Renoprotekcinis oridonino poveikis ūminio inkstų pažeidimo pelės modelyje, slopindamas su makrofagais susijusį uždegimą
Mar 17, 2022
ĮVADAS
Svarbus požymis ūminisinkstų pažeidimas(AKI) yra staigus nuosmukisinkstų funkcija. Tai pasaulinė sveikatos problema, sukėlusi didelį visuomenės susirūpinimą. Pagal statistiką, apie 13,3 milijono žmonių visame pasaulyje kasmet kenčia nuo AKI, iš kurių 85 procentai yra besivystančiose šalyse, o tai nužudys 1,7 milijono žmonių.1,2) Pažymėtina, kad AKI nėra viena liga ir gali būti komplikacija. daugelio ligų. Paprastai tai gali sukelti sepsis, šokas, išemija-reperfuzija ir apsinuodijimas. Po ilgalaikio vystymosi ši liga linkusi pereiti į lėtinęinkstų liga,stazinis širdies nepakankamumas ir galutinė stadijainkstų liga.3–5) Apibendrinant galima pasakyti, kad AKI gali sukelti didžiulę ekonominę naštą ir iš esmės padidins psichologinę ir fizinę pacientų naštą.Inkstųišemija-reperfuzija šiuo metu laikoma dažniausia AKI priežastimi ir dažniausiai atsiranda traumos, chirurginės rezekcijos arinkstų transplantacija. Makrofagai yra viena iš pagrindinių uždegiminių ląstelių, vaidinančių svarbų vaidmenį AKI progresavime. Mincle daugiausia ekspresuojamas mieloidinėse ląstelėse ir neutrofiluose, ypač makrofaguose. Jis turi labai išlikusį C tipo lektino domeną, kuris yra pagrindinis priešgrybelinio imuniteto veikėjas. Mincle tapatybę iš pradžių patvirtino Matsumoto kaip lipopolisacharidą (LPS) – sukeltą baltymą, galintį aktyvuoti branduolinį faktorių kappaB (NF-κB) per Card{5}}Bcl10-MALT1 signalizaciją, todėl veiksmingo T pagalbininko 1 (Th1) ir Th17 potipių susidarymas, skatinantis uždegiminių faktorių raišką, kad būtų galima sujungti įgimtus ir adaptyvius imuninius atsakus.6) Naujausi tyrimai parodė, kad Mincle taip pat gali atpažinti visas nenormalias medžiagas ląstelėse, jausti pažeidimus. susijusius signalus ir reaguoti į atitinkamus atsakymus. Pavyzdžiui, Mincle gali prisijungti prie -GlcCer, kuris yra visur esantis pažeistų ląstelių tarpląstelinis metabolitas, aktyvinantis ir indukuodamas citokinus ir sukeldamas specifinius antigenui T ląstelių atsakus.7) Mincle yra receptorius, kuris jaučia nevienalytę ląstelių mirtį, gali atpažinti endogeninį ligandą. SAP130, kurį išskiria negyvos ląstelės, skatina uždegiminių citokinų gamybą ir skatina neutrofilų infiltraciją į pažeistus audinius.8,9) Pažymėtina, kad Lan komanda patvirtina, kad Mincle yra specialiai indukuojamas M1 makrofagams ir vaidina pagrindinį vaidmenį palaikant uždegimo fenotipą. M1 makrofagai.6) Todėl tikslinė mišri terapija gali būti raktas gydant AKI ligą.
CISTANCHE PAGERINS INKSTU/INKSTŲ FUNKCIJĄ
Oridoninas yra natūralus tetraciklinis dipeptidinis junginys su kauriene skeletu, išskirtu iš Londono, turintis daug įvairių biologinių funkcijų, įskaitant antimikrobines, priešnavikines, priešuždegimines ir antifibrozes. Daugelio tipų tyrimais buvo pranešta apie šių natūralių diterpenoidų priešnavikinį potencialą ir mechanizmą vėžio ląstelių linijų serijoje.10,11) ir buvo patvirtinta, kad Oridoninas, kaip vaistas nuo vėžio, šiuo metu yra atliekami I fazės klinikiniai tyrimai. Kinija. Tačiau Oridonino vaidmuoinkstų ligaretai pranešama. Kelių tipų tyrimai patvirtino, kad Oridoninas gali sumažinti proteinuriją irinkstų pažeidimasspontaninės raudonosios vilkligės pelių modeliuose, o in vitro tyrimais nustatyta, kad Oridonin gali sumažinti uždegiminių citokinų sekreciją ir uždegiminį atsaką, kurį sukelia LPS po gydymo Oridonin.12,13) Šiame tyrime daugiausia dėmesio skyrėme Oridonin potencialo atskleidimui. gydant AKI ir ar jo pagrindinis mechanizmas yra susijęs su Mincle slopinimu makrofaguose. Šis tyrimas gali būti tvirtas AKI terapijos patikrinimo įrodymas.
