [CrossRef] [PubMed]
13. Meldrum, BS Glutamatas kaip neurotransmiteris smegenyse: fiziologijos ir patologijos apžvalga. J. Nutr.2000, 130, 1007S–1015S. [PubMed]
14. Lee, D.; Shim, MS; Kimas, KY; Ne, YH; Kim, H.; Kimas, SY; Weinreb, RN; Ju, WK kofermentas Q10 slopina glutamato eksitotoksiškumą ir oksidacinio streso sukeltus mitochondrijų pokyčius pelės glaukomos modelyje. Ištirti. Oftalmolis. Vis. Sci. 2014, 55, 993–1005. [CrossRef] [PubMed]
15. Choi, DW Kalcis ir eksitotoksinis neuronų pažeidimas. Ann. NY Akad. Sci. 1994, 747, 162–171. [CrossRef][PubMed]
16. Lau, A.; Tymianski, M. Glutamato receptoriai, neurotoksiškumas ir neurodegeneracija. Pflugeriai. Arch. 2010, 460, 525–542. [CrossRef] [PubMed]
17. Sattleris, R.; Tymianski, M. Glutamato receptorių sukeltos eksitotoksinės neuronų ląstelių mirties molekuliniai mechanizmai. Mol. Neurobiol. 2001, 24, 107–129. [CrossRef]
18. Schauwecker, PE Neuroprotekcija glutamato receptorių antagonistais nuo traukulių sukeltos eksitotoksinės ląstelių mirties senstančiose smegenyse. Exp. Neurol. 2010, 224, 207–218. [CrossRef] [PubMed]
19. Yeganeh, F.; Nikbakht, F.; Bahmanpour, S.; Rastegar, K.; Namavar, R. NMDA ir I grupės metabotropinių glutamato receptorių antagonistų neuroprotekcinis poveikis prieš homocisteino sukeltą neurodegeneraciją žiurkių hipokampe: In vivo tyrimas. J. Mol. Neurosci. 2013, 50, 551–557. [CrossRef] [PubMed]
20. Doble, A. Eksitotoksiškumo vaidmuo sergant neurodegeneracinėmis ligomis: pasekmės gydymui. Pharmacol. Ther.1999, 81, 163–221. [CrossRef]
21. Muir, KW Glutamatu pagrįsti terapiniai metodai: klinikiniai tyrimai su NMDA antagonistais. Curr. Nuomonė. Pharmacol. 2006, 6, 53–60. [CrossRef] [PubMed]
22. González, JC; Egėja, J.; del Carmen Godino, M.; Fernandez-Gomez, FJ; Sánchez-Prieto, J.; Gandía, L.; García, AG; Jordanas, J.; Hernández-Guijo, JM neuroprotektantas minociklinas slopina glutamaterginę neurotransmisiją ir Ca2 plius signalizaciją hipokampo neuronuose. Euras. J. Neurosci. 2007, 26, 2481–2495. [CrossRef] [PubMed]
23. Lu, CW; Linas, TY; Wang, SJ Memantinas slopina glutamato išsiskyrimą slopindamas nuo įtampos priklausomą Ca2 plius patekimą ir baltymų kinazę C žiurkės smegenų žievės nervų galuose: nuo NMDA receptorių nepriklausomas mechanizmas. Neurochem. Tarpt. 2010, 57, 168–176. [CrossRef] [PubMed]
24. Wang, SJ; Sihra, TS Nekonkurencinis metabotropinis glutamato 5 receptorių antagonistas (E) -2-metil-6- stirilpiridinas (SIB1893) slopina glutamato išsiskyrimą, slopindamas nuo įtampos priklausomą Ca2 ir patekimą į žiurkės smegenų žievės nervų galūnes (sinaptosomas). J. Pharmacol. Exp. Ten. 2004, 309, 951–958. [CrossRef] [PubMed]
25. Danklis, PR; Jarvie, PE; Heath, JW; Kidd, GJ; Rostas, JA Greitas sinaptosomų išskyrimo Percoll gradientuose metodas. Brain Res. 1986, 372, 115–129. [CrossRef]
26. Arakas, A.; Li, N.; Doyle, RT; Haydon, PG SNARE nuo baltymų priklausomas glutamato išsiskyrimas iš astrocitų.J. Neurosci. 2000, 20, 666–673. [PubMed]
