Renoprotekcinis izoliquiritigenino poveikis cisplatinos sukeltam ūminiam inkstų pažeidimui dėl FPR2 slopinimo makrofaguose

Norėdami gauti daugiau informacijos, susisiekite: ali.ma@wecistanche.com

Tan Rui-Zhi ir kt

Spustelėkite Cistanche, jei norite gydyti inkstų ligą

Abstraktus

Ūminis inkstų pažeidimas (AKI) yra sunki komplikacija sunkiai sergantiems pacientams. Besikaupę įrodymai parodė, kad makrofagai vaidina svarbų priešuždegiminį vaidmenįŪminis inkstų pažeidimasir izoliquiritigeninas (ISL) gali slopinti makrofaginį uždegimą, tačiau jo vaidmuoŪminis inkstų pažeidimaso pagrindinis mechanizmas nežinomas. Šiuo tyrimu siekiama ištirti ISL renoprotekcinį poveikį AKI ir formilpeptido receptorių 2 (FPR2) vaidmenį šiame procese. Šiame tyrime in vivo ir in vitro eksperimentams atlikti buvo naudojamas cisplatinos sukeltas AKI modelis ir lipopolisacharidų sukeltas makrofagų uždegimo modelis. Rezultatai parodė, kad ISL stipriai palengvėjoinkstų pažeidimasir slopino inkstų uždegimą in vivo ir slopina makrofaginį uždegiminį atsaką in vitro . Svarbu tai, kad buvo nustatyta, kad AKI ir LPS sukeltų makrofagų FPR2 buvo žymiai padidintas, palyginti su kontroline grupe, o ISL jį stipriai slopino. Įdomu tai, kad per didelė FPR2 ekspresija transfekuojant pcDNA3.{4}}FPR2 veiksmingai panaikino priešuždegiminį ISL poveikį makrofagams, o tai rodo, kad FPR2 gali būti potencialus ISL taikinys, siekiant užkirsti kelią uždegimui ir pagerinti būklę.inkstų pažeidimasapieŪminis inkstų pažeidimas. Visi šie rezultatai parodė, kad ISL pagerino cisplatinos sukeltą poveikįinkstų pažeidimasslopindamas FPR2 įtraukė makrofaginį uždegimą, kuris gali būti galimas gydymo būdas AKI.

1. Įvadas

Ūmusinkstassužalojimas (AKI) yra dažnas sunkus ligos tipasinkstasliga su dideliu mirtingumu.1 Jai būdingas greitas inkstų funkcijos pablogėjimas, kuris pasireiškia per 7 ar mažiau dienų. Naujausiose publikacijose pranešta, kad AKI dažnis siekia net 5 procentus stacionarių ir 30 procentų sunkių pacientų, oAKIvisame pasaulyje kasmet sukelia 2 milijonus mirčių, o tai tapo pasauline sveikatos problema. Nors apibrėžimas yra įprastas ir vienodas, AKI gali atsirasti dėl įvairių priežasčių, įskaitant nefrotoksinių vaistų vartojimą, išemijos ir reperfuzijos pažeidimą (išemijos-reperfuzijos pažeidimą, IRI), sepsį, širdies ir kraujagyslių chirurgiją, hipertenziją ir diabetą.2,3 Senas amžius, diabetas ir širdies nepakankamumas padidina AKI riziką, kuri kai kuriems pacientams paprastai sukelia negrįžtamą lėtinę inkstų ligą (LIL) ir galutinės stadijos inkstų ligą (ESRD).4 Pažymėtina, kad tyrimai parodė, kad beveik visos imuninės ląstelės yra susijusios su Imuniniame inkstų uždegime sergant AKI.5 Įrodyta, kad makrofagai atlieka svarbų vaidmenį skatinant inkstų uždegimą.6 Pašalinus makrofagus pagerėja AKI inkstų pažeidimas ir uždegimas.7 Todėl veiksmingas makrofaginio uždegimo slopinimas gali būti naudingas tobulinti dabartinius AKI valdymo metodus.