Raktiniai žodžiai:Oridoninas; ūminis inkstų pažeidimas (AKI); makrofagas; faršas; uždegimas; inkstų funkcija
MEDŽIAGOS IR METODAI GyvūnaiTrisdešimt šeši C57BL/6 pelių patinai (8–1 0 sav. amžiaus) buvo gauti iš Beijing Vital River Laboratory Animal Technologies Co., Ltd. (Pekinas, Kinija) ir laikomi kontroliuojamose temperatūros ir drėgmės patalpose. - Pietvakarių medicinos universiteto eksperimentų su gyvūnais centro kontroliuojama patalpa (atitinkamai 21.0 ± 2,0 laipsnio ir 65 ± 5 proc.). Visos pelės buvo stochastiškai suskirstytos į tris grupes: netikrą grupę, išemijos-reperfuzijos pažeidimo (IRI) modelio grupę (IRI grupę) ir oridoninu gydytų IRI grupę (OR grupė) (15 mg / kg). Prieš operaciją pelės buvo anestezuotos intraperitonine injekcija 45 mg/kg natrio pentobarbitalio. AKI pelės modelis buvo sukurtas suspaudžiant dvipusįinkstųarterijas 35 min. Apgaulingos grupės pelėms pilvo ertmė buvo veikiama tik 35 minutes, o OR grupės pelėms 3 dienas po operacijos buvo nuolat į skrandį švirkščiamas Oridonin, o kitoms grupėms buvo duotas toks pat kiekis fiziologinio tirpalo kaip kontrolinė. Trečią dieną pelėms buvo sušvirkšta į pilvaplėvės ertmę fiziologiniu tirpalu praskiesto pentobarbitalio natrio druskos (200 mg/kg). Visos eksperimentų su gyvūnais procedūros buvo atliekamos pagal Laboratorinių gyvūnų priežiūros gaires (leidimo numeris 201812-55).
CISTANCHE PAGERINS INKSTŲ/INKSTŲ NEAPTARKIMĄ
Cheminės medžiagos ir reagentaiOridoninas (BP1041, grynumas didesnis arba lygus 95 proc.) buvo gautas iš Biopurify phytochemicals Ltd. (Čengdu, Kinija). NF-κB, p-AKT ir indukuojamos azoto oksido sintazės (iNOS) antikūnai buvo įsigyti iš Cell Signaling Technology (Beverly, MA, JAV). Interleukinas (IL)-1, naviko nekrozės faktorius (TNF)-, Mincle, p-NF-κB ir AKT antikūnai buvo įsigyti iš Santa Cruz Biotechnology (Santa Cruz, CA, JAV). Visas RNR ekstrahavimo rinkinys buvo gautas iš Tiangen Biochemical Technology (Beijing) Co., Ltd. (Pekinas, Kinija). Atvirkštinės transkripcijos rinkinys, realaus laiko PGR rinkinys, kurį teikia Shanghai Promega Bioproducts Co., Ltd. (Šanchajus, Kinija). LPS (Escherichia coli 055:B5) pateikė Sigma Chemical (St. Louis, MO, JAV). DNR transfekcijos reagentas buvo gautas iš Zeta Life (Zeta Life, JAV).