27. Dunlop, J. Glutamatu pagrįsti terapiniai metodai: taikymas į glutamato transportavimo sistemą.
Curr. Nuomonė. Pharmacol. 2006, 6, 103–107. [CrossRef] [PubMed]
28. Zucchi, R.; Ronca-Testoni, S. Sarkoplazminis tinklas Ca2 ir kanalas / rianodino receptorius: endogeninių efektorių, vaistų ir ligos būsenų moduliavimas. Pharmacol. Rev. 1997, 49, 1–51. [PubMed]
29. Ventiliatorius, Y.; Li, J.; Zhang, YQ; Jiang, LH; Zhang, YN; Yan, CQ Baltymų kinazės C delta sąlygotas 6-hidroksidopamino citotoksiškumas per ilgalaikį ekstraląstelinio signalo reguliuojamo kinazės 1/2 aktyvavimą PC12 ląstelėse. Neurol. Res. 2014, 36, 53–64.[CrossRef] [PubMed]
30. Gschwendt, M.; Miuleris, HJ; Kielbassa, K.; Zangas, R.; Kittstein, W.; Rinkė, G.; Marks, F. Rottlerin, naujas proteinkinazės inhibitorius. Biochem. Biofizė. Res. Komun. 1994, 199, 93–98. [CrossRef] [PubMed]
31. Nicholls, DG; Sihra, TS; Sanchez-Prieto, J. Nuo kalcio priklausomas ir nepriklausomas glutamato išsiskyrimas iš sinaptosomų, stebimas nuolatine fluorometrija. J. Neurochem. 1987, 49, 50–57. [CrossRef] [PubMed]
32. Nicoll, RA Neuromediatorių receptorių susiejimas su jonų kanalais smegenyse. Mokslas 1988, 241,545–551. [CrossRef] [PubMed]
33. Wu, LG; Saggau, P. Presinaptinis sukelto neuromediatorių išsiskyrimo slopinimas. Neurosci tendencijos. 1997, 20, 204–212. [CrossRef]
34. Turner, TJ; Dunlap, K. Presinapsinių kalcio kanalų farmakologinis apibūdinimas, naudojant posekundius biocheminius sinaptosominės neurosekrecijos matavimus. Neurofarmakologija 1995, 34, 1469–1478. [CrossRef]
35. Millan, C.; Sanchez-Prieto, J. Diferencinis N ir P/Q tipo kalcio kanalų sujungimas su glutamato egzocitoze žiurkės smegenų žievėje. Neurosci. Lett. 2002, 330, 29–32. [CrossRef]
36. Vazquez, E.; Sanchez-Prieto, J. Presinaptinis glutamato išsiskyrimo moduliavimas nukreiptas į skirtingus kalcio kanalus žiurkės smegenų žievės nervų galuose. Euras. J. Neurosci. 1997, 9, 2009–2018 m. [CrossRef] [PubMed]
37. Ilgas, P.; Merceris, A.; Begumas, R.; Stephensas, GJ; Sihra, TS; Jovanovic, JN nervų terminalo GABAA receptoriai aktyvuoja Ca2 plius / nuo kalmodulino priklausomą signalizaciją, kad slopintų nuo įtampos priklausomą Ca2 plius įtekėjimą ir glutamato išsiskyrimą. J. Biol. Chem. 2009, 284, 8726–8737. [CrossRef] [PubMed]
38. Turner, JR; Kampas, JM; Juoda, ED; Joyal, JL; Maišai, DB; Madara, JL Nuo PKC priklausomas transepitelinio atsparumo reguliavimas: MLC ir MLC kinazės vaidmenys. Esu. J. Physiol. 1999, 277, C554–C562. [PubMed]
