Kiekybinis proteominis tyrimas atskleidžia fibrinogeno kelią sergant policistine kepenų liga Ⅲ

4. Diskusija

Policistinė kepenų liga(PLD) dažniausiai yra ekstrarenalinis pasireiškimas, susijęs su autosominiu dominavimupolicistinė inkstų liga(ADPKD). PLD būdingas laipsniškas tulžies latakų išsiplėtimas ir daugybinių cistų, užimančių mažiausiai pusę kepenų parenchimo tūrio, progresavimas. Kai kurios dabartinės gydymo strategijos yra pagrįstos chirurginėmis ir farmakologinėmis procedūromis, siekiant pagerinti ligos simptomus. Dėl šios priežasties PLD gydymas iki šiol buvo neveiksmingas, o vienintelė gydymo galimybė yra kepenų transplantacija.45]. Taip yra daugiausia todėl, kad pagrindinis vidinis cistogenezės molekulinis mechanizmas lieka nežinomas. Pagrindiniai metodai yra sutelkti į cAMP signalizacijos kelią ir somatostatino analogus bei keletą naujų tikslų (pvz.,histono deacetilazė 6,Cdc25A fosfatazės, PPAR- ir matricos metaloproteazės) buvo įvertintos ikiklinikinių tyrimų metu, tačiau jas reikia išbandyti kliniškai.8]. Taigi didėja susidomėjimas suprasti molekulinius kelius ir kurti naujas gydymo strategijas [2,8]. Šio ir naujo SWATH-MS darbo tikslas buvo apibūdintas proteominiais policistinių kepenų pokyčiais ir suteikti naujų įžvalgų ir terapinių tikslų PLD.

Spustelėkite, jei norite cistanche herba inkstų ligai gydyti

Ankstesniuose tyrimuose mes nustatėme ortologinį ADPKD modelį (Pkd1cond / cond; Tam-Cre) inkstų cistogenezės vystymosi langą, o tai rodo, kad antrinių įvykių laikas gali turėti įtakos cistinės inkstų ligos sunkumui. Naudodami tą pačią strategiją, ištyrėme, ar šis inkstų vystymosi langas laikui bėgant atitiko panašų kepenų vystymosi langą. Įdomu tai, kad mes pastebėjome, kad cistinis kepenų fenotipas nesilaiko to paties laiko, o tai rodo, kad inkstai ir kepenys gali turėti skirtingus cistogenezės mechanizmus. Tolesni tyrimai turėtų būti sutelkti į bendrų ir skirtingų abiejų organų ligų mechanizmų nustatymą ir nežinomo cistogenezės kepenų vystymosi lango nustatymą. Norėdami atlikti tolesnę analizę, naudojome naujos kartos kiekybinį proteominį metodą SWATH-MS, kad atliktume diferencinę cistinės kepenų ligos proteomų analizę esant lengvam ir sunkesniam PLD fenotipui tame pačiame inkstų vystymosi lange. Mūsų duomenys rodo, kad pažengusiais ligos progresavimo etapais padidėja nereguliuojamų takų skaičius, tikriausiai dėl antrinio ligos poveikio. Taip pat šie rezultatai patvirtina mintį, kad cistos augimas vyksta dviem dideliais etapais: cistos atsiradimu ir cistos progresavimu [46]. Įdomu tai, kad tiek lengvos (p14 grupės), tiek sunkios (p12 grupės) cistinės būklės proteomų analizės nustatė fibrinolizės baltymų kompleksus, tiesiogiai susijusius su kepenų cistine liga. Lengvesnėse ligos stadijose ANXA2 nustatėme kaip vieną iš įdomių baltymų, kuriuos reikia patvirtinti kaip galimą terapinį PLD taikinį. ANXA2 yra kalcio reguliuojamas membraną surišantis baltymas, kurį gamina daugybė ląstelių tipų, įskaitant epitelio, dendritines, trofoblastines ir naviko ląsteles, taip pat monocitus ir makrofagus. Pagrindinis vaidmuo yra išlaikyti ląstelės paviršiaus proteolitinį aktyvumą, bet taip pat atlieka daugybę tarpląstelinių funkcijų, įskaitant egzocitozę, endocitozę, membranos taisymą [47] ir prilipusių tarpląstelinių jungčių palaikymą [48]. Daugybė jo funkcijų prisideda prie fibrinolizės, uždegimo reguliavimo ir imuninės sistemos aktyvinimo bei audinių pažeidimo ir atstatymo; dėl to ANXA2 disfunkcija buvo susijusi su daugeliu žmonių ligų, pavyzdžiui, tarpląstelinės matricos remodeliavimu ir kepenų fibroze [49, 50], kuri yra bendras PLD ligos progresavimo požymis [8]. Įdomu tai, kad sunkioje kepenų ligos stadijoje mūsų proteomų analizė aptiko daugybę skirtingų baltymų, susijusių su fibrinogeno kompleksu. Pažeidžiant audinius ir kraujagysles, fibrinogeną trombinas fermentiniu būdu paverčia fibrinu, o fibrinolizės metu fibriną skaido pagrindinis fermentas plazminas (aktyvioji plazminogeno forma). Fibrinogenai yra susiję su MAPK [51, 52] ir integrinais [53] – dviem būdais, kurie ikiklinikinių tyrimų metu buvo veiksmingi kaip galimas ADPKD gydymas [54, 55]. Įrodyta, kad net vieno iš pernelyg išreikštų fibrinogenų (FIBA) gyvūnų modelis serga cistine liga [56]. Be to, padidėjęs fibrinogeno klasterių aktyvumas PLD suteikia naują ligos gydymo perspektyvą, palyginti su dabartiniais eksperimentiniais vaistais [57]. Todėl šio klasterio sumažėjimas galėtų palaikyti naują vaistų, kuriuose fibrinogeno šeimos baltymai būtų terapiniai tikslai, veikimo mechanizmą. Geresnis pavyzdys būtų ERR (su estrogenais susijusių receptorių) blokada – našlaičių branduolinis receptorius [58,59], kuris moduliuoja fibrinogeno kiekį hipofibrinogenemijos būsenose, kurias sukelia dietos sukeltas nutukimas, 2 tipo cukrinis diabetas, kepenų pažeidimas ir alkoholis. -sukeltas oksidacinis stresas [60,61]. Konkrečiai, atvirkštiniai agonistai, tokie kaip GSK5182 (CAS: 877387-37-6) [60–66] ir DN200434 [67, 68], sumažintų fibrinogeno kiekį.