Izoliquiritigeninas (ISL) yra chalkoninės struktūros flavonoidas, kurio šaknys yra žinomos tradicinės kinų vaistažolių medicinoje.8 Pastaraisiais metais jis sulaukė didelio mokslininkų dėmesio dėl savo antioksidanto, priešuždegiminio, antitrombocitų agregacijos, antibakterinio poveikio. , antivirusinės, priešnavikinės, hepatoprotekcinės, neuroprotekcinės, širdies apsaugos ir detoksikacijos savybės.9 Įrodyta, kad ISL slopina ląstelių dauginimąsi, mažina ROS ir sukelia įvairaus laipsnio vėžio ląstelių apoptozę, nekrozę ir mirtį.10 Naujausi ataskaitose nurodyta, kad izoliquiritigeninas gali slopinti IL-6 ir TNF-a gamybą, kurią sukelia LPS lipidų A dalis RAW264.7 makrofaguose, ir susilpninti LPS-TLR4/MD-2 komplekso susidarymą. Be to, ISL gali sukelti HepG2 ląstelių apoptozę per ROS sukeltą MAPK, STAT3 ir NF-kB signalizacijos kelius.11 Eksperimentiniai įrodymai taip pat parodė, kad ISL sukelia ROS sukeltą vidinį aktyvavimą ir aktyvuoja mitochondrijų-citochromo c-cisteino proteazės mechanizmą. PC-12 ląstelių apoptozės. Verta paminėti, kad ISL dažnai vartojamas kaip maisto papildas moterims.12 Naujausi tyrimai parodė, kad ISL turi didelį priešuždegiminį poveikį AKI, tačiau konkretus veikimo mechanizmas vis dar neaiškus.

Ankstesni mūsų komandos tyrimai parodė, kad Mincle, makrofagų sukeltas C tipo lektinas, yra transmembraninis modelio atpažinimo receptorius, susijęs su inkstų uždegimu13, per kurį mes tikrinome formilo peptido receptorius 2 (FPR2), kurie turi tam tikrą ryšį su Mincle. GEO duomenų bazėje. Tačiau jo vaidmuo sergant ūmine inkstų liga nebuvo patvirtintas. FPR2 yra baltymus koduojantis genas, priklausantis su G baltymu susietų receptorių šeimai ir turintis 351 aminorūgšties liekaną.14,15 Tai yra 7- transmembraniniai su G baltymu susieti receptoriai, galintys tarpininkauti imuninei reguliacijai, uždegiminių faktorių sekrecijai, ląstelių chemotaksė ir ląstelių adhezija, kurios yra glaudžiai susijusios su įvairių ligų atsiradimu ir vystymusi.16 Jo homologija su FPR1 ir FPR3 siekia net 69 procentus ir 83 procentus. FPR2 subląstelės yra lokalizuotos ląstelės membranoje ir yra kelių pralaidų membranos baltymai. Jie daugiausia ekspresuojami neutrofiluose, eozinofiluose, monocituose, epitelio ląstelėse, fibroblastuose, glijos ląstelėse, mezangialinėse ląstelėse ir kt., Pasiskirstę įvairiuose organuose, tokiuose kaip plaučiai, blužnis ir kepenys. Pažymėtina, kad FPR2 yra gausiai ekspresuojamas inkstų intersticyje, kur yra uždegiminės ląstelės. Pagrindinė FPR2 funkcija yra sujungti tam tikras specializuotas skilimą skatinančias terpes (SPM), kad tarpininkuotų šių metabolitų aktyvumui slopinant ir pašalinant uždegimą. Tačiau FPR2 vaidmuo AKI uždegime ir tai, ar jis gali būti naudojamas kaip vaistų intervencijos tikslas, vis dar nežinomas.

Šiame tyrime mes panaudojome nefrotoksinį vaistą - cisplatiną sukeltą pelės AKI modelį ir LPS sukeltą uždegiminių ląstelių modelį, kad ištirtume ISL pagerinimo poveikį inkstų pažeidimui ir uždegimui sergant AKI, taip pat pagrindinį FPR2 vaidmenį inkstų uždegime. ir ISL gydymas AKI. Šis tyrimas suteiks naujų krypčių, kaip suprasti uždegiminio sužalojimo mechanizmą ir AKI gydymo strategijas.

2. Medžiagos ir metodai

2.1. Narkotikai

Isoliquiritigenin (purity>98 procentai) yra izoflavono junginys, išgaunamas iš saldymedžio šaknies. Jo molekulinė formulė yra C15H12O4. Šiame tyrime izoliquiritigeninas buvo įsigytas iš Chengdu Bio purify Phytochemicals Ltd. (BP0787), ištirpintas 10 procentų DMSO (ST038, Beyotime, Kinija), o cisplatinos sukeltos pelės buvo įvedamos į skrandį 7,5 mg/kg ir 30 mg dozėmis. /kg, atitinkamai.

2.2. BMDM izoliacija

BMDM ląstelėms išskirti buvo atrinktos 6–8 savaičių amžiaus C57BL/6 pelių patinai. Atsargiai atskirkite užpakalinės kojos kaulą nuo šlaunikaulio ir pašalinkite pritvirtintus raumenis. Kaulus sutrinkite PBS su skiediniu, kol kaulų spalva pasikeis iš raudonos į baltą. Tada surinkite supernatantą ir filtruokite per 70 sietelį, po to centrifuguokite 1500 aps./min. greičiu 5 min. Eritrocitai buvo sulaužyti filtruojamame skystyje su 10 - PBS, kuris vėliau buvo filtruojamas ant 40 mm ląstelių sietelio. Gautas ląsteles inkubuokite 10 cm auginimo lėkštelėje ir 7 dienas indukuokite 30 procentų L929 supernatantu. BMDM ląstelės buvo stimuliuojamos 100 ng/ml LPS, kad būtų sukurtas uždegiminių ląstelių modelis.

