2 DALIS Echinakozidas slopina glutamato išsiskyrimą, slopindamas nuo įtampos priklausomą Ca2 ir baltymų kinazės C patekimą į žiurkės smegenų žievės nervų galus

Norėdami gauti daugiau informacijos, kreipkitės:Joanna.jia@wecistanche.com

SPAUSKITE ČIA, PADĖKITE 1 DALIS

3. Diskusija

Šiame tyrime echinakozidas, aktyvus junginysHerba Cistanche, slopino 4-aminopiridino sukeltą glutamato išsiskyrimą žiurkės smegenų žievės nervų galuose. Čia toliau tiriami ir aptariami galimi pagrindiniai echinakozidų sukelto glutamato išsiskyrimo slopinimo mechanizmai.

Cistanche deserticola turi daug efektų, spustelėkite čia, kad sužinotumėte daugiau

3.1. Mechanizmai, kuriais grindžiamas echinakozidų sukeltas glutamato išsiskyrimo slopinimas

sukeltas 4-aminopiridino, susideda iš dviejų komponentų: fiziologiškai reikšmingo nuo Ca2 plius priklausomo komponento, kuris susidaro sinaptinių pūslelių, turinčių glutamato, egzocitozės metu; ir nuo Ca2 plius nepriklausomas komponentas, atsirandantis dėl užsitęsusios depoliarizacijos, sukeliančios membranos potencialo sąlygotą pastovios glutamato transporterio būsenos poslinkį į išorę, taip paveikdamos citozolinį glutamato ištekėjimą [31]. Čia mes tai pastebėjomeechinakozidasreikšmingai neslopino 4-aminopiridino sukelto glutamato išsiskyrimo esant terpei, kurioje nėra Ca2 plius (nuo Ca2 plius nepriklausomas išsiskyrimas). Be to, pastebėtaechinakozidas- tarpininkaujamo 4- aminopiridino sukelto glutamato išsiskyrimo slopinimo veiksmingai užkirto bafilomicinas A1 (kuris išeikvoja glutamato kiekį sinaptinėse pūslelėse), bet ne DL-TBOA (kuris neselektyviai slopina visus sužadinamųjų aminorūgščių transporterių potipius). Šie rezultatai rodo, kadechinakozidasveikia nuo Ca2 plius priklausomą glutamato išsiskyrimo egzocitozę, nepaveikdamas nuo Ca2 plius nepriklausomo citozolinio glutamato ištekėjimo per nervų galinės plazmos membranos glutamato transporterį. Sinapsiniuose galuose Na plius kanalo slopinimas arba K plius kanalo aktyvinimas stabilizuoja membranos jaudrumą ir dėl to sumažina sukeltą Ca2 plius patekimą ir neuromediatorių išsiskyrimą [32,33]. Todėl galimas mechanizmasechinakozidas- tarpininkaujantis glutamato išsiskyrimo slopinimas apima sinaptosomų sužadinimo sumažėjimą. Tačiau ši galimybė yra nepagrįsta, remiantis dviem pastebėjimais: (1) 4-aminopiridino sukelta membranos potencialo depoliarizacija, išmatuota naudojant membranos potencialui jautrų dažą DiSC3(5), nebuvo paveikta pridėjusechinakozidas; ir (2) echinakozidas neturėjo įtakos 4-aminopiridino sukeltam Ca2 plius nepriklausomam glutamato išsiskyrimui, kuris priklauso tik nuo membranos potencialo [31]. Jei poveikio nesukelia sinaptosomų jaudrumo slopinimas, jis gali pasireikšti sumažinus Cav2.2 (N tipo) ir Cav2.1 (P/Q tipo) Ca2 plius kanalų aktyvumą kartu su glutamato egzocitoze. nervų galūnės [34–36]. Naudodami fura{15}} tai parodomeechinakozidasžymiai sumažina 4-aminopiridino sukeltą Ca2 plius koncentracijos padidėjimą. Be to, mūsų duomenys rodo, kad slopinamasis poveikisechinakozidas4-aminopiridino sukelto glutamato išsiskyrimas sumažėjo nuo 42,4 proc. ˘ 2,3 proc. iki 12,1 proc. ˘ 3,9 proc. po poveikio Cav2.2 (N tipo) ir Cav2.1 (P/Q tipo) Ca2 blokatoriams plius kanalai. Be to, mes tai pastebėjomeechinakozidastoliau reikšmingai slopino 4-aminopiridino sukeltą glutamato išsiskyrimą esant intraceluliniams Ca2 plius išsiskyrimo inhibitoriams. Šie rezultatai rodo, kad galimas mechanizmas yra Cav2.2 (N tipo) ir Cav2.1 (P/Q tipo) Ca2 plius kanalo aktyvumo slopinimas vienu metu.echinakozidas- tarpininkaujamas glutamato išsiskyrimo slopinimas. Tačiau bendras Cav2.2 (N tipo) ir Cav2.1 (P/Q tipo) Ca2 ir kanalo aktyvumas negalėjo blokuotiechinakozidasvisiškai. Taigi, kiti nenustatyti Ca2 plius kanalų tipai arba kiti presinapsiniai keliai gali būti susiję su slopinimu. Pavyzdžiui, GABAA receptoriai yra presinapsiniame lygmenyje, ir įrodyta, kad jų aktyvinimas slopina Ca2 ir glutamato antplūdį bei glutamato išsiskyrimą [37]. Šiame tyrime GABAA receptorių antagonistai SR95531 ir bicuculline neblokavo echinakozidų sukelto glutamato išsiskyrimo slopinimo, o tai rodo, kad GABAA receptoriai nedalyvauja mažinant nuo įtampos priklausomą Ca2 plius kanalo aktyvumą ir vėliau slopinant glutamato išsiskyrimą.