39. Vaughanas, PF; Walkeris, JH; Peers, C. Neuromediatorių sekrecijos reguliavimas proteinkinaze C.Mol. Neurobiol. 1998, 18, 125–155. [CrossRef] [PubMed]
40. Coffey, ET; Sihra, TS; Nicholls, DG; Pocock, JM Sinapsino I ir MARCKS fosforilinimą nervų galuose skatina Ca2 plius patekimas per Aga-GI jautrų Ca2 plius kanalą, susietą su glutamato egzocitoze. FEBS Lett. 1994, 353, 264–268. [CrossRef]
41. Obrenovičius, TP; Urenjak, J. Pakeistas glutamaterginis perdavimas esant neurologiniams sutrikimams: nuo didelio ekstraląstelinio glutamato iki pernelyg didelio sinapsinio veiksmingumo. Prog. Neurobiol. 1997, 51, 39–87. [CrossRef]
42. Zhang, D.; Li, H.; Wang, JB Echinakozidas slopina HEWL amiloidinį virpėjimą ir apsaugo nuo A sukelto neurotoksiškumo. Tarpt. J. Biol. Macromol. 2015, 72, 243–253. [CrossRef] [PubMed]
43. Linas, TY; Lu, CW; Vangas, CC; Lu, JF; Wang, SJ Hispidulinas slopina glutamato išsiskyrimą žiurkių smegenų žievės nervų galuose. Toksikolis. Appl. Pharmacol. 2012, 263, 233–243. [CrossRef] [PubMed]
44. Chang, CY; Linas, TY; Lu, CW; Huangas, SK; Wang, YC; Chou, SS; Wang, SJ Hesperidinas slopina glutamato išsiskyrimą ir apsaugo nuo eksitotoksiškumo, kurį sukelia kaino rūgštis žiurkių hipokampe. Neurotoksikologija 2015, 2015, 157–169. [CrossRef] [PubMed]
45. Nicholls, DG; Sihra, TS Synaptosomes turi egzocitotinį glutamato telkinį. Nature 1986, 321, 772–773.[CrossRef] [PubMed]
46. Vangas, CC; Kuo, JR; Wang, SJ Dimebon, antihistamininis vaistas, slopina glutamato išsiskyrimą žiurkių smegenų žievės nervų galuose. Euras. J. Pharmacol. 2014, 734, 67–76. [CrossRef] [PubMed]
47. Tibbs, GR; Barrie, AP; van Mieghem, FJ; Mc-Mahon, HT; Nicholls, DG. Pasikartojantys veikimo potencialai izoliuotuose nervų galuose, esant 4-aminopiridinui: poveikis laisvojo citozolinio Ca2 plius ir glutamato išsiskyrimui. J. Neurochem. 1989, 53, 1693–1699. [CrossRef] [PubMed]
48. Akermanas, KE; Scottas, LG; Heikkila, JE; Heinonen, E. Membraninio potencialo ir su glutamato receptoriais susietų atsakų joninė priklausomybė sinaptoneurosomose, išmatuota cianino dažais, DiSC2(5).J. Neurochem. 1987, 48, 552–559. [CrossRef] [PubMed]
49. Sihra, TS; Bogonez, E.; Nicholls, DG Localized Ca2 plus įvedimas pirmiausia veikia baltymų defosforilinimą, fosforilinimą ir glutamato išsiskyrimą. J. Biol. Chem. 1992, 267, 1983–1989. [PubMed]
50. Grynkevičius, G.; Poenie, M.; Tsien, RY Naujos kartos Ca2 plus indikatoriai su žymiai patobulintomis fluorescencinėmis savybėmis. J. Biol. Chem. 1985, 260, 3440–3450. [PubMed]
