Floridzinui jautrus echinakozido ir akteozido pernešimas ir pakitęs absorbcijos žarnyne būdas, panaudojus Cistanche tubulosa ekstraktą

Daugiau informacijos:ali.ma@wecistanche.com

Tadatoshi Tanino ir kt

AbstractObjectives

Šio tyrimo tikslas buvo ištirti teigiamą poveikįCistanche tubulosa ekstraktasdėl mažo echinakozido (ECH) ir akteozido (ACT) pralaidumo žarnyne gerinimo.

Metodai

ECH ir ACT absorbcijaCistanche tubulosa ekstraktasbuvo apibūdinta naudojant žmogaus žarnyno Caco{0}} ląstelių monosluoksnius su nepažeistais junginiais. Nuo gliukozės transporterio priklausoma ECH ir ACT absorbcija buvo patvirtinta perfuzijos in-situinteinine technika.

Pagrindinės išvados

Tariamasis pralaidumas (Papp) nepažeistos ECH ir nepažeistos ACT reikšmingai nesiskyrė. Esant floridzinui, didelėmis dozėmis ECH ir ACT Papp buvo sumažintas iki 20 procentų atitinkamo negydymo, tačiau floretinas ir verapamilis jo nepakeitė.Cistanche tubulosa ekstraktasmažos ir didelės dozės padidino ECH ir ACT Papp (abu tris kartus), todėl jie aktyviai dalyvavo nuo natrio priklausomoje nuo gliukozės transporterio nepriklausomoje absorbcijoje. Esant mažai koncentracijai, phloridzinas reikšmingai slopino tuo pačius ECH ir ACT lygius portalo kraujyje.

Išvada

Dietiniai ir vaistiniaiCistanche tubulosa ekstraktasECH ir ACT absorbcijos žarnyne gerinimas gali padėti geriau valdyti žmonių sveikatą, nors floridzinui jautraus pernešimo dalyvavimas turėtų būti sumažintas.

Raktažodžiaiakteozido; Caco{0}} ląstelių monosluoksniai;Cistanchetubulosa ekstraktas; echinakozidas;phloridzinui jautrus gliukozės pernešėjas

Cistanche tubulosa ekstraktas

Spustelėkite Cistanche tubulosa miltelius

Įvadas

Cistanche tubulosa šaknys tradiciškai buvo naudojamos vaistams ir maistui.Cistanche tubulosa ekstraktasYra žinoma, kad jis turi farmakologinį poveikį įvairioms smegenų ligoms, senėjimą stabdančioms funkcijoms, riebalų apykaitai ir plaukų augimui.[1–4]Pastaruoju metu iridoidai, monoterpenoidai, feniletanoidiniai glikozidai ir lignanai buvo išskirti išCistanche tubulosa[5,6] Feniletanoidiniai glikozidai, polifenolinių junginių klasė, yra pagrindinės Cistanche rūšių cheminės sudedamosios dalys[7], nors jų kiekis įvairiose rūšyse skiriasi. Echinakozidas (ECH; 1 pav.) yra vienas iš pagrindinių feniletanoidinių glikozidų HerbaCistanchis. Jį hidrolizuoja į akteozidą (ACT; dar vadinamas verbaskozidu) storojoje žarnoje veikiant bakterinės kilmės fermentams.[8,9] ECH ir ACT pasižymi naudingu hepatoprotekcijos[10] ir priešuždegiminiu[11] aktyvumu graužikams. Keista, bet labai vandenyje tirpus ECH pagerina elgesio ir neurocheminius rezultatus Parkinsono ligos pelių modelyje ir slopina kaspazės{10}} ir kaspazės{11}} aktyvaciją smegenėlių granulių neuronuose.[9] Gerai žinoma, kad hematoencefalinis barjeras griežtai riboja ksenobiotikų patekimą ir pasiskirstymą į smegenis iš kraujo. Wu ir kt.[12] taip pat parodė, kad vandenyje tirpus ACT greitai pasiskirstė žiurkių smegenų audiniuose. Todėl ECH ir ACT gali būti pernešami į smegenis, žarnyną ir kepenis naudojant specifinę (-es) sistemą (-as).