Ca2 plius patekimas per nuo įtampos priklausomus Ca2 plius kanalus suaktyvina keletą baltymų kinazių, susijusių su glutamato išsiskyrimu nervų galuose, įskaitant mitogeno aktyvuotą proteinkinazę, proteinkinazę C ir proteinkinazę A. Čia parodome, kad proteinkinazės C inhibitoriai veiksmingai antagonizuojaechinakozidas-tarpinis glutamato išsiskyrimo slopinimas; nepaisant to, mitogenu aktyvuotas proteinkinazės inhibitorius PD98059 arba proteinkinazės A inhibitorius H89 buvo neveiksmingas. Be to, tai. J. Mol. Sci. 2016, 17, 1006 8 iš 13 4-aminopiridino sukeltas proteinkinazės C fosforilinimas sumažėjo sinaptosomose po išankstinio apdorojimoechinakozidaskurių koncentracija veiksminga slopinant glutamato išsiskyrimą. Todėl signalizacijos keliasechinakozidas- tarpininkaujamas glutamato išsiskyrimo slopinimas gali būti susijęs su baltymų kinaze C. Baltymų kinazė C yra svarbi tarpląstelinė signalizacijos sistema, esanti presinapsiniame lygmenyje ir turinti lemiamą vaidmenį neuromediatorių egzocitozėje. Pavyzdžiui, kai kurie sinaptiniai baltymai, dalyvaujantys sinaptinių pūslelių apyvartoje arba įdarbinimo ir egzocitozės procese, tokie kaip miristoilintas alanino turtingas C kinazės substratas, yra fosforilinami baltymų kinazės C [38, 39]. Šį fosforilinimo procesą galima sustiprinti depoliarizacijos skatinamu Ca2 plius patekimu, kuris palengvina glutamato išsiskyrimą [40]. Taigi galime pagrįstai spėti, kad slopinamasis poveikisechinakozidasČia pastebėtas Ca2 plius patekimas gali sumažinti proteinkinazės C aktyvumą ir atitinkamai glutamato išsiskyrimą.

3.2. Terapinės pasekmės

Eksitotoksiškumas, patologinis procesas, kurį sukelia per didelis glutamato išsiskyrimas ir glutamato receptorių aktyvacija, yra pagrindinė neuronų mirties priežastis esant ūminiams ir lėtiniams smegenų sutrikimams, tokiems kaip insultas, trauminis smegenų pažeidimas, Parkinsono ir Alzheimerio ligos [13,41] ir gydymo strategijos. glutamato išsiskyrimo slopinimas gali būti daug žadančios neuroprotekcinės strategijos gydant tokias ligas.EchinakozidasBuvo patvirtinta, kad jis prasiskverbia pro kraujo ir smegenų barjerą (BBB) ​​ir pasižymi neuroprotekciniu poveikiu įvairiuose in vivo neurotoksiškumo modeliuose [8,10–12,42]. Nors šių neuroprotekcinių poveikių mechanizmas nėra visiškai suprantamas, buvo pranešta apie keletą galimų mechanizmų, įskaitant uždegiminio atsako slopinimą, mitochondrijų funkcijos stabilizavimą, antioksidaciją, laisvųjų radikalų pašalinimą ir neurotrofinės funkcijos mėgdžiojimą [5,9,12,42]. Dabartiniame tyrime echinakozido gebėjimas sumažinti glutamato išsiskyrimą iš nervų galūnių taip pat gali iš dalies paaiškinti jo neuroprotekcinį mechanizmą. Tačiau, ar šis poveikis prisideda prie akivaizdaus terapinio echinakozido potencialo esant smegenų sutrikimams, susijusiems su glutamato eksitotoksiškumu, reikia tolesnių tyrimų.