2.3. FPR2 numušimas ir per didelė ekspresija BMDM

FPR2 buvo sumažintas transfekuojant Zeta LifeAdvanced Transfection Reagent (AD600050, Zeta life, JAV) ir FPR2 siRNR į BMDM (FPR2 siRNR sekos: Sense, 5'-GGAGAUGUGUAUUGUACAUTT-3'; Antisense, Antisense, Zeta life, USA CAUCUCCTT{10}}“. Sangon Biotech, Kinija). Panašiai pcDNA3.{12}}FPR2 plazmidė (sukūrė Fenghui Biotech, Kinija) buvo transfekuota į BMDM su ZETA, kad ląstelėse būtų per daug ekspresuojama FPR2.

2.4. Eksperimentai su gyvūnais

Visi eksperimentai su gyvūnais buvo atlikti pagal Pietvakarių medicinos universiteto etikos komiteto gaires. 32 C57BL/6 pelių patinai buvo įsigyti iš ChengduDaShuo Animal Co., Ltd, kurios buvo atsitiktinai suskirstytos į 4 grupes: fiktyvi grupė, pavyzdinė grupė (cisplatinos sukelta AKI grupė), ISL mažos dozės grupė (7,5 mg/kg, L grupė), ir didelės dozės grupė (30 mg/kg, H grupė). Pavyzdinei grupei pirmą dieną buvo suleista 20 mg/kg cisplatinos (P4394, Sigma-Aldrich, JAV), mažos dozės grupei buvo skirta 7,5 mg/kg ISL, o didelei grupei – 30 mg/kg ISL 3 dienas. . Po 3 dienų serumas ir inkstai buvo paimti iš paaukotų pelių.

2.5. Inkstų funkcijos tyrimas

Surinkę kiekvienos pelių grupės serumą, griežtai laikykitės rinkinių instrukcijų, kad nustatytumėte kreatinino (C011-2-1, Jiancheng Biotech, Kinija) ir karbamido azoto (C013-2-1, Jiancheng Biotech, Kinija).

2.6. Patologinis dažymas

H&E dažymas: sekcijų įprastas devaškavimas ir rehidratacija, dažymas hematoksilinu 5 min., RO skalavimas vandeniu, 1 proc. vandenilio chlorido rūgšties atskyrimas alkoholiu 2 s, skalavimas vandeniu iš čiaupo, panardinimas į 75 proc. etanolį 2 s, 1 proc. alkoholyje tirpus eozinas 30 , nuskalaukite vandeniu iš čiaupo, 100 procentų etanolis Dehidratuokite 1 min., išdžiovinkite, ksilenas skaidrus 10 min., išdžiovinkite, sandarinkite neutralia balzamo tvirtinimo priemone (36313ES60, Yepsen, Kinija).

PAS dažymas: griežinėliai buvo dedami į periodinės rūgšties tirpalą kambario temperatūroje 5e8 min., po to du kartus nuplaunami RO vandeniu. Tada šias riekeles įdėkite į Schiff reagentą 10e20 min., nuplaukite vandeniu iš čiaupo 10 min., nudažykite hematoksilinu 1e2 min., nusausinkite ir peršviečiate 100 procentų alkoholyje, išdžiovinkite, užsandarinkite neutralia balzamo tvirtinimo priemone.

2.7. Imunofluorescencija

Užšaldytas audinių dalis sudėkite į PBS, du kartus nuplaukite, fiksuokite 10 procentų formaldehidu 10 min. Pjūvių audinys buvo užblokuotas 5 procentų ožkos serumu 30 minučių, po to inkubuojamas su pirminiu pelės antipelės FPR2 (1:200, sc{8}}, Santa Kruzas, JAV) ir žiurkių antipelės F4/80. antikūnų (1:200, sc-52664, Santa Krusas, JAV)4 - C temperatūroje per naktį. Kitą dieną sekcijas du kartus nuplaukite PBS, inkubuokite su antriniu antikūnu (1:200) kambario temperatūroje 1 valandą ir nudažykite branduolį DAPI. Vaizdai užfiksuoti EVOS sistema.

2.8. Elisa

IL-1b, IL-6, TNF-a koncentracija serume ir ląstelių supernatante buvo analizuojama naudojant ELISA rinkinius (EMC001B, EMC004, EMC102A, Neobioscience, Kinija) pagal rinkinio instrukcijas.