Ląstelių kultūra ir transfekcijosRAW264.7 ląstelės buvo įsigytos iš Kinijos mokslų akademijos ląstelių banko (Šanchajus, Kinija), kultivuojamos 37 laipsnių temperatūroje 5 procentų CO2 aplinkoje Dulbecco modifikuotoje Eagle's medium (DMEM) didelės gliukozės terpėje. Virškinimas buvo atliktas, kai ląstelės išaugo iki 80 procentų susiliejimo. Viso eksperimento metu buvo naudojamos logaritminės augimo fazės ląstelės. Perteklinė Mincle ekspresija RAW264.7 ląstelėse buvo atlikta transfekuojant Mincle ekspresijos plazmidę (Genechem, Šanchajus, Kinija) į ląsteles su Zeta Life Advanced DNR transfekcijos reagentu. Ląstelių morfologija ir augimo būklė buvo stebima naudojant šviesos mikroskopą.
Ląstelių skaičiavimo rinkinio-8 (CCK-8) analizėTrys tūkstančiai ląstelių buvo pasėtos į 96-šulinėlių plokštelę su 6 kartotiniais šulinėliais vienoje grupėje. Vėliau ląstelės buvo badomos terpėje be serumo 24 valandas, po to 24 valandas buvo apdorotos vaistų turinčia terpe. Tada, pašalinę terpę, į kiekvieną šulinėlį įpilkite 100 µL 10 procentų CCK-8 reagento ir inkubuokite 3 valandas. Ląstelių išgyvenamumas buvo apskaičiuotas pagal kiekvieno šulinio absorbcijos vertę.
Inkstų funkcijos įvertinimasKreatinino ir karbamido azoto kiekis serume buvo išmatuotas naudojant atitinkamą rinkinį (Jiancheng, Nanjing, Kinija). Vertės išreiškiamos mmol/l serumo.
Hematoksilino-eozino (H&E) ir periodinės rūgšties-šifo (PAS) dažymasSurinktasinkstasaudinys 24 valandoms buvo dedamas į 4 procentų paraformaldehidą, po to dedamas į skirtingų koncentracijų etanolio tirpalus ir įdėtas į ksileno ir vaško blokus. Prieš dažymą stikleliai buvo įdedami į 60 laipsnių orkaitę 2 valandoms, tada devaškuoti ir rehidratuoti. Kai kurie mėginiai buvo nudažyti eozino ir hematoksilino pigmentais, į kitus mėginius įpilama periodinės rūgšties alkoholio ir Schifffdye tirpalo atskirai. Galiausiai, Stebėtas ir nufotografuotas mikroskopo kamera.
Su fermentais susijęs imunosorbentinis tyrimas (ELISA)IL-1, IL-6 ir TNF- kiekis ląstelių kultūros supernatante buvo išmatuotas naudojant ELISA rinkinius (IL-1: Neobioscience, EMC001b; IL-6: Neobioscience , EMC004; TNF-: Neobioscience, 500850). Atlikite mėginio tyrimą pagal reagento tiekėjo pateiktą metodą ir apskaičiuokite kiekvienos grupės koncentracijos vertę pagal standartinę kreivę.
CISTANCHE PAGERINS INKSTU/INKSTŲ SKAUSMĄ
Western BlotVisi gyvūnų ir ląstelių mėginiai buvo lizuojami radioimunoprecipitacijos tyrimo (RIPA) buferyje ant ledo ir centrifuguojami, kad būtų gautas atitinkamas baltymų mėginys. Kiekvieno mėginio baltymų koncentracijai nustatyti buvo naudojamas Coomassie briliantinio mėlynumo tyrimas, o gelis buvo paleistas su tam tikru baltymų mėginių kiekiu. Kiekviena baltymų grupė buvo atskirta natrio dodecilsulfato-poliakrilamido gelio elektroforeze (SDS-PAGE), o po to perkelta į polivinilideno difluorido (PVDF) membraną. Per naktį inkubavus membraną su pirminiais antikūnais 4 laipsnių temperatūroje, antriniai antikūnai buvo inkubuojami kambario temperatūroje 1 val. Juostos spalva sukurta naudojant spalvą išryškinantį sprendimą, o juostos pilkumo intensyvumas buvo apskaičiuotas Image J programine įranga.
Realaus laiko PGRBendra RNR buvo gauta pagal Tiangen rinkinio naudojimo instrukcijas ir ištirpinta vandenyje be fermentų. Vadovaudamiesi atitinkamomis instrukcijomis, mes naudojame atvirkštinės transkripcijos rinkinį cDNR sintezei. RT-PGR reakcijos sąlygos buvo atliekamos taip: 37 laipsniai 15 min., 95 laipsniai 5 min., o po to 40 ciklų.
