Cistanche poveikio laisviesiems radikalams tyrimas

Daugiau informacijos:Ali.ma@wecistanche.com

Antrasis debesų miškas Senasis Zhang Hongjing

Šiuo metu manoma, kad aparato imuninės funkcijos susilpnėjimas yra susijęs su senėjimu. Remiantis tyrimu, kadCistanchegali sustiprinti pelių humoralines ir ląstelines imunines funkcijas ir kovoti su d-galaktozės sukeltu senėjimo modeliu, toliau tyrėme vaisto poveikį pelėms. Ozono įkvėpimas<. 3)="" induces="" strong="" antagonistic="" effects="" of="" aging="" and="" aging="" caused="" by="" strong="">laisvieji radikalaiorganizme. Vaistų grupės pelių chemiliuminescencijos ekspresijos greitis padidėjo, SOD Padidėjęs gyvybingumas "Sumažėjo lipidų peroksidų kiekis plazmoje, klūpo ir šlaunies audiniuose bei koridoriaus audinių MAOB gyvybingumas; tarp skirtingų dozių grupių atsirado dozės ir poveikio santykis. -Pelių senėjimo poveikis poūmiam senėjimui atitinka tyrimąCistanchepadidina pelių imuninę funkciją.Cistanchegali sustiprinti imuninę funkciją, pagerinti organizmo gebėjimą kovoti su stresu ir tikslinga gauti ar netiesiogiai pašalintilaisvieji radikalaiprie kūno. , Slopina 1WMAO-B gyvybingumą. Kad būtų pasiektas senėjimą stabdantis efektas. Šis eksperimentas suteikia eksperimentinį pagrindą taikytiCistanchestabdant senėjimą ir gydant tam tikras senatvines ligas.

Spustelėkite, kad sužinotumėte apie laisvųjų radikalų naudą ir šalutinį poveikį

1 Medžiaga ir metodai

1.1 Medžiaga

1.1.1 Vaistas ir reagentai:Cistanchedeserticola YC Ma 3 kartus išvirinta vandenyje, nuovirai sumaišyti, sukoncentruoti iki atitinkamo tūrio ir įpilti tam tikrą kiekį etanolio. Po 24 valandų stovėjimo jis filtruojamas. Filtratas išgarinamas iki alkoholio. Paruoškite su garuojančiu vandeniu prieš naudodami 0,25 proc. ~0,5 proc. koncentraciją. ml yra neapdorotų vaistų apie lg). Luminol (luminolis), ®National E Merck kompanijos produktai Huang Howling Oxidation 88 (HO), Hypochromatic Howling (HX), standartinis tetraetoksipropanas, visi yra Sigma Įmonės produktai, druska, benzalkonis, Changzhou Guangming Biochemical Research Institute; cikloheksanas, produktas iš Šanchajaus reagento Nr. 1; Tiobarbitūro rūgštis, produktas iš Šanchajaus reagento Nr. 2, LužanasSuperoksidasDismutazė, Šanchajaus Kinijos mokslų akademijos Biocheminių produktų instituto produktai.

Cistanche

1.1. 2 Prietaisas Beckman LS-98OO33, skirtas tik skysčių scintiliacijos skaičiavimui, Shimadzu RF-540 fluorescencinis spektrofotometras, 752 ultravioletinių gardelių spektrofotometras-G1-20Didelės spartos šaldoma centrifuga, CPS-1A ultragarsinis pulverizatorius.

1.1.3 Gyvūnų ICR pelės, 2 mėnesių amžiaus, sveriančios 20 ± 2 g, pateikė Jiangsu eksperimentinis gyvūnų centras.

1.2 metodas

Pelės buvo suskirstytos į kontrolinę (nepatekti į Q aplinką), modelio ir vaistų grupes, kurių kiekvienoje buvo 10 pelių, greitai valgančių vandenį be apribojimų. Vaistų grupė buvo suskirstyta į dvi dozių grupes: 2 tomas, 7 leidimas, 1994 m., Kinijos žurnalas Kinijos Materia MedicaCistancheekstraktas100 ir 200 mg/kg (atitinka neapdorotų vaistų 20 ir 4Qg/kg). Kontrolinei ir pavyzdinei grupei kiekvieną dieną buvo skiriamas vienodas kiekis normalaus fiziologinio tirpalo. Administravimo grupei ir modelių grupei buvo suteikta O, aplinka (0,9 X 10-^Oaft laipsnis), tęstinis 2. Diena. Kiekvieno piršto įtempimo testas buvo atliktas 21-ąją eksperimento dieną.