Nors yra svarių įrodymų, leidžiančių manyti, kad vartojantCistanche tubulosa ekstraktasyra naudingas žmonių sveikatai, gryno ECH pralaidumas per Caco{0}} ląstelių monosluoksnius, kai viršūninė koncentracija yra 8,4 ± 1,6 ug/ml, lygi arba mažesnė už paraląstelinio transportavimo žymens manitolį.[13] Kai žiurkėms skiriamas grynas ECH (dozė, 1{{10}}0 mg/kg), absorbcija yra itin greita (Tmax, 15 min.), o didžiausia koncentracija serume yra labai maža. (Cmax, 0,61 ± 0,32 ug/ml).[14] Absoliutus ECH biologinis prieinamumas yra tik 0,83 proc. Panašiai, kai Caco-2 ląstelės yra inkubuojamos su fenolio frakcija, iš dalies išvalyta iš alyvuogių malūno nuotekų, grynas ACT įsisavinamas greitai, o didžiausias kaupimasis įvyksta po 30 min., o bendras kaupimosi efektyvumas yra 0,1 proc., todėl ląstelės viduje yra 130 pmol/mg ląstelės baltymo.[15] Didžiausia gryno ACT koncentracija (0,13 ± 0,03 ug/ml) žiurkėms buvo pasiekta per 30 minučių po geriamojo 100 mg/kg dozės[12], o tai reiškia, kad jis greitai absorbuojamas iš žarnyno. Geriamasis ACT, taip pat ECH, biologinis prieinamumas yra gana mažas (0,12 ± 0,04 proc.), o tai rodo, kad žarnyno trakte ir kepenyse gali pasireikšti pirmojo prasiskverbimo poveikis. Žiurkių tulžyje ECH metilinimo ir gliukuronizacijos konjugatai yra pagrindiniai metabolitai[16], nors metabolizmo kepenyse mastas lieka neaiškus. Preliminariai nustatėme, kad ECH ir ACT buvo gana stabilūs žiurkių žarnyno gleivinės ir dirbtinės skrandžio rūgšties homogenatuose (duomenys nerodomi). Najar ir kt.[17] parodė, kad ACT slopina P-glikoproteino (P-gp)-ATPazės aktyvumą panašiai kaip verapamilis (reprezentatyvus P-gp inhibitorius), o tai reiškia P-gp moduliatorių; tačiau neaišku, ar ACT yra kaip P-gp substratas. Įdomu tai, kad naujausi maisto flavonoidų-D-gliukozidų radiniai parodė, kad nuo daugelio vaistų atsparumo baltymas (MRP2) užmaskuoja nuo natrio priklausomą gliukozės transporterį (SGLT) 1-tarpininkaujantį kvercetino 4′-O- -gliukozės įsisavinimą[18]. ,19], kuri yra atsakinga už labai prastą absorbciją. Tačiau labai mažai žinoma apie polifenolinius gliukozidus sugeriančių pernešėjų, įskaitant gliukozės pernešėjus, jautrumą. Informacija apie kvercetino 4′-gliukozido absorbcijos ypatybes ir greitai kraujo smegenų barjerą pralaidų ECH paskatino mus ištirti glikozidų pernešimui jautrų dietinį glikozidą. kanalėlių.

Šiame tyrime mes ištyrėme gliukozės transporterio sukeltą nepažeisto ECH ir ACT absorbciją, naudodami žmogaus žarnyno Caco{1}} ląstelių monosluoksnius. Tuo pačiu metu ECH ir ACT absorbcijos pernešimas kartu su maistuCistanche tubulosa ekstraktaspasižymėjo in vitro modeliu ir in situ žarnyno perfuzijos sistema su portalo kraujo mėginių ėmimu, pagal kurį galima lengvai atskirti absorbcijos mastą ir vengimą pirmojo prasiskverbimo kepenyse.

Medžiagos ir metodai

Medžiagos

Nepažeistas ECH ir ACT buvo dosnios dovanos iš EishinTrading Co., Ltd (Osaka, Japonija). Phloridzinas ir floretinas buvo įsigyti iš Tokyo Kasei Co., Ltd. (Tokijas, Japonija). Verapamilis ir p-kumaro rūgštis, naudojami kaip vidiniai aukštos kokybės skysčių chromatografijos (HPLC) tyrimo standartai, buvo gauti iš Sigma-Aldrich (St Louis, MO). , JAV). Visos kitos naudojamos cheminės medžiagos buvo analitinės kokybės ir parduodamos.

Augalinė medžiaga ir teminio ekstrakto paruošimas

C. tubulosa (SCHRENK) R. WIGHT (Orobanchaceae) yra daugiametis parazitinis augalas, augantis ant Salvadoraor Calotropis rūšių šaknų ir paplitęs Šiaurės Afrikos, Arabijos ir Azijos šalyse. Džiovinti C. tubulosa stiebai buvo sumalti į miltelius ir tris kartus ekstrahuoti metanoliu ir kaitinant su grįžtamu šaldytuvu 3 valandas. Išgarinant tirpiklį, sumažintas slėgis, gaunamas metanolinis ekstraktas. Teminis ekstraktas (komercinės klasės, partijos Nr. 20070130; registro prekės pavadinimas, Sabaku Ninnjinn Kanka) buvo dosni Eishin Trading Co., Ltd dovana per Muraoką ir Morikavą (Kinki universitetas, Japonija), o botaninį identifikavimą atliko profesorius Jia Xiaoguangas m. Sindziango tradicinės kinų ir etnologijos institutas.

Augalų ekstrakto analizė: chromatografija

Mes nustatėme ECH ir ACT turinįCistanche tubulosa ekstraktas(partijos Nr. 20070130) HPLC analize, aprašyta toliau. Gauti duomenys pateikti 1 lentelėje.

Ląstelių kultūros

Caco{{0}} ląstelės, įsigytos iš American Type CultureCollection (ATCC, Rockville, MD, JAV), buvo naudojamos 38–53 kanaluose. Jie buvo auginami auginimo terpėje, sudarytoje iš Dulbecco modifikuotos Erelio terpės (DMEM, Nacalai Tesque Co., Kiotas, Japonija), papildytos 0,1 mM nepakeičiamomis aminorūgštimis, 10 procentų šiluma inaktyvuoto galvijų vaisiaus serumo, 100 V/ml penicilino G ir 0,1 mg/ml streptomicino sulfato.