95 laipsnių 10 min., 95 laipsnių 15 s ir 60 laipsnių 1 min. Santykinis kiekvieno geno mRNR ekspresijos lygis buvo normalizuotas, palyginti su gliceraldehido -3-fosfatdehidrogenaze (GAPDH). Pradmenų sekos parodytos 1 lentelėje.Imunofluorescencinis dažymasRAW264.7 ląstelės buvo fiksuotos 4 procentų paraformaldehidu, po to blokuojamos galvijų serumo albuminu kambario temperatūroje (rt) 1 valandą ir inkubuojamos su atitinkamais pirminiais antikūnais 4 laipsnių temperatūroje per naktį. Po plovimo fosfatiniu buferiniu tirpalu (PBS) 3 kartus, ląstelės buvo inkubuojamos su antriniais antikūnais kambario temperatūroje 1 valandą. Branduolys buvo nudažytas 4′-6-diamidino- 2-fenilindoliu (DAPI). Imunofluorescenciniai vaizdai buvo užfiksuoti Nikon Eclipse mikroskopu (Nikon, Tokijas, Japonija).Statistinė analizėStatistinės analizės rezultatai pateikiami kaip vidurkis ± standartinis nuokrypis (SD), Grupių palyginimai atlikti naudojant vienpusę ANOVA, p.< 0.05="" was="" considered="" significant.="" graphpad="" prism="" 7="" software="" was="" used="" to="" calculate="" data="" for="" statistical="">
REZULTATAI
Oridonino slopinamas išemijos ir reperfuzijos sukeltas inkstų pažeidimas ir uždegimasSiekiant įvertinti apsauginį oridonino poveikį AKIinkstassukelta išemijos-reperfuzijos, ištyrėme kreatinino, karbamido azoto irinkstųkiekvienos grupės pelių kanalėlių pažeidimo indeksas, taip pat uždegiminių citokinų ekspresija inkstų audinyje ir įvertintainkstųpatologija H&E ir PAS dažymu. Rezultatas parodytas paveikslėlyje, kad AKI modelio grupės kreatinino (1a pav.) ir karbamido azoto (1b pav.) koncentracija serume sumažėjo, kai tris dienas buvo nuolat švirkščiamas Oridonin. Atitinkamai, kanalėlių pažeidimo indeksas parodė, kad oridoninas stipriai sumažina kanalėlių nekrozęinkstasAKI pelių (1c pav.). Realaus laiko PGR rezultatai parodė, kad oridoninas žymiai sumažino IL-1, MCP-1 ir F4/80 mRNR lygius.inkstasAKI modelių grupės (1d–f pav.). Be to, patologinio dažymo ir imunofluorescencijos rezultatai parodė, kad Oridoninas reikšmingai sumažino kanalėlių nekrozę (1g pav.) ir uždegiminių citokinų baltymų kiekį (1h pav.) AKI pelėms, o tai veiksmingai pagerino inkstų pažeidimą, o tai rodo, kad Oridonin turėjo reikšmingą priešuždegiminį poveikį. ir priešuždegiminis poveikis AKI modeliui.
Oridonino slopinamas mincle / AKT / NF-κB signalizacijos kelias AKI pelių inkstuoseIšsiaiškinti Oridonin terapinį mechanizmąinkstųuždegimą, toliau ištyrėme Mincle / AKT / NF-κB signalizacijos aktyvavimą po Oridonino vartojimo. Western blot rezultatai parodė, kad Oridonin intervencija gali žymiai sumažinti su uždegimu susijusių baltymų IL-1 ir iNOS ekspresiją AKIinkstusir sumažina AKT ir NF-κB kelio baltymų aktyvavimą (2a–e pav.), o tai rodo, kad oridoninas gali slopinti IRI sukeltą uždegimąinkstasiš AKI. Pažymėtina, kad realaus laiko PGR ir Western blot rezultatai parodė, kad Oridoninas veiksmingai sumažino Mincle mRNR ir baltymų kiekį.inkstasAKI modelio (2f, g pav.). Norint nustatyti Mincle vietąinkstas, atlikome imunofluorescenciją kiekvienoje grupėje (2h pav.), rezultatai parodė, kad Mincle buvoinkstųinterstitium ir lokalizuotas kartu su makrofagų žymekliu F4/80, o tai rodo, kad Mincle daugiausia buvo išreikštainkstųmakrofagai ir stipriai reguliuojami po AKI. Imuno-FL fluorescencijos rezultatai taip pat parodė, kad makrofagų žymiai padaugėjo po AKI, o tai rodo svarbų makrofagų vaidmenį vystant AKI. Pažymėtina, kad Oridoninas reikšmingai slopino MincleinkstųAKI pelių makrofagai. Pirmiau pateikti rezultatai rodo, kad Oridonin gali pagerėtiinkstasuždegimas ir sužalojimas, slopindami Mincle / AKT / NF-κB signalizaciją.