Apibendrinant, kiekybine proteomine SWATH-MS technologija nustatėme keletą naujų tikslų ir būdų, susijusių su PLD fiziopatologija. Mes pabrėžėme naują fibrinogenų ir fibrinolizės (ir kitų susijusių identifikuotų baltymų) teikiamą terapinę galimybę, daugiausia dėl to, kad visi patvirtinimai su reikšmingais skirtumais yra susiję su fibrinogeno kompleksu. Nepaisant to, yra galimybė tai patvirtinti būsimuose ikiklinikiniuose tyrimuose, taip pat daugiau funkciniuose tyrimuose, siekiant apibūdinti tikslų mūsų tikslinių kandidatų vaidmenį PLD. Apibendrinant, šis darbas sukūrė naują mechanizmą ir galimybę būsimiems PLD fiziopatologijos tyrimams, todėl galimi nauji ligos gydymo metodai.

5. Santrauka

Pranešėme apie naują proteominį kiekybinį tyrimą, pagrįstą SWATH-MS technologija, lyginantį laukinio tipo ir policistinių kepenų proteomas. Buvo nustatyti keli nauji keliai ir taikiniai, praplečiant žinias apie molekulinius mechanizmus PLD srityje ir pabrėžiant fibrinogeno kompleksą kaip galimą naują terapinį taikinį.

Papildoma medžiaga: šią pagalbinę informaciją galima atsisiųsti adresu: https: //www.mdpi.com/article/10.3390/biomedicines10020290/s1, S1 paveikslas: kokybinė DDA masės spektrometrijos analizė įvairiose tyrimo grupėse, S2 paveikslas: TAS (Bendros ploto sumos) normalizavimo diagramos p14 grupė, S3 paveikslas: TAS (bendros plotų sumos) normalizavimo grafikai p12 grupei, S4 paveikslas: baltymų, turinčių reikšmingų skirtumų pagal SWATH-MS analizę, šilumos žemėlapio paveikslas, S5 pav. Neprižiūrimas. Visų baltymų, aptiktų SWATH-MS, šilumos žemėlapio klasterio analizė, S6 paveikslas: Neprižiūrimi PCA iš SWATH-MS duomenų, S7 paveikslas: GO sodrinimas ir baltymų kelio analizė, reikšmingai reguliuojama kepenų cistogenezėje atitinkamai pagal String ir Reactome, S8 paveikslas: Visas baltymų ir baltymų sąveikos žemėlapis pagal eilutę, S9 paveikslas: pasirinktų taikinių, skirtų patvirtinimui, kiekybinių proteominių SWATH-MS duomenų dėžutės diagramos, S1 lentelė: ID Analizuojami mėginiai, pasiskirstymas kiekvienoje grupėje ir mėginių kaupimas, kad būtų galima įsigyti šautuvų paleidimus, kad būtų galima sukurti spektrinė biblioteka, S2 lentelė. Pradmenų sekų sąrašas, naudojamas RT-qPCR analizei, lentelė