Transporto studijos

Caco{0}} ląstelės buvo padengtos 6,4 × 103 ląstelių/cm2 tankiu ant polikarbonato filtrų. Vieno sluoksniai buvo naudojami transportavimo eksperimentams praėjus 21–25 dienoms po sėjos. Nepažeisti ECH ir ACT, kurie buvo lygiaverčiai jų turiniuiCistanche tubulosa ekstraktas (4.5 and 13.5 mg/ml) were mixed with DMEM medium containing 0.5% dimethylsulfoxide to maintain the integrity of the cell monolayer over the periods of the experiments. Intact ACT equivalent to ECH content in the extract was also dosed in the incubation medium. The extract was suspended in a DMEM medium and was centrifuged to remove insoluble components. Supernatants were loaded to the apical side. At the indicated times, an aliquot of the incubation medium was withdrawn from the basolateral side and was mixed with acetonitrile containing an internal standard for the assay. In separate experiments, phloridzin (final concentration, 1 mM) and verapamil (final concentration, 0.2 mM) was added to the apical side of the monolayer; however, phloretin (final concentration, 0.3 mM) was treated on both sides of the monolayer. The integrity of monolayers was monitored by transepithelial electrical resistance (TEER) using Millicell-ERS (Millipore, Bedford, MA, USA) before and after transport experiments. TEER values of monolayers used were >300 Ω·cm2.

Echinakozidas vidujeCistanche tubulosa ekstraktas

In situ žarnyno perfuzija

Wistar žiurkių patinai (230–250 g) buvo gauti iš SLCJapan (Hamamatsu, Japonija). Prieš naudojimą gyvūnai buvo laikomi patalpoje su oro kondicionieriumi pagal 12 valandų šviesos / tamsos ciklą 1 savaitę. Žiurkės buvo šeriamos standartiniu laboratoriniu maistu (Oriental Yeast Co., Ltd., Tokijas, Japonija) vandeniu ad libitum ir buvo nevalgiamos per naktį prieš bandymą. In siturecirculating perfuzijos tyrimas buvo atliktas pagal modifikuotą procedūrą, aprašytą Mihara ir kt. [20] Trumpai tariant, žiurkės buvo anestezuojamos 25 procentų uretano tirpalu (1 mg/kg), kad būtų išvengta kraujospūdžio sumažėjimo. Buvo padarytas vidurinės pilvo linijos pjūvis ir atskleista plonoji žarna. Tulžies latakas buvo perrištas, kad būtų išvengta tulžies sekrecijos į perfuzą. Visa plonoji žarna kaip vienas segmentas (nuo dvylikapirštės žarnos iki klubinės žarnos) buvo skalaujamas įprastu fiziologiniu tirpalu 37 laipsnių temperatūroje 10 minučių, kol plovimas pasirodė skaidrus. Stikliniai vamzdeliai, sujungti su silikoniniais vamzdeliais, buvo įkišti į abu plonosios žarnos galus ir pritvirtinti siūlų siūlu. Tada pilvo srityje buvo pakeistos plonosios žarnos, o kaniulės buvo prijungtos prie peristaltinio siurblio. Vartų vena buvo kaniuliuota polietileno vamzdeliu (PE10).Cistanche tubulosa ekstraktasprekyboje buvo suspenduotas Krebs-Henseleit bikarbonato buferyje (pH 7,4), kad galutinė koncentracija būtų 4,5 mg/ml, ir centrifuguota 10 min 8000 aps./min., kad būtų pašalinti netirpūs komponentai. Supernatantas, kuriame nėra arba nebuvo floridzino (1 mM), buvo surinktas į rezervuarą, kurio temperatūra buvo palaikoma 37 ± 0,5 laipsnio per visą eksperimento eigą. Nurodytu laiku kraujas buvo paimtas per vartų venos kaniulę. Centrifugavus kraujo mėginius, gautos plazmos baltymai buvo pašalinti acetonitrilu, turinčiu vidinį etaloną, ir centrifuguojami 3000 aps./min. Supernatantai buvo išgarinti, o liekana ištirpinama judriąja faze, susidedančia iš acetonitrilo ir 0,5 % acto rūgšties. Sumaišytas tirpalas buvo įkeltas į HPLC kolonėlę. Žiurkės buvo naudojamos laikantis etinių procedūrų pagal Japonijos vyriausybės ir Kinki universiteto išleistas laboratorinių gyvūnų priežiūros ir naudojimo gaires.

HPLC analizė

HPLC analizė buvo atlikta naudojant sistemą su aShimadzu SPD{{0}}A, UV detektoriumi, Shimadzu LC-10A pompa ir Shimadzu C-R4A chromatopac integratoriumi (Kiotas, Japonija). ECH ir ACT buvo atskirti naudojant Inertsil ODS kolonėlę (5 μm, 4,6 × 150 mm, GL Sciences Inc., Osaka, Japonija). Naudota judri acetonitrilo ir 0,5 % acto rūgšties fazė santykiu 15:85 (t/v), esant 1,0 ml/min srauto greičiui. Aptikimas buvo atliktas esant 334 nm

Kinetinė analizė

Tariamasis pralaidumo koeficientas (Papp) buvo apskaičiuotas pagal junginio pernešimo per Caco-2 ląstelių monosluoksnius linijinės laiko dalies nuolydį: P dQ dt AC programa=( ) ( )

čia dQ/dt yra pralaidumo koeficientas, C0 yra pradinė tirpios medžiagos koncentracija donoro kameroje, o A yra membranos paviršiaus plotas (4,7 cm2).

Atliekant in situ žarnyno perfuzijos tyrimą su žiurkėmis, plotas po plazmos koncentracijos ir laiko kreive (AUC{2}}–90) vartų venoje nuo nulio iki paskutinio matavimo buvo apskaičiuotas pagal tiesinę trapecijos taisyklę.