4. Medžiagos ir metodai

4.1. Chemikalai

Fura-2-acetoksimetilo esteris (Fura-2-AM) ir 3',3',3'-dipropiltiadikarbocianino jodidas [DiSC3(5)] buvo įsigyti iš Invitrogen (Karlsbadas, CA, JAV). ω-konotoksinas MVIIC, rottlerinas, 2-[1-(3-dimetilaminopropil)indol-3-il]-3-(indol-3-il) maleimidas ( GF109203X), 5,6,7,13-tetrahidro-13-metil-5-okso-12H-indolo[2,3-a]pirolo[3,{ {27}}c]karbazolo-12-propannitrilas (Go6976) ir N-[2-(p bromocinamilamino)etil]-5-izochinolinsulfonamidas (H89) buvo įsigyti iš TocrisBioscience (Bristolis, JK). Echinakozidas, dantrolenas, DL-treo-beta-benzil-oksiaspartatas (DL-TBOA), 7-chloro-5-(2-chlorofenilas)-1,5-dihidro -4,1-benzotiazepinas-2(3H)-onas (CGP37157), 2-(2-amino-3-metoksifenilas)-4 Buvo nupirktas H-1-benzopiran-4-onas) (PD98059), etilenglikolio bis(-aminoetilo eteris)-N,N,N1,N1-tetraacto rūgštis (EGTA) ir visi kiti reagentai. iš Sigma-Aldrich Co. (St. Louis, MO, JAV).

4.2. Gyvūnai

Buvo naudojami dviejų mėnesių Sprague-Dawley žiurkių patinai. Gyvūnai buvo laikomi standartizuotomis aplinkos sąlygomis (22 ˘ 1 ˝C; 50 procentų santykinė drėgmė; 12 h šviesos/tamsos ciklas) ir jiems buvo suteikta neribota prieiga prie maisto ir vandens. Gyvūnai buvo nužudyti nukirtus galvą, o smegenų žievė buvo greitai pašalinta 4 °C temperatūroje. Eksperimentines procedūras patvirtino Fu Jen institucinis gyvūnų priežiūros ir naudojimo komitetas (A10259), vadovaudamasis Nacionalinių sveikatos institutų laboratorinių gyvūnų priežiūros ir naudojimo vadovu. Buvo dedamos visos pastangos siekiant sumažinti gyvūnų kančias ir naudoti minimalų gyvūnų skaičių, reikalingą patikimiems rezultatams gauti.

4.3. Sinaptosominiai preparatai

Sinaptosomos buvo išgrynintos iš žiurkių smegenų žievės, naudojant nepertraukiamus Percoll gradientus, kaip aprašyta anksčiau [43, 44]. Trumpai tariant, audinys buvo homogenizuotas terpėje, kurioje yra 0,32 M sacharozės (pH 7,4), homogenatas centrifuguojamas 10 min 3000ˆ g (5{{25). }}00 aps./min. JA 25.5 rotoriuje; Beckman Coulter, Inc., Majamis, FL, JAV) ir 4 ˝C, o supernatantas vėl centrifuguojamas 12 min 14 500 ˆ g ( 11,000 aps./min. JA 25.5 rotoriuje). Nuosėdos buvo švelniai resuspenduojamos 0,32 M sacharozės tirpale (pH 7,4), o šios sinaptosominės suspensijos alikvotinė dalis (2 ml) buvo dedama ant 3 ml Percoll nepertraukiamo gradiento, kuriame yra 0,32 M sacharozės, 1 mM EDTA, 0,25 mililitrų ir 0,25 mililitrų DL. 3 proc., 10 proc. ir 23 proc. Percoll (pH 7,4). Po centrifugavimo esant 32 500 ˆ g (16 500 aps./min. JA 20.5 rotoriuje) 7 minutes 4 ˝C temperatūroje, sinaptosomos buvo išgautos iš 10 % ir 23 % Percoll juostų ir praskiestos iki galutinio 30 ml tūrio. HEPES buferinės terpės (140 mM NaCl, 5 mM KCl, 5 mM NaHCO3, 1 mM MgCl2¨ 6H2O, 1,2 mM Na2HPO4, 10 mM gliukozės ir 10 mM HEPES (pH 7,4)). Po tolesnio centrifugavimo esant 27, 000ˆ g (15 000 aps./min JA 25.5) 10 min., sinaptosomų nuosėdos buvo resuspenduojamos 3 ml HEPES buferinės terpės, o baltymų kiekis buvo nustatytas naudojant Bradfordo testą. Galiausiai 0,5 mg sinaptosomų suspensijos buvo praskiesta 10 ml HEPES buferinės terpės ir centrifuguojama 3000 ˆ g (5000 aps./min. JA 20.1 rotoriuje) 10 min. Supernatantas buvo išmestas, o granulės, kuriose yra sinaptosomos, buvo laikomos ant ledo ir naudojamos per 4–6 valandas.