Oridoninas reikšmingai atkūrė RAW264.7 makrofagų morfologinius pokyčius, kuriuos sukėlė LPSNorėdami ištirti Oridonino poveikį uždegiminiams makrofagams, mes panaudojome LPS, kad paskatintume RAW264.7 ląsteles sukurtiuždegiminių ląstelių modelis. Oridonino cheminė struktūra parodyta 3a pav. Todėl mes išbandėme Oridonino toksiškumą skirtingomis koncentracijomis RAW264.7 ląstelėse. CCK8 rezultatai rodo, kad kai koncentracija yra 5 µM, Oridoninas neturi reikšmingo poveikio ląstelių morfologijai (3b pav.), kuris buvo naudojamas tolesniuose in vitro eksperimentuose. Stebėtina, kad Oridoninas žymiai pagerino LPS sukeltą makrofagų morfologiją (3c pav.), įskaitant tarpląstelinių vakuolių sumažinimą ir ląstelių tvirtumą.
Oridoninas slopino uždegiminių faktorių sekreciją ir raišką LPS stimuliuojamame RAW264.7Ląstelės Norėdami išsiaiškinti priešuždegiminį oridonino poveikį LPS stimuliuotoms RAW264.7 ląstelėms, mes panaudojome realaus laiko FL fluorescencinę PGR, ELISA ir imunofluorescenciją, kad išmatuotų uždegiminius veiksnius, kuriuos išskiria kiekviena ląstelių grupė. Rezultatai parodė, kad Oridoninas reikšmingai sumažino IL-1, IL-6, TNF-, iNOS ir MCP-1 mRNR lygius LPS stimuliuojamose ląstelėse (4a–e pav.). Be to, Oridoninas taip pat reikšmingai sumažino IL-1, IL-6 ir TNF- sekreciją supernatante uždegiminių ląstelių modelyje (4f–h pav.), taip pat baltymų kiekį uždegiminių citokinų LPS stimuliuojamuose makrofaguose (4i pav.). Aukščiau pateikti rezultatai rodo, kad Oridoninas turi akivaizdų priešuždegiminį poveikį makrofagams.
Oridoninas blokavo Mincle / AKT / NF-κB signalizacijos kelią uždegiminiuose makrofaguose in vitroMincle, kaip modelio atpažinimo receptorius, yra būtinas skatinant su makrofagais susijusį uždegimąinkstasiš AKI. Aukščiau pateikti eksperimentų su gyvūnais rezultatai parodė, kad Oridoninas gali sumažinti Mincle ekspresijąinkstasiš AKI. Todėl toliau tyrėme, ar Oridoninas gali sumažinti Mincle mRNR ir baltymų lygį LPS stimuliuojamame makrofagų uždegiminiame modelyje. Western blot, imunofluorescencijos ir realaus laiko PGR rezultatai parodė, kad 5 µM oridoninas ne tik reikšmingai sumažino mRNR ekspresiją (5c pav.), bet ir sumažino Mincle baltymų kiekį uždegiminiuose makrofaguose (5a, b pav. , d). Be to, Oridoninas žymiai sumažino iNOS ir fosforilinto-AKT bei NF-κB baltymų lygį LPS apdorotose RAW264.7 ląstelėse.