Akteozidas vidujeCistanche tubulosa ekstraktas

Fizikinės ir cheminės savybės

Junginių polinio paviršiaus ir nepolinio paviršiaus plotas buvo apskaičiuotas naudojant SAS programą (versija 0.8, Olsson, T.; Sherbukhin, V., Synthesis and Structure Administration, 1997–2001, AstraZeneca, Cary , NC, JAV). Eksperimentiškai nustatytos log P ir pKa reikšmės buvo gautos iš literatūros.

Statistinė analizė

Duomenys buvo analizuojami naudojant vienpusę dispersijos analizę, po kurios buvo atliktas Tukey post-hoc testas. Tikimybių reikšmės, mažesnės nei 5 procentai, buvo laikomos reikšmingomis.

Rezultatai

Echinakozido ir akteozido absorbcinis pernešimas per Caco{0}} ląstelių monosluoksnius

Pelėms ir žiurkėms nepažeistas ECH[10,14] ir ACT[12,21] vartojamas per burną 100–1000 mg/kg dozėmis. TheCistanche tubulosa ekstraktasvienoje dozėje buvo maždaug 30 procentų ECH ir 15 procentų ACT. Kadangi ekstraktas keitė osmosinį slėgį ir pH inkubacinėje terpėje, 4,5 ir 13,5 mg/ml koncentracijos buvo nustatytos pagal geriamąją dozę (nepažeisti junginiai: 2–20 mg/2{{2{{31} }}} g kūno svorio) pelėms. Mažų (4,5 mg/ml) ir didelių (13,5 mg/ml) dozių ekstrakte buvo 2.0 ir 6,1 mg ECH ir 1.{35}} ir atitinkamai 3.{39}} mg ACT. Mes naudojome C. tubulosa ekstrakto kiekius, kurie buvo daug mažesni nei geriamosios ECH ir ACT dozės, apie kurias pranešta žmonėms (rekomenduojama su maistu gaunama ekstrakto norma: 15{41}} mg, kuriame yra maždaug 45 mg forECH ir 22,5 mg ACT). Vartojant mažas ir dideles nepažeistų junginių dozes, absorbcijos profiliai (2 pav.) ir Papp reikšmingai nesiskyrė tarp ECH ir ACT kaip ECH ekvivalento (2 lentelė). Kai į terpę buvo įdėta C. tubulosa ekstrakto didele 13,5 mg/ml doze, Pappvalues ​​(atitinkamai 1,27 ± 0,13 ir 0,34 ± 0,03 × 10-6 cm/s) ECH ir ACT kartu buvo tris kartus didesnis nei nepažeistų ECH ir ACT (atitinkamai 0,38 ± 0,09 ir 0,10 ± 0,03 × 10–6 cm/s) (2 lentelė). Ekstraktas, skirtingai nei nepažeisti junginiai, žymiai padidino ECH ir ACT absorbcijos transportą.

Slopinantis floridzino, floretino ir verapamilio poveikis

To characterize the intestinal absorption of ECH and ACT, Caco-2 cell monolayers were incubated with representative inhibitors. Apical glucose transporter 1-sensitive phloridzin dramatically reduced the Papp of intact ECH and ACT to 20% of non-treatment at the high dose (Table 2). Basolateral glucose transporter (GLUT) 2-sensitive phloretin did not decrease the transport of intact ECH and ACT (Figure 3). In this study, higher concentrations (>0,3 mM) floretino negalima naudoti dėl pastebimo toksiškumo ląstelėms. Be to, nustatyta, kad P-gp yra svarbus veikėjas, atsakingas už augalinių vaistų ir kliniškai svarbių P-gpsubstratų sąveiką. Verapamilis nepadidino nepažeistų junginių absorbcinio transportavimo (3 pav.).

ECH ir ACT absorbcinį transportavimą ekstrakte (maža dozė) žymiai slopino floridzinas (2 lentelė ir 4 pav.). Didelės dozės ekstraktas slopino floridzinui jautrų slopinimą, nors nepažeisto ECH ir ACT pernešimas buvo jautresnis floridzinui (2 lentelė).

In situ žarnyno perfuzijos tyrimas

In situ tyrime išbandėme, ar ECH ir ACT yraCistanche tubulosa ekstraktasbuvo gabenami SGLT1, esančiu plonosios žarnos viršūnėje. Kai buvo perfuzuojamas mažos dozės (4, 5 mg/ml) dietinis ekstraktas, ECH ir ACT greitai atsirado portalo kraujyje (5 pav.). AUC buvo nustatytas kaip 2702,8 ± 384,1 μm · min ECH ir 698,3 ± 197,2 μm · min ACT. Po to, kai AUC buvo normalizuotas su turiniu nuoCistanche tubulosa ekstraktas, absorbuojamas kiekis reikšmingai nesiskyrė tarp ECH ir ACT. SGLT{0}}jautrus floridzinas, skirtingai nei floretinas, reikšmingai slopino ECH (AUC, 649,4 ± 248,2 μm·min) ir ACT (neaptikta) absorbcinį transportavimą.