4.4. Glutamato išsiskyrimas

Glutamato išsiskyrimas buvo tiriamas naudojant internetinę fluorimetriją, kaip aprašyta anksčiau [45, 46]. Sinaptosominės granulės buvo resuspenduotos HEPES buferinėje terpėje (0,5 mg/mL) ir iš anksto inkubuojamos 37 ˝C temperatūroje 10 min., dalyvaujant 16 µM galvijų serumo albumino, kad surištų visas laisvas riebalų rūgštis, išsiskiriančias iš sinaptosomų išankstinio inkubavimo metu. 2- ml sinaptosomų alikvotinė dalis buvo perkelta į maišomą kiuvetę, kurioje yra 2 mM NADP plius, 50 vienetų glutamato dehidrogenazės ir 1,2 mM CaCl2, o NADPH FL fluorescencija buvo išmatuota Perkin-Elmer LS{{ 14}} spektrofluorimetras (PerkinElmer Life and Analytical Sciences, Waltham, MA, JAV), kai sužadinimo ir emisijos bangos ilgiai yra atitinkamai 340 ir 460 nm. Kadangi sinaptosomos nėra atsparios elektrinei stimuliacijai, gliutamato išsiskyrimui skatinti buvo naudojamas kalio kanalų blokatorius 4-aminopiridinas. 4-aminopiridinas destabilizuoja membranos potencialą ir manoma, kad jis sukelia pasikartojančią spontanišką Na ir kanalo priklausomą depoliarizaciją, kuri labai artima sinapsinio terminalo depoliarizacijai in vivo, dėl kurios suaktyvėja nuo įtampos priklausomi Ca2 plius kanalai ir išsiskiria neuromediatorius [47] ]. Duomenys buvo gauti 2 s intervalais. Kiekvieno eksperimento pabaigoje buvo pridėtas egzogeninio glutamato standartas (5 nmol). FL fluorescencijos pokyčio vertė, gauta naudojant standartinį pridėjimą, buvo naudojama apskaičiuojant išleistą glutamatą kaip glutamato nanomolius viename miligrame sinaptosominio baltymo (nmol / mg). Tekste nurodytos išleidimo vertės yra lygiai, pasiekiami esant pastoviai būsenai po 5 min. depoliarizacijos (nmol/mg/5 min). Kaupiami duomenys buvo analizuojami naudojant Lotus 1-2-3 skaičiuokles (IBM, White Plains, NY, JAV) ir MicroCal Origin (OriginLab Corporation, Northampton, MA, JAV).

4.5. Plazmos membranos potencialas

Plazmos membranos potencialas buvo nustatytas naudojant membranos potencialui jautrų dažą DiSC3(5) [48]. Sinaptosomos buvo resuspenduotos HEPES buferinėje terpėje ir 2 ml alikvotinės dalys buvo perkeltos į maišomą kiuvetę, kurioje yra 5 µM DiSC3(5) 37 ˝C temperatūroje Perkin-Elmer LS-55 spektrofluorometru (PerkinElmer Life and Analytical Sciences, Waltham, MA, JAV). Leidžiant mišiniui susibalansuoti 3 minutes, FL fluorescencija buvo nustatyta atitinkamai 646 ir 674 nm sužadinimo ir emisijos bangos ilgiuose. Duomenys buvo renkami 2 s intervalais. Suvestiniai duomenys buvo analizuojami naudojant MicroCal Origin (OriginLab Corporation, Northampton, MA, JAV) ir išreikšti FL fluorescencijos vienetais.

4.6. Citozolinis Ca2 plius koncentracija ([Ca2 plius ]C)

[Ca2 plius ]C buvo matuojamas naudojant Ca2 plius indikatorių fura-2. Sinaptosomos (0,5 mg/mL) buvo iš anksto inkubuojamos HEPES buferinėje terpėje, kurioje yra 5 µM fura-2 ir 0,1 mM CaCl2, 30 min. 37 ˝C temperatūroje maišant bandymą. vamzdis. Po fura-2 pakrovimo sinaptosomos buvo centrifuguojamos mikrocentrifugoje 30 s esant 3000ˆ g (5000 aps./min.). Sinaptosominės granulės buvo pakartotinai suspenduotos HEPES buferinėje terpėje, o sinaptosomų suspensija buvo maišoma termostatuotoje kiuvetėje Perkin-Elmer LS-55 spektrofluorometre (PerkinElmer Life and Analytical Sciences, Waltham, MA, JAV). CaCl2 (1 mM) buvo pridėta po 3 min., o dar po 10 min. Fluorescencijos duomenys buvo kaupiami esant 340 ir 380 nm sužadinimo bangos ilgiams (emisijos bangos ilgis 505 nm) 2 s intervalais. [Ca2 plius ]C (nM) buvo apskaičiuotas naudojant kalibravimo procedūras [49] ir anksčiau aprašytas lygtis [50]. Suvestiniai duomenys buvo analizuojami naudojant MicroCal Origin (OriginLab Corporation, Northampton, MA, JAV).