1. 2.1 Ištvermės testas Padėkite peles kiekvienoje iš aukščiau nurodytų grupių į 40 cm ir 12 ± l vandens gylį. Water®L talpykloje pradėkite skaičiuoti laiką, kol jis nuslūgs į dugną ir nejudės, o tai yra pelių plaukimo laikas.

   
   

1.2.2 Atsparumo karščiui testas Pirmiausia pelė nustatoma į 15. Paplaukiokite vandenyje 2 minutes, tada įeikite į 15P šaldiklį ir stebėkite visą užšalimo laiką.

1.2.3 Atmosferos hipoksijos tolerancijos testas Įdėkite mažą glitimą į 250 ml plataus burnos buteliuką, pripildytą natrio kalkių, ir užregistruokite kiekvienos grupės pelių išgyvenimo laiką po sandarinimo.

1.2.4 Smegenų B tipo monoaminooksidazės (MACXB) nustatymas Pagal literatūroje pateiktą oralinį metodą, paimkite visas pelių smegenis, įpilkite atitinkamą kiekį iš anksto atšaldyto 0,2mol/L fosfato buferio (PH7,4). ), homogenizuokite ir ultragarsu (24 kC) Susmulkinkite 3 kartus, iš viso du kartus, 30sr1000r/min intervalu, 0C 30 min. supernatantą esant 17 000 aps./min., 4 °C 30 min., supernatantą išmeskite, paimkite nuosėdas ir naudokite atitinkamą kiekį. .2mo(/L PH7.4) Rūgštis buferizuojama ir resuspenduojama, kad susidarytų neapdorotas fermentacijos tirpalas. Paimkite atitinkamą kiekį neapdoroto fermentacijos tirpalo, įpilkite 16 mmol/l benzamidino 0,3 ml, naudokite aukščiau pateiktą fosfatinį buferį, kad gautumėte 3 ml, ir naudokite fosforo rūgšties būgną. 3 ​​ml buferinio tirpalo naudojamas kaip tuščias mėgintuvėlis. Visi mėgintuvėliai dedami į 37 °C. Purtykite vandens vonioje 3 valandas, išimkite, įpilkite 6 procentų peroksirūgšties, kad reakcija pasibaigtų, tada įpilkite 3 m [cikloheksano, purtykite, kad sumaišytumėte, centrifuguokite 1000 aps./min. greičiu 1 min. ir paimkite. Skaidraus tirpalo absorbcija matuojama ties 242 nm, o tuščiasis mėgintuvėlis turi būti šiltas prieš įdedant kiniško amino. Baltymų drumstumas nustatomas folino fenolio metodu, standartiniu baltymu naudojant veršelių serumo albuminą. Vienas fermento aktyvumo vienetas ir vienas fermento aktyvumo vienetas apibrėžiami kaip 37P gamina fermento kiekį, kurio absorbcija pasikeičia 0,01/3 val.