Diskusija

Kai kurie augaliniai ingredientai yra P-gp substratai, labai ekspresuojami kepenyse, žarnyne, smegenyse ir inkstuose. P-gp yra lemiamas augalinių preparatų, įskaitant jonažolės, kurkumino, ežiuolės, ženšenio, ginkmedžio ir imbiero, biologinio prieinamumo in vivo, išsidėstymo ir pasiskirstymo veiksnys.[22,23]Genisteino biologinis prieinamumas{5} }gliukozidą, flavonoidų darinį, taip pat ribojo žarnyno MRP2 transporteris.[24] Todėl šis tyrimas buvo skirtas ištirti ECH ir ACT kartu vartojamų maisto ir vaistų absorbcijos savybes.Cistanche tubulosa ekstraktas.

Poliarizuoti Caco{0}} ląstelių monosluoksniai, taip pat žarnynas[25], išreiškia pagrindinius žarnyno vaistų ištekėjimo pernešėjus, tokius kaip P-gp, MRP ir atsparumo krūties vėžiui baltymai.[26]Maisto flavonoidai. buvo įrodyta, kad kvercetino[27] ir miricetino[28] slopina P-gp sukeltą išsiliejimą tiek ląstelių linijose, tiek gyvūnų modeliuose. Verapamilis, P-gp inhibitorius, nepakeitė ACT ir ECH pralaidumo per Caco-2 ląstelių monosluoksnius (3 pav.), o tai rodo, kad nepažeistos ECH ir ACT neapribojo P-gp ištekėjimo siurblys. Mūsų ankstesni tyrimai parodė, kad MRP2 baltymai nebuvo ekspresuojami Caco{13}} ląstelių monosluoksniuose.[29] P-gp ir MRP{16}}tarpininkaujantis ištekėjimas gali būti neįtrauktas į ECH ir ACT transportavimą. Kai kurie žemo lipofiliškumo kvercetino glikozidai buvo absorbuojami efektyviau nei pats kvercetinas.[30] Taip pat svarbu pažymėti, kad ACT su cukraus dalimi greitai pasiskirsto smegenų audiniuose. Mūsų dėmesys buvo sutelktas į dviejų gliukozės pernešėjų inenterocitų bendrą veikimą: SGLT šepetėlio sienelės membranoje ir palengvintą difuzinį gliukozės transportavimą (GLUT) bazolaterinėje membranoje. Caco-2 ląstelių kultūra gali būti naudojama kaip modelis tiriant floretinui jautrius GLUT2, ir floridzinui jautrius SGLT1 ir 2 pernešėjus.[31–34]Gliukozė pernešama iš Caco-2 monosluoksnių viršūnės į bazolaterinę pusę. dideliu greičiu su Pappof 36,8 ± 1,1 × 10–6 cm/s.[35] Jame yra didesnis pappthan, tarpląstelinio transportavimo žymeklis propranololis (23,4 ± 2,8 × 10-6 cm/s). Kaip parodyta 2 lentelėje, nepažeisto ECH ir ACT Papp buvo daug mažesnis nei nurodytas gliukoze ir pasyviajame propranololyje. Apskaičiavome pasiskirstymo koeficiento (oktanolis-vanduo), log P, logaritmą atitinkamai –2,32 ir 0,077 ECH ir ACT. Manoma, kad poliariniai hidrofiliniai junginiai yra pernešami paraląsteliniu keliu (per tankias jungtis). Atrodo, kad du feniletanoidiniai glikozidai, kaip ir manitolis, yra transportuojami tarpląsteliniu keliu. Tačiau phloridzinas smarkiai sumažino nepažeistos ECH ir ACT absorbcinį pralaidumą (2 lentelė), o tai rodo, kad apicalSGLT1 vaidina pagrindinį vaidmenį nepažeistos ECH ir ACT absorbcijos žarnyne. Vartojant lygiavertę dozę, didesnis hidrofobinis ACT pralaidumas buvo artimas ECH pralaidumui (2 pav. ir 2 lentelė). Yoshikawa ir kt.[36] parodė, kad palengvinantys transporteriai (GLUT 1 ir 2), taip pat floridzinui jautrūs SGLT1, intensyviai ekspresuojami plonojoje žarnoje. Kadangi absorbuoti junginių kiekiai yra pagrįsti masės balansu tarp įsisavinimo ir pašalinimo, įvertinome GLUT2 dalyvavimą. Gliukozė kerta viršūnines enterocitų membranas SGLT1 su dideliu afinitetu ir mažu pajėgumu ir išeina per bazolaterinę membraną per GLUT2 su mažu afinitetu ir dideliu pajėgumu. Floretinas (specifinis GLUT2 inhibitorius) nepanaikino nepažeisto ECH ir ACT transportavimo (3 pav.). Funes ir kt.[37] parodė, kad ACT stipriai sąveikavo su fosfolipidų membranų fosfatų grupėmis. Kadangi ACT struktūroje yra daug hidroksilo grupių, vandenilio ryšiai tarp šių grupių ir glicerolio poliarinių galvučių arba fosfolipidų fosfato grupių yra labiausiai tikėtina sąveika. Kai nepažeistas ECH ir jo ekvivalentas ACT buvo inkubuojami su Caco-2 vienasluoksniais sluoksniais 11 valandų, ACT kaupimasis ląstelėse (0,24 ± 0,04 nmol/cm2) buvo tris kartus didesnis nei ECH (0,07 ± 0,01 nmol/cm2). Manėme, kad SGLT{74}}jautri ECH ir ACT buvo lėtai perkeliami iš enterocitų į kraują, todėl galbūt buvo pastebėtas žemas PAPP. Palyginti su labai hidrofiliniu ECH, mažas ACT pralaidumas gali būti dėl įsiterpimo į ląstelių membranas.