4.7. Western blotavimas

Sinaptosomos buvo homogenizuotos lizės buferyje (10 mM HEPES buferis, pH 7,4), 1 proc. Triton X-100 ir proteazės inhibitorių mišinyje. Lizatai buvo nuskaidrinti centrifuguojant, o baltymų koncentracija buvo nustatyta naudojant baltymų tyrimo rinkinį (Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA, JAV). Vienodas kiekis baltymų buvo atskirtas natrio dodecilsulfato-poliakrilamido gelio elektroforeze (SDS-PAGE) ir perkeltas į nitroceliuliozės membraną. Membranos buvo užblokuotos Tris buferiniu fiziologiniu tirpalu, kuriame buvo 5 procentai neriebaus pieno, ir inkubuojamos su atitinkamu pirminiu antikūnu (fosfoproteinų kinazė C (panelėje), 1:3000, NOVUS Biologicals Inc., Beverly, MA, JAV) per naktį 4˝C. Po trijų plovimų Tris buferiniu tirpalu, membrana buvo apdorota antriniu krienų peroksidazės konjuguotu antikūnu (1:3000) 1 valandą kambario temperatūroje. Tada membranos buvo plaunamos mažiausiai tris kartus Tris buferiniu fiziologiniu tirpalu ir vizualizuotos naudojant patobulintą chemiliuminescencijos sistemą (Amersham, Buckinghamshire, JK). Mėginių alikvotinė dalis buvo pakrauta ir tiriama anti-PKC antikūnu, kad būtų galima aptikti PKC kaip įkrovos kontrolę. Ekspresijos arba fosforilinimo lygis buvo įvertintas pagal juostos tankį, kuris buvo kiekybiškai įvertintas densitometrija. Densitometrinis juostų kiekybinis nustatymas buvo analizuojamas naudojant Syngene programinę įrangą (Synoptics, Kembridžas, JK).

4.8. Statistinė analizė

Duomenys buvo gauti iš vieno sinaptosominio preparato ir nebuvo nepriklausomi vienas nuo kito. Norint patikrinti vaisto ir kontrolės poveikio reikšmingumą, buvo naudojamas dviejų krypčių Stjudento t testas. Kai prireikė papildomo palyginimo (pvz., ar antrasis gydymas turėjo įtakos echinakozido veikimui), buvo naudojama vienpusė ANOVA, po kurios buvo atliktas Tukey testas. Analizė buvo atlikta naudojant programinę įrangą SPSS (17.0; SPSS Inc., Chicago, IL, JAV). Duomenys išreiškiami kaip vidurkis ˘ SEM; reikšmingumas buvo įvertintas esant p < 0,05="" visoms="" statistinėms="">

5. Išvados

Tai pirmasis tyrimas, įrodantis taiechinakozidasslopina glutamato išsiskyrimą iš žiurkių smegenų žievės sinaptosomų, sumažindamas Ca2 plius antplūdį per Cav2.2 ir Cav2.1 kanalus, ir šis išsiskyrimo slopinimas greičiausiai priklauso nuo baltymo kinazės C kelio slopinimo, bent jau iš dalies. Šis atradimas yra vertingas, nes suteikia naują įžvalgą apie echinakozido veikimo mechanizmus smegenyse.

Padėkos:Šis darbas buvo paremtas Mokslo ir technologijų ministerijos dotacija (MOST 103-2320-B-030-001 MY3).

Autoriaus indėlis:Tzu Yu Lin ir Su Jane Wang sumanė ir sukūrė eksperimentus; Cheng Wei Lu atliko eksperimentus; Cheng Wei Lu ir Shu Kuei Huang analizavo duomenis; Su Jane Wang parašė darbą.

Interesų konfliktai:Autoriai deklaruoja, kad nėra interesų konflikto.

Interesų konfliktai: autoriai pareiškia, kad nėra interesų konflikto.

Nuorodos

1. Tu, PF; Wang, B.; Deyama, T.; Zhang, ZG; Lou, ZC feniletanoidinių glikozidų analizėHerba cistanchepateikė RP-HPLC. Acta Pharm. Nuodėmė. 1997, 32, 294-300.

2. Dalby-Brown, L.; Barrettas, H.; Landbo, AK; Meyer, AS; Molgaard, P. Alkalamidų, kavos rūgšties darinių ir polisacharidų frakcijų iš Echinacea purpurea sinerginis antioksidacinis poveikis žmogaus mažo tankio lipoproteinų oksidacijai in vitro. J. Agrič. Food Chem. 2005, 53, 9413-9423. [CrossRef] [PubMed]

3. Dapas, B.; Dall'Acqua, S.; Bula, R.; Agostinis, C.; Perissutti, B.; Invernizzi, S.; Grassi, G.; Voinovich, D. Imunomoduliacija, sąlygota vaistažolių sirupo, kuriame yra standartizuoto ežiuolės šaknų ekstrakto: bandomasis sveikų žmonių citokinų genų ekspresijos tyrimas. Fitomedicina, 2014, 21, 1406-1410. [CrossRef] [PubMed]

4. Jis, WJ; Iltis, TH; Tu, PF Echinakozido farmakologinės veiklos tyrimų pažanga. Kinija J. Chin. Mater. Med. 2009, 34, 476-479.