Per didelis Mincle ekspresija pašalino slopinamąjį oridonino poveikį uždegimui LPS stimuliuojamose RAW264.7 ląstelėseNorėdami nustatyti, ar Mincle yra pagrindinis Oridonin taikinys, slopinantis makrofagų uždegimą, RAW264.7 ląsteles transfekavome Mincle ekspresijos plazmide, kad padidintume Mincle ekspresijos reguliavimą. Remiantis realaus laiko PGR ir Western blot rezultatais, buvo įrodyta, kad Mincle mRNR ir baltymų kiekis RAW264.7 ląstelėse po transfekcijos padidėjo (6a, b pav.). Tada plazmidė buvo transfekuota į oridoninu apdorotas uždegimines ląsteles, ir rezultatai parodė, kad Mincle ekspresija taip pat buvo padidinta šios grupės ląstelėse (6c, d pav.). Vektorius buvo transfekuotas ląstelėse kaip neigiama kontrolė. Atkūrimo eksperimentų rezultatai parodė, kad per didelė Mincle ekspresija oridoninu gydytame uždegiminiame makrofage padidino AKT ir NF-κB aktyvavimą, padidindamas šių dviejų baltymų fosforilinimo lygį (6d–g pav.), o tai rodo, kad Oridoninas slopina makrofagų uždegimą. gali per žemyn reguliuojamą Mincle ir jo pasroviui AKT ir NF-κB signalizaciją. Be to, realaus laiko PGR ir ELISA rezultatai parodė, kad per didelė Mincle ekspresija atkūrė citokinų ekspresiją ir sekreciją Oridoninu gydomuose uždegiminiuose makrofaguose (6h–l pav.). Aukščiau pateikti rezultatai parodė, kad Oridoninas slopina uždegimą makrofaguose, reguliuodamas Mincle / AKT / NF-κB signalizaciją.
DISKUSIJA
AKI yra klinikinis sindromas, kurį sukelia įvairios etiologijos ir patologiniai mechanizmai.Inkstųišeminis-reperfuzinis pažeidimas yra dažnas patofiziologinis procesas klinikose ir viena iš pagrindinių ūminio susirgimo priežasčių.inkstų pažeidimas.14,15) Uždegiminis atsakas yra sudėtingas tinklas, susijęs suinkstųparenchiminės ląstelės ir nuolatinės imuninės ląstelės, kuriose makrofagai vaidina svarbų vaidmenįinkstų pažeidimas.16) Dėl imuninės mikroaplinkos pokyčių makrofagai bus poliarizuoti į keletą fenotipų, daugiausia suskirstytų į M1 ir M2 tipus. iNOS išraiška yra M1 tipo ženklas. In vivo ir in vitro tyrimai parodė, kad iNOS ekspresija padidėja modelio grupėje, o po gydymo ekspresija sumažėja. Makrofagų sukeltas C tipo lektinas (Mincle) yra C tipo lektino receptorius, ekspresuojamas aktyvuotuose makrofaguose ir yra genetiškai lokalizuotas pelės 6F2 ir žmogaus chromosomoje 12P31. Kai kurie tyrimai pranešė, kad Mincle dalyvauja inicijuojant įgimtą imuninį atsaką, atpažindamas su patogenais susijusius molekulinio modelio atpažinimo receptorius.17) Kai kurie eksperimentiniai tyrimai parodė, kad po smegenų išeminio sužalojimo sužalotoje vietoje padidėja baltųjų kraujo kūnelių infiltracija. gali lemti neuronų praradimą kraujagyslių perfuzijos srityje, o Mincle išmušimas gali būti reikšmingas
sulėtinti išeminį pažeidimą, kurį sukelia vidurinės smegenų arterijos okliuzija. Naujausi tyrimai rodo, kad Mincle gali nujausti mirtįinkstųkanalėlių epitelio ląstelės, kurios jungiasi su -gliukozilceramidu, pagreitina uždegiminį atsaką ir lėtina uždegimo pašalinimą.18) Tyrimai apieinkstų ligayra toks pat, kaip ir mūsų tyrimų rezultatai, kurie parodė, kad Mincle yra labai išreikštas tiek išemijos reperfuzijos, tiek cisplatinos sukeltuose AKI modeliuose, ir jis yra konkrečiai išreikštas M1- tipo makrofaguose. Apibendrinant galima pasakyti, kad tikslinis Mincle tyrimas gali būti naujas susijusių ligų, kurias sukelia uždegiminiai makrofagai, gydymas. Mūsų tyrimas parodė, kad Mincle ekspresija padidėja AKI pelių modelyje