Cistanche tubulosa ekstraktas

Klinikinio naudojimo metu polifenoliniai junginiai vartojami žolelių mišiniuose ir yra parduodami kaip maisto papildai. In vitro atliktas tyrimas parodė, kad fenolio epikatechino absorbcijai įtakos neturėjo gėrimų maistinių medžiagų sudedamųjų dalių sudėtis.[38] Priešingai, Hypericum perforatumL. produktų matricos veikia kvercetingliukozidų (rutino ir izokvercitrino) ir hiperozidų pernešimą per Caco-2 ląsteles dėl matricos fitocheminės sudėties ir transportavimo savybių skirtumų, ty tarpląstelinio pernešimo ir nešiklio ar aktyvaus pernešimo.[39] Šiame tyrime C. tubulosa suteikė tris kartus didesnį transepitelinį pernešimą nei nepažeista ECH ir ACT (2 pav. ir 2 lentelė). Spėjame, kad komponentai intheCistanche tubulosa ekstraktassuaktyvinti floridzinui jautrų transporterį ir (arba) pagreitinti intracelulinio ECH ir ACT pašalinimą.Cistanche tubulosa ekstraktasAtrodė, kad didelė dozė labai užmaskuoja floridzinui jautraus pernešimo stiprumą (2 lentelė). Su maistu gaunami angliavandeniai[40] ir baltymai[41] sąveikauja su kai kuriais polifenoliais virškinimo trakte.Morikawa ir kt.[10] parodė, kad penki iridoidai, kankanosidai AD ir kankanolis, monoterpeno glikozidas, kankanosidas E, du feniletanoidiniai oligoglikozidai, kankanosidai F ir G, ir acilintas oligo cukrus, kankanozė, gali būti išskirti išCistanche tubulosa ekstraktas

šiuo metu naudojamas. Kitos sudedamosios dalys, įskaitant baltymusCistanche tubulosa ekstraktas, lieka neaišku. Kartu su aukščiau pateiktomis spėlionėmis esame skirti ištirti, ar kiti komponentai sąveikauja su SGLT1 ir slopina ECH ir ACT absorbciją.

In vivo eksperimentai negali lengvai atskirti absorbcijos laipsnio ir vengimo pirmojo prasiskverbimo per kepenis. In situ žarnyno perfuzijos modelis turi pranašumą prieš in vivo ir in vitro modelius, nes lengvai kontroliuojami eksperimento parametrai ir neįtraukiamas kitų organų poveikis bei palaikomas nepakitęs žarnyno aprūpinimas krauju.[22] Floridzinui jautraus gliukozės transporterio dalyvavimas buvo įvertintas anin situ žarnyno perfuzijos sistemoje. Kaip parodyta 5 paveiksle, ECH ir ACT kartu sugerti kiekiaiCistanche tubulosa ekstraktas (low dose) were greatly abolished by phloridzin, which agrees with our in-vitro data (Figure 4). Using peptides and 20 drugs passively absorbed, a good correlation is obtained between in-vivo drug absorption and the drug permeability of Caco-2 monolayers.[42] Drugs with a Papp of >1 × 10–6 cm/s yra visiškai absorbuojami žmogaus organizme, o prastai absorbuojami vaistai ir peptidai (<1% of="" dose)="" have="" papp="" values="" of=""><1 ×="" 10−7="" cm/s.="" surprisingly,="" the="" papp="" of="" the="" ech="" concomitant="" (high="" dose)="" was="">1 × 10–6 cm/s (2 lentelė), o tai rodo didelį gyvūnų ir žmonių biologinį prieinamumą per burną. Crespy ir kt.[43] parodė, kad in situ žarnyno perfuzijos tyrimo metu ištekėjimas tarp floridzino ir floretino reikšmingai nesiskyrė. Jie [44] taip pat parodė, kad geriamojo floridzino, kurio jautrumas SGLT1, biologinis prieinamumas žiurkėms buvo tik 10 procentų. Būsimuose tyrimuose reikia įvertinti ECH biologinį prieinamumą ir pirmojo prasiskverbimo kepenyse poveikį, kai vartojamas per burną didelėmis dozėmis. In situ rezultatai reiškia, kad suvartojimasCistanche tubulosa ekstraktasgali pagerinti mažą nepažeisto ECH ir ACT burnos absorbciją.

Išvada

Dietiniai ir vaistiniaiCistanche tubulosa ekstraktasECH ir ACT absorbcijos žarnyne gerinimas gali padėti geriau valdyti žmonių sveikatą, nors floridzinui jautraus pernešimo dalyvavimas turėtų būti sumažintas.

Deklaracijos

Interesų konfliktas

Autorius (-iai) pareiškia (-ai), kad jie neturi atskleisti interesų konfliktų

Finansavimas

Šį darbą iš dalies palaikė Kinki universiteto Aukštųjų technologijų tyrimų centras.

Padėkos

Autoriai nori padėkoti Osamu Muraoka (Kinki universitetas, Osaka, Japonija) ir Toshio Morikawa (Kinki universitetas, Osaka, Japonija) už tiekimąCistanche tubulosa ekstraktasir grynos sudedamosios dalys. Esame labai dėkingi Masahiro Iwaki (Kinki universitetas) už paramą studijoms.