5. Dengas, M.; Zhao, JY; Tu, PF.; Jiang, Y; Li, ZB; Wang, YH Echinacoside gelbsti SHSY5Y neuronų ląsteles nuo TNFalpha sukeltos apoptozės. Euras. J. Pharmacol. 2004, 505, 11-18. [CrossRef] [PubMed]

6. Koo, KA; Sung, SH; Parkas, JH; Kim, SH; Lee, KY; Kim, YC In vitro neuroprotekcinė feniletanoidinių glikozidų veikla iš Callicarpa dichotomos. Planta Med. 2005, 71, 778-780. [CrossRef] [PubMed]

7. Wang, YH; Siuanas, Zhejiangas; Tianas, S.; Du, GH echinakozidas apsaugo nuo 6-hidroksidopamino sukeltos mitochondrijų disfunkcijos ir uždegiminių reakcijų PC12 ląstelėse, sumažindamas ROS gamybą. Evid. Remiantis papildymu. Altern. Med. 2015, 2015, 189239. [CrossRef] [PubMed]

8. Zhu, M.; Lu, C.; Li, W. Pakanka trumpalaikio echinakozido poveikio, kad suaktyvintų Trk signalizaciją ir apsaugotų neuronų ląsteles nuo rotenono. J. Neurochem. 2013, 124, 571-580. [CrossRef] [PubMed]

9. Gengas, X.; Tianas, X.; Tu, P.; Pu, X. Echinakozido neuroprotekcinis poveikis Parkinsono ligos pelių MPTP modelyje. Euras. J. Pharmacol. 2007, 564, 66-74. [CrossRef] [PubMed]

10. Wei, LL; Chen, H.; Jiang, Y; Tu, PF.; Zhong, M.; Du, J.; Liu, F.; Wang, L.; Liu, CY Echinakozido poveikis histiocentriniam aktyviosios masės lygiui vidurinės smegenų arterijos okliuzijos žiurkėms. Biomed. Aplinka. Sci. 2012, 25, 238-244. [PubMed]

11. Wu, CR; Linas, HC; Su, MH Apvertimas vandeniniais ekstraktaisCistanche tubulosadėl elgesio trūkumų į Alzheimerio ligą panašiame žiurkės modelyje: svarba amiloido nusėdimui ir centrinio neurotransmiterio funkcijai. BMC papildymas. Altern. Med. 2014, 14, 202. [CrossRef] [PubMed]

12. Zhao, Q.; Gao, J.; Li, W.; Cai, D. Echinakozido neurotrofinis ir neurogelbėjimo poveikis poūmiame Parkinsono ligos MPTP pelės modelyje. Brain Res. 2010, 1346, 224-236. [CrossRef] [PubMed]

13. Meldrum, BS Glutamatas kaip neurotransmiteris smegenyse: fiziologijos ir patologijos apžvalga. J. Nutr. 2000, 130, 1007S-1015S. [PubMed]

14. Lee, D.; Shim, MS; Kimas, KY; Ne, YH; Kim, H.; Kimas, SY; Weinreb, RN; Ju, WK kofermentas Q10 slopina glutamato eksitotoksiškumą ir oksidacinio streso sukeltus mitochondrijų pokyčius pelės glaukomos modelyje. Ištirti. Oftalmolis. Vis. Sci. 2014, 55, 993-1005. [CrossRef] [PubMed]

15. Choi, DW Kalcis ir eksitotoksinis neuronų pažeidimas. Ann. NY Akad. Sci. 1994, 747, 162-171. [CrossRef] [PubMed]

16. Lau, A.; Tymianski, M. Glutamato receptoriai, neurotoksiškumas ir neurodegeneracija. Pflugeriai. Arch. 2010, 460, 525-542. [CrossRef] [PubMed]

17. Sattleris, R.; Tymianski, M. Glutamato receptorių sukeltos eksitotoksinės neuronų ląstelių mirties molekuliniai mechanizmai. Mol. Neurobiol. 2001, 24, 107-129. [CrossRef]

18. Schauwecker, PE Neuroprotekcija glutamato receptorių antagonistais nuo traukulių sukeltos eksitotoksinės ląstelių mirties senstančiose smegenyse. Exp. Neurol. 2010, 224, 207-218. [CrossRef] [PubMed]

19. Yeganeh, F.; Nikbakht, F.; Bahmanpoui; S.; Rastegar, K.; Namavar, R. NMDA ir I grupės metabotropinių glutamato receptorių antagonistų neuroprotekcinis poveikis prieš homocisteino sukeltą neurodegeneraciją žiurkių hipokampe: In vivo tyrimas. J. Mol. Neurosci. 2013, 50, 551-557. [CrossRef] [PubMed]