sukurta išemijos-reperfuzijos būdu. Remiantis imunofluorescencinės bendros lokalizacijos rezultatais, Mincle daugiausia išreiškiama antinkstasmodelio grupės pelių makrofagais ir atitinka Lan tyrimų rezultatus. Mincle yra indukuojamas specialiai M1 makrofagams, kur Mincle-dangaus signalizacija skatina ir palaiko uždegiminius M1 makrofagų fenotipus ūminiu atveju.inkstų uždegimas.6) Mincle priklauso C tipo lektino receptoriui (CLR), kuris gali atpažinti grybus ir kitas mikroorganizmų formas arba aseptinius pavojus. Jie sukelia uždegimą per jungiamąjį baltymą CARD9, po kurio susidaro CARD9-Bcl10 kompleksas ir tipiškas NF-κB reguliavimas. Yra reguliavimo ryšys
tarp NF-κB ir AKT baltymo.10,19) LPS stimuliuojamų makrofagų uždegimo tyrimo metu buvo patikrinta, kad AKT ir NF-κB ekspresija yra padidėjusi. Vėliau mes transfekavome didelės ekspresijos Mincle plazmidę į ląstelę, kuri buvo gydoma vaistais, ir rezultatai parodė, kad AKT ir NF-κB signalizacijos kelias vėl buvo aktyvuotas. Galima daryti išvadą, kad Mincle gali paveikti šio kelio baltymų ekspresiją. Tačiau neaišku, kaip Mincle reguliuoja šiuos du signalizacijos kelius, ir neaišku, ar baltymas aktyvuojamas per dangaus kelią, kaip teigiama tyrime.
Oridoninas yra natūralus diterpenoidinis junginys, išgautas iš Orion, ir turi platų farmakologinį poveikį, įskaitant priešnavikinį, priešuždegiminį ir neuroprotekcinį poveikį. Tirdama neuroprotekcinę Oridonino funkciją, Wen komanda nustatė, kad Oridoninas gali blokuoti atsparumą insulinui, slopindamas autofagiją, kad pagerintų pažinimo sutrikimus.20) Lino komanda nustatė, kad Oridoninas gali apsaugoti nuo Parkinsono ligos ir traukulių, nes sumažina neurooksidacinį stresą ir kitus neuroprotekcinius poveikius. 21) Nuodugniausiai ištirtas Oridonino priešnavikinis poveikis. Mokslininkų grupė padarė vaistą į inhaliacines daleles, skirtas nesmulkialąstelinio plaučių vėžio modelio pelėms gydyti, kurioms pasireiškė stiprus angiogenezę slopinantis ir proapoptozinis poveikis bei reikšmingas priešvėžinis poveikis.22) Oridoninas taip pat gali turėti priešuždegiminį poveikį. poveikis. Jis gali slopinti Notch kelią, paskatinti makrofagų poliarizaciją pereiti prie priešuždegiminio fenotipo ir slopinti autoimuninio neurito atsiradimą.23)
Jis taip pat gali palengvinti osteoartrito atsiradimą, nes slopina uždegiminių faktorių sekreciją ir redukcinės oksidazės gamybą.24) Kai kurie tyrimai parodė, kad Oridoninas taip pat turi reikšmingą poveikį įvairioms ligoms.inkstų ligos. Tyrimai parodė, kad oridoninas gali bendradarbiauti su 5-fluorouracilu (5-FU), kad sukurtų priešnavikinį poveikį ir padidintų 5-FU citotoksiškumąinkstųvėžio ląsteles.25) Remiantis šio tyrimo in vivo eksperimento rezultatais, Oridoninas gali žymiai sumažinti kreatinino karbamido azoto kiekį serume pelėms, patyrusioms išemijos ir reperfuzijos pažeidimą, ir žymiai sumažinti jo patologinę žalą. Rezultatai taip pat parodė, kad Oridonin gali slopinti uždegiminį aktyvumą, susijusį su AKT ir NF-κB kelio slopinimu, o tai panašu į Oridonin intervencijos