Cistanche tubulosa ekstraktasProduktai

Iš: „Echinakozido ir akteozido pernešimas, jautrus floridzinui ir pakitęs rezorbcijos žarnyne būdas, panaudojusCistanche tubulosa ekstraktas'pagalTadatoshi Tanino ir kt

---© 2015 m. Royal Pharmaceutical Society, Journal of Pharmacy and Pharmacology, 67, p. 1457–1465,SGLT1 transportuojami feniletanoidiniai gliukozidai

Nuorodos

1. Tanaka J ir kt. PoveikisCistanche tubulosa ekstraktasdėl įvairių smegenų ligų. Maisto stilius 21 2008; 12: 24–26.

2. Tanaka J ir kt. Anti-senėjimo funkcijosCistanche tubulosa ekstraktas. Maisto stilius 21 2008; 12: 27–29.
3. Tanaka J ir kt. Grožio ir plaukų augimo funkcijosCistanche tubulosa ekstraktas. Maisto stilius 21 2008; 12: 29–32.
4. Tanaka J ir kt. Riebalus metabolizuojantis poveikisCistanche tubulosa ekstraktas. Maisto stilius 21 2008; 12:30–33 val.
5. Yoshizawa F ir kt. Cistanche tubulosa Schrenk (Kablys) f.II sudedamosios dalys. naujo feniletanoido glikozido ir naujo neolignano glikozido išskyrimas ir struktūra. Chem Pharm Bull 1990; 38: 1927–1930.
6. Yoshikawa M ir kt. Feniletanoidiniai oligoglikozidai ir acilinti oligocukrai, turintys kraujagysles atpalaiduojantį poveikį iš Cistanche tubulosa. Bioorg Med Chem 2006; 14: 7468–7475.
7. Tu PF ir kt. Herba cistansų feniletanoidinių glikozidų analizė RP-HPLC. Yao Xue Xue Bao 1997; 32: 294–300.
8. Lei L ir kt. Feniletanoidinių glikozidų iš Herba cistankų metabolinis reguliavimas šunų virškinimo trakte. Yao Xue Xue Bao 2001; 36: 432–435.
9. Geng X ir kt. Echinakozido neuroprotekcinis poveikis Parkinsono ligos pelių MPTP modelyje. Eur J Pharmacol 2007; 564: 66–74.
10. Morikawa T ir kt. Acilinti feniletanoidiniai oligoglikozidai, turintys hepatoprotekcinį aktyvumą, iš dykumos augalo Cistanche tubulosa. Bioorg Med Chem 2010; 18: 1882–1890.
11. Paola RD ir kt. Verbaskozido, biotechnologiškai išgryninto syringa Vulgaris augalų ląstelių kultūromis, poveikis graužikų periodontito modeliui. J Pharm Pharmacol 2011; 63: 707–717.
12. Wu YT ir kt. Akteozido nustatymas Cistanche deserticola ir Boschniakia rossica ir jo farmakokinetika laisvai judančiose žiurkėse naudojant LC-MS/MS. J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci 2006; 844: 89–95.
13. Matthias A ir kt. Alkilamidų ir kavos rūgšties konjugatų iš ežiuolės pralaidumo tyrimai naudojant caco{1}} ląstelių vienasluoksnį modelį. J Clin Pharm Therapeut 2004; 29: 7–13.
14. Jia C ir kt. Echinakozido nustatymas žiurkės serume atvirkštinės fazės didelio efektyvumo skysčių chromatografijos metodu su ultravioletinių spindulių aptikimu ir jo taikymas farmakokinetikai bei biologiniam prieinamumui. J Chromatogr 2006; 844: 308–313.
15. Cardinali A ir kt. Verbaskozidai iš alyvuogių malūno vandens: jų biologinio prieinamumo ir įsisavinimo žarnyne įvertinimas naudojant in vitro virškinimo / caco{1}} modelio sistemą. J Food Sci 2011; 176: H48–H54.
16. Jia C ir kt. Echinakozido, gero antioksidanto, metabolizmas žiurkėms: jo tulžies metabolitų išskyrimas ir identifikavimas. Drug Metab Dispos 2009; 37: 431–438.
17. Najar IA ir kt. P-glikoproteino ATPazės aktyvumo moduliavimas kai kurių fito sudedamųjų dalių dėka. Phytother Res 2009; 24: 454–458.
18. Walgren RA ir kt. Maistinio flavonoidinio kvercetino 4′-beta-gliukozido ištekėjimas per žmogaus žarnyno kako{4}} ląstelių monosluoksnius viršūniniu atsparumu vaistams susijusiu baltymu-2. J Pharmacol Exp Ther 2000a; 294: 830–836.
19. Walgren RA ir kt. Maistinio flavonoidinio kvercetino 4′-beta-gliukozidazės įsisavinimas ląstelėje naudojant nuo natrio priklausomą gliukozės transporterį SGLT1. J Pharmacol Exp Ther 2000b; 294: 837–843.
20. Mihara K ir kt. Pirmojo eperizono metabolizmas žiurkėms žarnyne. Pharm Res 2001; 18: 1131–1137.
21. Isacchi B ir kt. Antihiperalgezinis verbaskozido aktyvumas dviejuose neuropatinio skausmo modeliuose. J Pharm Pharmacol 2011; 63: 594–601.

22. Cook TJ ir kt. Chlorpirifoso žarnyno pralaidumas naudojant vienkartinės žarnyno perfuzijos metodą žiurkėms. Toksikologija 2003; 184: 125–133.