20. Doble, A. Eksitotoksiškumo vaidmuo sergant neurodegeneracinėmis ligomis: pasekmės gydymui. Pharmacol. Ten. 1999, 81, 163-221. [CrossRef]

21. Muir, KW Glutamatu pagrįsti terapiniai metodai: klinikiniai tyrimai su NMDA antagonistais. Curr. Nuomonė. Pharmacol. 2006, 6, 53-60. [CrossRef] [PubMed]

22. Gonzalez, JC; Egėja, J.; del Carmen Godino, M.; Fernandez-Gomez, FJ; Sanchez-Prieto, J.; Gandia, L.; Garcia, AG; Jordanas, J.; Hernandez-Guijo, JM neuroprotektantas minociklinas slopina glutamaterginę neurotransmisiją ir Ca2 plius signalizaciją hipokampo neuronuose. Euras. J. Neurosci. 2007, 26, 2481-2495. [CrossRef] [PubMed]

23. Lu, CW; Linas, TY; Wang, SJ Memantinas slopina glutamato išsiskyrimą slopindamas nuo įtampos priklausomą Ca2 plius patekimą ir baltymų kinazę C žiurkės smegenų žievės nervų galuose: nuo NMDA receptorių nepriklausomas mechanizmas. Neurochem. Tarpt. 2010, 57, 168-176. [CrossRef] [PubMed]

24. Wang, SJ; Sihra, TS Nekonkurencinis metabotropinis glutamato 5 receptorių antagonistas (E) -2-metil-6- stirilpiridinas (SIB1893) slopina glutamato išsiskyrimą, slopindamas nuo įtampos priklausomą Ca2 ir patekimą į žiurkės smegenų žievės nervų galūnes (sinaptosomas). J. Pharmacol. Exp. Ten. 2004, 309, 951-958. [CrossRef] [PubMed]

25. Danklis, PR.; Jarvie, PE; Heath, JW; Kidd, GJ; Rostas, JA Greitas sinaptosomų išskyrimo Percoll gradientuose metodas. Brain Res. 1986, 372, 115-129. [CrossRef]

26. Arakas, A.; Li, N.; Doyle, RT; Haydon, PG SNARE nuo baltymų priklausomas glutamato išsiskyrimas iš astrocitų. J. Neurosci. 2000, 20, 666-673. [PubMed]

27. Dunlop, J. Glutamatu pagrįsti terapiniai metodai: taikymas į glutamato transportavimo sistemą. Curr. Nuomonė. Pharmacol. 2006, 6, 103-107. [CrossRef] [PubMed]

28. Zucchi, R.; Ronca-Testoni, S. Sarkoplazminis tinklas Ca2 ir kanalas / rianodino receptorius: endogeninių efektorių, vaistų ir ligos būsenų moduliavimas. Pharmacol. Rev. 1997, 49, 1-51. [PubMed]

29. Ventiliatorius, Y.; Li, J.; Zhang, YQ; Jiang, LH; Zhang, YN; Yan, CQ Baltymų kinazės C delta sąlygotas 6-hidroksidopamino citotoksiškumas per ilgalaikį ekstraląstelinio signalo reguliuojamo kinazės 1/2 aktyvavimą PC12 ląstelėse. Neurol. Res. 2014, 36, 53-64. [CrossRef] [PubMed]

30. Gschwendt, M.; Muller, HJ; Kielbassa, K.; Zangas, R.; Kittstein, W.; Rinkė, G.; Marks, F. Rottlerin, naujas proteinkinazės inhibitorius. Biochem. Biofizė. Res. Komun. 1994, 199, 93-98. [CrossRef] [PubMed]

31. Nicholls, DG; Sihra, TS; Sanchez-Prieto, J. Nuo kalcio priklausomas ir nepriklausomas glutamato išsiskyrimas iš sinaptosomų, stebimas nuolatine fluorometrija. J. Neurochem. 1987, 49, 50-57. [CrossRef] [PubMed]

32. Nicoll, RA Neuromediatorių receptorių susiejimas su jonų kanalais smegenyse. Science 1988, 241, 545-551. [CrossRef] [PubMed]

33. Wu, LG; Saggau, P. Presinaptinis sukelto neuromediatorių išsiskyrimo slopinimas. Neurosci tendencijos. 1997, 20, 204-212. [CrossRef]

34. Turner, TJ; Dunlap, K. Presinapsinių kalcio kanalų farmakologinis apibūdinimas, naudojant posekundius biocheminius sinaptosominės neurosekrecijos matavimus. Neuropharmacology, 1995, 34, 1469-1478. [CrossRef]

35. Millan, C.; Sanchez-Prieto, J. Diferencinis N ir P/Q tipo kalcio kanalų sujungimas su glutamato egzocitoze žiurkės smegenų žievėje. Neurosci. Lett. 2002, 330, 29-32. [CrossRef]