2.9. Realiojo laiko PGR

Bendra RNR buvo išgauta naudojant RNR ekstrahavimo rinkinį (Tiangenas, Kinija) pagal gamintojo instrukcijas. Atvirkščiai transkribavus išskirtą RNR į cDNR, pridėjus ją prie 10 ml reakcijos sistemos, kad būtų atlikta realiojo laiko PGR naudojant Roche LightCycler 480 sistemą, ir reakcijos sistema yra tokia: Eastep® qPCR MasterMix 2 -, 5 ml; cDNR šablonas, 1 ml; pradmuo prieš srovę (10 mM), 0,5 ml; pasroviui skirtas pradmuo (10 mM), 0,5 ml; Vanduo be branduolių, 3 ml. Šiame eksperimente naudotus pradmenis susintetino Sangon (Šanchajus, Kinija), o visų pradmenų sekos išvardytos 1 lentelėje.

2.10. Western blot

RIPA lizės buferis buvo naudojamas baltymams ekstrahuoti iš inkstų audinių ir BMDM ląstelių. Baltymus ištirpinus 10 procentų SDS-PAGEgel ir perkėlus į PVDF membraną, 1 valandai blokavus membraną 5 procentų BSA ir 3 kartus išplovus TBST, po to membraną inkubavus su pirminiais antikūnais 4 - C temperatūroje per naktį (paruošta). su 5 procentais BSA, 1: 1000). Tada membranos buvo inkubuojamos su antriniu antikūnu (peroksidaze konjuguota ožkos anti-pelės IgG (ZB-2305, 1:3000), ožkos anti-triušio IgG (ZB-2301, 1:3000)). kambario temperatūroje 1 val. Vaizdai buvo užfiksuoti gelio vaizdavimo sistema (BIORAD, JAV). Juostų pilkos spalvos intensyvumas buvo apskaičiuotas Image J programine įranga.

2.11. Statistinė analizė

Rezultatai buvo parodyti kaip vidurkis ± standartinis nuokrypis. Duomenų analizė atlikta naudojant vienpusį ANOVA testą, po kurio buvo atliktas daugkartinis palyginimas su LSD testu, naudojant SPSS programinę įrangą 21.0. P < 0,05="" buvo="" laikomas="" statistiškai="" reikšmingu.="" kiekviena="" eksperimentų="" grupė="" pasikartoja="" 3="">

3. Rezultatai

3.1. Izoliquiritigeninas pagerino cisplatinos sukeltą inkstų pažeidimą ir slopino inkstų uždegimą

Norėdami ištirti izoliquiritigenino renoprotekcinį ir priešuždegiminį poveikį AKI, realiojo laiko PGR ir ELISA nustatėme kiekvienos grupės Cre ir BUN kiekį serume, taip pat uždegiminio citokino ekspresiją ir sekreciją. Be to, inkstų patologija buvo išmatuota H&E ir PAS dažymu. Rezultatai parodė, kad lyginant su normalia grupe, Cre ir BUN koncentracijos serume padidėjo pagal AKI modelį, o gydymas 7,5 mg/kg arba 30 mg/kg ISL reikšmingai sumažino Cre ir BUN koncentraciją serume. , 30 mg/kg dozė turi geriausią gydomąjį poveikį (1A ir B pav.). Pažymėtina, kad 30 mg/kg ISL gali pagerinti inkstų kanalėlių pažeidimą pagal įvertintą kanalėlių nekrozės procentą (1C pav.). ELISA ir PGR rezultatai parodė, kad po ISL (7,5 mg/kg ir 30 mg/kg) intervencijos sumažėjo IL-1b, IL-6 ir TNF-a sekrecija bei mRNR ekspresija. IL-1b, IL-6 ir TNF-a taip pat labai sumažėjo, kai buvo skiriama 30 mg/kg ISL (1 DeI pav.). Kita vertus, H&E ir PAS dažymo rezultatai parodė, kad AKI grupės inkstams buvo sunkus inkstų kanalėlių pažeidimas, inkstų epitelio išsiskyrimas, mezangialinės ląstelės ir mezangialinė intersticinė hiperplazija bei uždegiminių ląstelių infiltracija, stebėtinai, 30 mg/kg ISL. gali veiksmingai pakeisti inkstų pažeidimą sergant AKI (1J pav.). Visi rezultatai atskleidė, kad 7,5 mg/kg ir 30 mg/kg ISL vartojimas gali pagerinti cisplatinos sukeltą inkstų pažeidimą ir slopinti inkstų uždegimą, kai 30 mg/kg ISL turi geriausią poveikį.