1. 2. 5 Serumassuperoksidasdismutazė(SOD) aktyvumo nustatymas (5 mu I, pelės serumas 10M, dedamas į liuminescencinį mišinį (sumaišytas su 0, 1 mmol/L luminoliu ir 0,1 mmol/l hipoksantinu) 980", laikyti 37C inkubatoriuje 20 min.. Išėmę įpilkite Huang Guanyin oksidazės, kad prasidėtų reakcija. Beckman LS~98OO skystoje blykstės terpėje liuminescencijos skaičius 1 min. pabaigoje apskaičiuojamas pagal laipsnį vieno fotono aptikimas. Kaip vienetas naudojamas Com. Liuminescencijos slopinimo greitis apskaičiuojamas naudojant prastesnę serumo grupę kaip tuščią. Be to, standartinissuperoksidasdismutacijakoncentracija (abscisė) ir liuminescencijos slopinimo greitis (koordinatė) naudojami kaip standartinis baltymų kiekio nustatymas, kaip ir anksčiau. 1. 2.6 Lipidų peroksido (LPO) nustatymas plazmoje, smegenyse ir kepenyse ④ Paimkite 50 skardines pelės plazmos, homogenizuokite kepenis ir smegenis (naudokite 0,2 mol/l fosfato buferį, pH 7,4). , homogenizatoriuje Pagaminta 10 proc. koncentracijos) kas 50 protėvių, įpilkite l/24mol/l sieros rūgšties 4ml, 1 proc. fosforo rūgšties 0,5ml, sumaišykite ir padėkite 5 min., centrifuguokite 1000r/mm 10 min. ir išsiurbė supernatantą. Į nuosėdas įpilkite 2 ml l/24 mol/l sieros rūgšties ir 0,3 ml 10 procentų kalcio fosfato, gerai išmaišykite, centrifuguokite 1000 aps./min. ir į nuosėdas įpilkite 1 ml atsparaus bailaus vandens, gerai išmaišykite, kad susidarytų suspensija, supilkite skaldytas barbitalis Rūgštinis reagentas 1 ml, esant 95 °C. Atvėsinę 14 °C aliejaus vonioje, įpilkite 5 ml n-butanolio, gerai išmaišykite *100 Ar/min. centrifugavimas 10 mtn, paimkite n-butanolio fazę ir išmatuokite fluorescencijos intensyvumą pagal RF{{ 33}}OS spektrofotometras (sužadinimo bangos ilgis 515 mn, emisijos ilgis 553 nm), Be to, kaip standartinę kreivę naudokite standartinį tetraetoksipropaną ir santykinį fluorescencijos intensyvumą.

   
   

2. 

2 rezultatai

2.1 Poveikis laisvųjų radikalų sužalotų pelių ištvermės testui

Modelių grupės pelių plaukimo laikas buvo žymiai trumpesnis nei kontrolinės grupės, o vartojusių žmonių plaukimo laikas truko ilgiau, o didelės dozės gavusios grupės – panašios į kontrolinės grupės (1 lentelė).

1 lentelė: poveikisCistancheapie laisvo kapo sužeidimo pelės modelio plaukimo ištvermės testą

2.2 Poveikis gebėjimui išlaikyti šilumą

Modelių grupės pelės greitai užšąla žemoje temperatūroje, o laikas yra trumpesnis nei kontrolinės grupės, o dviejų dozių grupių užšalimo laikas.Cistancheyra ne tik ilgesnis nei modelio grupė, bet ir ilgesnis už kontrolinę grupę, tai rodoCistancheturi ne tik laisvųjų radikalų žalos poveikį, bet ir akivaizdų poveikį. Padidinkite gebėjimą išlaikyti šilumą nuo šalčio (2 lentelė).

2 lentelė: poveikisCistancheapie Senhano gebėjimą pelėms susižaloti nemokamai

2.3 Poveikis gebėjimui atlaikyti hipoksiją esant atmosferos slėgiui

Po įvedimoCistanche, pelės išgyveno esant normaliam slėgiui ir hipoksijai.Cistanchepoveikis laisvo sužalojimo pelės modelio Senhan gebėjimui buvo žymiai ilgesnis nei modelio grupės ir taip pat didesnis nei kontrolinės grupės, o tai rodo, kadCistanchegali padidinti pelių toleranciją hipoksijai. Jėga (3 lentelė)

3 lentelė:Cistanche's laisvųjų radikalų žalos pelės modelis

2.4 Poveikis MAO-B gyvybingumui

Įkvėpus O, modelio grupės smegenų audinio MAO-B aktyvumas buvo žymiai didesnis nei analogiškos grupės, o MAO-B aktyvumo padidėjimas vartojimo grupėje buvo reikšmingai slopinamas.