Autoriaus indėlis:Konceptualizacija, MAG-G. ir kintamoji srovė; metodika, AC, MV-G., LN-G., AM-V., MdPC-V. ir SBB; formali analizė, AC; ištekliai: MAG-G. ir SBB; duomenų tvarkymas, kintamoji srovė; rašymas – originalaus projekto rengimas, AC; rašymas-recenzija ir redagavimas, MAG-G., SBB ir LN-G.; vizualizacija, MAG-G. ir kintamoji srovė; priežiūra, MAG-G.; projektų administravimas, MAG- G.; finansavimo įsigijimas, MAG-G. Visi autoriai perskaitė ir sutiko su paskelbta rankraščio versija.

Finansavimas: Šį tyrimą finansavo Instituto de Salud Carlos III pagal FIS/FEDER lėšas PI15/01467 ir PI18/00378 (MAG-G.) ir Xunta de Galicia apdovanojimą IN607B 2016/020 (MAG-G.). Darbo užmokesčio palaikymą suteikė 2016 m. Xunta de Galicia ikidoktorantūros stipendija AC ir Xunta de Galicia 2017 m. ikidoktorantūros stipendija MV-G.

Nuorodos

1. Cnossen, WR; Drenth, JPH Policistinė kepenų liga: patogenezės, klinikinių apraiškų ir gydymo apžvalga. Orphanet J. Retas Dis. 2014, 9, 1–13. [CrossRef] [PubMed]

2. Santosas-Lasas, A.; Izquierdo-Sánchez, L.; Lee-Law, PY; Perugorrija, MJ; Marzionis, M.; Marinas, JJG; Bujanda, L.; Banales, JM. Nauji progresai sergant policistinėmis kepenų ligomis. Semin. Kepenų Dis. 2017, 37, 45–55. [CrossRef] [PubMed]

3. Suwabe, T.; Shukoor, S.; Chamberlain, AM; Killianas, JM; Karalius, BF; Edvardsas, M.; Senumas, SR; Madsen, CD; Chebib, FT; Hoganas, MC; ir kt. Autosominės dominuojančios policistinės inkstų ligos epidemiologija Olmsted apskrityje. Clin. J. Am. Soc. Nefrolis. 2020, 15, 69–79. [CrossRef] [PubMed]

4. Cordido, A.; Besada-Cerecedo, L.; García-González, MA Genetinis ir ląstelinis autosominės dominuojančios policistinės inkstų ligos pagrindas – pradmenys gydytojams. Priekyje. Pediatr. 2017, 5, 279. [CrossRef] [PubMed]

5. Bergmann, C.; Guay-Woodford, LM; Harrisas, kompiuteris; Horie, S.; Petersas, DJM; Torres, VE Policistinė inkstų liga. Nat. kun. Dis. Prim. 2018, 4, 1–24. [CrossRef]

6. Cordido, A.; Vizoso-Gonzalez, M.; Garcia-Gonzalez, MA Molekulinė autosominės recesyvinės policistinės inkstų ligos patofiziologija. Tarpt. J. Mol. Sci. 2021, 22, 6523. [CrossRef]

7. Van Aerts, RMM; van de Laarschot, LFM; Banalesas, JM; Drenth, JPH Klinikinis policistinės kepenų ligos gydymas. J. Hepatol. 2018, 68, 827–837. [CrossRef]

8. Perugorrija, MJ; Masyukas, televizija; Marinas, JJ; Marzionis, M.; Bujanda, L.; Larusso, NF; Banales, JM Policistinės kepenų ligos: pažangios įžvalgos apie molekulinius mechanizmus. Nat. Gastroenterolio kunigas. Hepatol. 2014, 11, 750–761. [CrossRef]

9. Banalesas, JM; Masyukas, televizija; Gradilone, SA; Masyuk, AI; Medina, JF; LaRusso, NF cAMP efektoriai Epac ir proteinkinazė a (PKA) dalyvauja autosominės recesyvinės policistinės inkstų ligos (ARPKD) gyvūnų modelio kepenų cistogenezėje. Hepatology 2009, 49, 160–174. [CrossRef]

„Wecistanche“ – didžiausio cistansų eksportuotojo Kinijoje – pagalbinė tarnyba:

El. paštas:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp / Tel:+86 15292862950

Įsigykite daugiau specifikacijų:

https://www.xjcistanche.com/cistanche-shop

GAUKITE NATŪRALIŲ EKOLOGIŠKŲ CISTANČŲ EKSTRAKTO SU 25% ECHINAKOZIDU IR 9% AKTEOZIDU NAUDOJANT INKŠTŲ INFEKCIJĄ