3.2. Izoliquiritigeninas sumažino FPR2 ekspresiją AKI pelių makrofaguose

Daugelyje ankstesnių pranešimų buvo nurodyta, kad FPR2 vaidina gyvybiškai svarbų vaidmenį imuniniame atsake ir su uždegimu susijusiose ligose. Tačiau galimas FPR2 poveikis AKI inkstams yra neapibrėžtas. Šiame tyrime atlikome imunofluorescenciją, kad kartu nustatytų FPR2 ir makrofagus (F4/80, makrofagų gamintojas). Rezultatai parodė, kad makrofagai (žalios dėmės) buvo gausiai įsiskverbę į AKI pelių inkstus, tuo tarpu FPR2 (raudonos dėmės) buvo kartu su F4/80, o tai rodo, kad FPR2 daugiausia buvo išreikštas makrofaguose, o FPR2 lygis buvo reikšmingas. padidėjo AKI pelių inkstuose (2A pav.). Toliau aptikome FPR2 mRNR ir su uždegimu susijusių baltymų ekspresiją realiuoju laiku PGR ir Western blot inkstuose, o rezultatai parodė, kad 30 mg/kg ISL gali veiksmingai sumažinti FPR2 mRNR ir baltymų kiekį inkstuose. AKI pelių inkstuose, palyginti su 7,5 mg/kg ISL grupės (2B, G, H pav.). Svarbu tai, kad Western blot tyrimo rezultatai parodė, kad 30 mg/kg ISL taip pat slopino p-65 aktyvavimą ir sumažino TNF-a, IL-6 ir IL{{28} baltymų kiekį. }b AKI pelių inkstuose (2 pav. CeF). Visi aukščiau pateikti duomenys rodo, kad ISL palengvintas AKI pelių inkstų uždegimas gali būti susijęs su FPR2 ekspresijos mažinimu makrofaguose.

3.3. Izoliquiritigeninas slopino FPR2 ir uždegiminių citokinų ekspresiją ir sekreciją LPS sukeltose BMDM ląstelėse

Norėdami toliau nustatyti ISL poveikį LPS sukeltoms BMDM ląstelėms, realiojo laiko PGR ir ELISA metodu ištyrėme FPR2 mRNR lygį, uždegiminių citokinų ekspresiją ir sekreciją LPS sukeltose BMDM ląstelėse po ISL vartojimo. Rezultatai parodė, kad ISL sumažino FPR2, IL-1b, IL-6 ir TNF-a mRNR lygį (3AeD pav.), taip pat IL-1b sekreciją. , IL-6 ir TNF-a ląstelių supernatante LPS sukeltose BMDM ląstelėse (3EeG pav.). Pirmiau pateikti rezultatai rodo, kad ISL gydymas 40 mM koncentracija stipriai slopino uždegimą LPS sukeltose BMDM ląstelėse.

3.4. Izoliquiritigeninas sumažino FPR2 ir uždegiminių citokinų baltymų kiekį LPS sukeltose BMDM ląstelėse

Mes taip pat nustatėme FPR2 ir uždegiminių citokinų baltymų kiekį LPS sukeltose BMDM ląstelėse po ISL vartojimo Western blot metodu. Duomenys parodė, kad, lyginant su kontroline grupe, FPR2, p-p65, IL-6 ir TNF-a baltymų kiekis LPS sukeltose BMDM ląstelėse buvo reikšmingai padidėjęs ir stipriai sumažintas vartojant 40 mM ISL. 4AeE pav.). Šie rezultatai dar labiau parodė, kad ISL gali slopinti NF-kB aktyvaciją ir sumažinti uždegiminių citokinų baltymų kiekį LPS sukeltose BMDM ląstelėse.

3.5. FPR2 slopinimas slopino LPS sukeltą uždegimą BMDM ląstelėse

Norėdami ištirti FPR2 vaidmenį makrofagų uždegime, mes panaudojome siRNR, kad numuštume FPR2 BMDM ląstelėse. Rezultatai parodė, kad siRNR transfekcija gali žymiai slopinti FPR2 ekspresiją LPS sukeltuose makrofaguose (5A pav.) ir veiksmingai sumažinti IL-1b ir TNF-a ekspresiją (5B ir C pav.). Be to, Western blot rezultatai parodė, kad po siRNR transfekcijos FPR2 baltymų lygis buvo žymiai slopinamas, nepaisant to, ar jį stimuliavo LPS (5D ir E pav.). Pažymėtina, kad FPR2 numušimas žymiai sumažino uždegiminių citokinų baltymų kiekį ir slopino NF-kB signalizacijos aktyvumą (5FeK pav.), o tai rodo, kad FPR2 vaidina svarbų vaidmenį skatinant uždegiminį atsaką makrofaguose. Be to, tai gali būti pagrindinis ISL tikslas slopinti makrofagų uždegimą.