sergant diabetine nefropatija tyrimų rezultatus ir kartu gali sumažinti uždegiminių citokinų infiltraciją bei rinkliavos aktyvumą. kaip receptorius 4 (TLR4)/NF-κB signalizacijos kelias.26) Aukščiau pateikti rezultatai rodo, kad Oridoninas gali slopinti Mincle ir slopinti AKT ir NF-κB kelio aktyvumą. In vitro eksperimentuose šie kelio rodikliai buvo padidinti LPS stimuliuojamo makrofagų uždegimo modelyje ir taip pat sumažėjo Oridonino. Atkūrimo eksperimentų rezultatai parodė, kad per didelė Mincle ekspresija Oridoninu gydytuose uždegiminiuose makrofaguose padidino AKT ir NF-κB signalizacijos aktyvumą, todėl Oridonin gydomose ląstelėse sustiprėjo uždegiminių citokinų ekspresija ir sekrecija, o tai rodo, kad Oridoninas slopina uždegimą makrofagai gali slopinti Mincle ir AKT/NF-κB signalizaciją
CISTANCHE PAGERINS INKSTŲ/INKSTŲ INFEKCIJĄ
Yra daug būdų, kaip sukurti AKI gyvūnų modelius, įskaitant dvišalę išemiją-reperfuziją, vienpusį IRI su priešinga nefrektomija, cisplatiną, difterijos toksiną, LPS, aristolochinę rūgštį arba folio rūgštį. Tačiau cisplatinos injekcija negali visiškai imituoti klinikinių pacientų. Difterijos toksino injekcijos sukeltas modelis linkęs pailginti ligos progresavimąinkstų liga, kuris daugiausia gali sukeltiinkstųfibrozė ir glomerulų sklerozė, taip pat lengvas kanalėlių pažeidimas. Aristolocho rūgšties nefropatija yra tubulointersticinis nefritas, o folio rūgštis taip pat sukelia nefrotoksiškumą.inkstųfifibrozė, tačiau klinikinis šių dviejų atvejų dažnis yra mažas.27) IRI sukeltas ūminisinkstų pažeidimasyra pasaulinė visuomenės sveikatos problema, susijusi su dideliu sergamumu, mirtingumu ir sveikatos priežiūros išlaidomis. Todėl mes naudojame išemiją-reperfuziją, kad sukurtume ūminįinkstassužalotų pelių modelis. Keletas tyrimų parodė skirtingą suspaudimo laikąinkstųarterija. Mokslinių tyrimų grupė sukūrė IRI gyvūnų modelį, skirtą dvipusiam suspaudimuiinkstųSprague-Dawley (SD) žiurkių pedikulai 1 val. 28) Kita tyrėjų grupė suspaudė dvipusįinkstųarterijose 45 min., kad paruoštų reperfuzijos modelį Wistar žiurkėms. Be to, buvo atliktas tyrimas naudojant C57BL/6J peles, kurios 35 min. užfiksavo dvišalius inkstų pedikelius, kad būtų sukurtas modelis.29) Remiantis ankstesniais eksperimento rezultatais, nustatyta, kad reperfuzija buvo atnaujinta po dvišalioinkstųarterija buvo užspausta 20 minučių, o po trijų dienų kreatinino kiekis serume grįžo į normalų pradinį lygį. Todėl mes pasirinkome dvišales inkstų arterijas užspausti 35 minutes prieš reperfuziją, o kreatinino koncentracijos serume pokyčiai buvo stabilūs po operacijos tris dienas. Operacijos metu galime pastebėti, kad spalvainkstasiš rožinės spalvos pasikeičia į šviesiai raudoną, kurią sukeliainkstųarterijų kraujagyslių išemija. Nuėmus segtuką po 35 min., galime pastebėti, kad spalvosinkstasgrįžta į normalią, buvo sukonstruotas IRI-AKI modelis. Apibendrinant galima pasakyti, kad ši išvada parodė, kad Oridoninas turi reikšmingą priešuždegiminį poveikį ir gali apsaugoti AKI inkstus nuo sužalojimų, kurie daugiausia gali būti susiję su Mincle slopinimu ir jo NF-κB ir AKT signalizacijos aktyvumu. Šiame tyrime pateikiamas naujas galimas AKI gydymo Oridonin mechanizmas, kuris gali suteikti galimybių klinikiniam AKI gydymui.