23. Kumar YS ir kt. P-glikoproteino ir citochromo P-450-sąveika su augaliniais vaistais. Narkotikų metabolizmas Drug Interact 2010; 25: 3–16.
24. Walle UK ir kt. Genisteino -7-gliukozido pernešimas žmogaus žarnyno CACO-2 ląstelėmis: galimas MRP2 vaidmuo. Res Commun Mol Pathol Pharmacol 1999; 103: 45–56.
25. Ito K ir kt. Apikalinė / bazolaterinė vaistų pernešėjų paviršiaus ekspresija ir jos vaidmuo vektoriniame vaistų transporte. Pharm Res 2005; 22: 1559–1577.
26. Laitinen L ir kt. Caco-2 ląstelių kultūros vertinant absorbciją žarnyne: kai kurių kartu vartojamų vaistų ir natūralių junginių poveikis biologinėse matricose. (Helsinkio universitetas, Suomija, 2006) Akademinė disertacija, p. 1–66.
27. Scambia G ir kt. Kvercetinas stiprina adriamicino poveikį daugeliui vaistų atsparioje MCF{2}} žmogaus krūties vėžio ląstelių linijoje: P-glikoproteinas kaip galimas taikinys. Cancer Chemother Pharmacol, 1994; 34: 459–464.
28. Choi DH ir kt. Myricetino, antioksidanto, poveikis losartano ir jo aktyvaus metabolito EXP-3174 farmakokinetikai žiurkėms: galimas citochromo P450 3A4, citochromo P450 2C9 ir P- glikoproteino slopinimas miricetinu. J Pharm Pharmacol 2010; 62: 908–914.
29. Tanino T ir kt. Paklitakselio -2′-etilkarbonato provaistas gali apeiti P-glikoproteino sukeltą ląstelių ištekėjimą, kad padidintų vaisto citotoksiškumą. Pharm Res 2007; 24: 555–565.
30. Hollman PC ir kt. Dietinių kvercetino glikozidų ir kvercetino absorbcija sveikiems savanoriams, kuriems atlikta ileostomija. Am J Clin Nutr 1995; 62: 1276–1282.
31. Kellett GL ir kt. Difuzinis gliukozės absorbcijos žarnyne komponentas yra tarpininkaujamas dėl gliukozės sukelto GLUT2 pritraukimo į šepetėlio plokštės membraną. Biochem J 2000; 350: 155–162.
32. Matter K ir kt. Endogeniniai plazmos membranos baltymai rūšiuojami iš dviejų vietų kultivuojamose žmogaus žarnyno epitelio ląstelėse (Caco-2). Ląstelė 1990; 60: 429–437.
33. Mahraoui L ir kt. SGLT1, GLUT1, GLUT2, GLUT3 ir GLUT5 heksozės pernešėjų mRNR buvimas ir skirtinga ekspresija Caco{6}} ląstelių klonuose, atsižvelgiant į ląstelių augimą ir gliukozės suvartojimą. Biochem J 1994; 298: 629–633.

34. Mesonero J ir kt. Nuo cukraus priklausoma fruktozės transporterio GLUT 5 ekspresija Cac-2 ląstelėse. Biochem J 1995; 312: 757–762.

35. Walgren RA ir kt. Kvercetino ir jo gliukozidų pernešimas per žmogaus žarnyno epitelio Caco-2 ląsteles. Biochem Pharmacol 1998; 55: 1721–1727.
36. Yoshikawa T ir kt. Lyginamoji heksozės transporterių (SGLT1, GLUT1, GLUT2 ir GLUT5) ekspresija visame pelės virškinimo trakte. Histochem Cell Biol 2011; 135: 183–194.
37. Funes L ir kt. Verbascoside, fenilpropanoido glikozido iš citrininės verbenos, poveikis fosfolipidų modelių membranoms. Chem Phys Lipids 2010; 163: 190–199.
38. Neilson AP ir kt. Šokolado matricos sudėties įtaka kakavos flavan{1}olio biologiniam prieinamumui in vitro ir biologiniam prieinamumui žmonėms. J Agric Food Chem 2009; 57: 9418–9426.
39. Gao S ir kt. Labai įvairus fenolių kiekis jonažolių produktuose turi įtakos jų pernešimui žmogaus žarnyno Caco{1}} ląstelių modelyje: farmacinis ir biofarmacinis produktų standartizavimo pagrindas. J Agric Food Chem 2010; 58: 6650–6659.
40. Schramm DD ir kt. Maisto poveikis kakavos flavanolių absorbcijai ir farmakokinetikai. Life Sci 2003; 73: 857–869.
41. Laurent C ir kt. Etanolis ir vyno matrica be polifenolio skatina žmogaus žarnyno Caco-2 ląstelių diferenciaciją. Jų sąsajos su procianidino turtingu vynuogių sėklų ekstraktu įtaka. J Agric Food Chem 2005; 53: 5541–5548.
42. Artursson P ir kt. Koreliacija tarp geriamųjų vaistų absorbcijos žmonėms ir tariamo vaisto pralaidumo koeficientų žmogaus vidinio epitelio (Caco{1}}) ląstelėse. Biochem Biophys Res Commun 1991; 175: 880–885.
43. Crespy V ir kt. Žiurkių kvercetino, floretino ir jų gliukozidų absorbcijos žarnyne palyginimas. J Nutr 2001a; 131: 2109–2114.
44. Crespy V ir kt. Floretino ir floridzino biologinis prieinamumas žiurkėms. J Nutr 2001b; 131: 3227–3230.