3.6. Per didelis FPR2 ekspresija neutralizavo izoliquiritigenino priešuždegiminį poveikį LPS sukeltose BMDM ląstelėse

Norėdami nustatyti, kad ISL slopina uždegimą AKI, slopindamas FPR2 makrofaguose, mes panaudojome FPR2 ekspresijos plazmidę, kad padidintume FPR2 ekspresiją ISL gydomose uždegiminėse BMDM ląstelėse. Kaip parodyta 6 pav., FPR2 baltymų ir mRNR lygis buvo žymiai padidėjęs pcDNA3.{7}} FPR2 transfekuota grupė (6A, B, G pav.), o per didelė FPR2 ekspresija veiksmingai panaikino 40 slopinamąjį poveikį. mM ISL dėl p65 aktyvacijos ir IL-1b, IL-6 ir TNF-a baltymų lygių LPS sukeltose BMDM ląstelėse (6CeF pav.). Panašiai, padidinus FPR2 reguliavimą, buvo pašalintas slopinamasis 40 mM ISL poveikis uždegiminių citokinų ekspresijai ir sekrecijai LPS sukeltose BMDM ląstelėse, pvz., IL-1b, IL-6 ir TNF-a. (6 HeM pav.), o tai rodo, kad ISL sumažino uždegimą LPS sukeltose BMDM ląstelėse, slopindamas FPR2.

4. Diskusija

Ūminis inkstų pažeidimas yra viena iš dažniausių klinikinių ligų. Paprastai tai per trumpą laiką sukelia sutrikusią pacientų imuninę funkciją. Traumos kraujo netekimo, organų pažeidimo, šoko atvejais inkstai yra jautriausias organas ir yra linkę į ūmų sužalojimą.18e20 Daugybė tyrimų patvirtino, kad uždegimas vaidina pagrindinį vaidmenį vystant AKI, o tai buvo laikoma. kaip galimą intervencijos tikslą gydant AKI. Pastaraisiais metais kinų vaistai padarė didžiulę pažangą kovojant su uždegimu, įskaitant kurkuminą, kvercetiną, naringeniną ir kitus monomerus. Izoliquiritigeninas yra flavonoidinis junginys, pasižymintis daugybe biologinių veiklų, tokių kaip priešuždegiminis, laisvųjų radikalų, priešnavikinis ir kitas poveikis.21 Ankstesni tyrimai parodė, kad ISL slopina apoptozę, uždegimą ir tarpląstelinės matricos gamybą angiotenzine. II sukeltos HK-2 ląstelės.22 Wu Yangpingo tyrimai parodė, kad ISL gali sumažinti IL-6 ir IL-8 reguliavimą, nes slopina NF-kB aktyvumą psoriazės modelyje. ISL gali būti tinkamas psoriazės ir kitų autoimuninių uždegiminių ligų gydymui.23 Kita vertus, neseniai atliktas tyrimas parodė, kad ISL gali sumažinti septinį AKI, nes slopina NF-kB p65 translokaciją ir slopina uždegiminius atsakus.24 Šiame tyrime mes nustatė, kad ISL gali veiksmingai pagerinti cisplatinos sukeltų AKI pelių inkstų funkciją, sumažinti inkstų pažeidimą ir slopinti inkstų uždegimą. Tačiau tikslus ISL slopinimo mechanizmas uždegimą neaiškus.

FPR2 priklauso chemotaktinių receptorių šeimai ir yra su G baltymu susietas receptorius, 7 kartus transmembraninis. Ankstesni tyrimai parodė, kad FPR2 dalyvauja įvairiuose fiziologiniuose ir patologiniuose procesuose, įskaitant gynybines reakcijas, uždegimus, neurodegeneracines ligas, navikus, sutrikimus, susijusius su gliukozės ir lipidų apykaita.25,26 FPR2 gali būti reguliuojamas lipopolisacharidais, įvairiais uždegiminiais veiksniais, ir prostaglandiną E2 uždegiminiame procese, kuris gali atlikti priešuždegiminį ir priešuždegiminį vaidmenį.27,28 Skirtingas FPR2 poveikis uždegimui priklauso nuo aplinkos ir ligandų, kurie aktyvuoja skirtingus signalizacijos kelius.29 Šiame tyrime mes nustatėme, kad FPR2 daugiausia ekspresuojamas makrofaguose inkstų intersticyje ir yra labai ekspresuojamas cisplatinos sukeltų AKI pelių inkstuose, o tai rodo, kad FPR2 makrofaguose gali būti susijęs su uždegiminiu makrofagų atsaku AKI inkstuose. Vis daugiau įrodymų patvirtino, kad per kelias valandas po AKI atsiradimo į inkstus įsiskverbė daug makrofagų ir, reaguodami į uždegimą, pablogėjo inkstų pažeidimas.30e33 Todėl sumažinus infiltruotų makrofagų uždegimą AKI inkste gali yra svarbi AKI tobulinimo kryptis, o ar FPR2 dalyvauja šiame procese, nežinoma.