4 lentelė: poveikisCistancheapie 1SB tipo monoamino oksido vynmedžio (MAO~B) aktyvumą laisvo kapo sužalojimo pelės modelyje

2. 5 Poveikis SOD gyvybingumui

Serumo chemiliuminescencijos slopinimo greitis modelio grupėje buvo žymiai mažesnis nei kitų grupių, o SOD aktyvumas buvo žymiai sumažėjęs. Vaistų grupės SOD aktyvumas buvo reikšmingai padidėjęs, o dideles dozes vartojusių grupė buvo didesnė nei kontrolinės grupės (žr. 5 lentelę).

5 lentelė. Modelinis serumassuperoksidasDismutazės (SOD) aktyvumas yra garsiausias2.6 Poveikis lipidų peroksido (ZLPO) kiekiui

2.6 Lipidų peroksido (LFO) kiekis modelio grupės plazmoje, kepenyse ir smegenų audinyje žymiai padidėjo, o LPO kiekis žymiai sumažėjo po vartojimo. Didelė dozė ir dozės grupė sumažino LPO smegenų audinyje iki kontrolinės grupės lygio (6 lentelė).

6 lentelė. Mėsos Axun poveikis plazmos, kepenų ir lipidų peroksido (LPO) lygiui laisvųjų radikalų pažeidimo pelės modelyje

3 Diskusija

Senėjimas yra teigiamas reiškinys gyvenimo procese. Tradicinė tėvynės medicina sukaupė daug patirties ir vaistų šaltinių kovos su senėjimu metais. Pastaraisiais metais vietiniai mokslininkai daugiausia dėmesio skyrė veiksmingų senėjimą stabdančių vaistų paieškai iš tradicinės kinų medicinos. Šiuo metu vis dažniau nagrinėjama kūno senėjimo laisvųjų radikalų teorija. Norslaisvieji radikalaiNormaliomis sąlygomis susidaro organizme, audinių ląstelės yra apsaugotos dėl nuolatinio SOD ir kitų antideguonies toksiškumo fermentų sistemų pašalinimo. Oa yra stiprus oksidatorius. , Gali pradėti laisvųjų radikalų reakciją organizme. Per didelis deguonies įkvėpimas sukelia susidarymąlaisvieji radikalaiorganizme, o tai viršija organizmo antitolerancijos stelų sistemos gebėjimą sunaikinti, todėl pažeidžiamos nukleino rūgštys, baltymai, aminorūgštys, angliavandeniai ir lipidų junginiai, taip pažeidžiamas ląstelių formavimasis ir funkcija bei senėjimas ⑶. Šis eksperimentas rodo, kad įkvėpus deguonies7, pelių fizinė jėga, gebėjimas sušilti ir tolerancija hipoksijai sumažėja, panašiai kaip senų gyvūnų fiziologinių funkcijų sumažėjimas. Tai rodo, kad jaunos pelės, gavusios d stimuliaciją, gali sukelti senėjimo modelį.Cistanchegerokai pagerino minėtų rodiklių pokyčius.

Superoksidaslaisvieji radikalaiorganizme egzistuoja trumpą laiką ir daugiausia pašalinami naudojant SOD. Paprastai lygis arba atsispindi matuojant SOD aktyvumą. Sumažėja įvairių antioksidantų natūraliai senstančių pelių ir laisvųjų radikalų pažeistų pelių organizme, Sumažėja velėnos aktyvumas, todėl sumažėja gebėjimas valytis.laisvieji radikalai, todėl padidėja lipidų peroksidų kiekis. B tipo monoaminooksidazės (MA0-B) aktyvumas smegenyse didėja su amžiumi. MAOB yra pagrindinė centrinėje pagumburio senėjimo biologinio laikrodžio kontrolė. Laikrodžio veikimas yra glaudžiai susijęs su senėjimu. ⑴. MA0-B aktyvumas pelių smegenyse šioje eksperimentinio modelio grupėje yra padidėjęs, o tai rodo biocheminius pokyčius, atitinkančius senstančių gyvūnų pokyčius.