36. Vazquez, E.; Sanchez-Prieto, J. Presinaptinis glutamato išsiskyrimo moduliavimas nukreiptas į skirtingus kalcio kanalus žiurkės smegenų žievės nervų galuose. Euras. J. Neurosci. 1997, 9, 2009-2018. [CrossRef] [PubMed]

37. Ilgas, P; Merceris, A.; Begumas, R.; Stephensas, GJ; Sihra, TS; Jovanovic, JN nervų terminalo GABAA receptoriai aktyvuoja Ca2 plius / nuo kalmodulino priklausomą signalizaciją, kad slopintų nuo įtampos priklausomą Ca2 plius srautą ir glutamato išsiskyrimą. J. Biol. Chem. 2009, 284, 8726-8737. [CrossRef] [PubMed]

38. Turner, JR; Kampas, JM; Juoda, ED; Joyal, JL; Maišai, DB; Madara, JL Nuo PKC priklausomas transepitelinio atsparumo reguliavimas: MLC ir MLC kinazės vaidmenys. Esu. J. Physiol. 1999, 277, C554-C562. [PubMed]

39. Vaughanas, PF; Walkeris, JH; Peters, C. Neuromediatorių sekrecijos reguliavimas proteinkinaze C. Mol. Neurobiol. 1998, 18, 125-155. [CrossRef] [PubMed]

40. Coffey, ET; Sihra, TS; Nicholls, DG; Pocock, JM Sinapsino I ir MARCKS fosforilinimas nervų galuose yra tarpininkaujamas Ca2 plius patekimu per Aga-GI jautrų Ca2 plius kanalą, susietą su glutamato egzocitoze. FEBS Lett. 1994, 353, 264-268. [CrossRef]

41. Obrenovičius, TP; Urenjak, J. Pakeistas glutamaterginis perdavimas esant neurologiniams sutrikimams: nuo didelio ekstraląstelinio glutamato iki pernelyg didelio sinapsinio efektyvumo. Prog. Neurobiol. 1997, 51, 39-87. [CrossRef]

42. Zhang, D.; Li, H.; Wang, JB Echinakozidas slopina HEWL amiloidinį virpėjimą ir apsaugo nuo Ap sukelto neurotoksiškumo. Tarpt. J. Biol. Macromol. 2015, 72, 243-253. [CrossRef] [PubMed]

43. Linas, TY; Lu, CW; Vangas, CC; Lu, JF; Wang, SJ Hispidulinas slopina glutamato išsiskyrimą žiurkių smegenų žievės nervų galuose. Toksikolis. Appl. Pharmacol. 2012, 263, 233-243. [CrossRef] [PubMed]

44. Chang, CY; Linas, TY; Lu, CW; Huangas, SK; Wang, YC; Chou, SS; Wang, SJ Hesperidinas slopina glutamato išsiskyrimą ir apsaugo nuo eksitotoksiškumo, kurį sukelia kaino rūgštis žiurkių hipokampe. Neurotoksikologija 2015, 2015, 157-169. [CrossRef] [PubMed]

45. Nicholls, DG; Sihra, TS Synaptosomes turi egzocitotinį glutamato telkinį. Nature 1986, 321, 772-773. [CrossRef] [PubMed]

46. ​​Vangas, CC; Kuo, JR; Wang, SJ Dimebon, antihistamininis vaistas, slopina glutamato išsiskyrimą žiurkių smegenų žievės nervų galuose. Euras. J. Pharmacol. 2014, 734, 67-76. [CrossRef] [PubMed]

47. Tibbs, GR; Barrie, AP; van Mieghem, FJ; Mc-Mahon, HT; Nicholls, DG. Pasikartojantys veikimo potencialai izoliuotuose nervų galuose, esant 4-aminopiridinui: poveikis laisvojo citozolinio Ca2 plius ir glutamato išsiskyrimui. J. Neurochem. 1989, 53, 1693-1699. [CrossRef] [PubMed]

48. Akermanas, KE; Scottas, LG; Heikkila, JE; Heinonen, E. Jonų priklausomybė nuo membranos potencialo ir su glutamato receptoriais susijusių atsakų sinaptoneurosomose, išmatuota naudojant cianino dažus DiSC2(5). J. Neurochem. 1987, 48, 552-559. [CrossRef] [PubMed]

49. Sihra, TS; Bogonez, E.; Nicholls, DG Lokalizuotas Ca2 plius įvedimas pirmiausia veikia baltymų defosforilinimą, fosforilinimą ir glutamato išsiskyrimą. J. Biol. Chem. 1992, 267, 1983-1989. [PubMed]

50. Grynkevičius, G.; Poenie, M.; Tsien, RY Naujos kartos Ca2 plus indikatoriai su žymiai patobulintomis fluorescencinėmis savybėmis. J. Biol. Chem. 1985, 260, 3440-3450. [PubMed]