Mūsų eksperimentiniai rezultatai parodė, kad gydymas mažomis ir didelėmis ISL dozėmis cisplatinos sukeltoms AKI pelėms gali ne tik pagerinti inkstų struktūrą ir funkciją, bet ir sumažinti uždegiminių citokinų kiekį. Be to, ISL gali veiksmingai sumažinti FPR2 baltymų lygį ir p65 aktyvumą. Kadangi FPR2 daugiausia išreiškiamas makrofaguose, tai rodo, kad ISL gali pagerinti inkstų uždegimą, slopindamas FPR2 makrofaguose. Dėl svarbaus infiltruotų makrofagų vaidmens inkstų uždegimui, mes išskyrėme pirminius iš kaulų čiulpų gautus makrofagus, kad in vitro nustatytų ISL gerinantį poveikį makrofagų uždegimui ir galimą mechanizmą. Mūsų rezultatai parodė, kad ISL gali reikšmingai slopinti LPS sukeltą makrofagų uždegimą ir sumažinti uždegiminių faktorių IL-1b, IL-6 ir TNF-a ekspresiją ir sekreciją. Tuo pačiu metu ISL taip pat gali sumažinti makrofagų uždegiminių molekulių baltymų kiekį ir slopinti LPS stimuliuojamą FPR2 mRNR ekspresiją ir baltymų lygį. Norėdami patikrinti pagrindinį FPR2 uždegimo slopinimo su ISL vaidmenį, panaudojome pcDNA3.{18}}FPR2 plazmidę FPR2 per daug ekspresuoti ir nustatėme, kad uždegiminiame makrofage, gydomame ISL, per didelė FPR2 ekspresija neutralizuoja slopinamąjį ISL poveikį uždegimui, tai rodo, kad ISL reguliuojamas makrofagų uždegimas daugiausia vyksta dėl FPR2 slopinimo. Pažymėtina, kad in vivo panaudojome cisplatinos sukeltą AKI modelį ir pasirinkome LPS sukeltą uždegiminių ląstelių modelį in vitro. Nors dviejų modelių indukciniai reagentai nėra nuoseklūs, šiuo metu pripažįstama, kad šie du metodai sukuria uždegimo modelius atitinkamai in vivo ir in vitro. Atsižvelgiant į tai, kad šiame tyrime pagrindinis dėmesys skiriamas uždegiminiams atsakams, šiuos du metodus galima naudoti viename tyrime.

Šie duomenys įrodė, kad ISL gali veiksmingai sumažinti uždegiminių veiksnių ekspresiją in vivo ir in vitro, o tai galima pasiekti slopinant FPR2 ekspresiją. Taigi ISL gali būti galimas terapinis vaistas nuo AKI.

Padėkos

Šis darbas buvo paremtas Ludžou – Pietvakarių medicinos universiteto jungtinis projektas (2017LZXNYD-P01 ir 2018LZXNYD-PT03), Pietvakarių medicinos universitetas – jungtinis tradicinės medicinos ligoninės projektas (2018XYLH-034), Sichuano Key laboratorijos statybos projektas. Medicina (2018 Nr. 53), Ludžou mokslo ir technologijų projektas (2020-JYJ-56) ir Ludžou savivaldybės – Pietvakarių medicinos universiteto jungtinė specialioji dotacija aukšto lygio talentams diegti (Lan Hui-Yao komanda ).

Nuorodos

1. Soares DB, Mambrini JVM, Botelho GR, Girundi FF, Botoni FA, Martins MAP. Vaistų terapija ir kiti veiksniai, susiję su ūminio inkstų pažeidimo išsivystymu kritiškai sergantiems pacientams: skerspjūvio tyrimas.PeerJ. 2018;6:e5405. e-pub prieš spausdinimą 2018-08-22.

2. Sato Y, Yanagita M. Imuninės ląstelės ir AKI uždegimas iki CKD progresavimo.Am J Physiol Ren Physiol. 2018;315(6):F1501eF1512. e-pub prieš spausdinimą 2018/08/30.

3. Ram P, Mezue K, Pressman G, Rangaswami J. Ūminis inkstų pažeidimas po transkateterio aortos vožtuvo pakeitimo.Clin Kardiolis. 2017;40(12):1357e1362. e-pub prieš spausdinimą 2017-12-19.

4. YH H, IJ C, YF L, YJ C, YH L, HW C. Laktoferinas prisideda prie renoprotekcinio poveikio esant ūminiam inkstų pažeidimui ir ankstyvai inkstų fibrozei.Farmacija. 2020;12(5):434.

5. Bonavia A, Singbartl K. Imuninių ląstelių vaidmens ūminio inkstų pažeidimo atveju apžvalga.Pediatr Nephrol. 2018;33(10):1629e1639. e-pub prieš spausdinimą 2017/08/13.

6. Li J, Tang Y, Tang PMK ir kt. Blokuojantis makrofagų migraciją slopinantį faktorių apsaugo nuo cisplatinos sukelto ūminio inkstų pažeidimo pelėms.Mol Ten. 2018;26(10):2523e2532. e-pub prieš spausdinimą 2018/08/06.

7. Ferenbach DA, Sheldrake TA, Dhaliwal K ir kt. Makrofagų / monocitų išeikvojimas klodronatu, bet ne difterijos toksinu, pagerina inkstų išemiją / reperfuzijos pažeidimą pelėms.Kidney Int. 2012;82(8):928e933. e-pub prieš spausdinimą 2012/06/08.

8. JQ, JC, BM ir kt. Izoliquiritigeninas slopina aterosklerozę blokuodamas TRPC5 kanalo ekspresiją.Širdies ir kraujagyslių terapijos. 2020;2020:1926249.

9. YG, XL, HY, LP, X C. Izoliquiritigeninas turi antioksidacinį ir priešuždegiminį poveikį aktyvindamas KEAP-1/Nrf2 kelią ir slopindamas NF-kB ir NLRP3 kelius sergant karagenino sukeltu pleuritu.Maistas& funkcija. 2020;11(3):2522e2534.

10. LS, XY, XY, YW, Q Z. Izoliquiritigeninas sukelia žmogaus šlapimo pūslės vėžio T24 ląstelių apoptozę per nuo ciklino priklausomą kinazės nepriklausomą mechanizmą.Onkologijos laiškai. 2017;14(1):241e249.

11. Wang JR, Luo YH, Piao XJ ir kt. Mechanizmai, kuriais grindžiama izoliquiritigenino sukelta apoptozė ir ląstelių ciklo sustabdymas per ROS sukeltus MAPK / STAT3 / NF-kappaB kelius žmogaus kepenų ląstelių karcinomos ląstelėse.Narkotikų kūrėjasRes. 2019;80(4):461e470. e-pub prieš spausdinimą 2019/01/31.

12. AH, CS, YY ir kt. Saldymedžio rūšių estrogeninio aktyvumo įvertinimas, palyginti su apyniais, naudojamais botanikos preparatuose menopauzės simptomams gydyti.PLoSVienas. 2013;8(7):e67947.

13. LL L, PM T, CJ L ir kt. Modelio atpažinimo receptorius Mincle yra būtinas norint išlaikyti M1 makrofagų fenotipą esant ūminiam inkstų uždegimui.Kidney Int. 2017;91(3):587e602.

14. Schroder N, Schaffrath A, Welter JA ir kt. Formilo peptidų receptorių slopinimas pagerina Alzheimerio ligos pelių modelio rezultatus.JNeurouždegimas. 2020;17(1):131. e-pub prieš spausdinimą 2020/04/26.

15. Neymeyer H, Labels R, Reverte V ir kt. Aneksino A1 signalizacijos aktyvinimas inkstų fibroblastuose turi antifibrotinį poveikį.Acta Physiol. 2015;215(3):144e158. e-pub prieš spausdinimą 2015/09/04.

16. FC, MP, RA. Skirtingos signalizacijos kaskados, kurias sukelia skirtingi formilo peptido receptoriaus 2 (FPR2) agonistai.Tarpt J Mol Sci. 2013;14(4):7193e7230.

17. HW, XP, YG ir kt. Ganoderma-A gautas junginys daro slopinamąjį poveikį per formilo peptido receptorių 2.Front Pharmacol. 2020;11:337.

18. Wang Y, Cai J, Tang C, Dong Z. Mitofagija esant ūminiam inkstų pažeidimui ir inkstų atstatymui.Ląstelės. 2020;9 (2). e-pub prieš spausdinimą 2020/02/07.

19. Sato Y, Takahashi M, Yanagita M. AKI patofiziologija iki CKD progresavimo.Seminas Nefrolis. 2020;40(2):206e215. e-pub prieš spausdinimą 2020/04/19.

20. Ronco C, Bellomo R, Kellum JA. Ūminis inkstų pažeidimas.Lancetas. 2019;394(10212): 1949e1964. e-pub prieš spausdinimą 2019/11/30.

21. PZ, HM J, JW Z ir kt. Apsauginis izoliquiritigenino poveikis nuo septinių pelių smegenų pažeidimo, susilpninant NF-KB.Įflammofarmakologija. 2019;27(4): 809e816.

22. DX, WH, ST Y, YS T. Izoliquiritigeninas sumažino Ang II sukeltą hipertenzinį inkstų pažeidimą, slopindamas uždegimo citokinus ir oksidacinio streso sukeltą apoptozę per Nrf2 ir NF-kB kelius.Biochem BiophysRes Commun. 2018;506(1):161e168.

23. YW, XC, XG ir kt. Izoliquiritigeninas apsaugo nuo į psoriazę panašių simptomų progresavimo, nes slopina NF-kB ir uždegimą skatinančius citokinus.J MolMed(Berlis). 2016;94(2):195e206.