Cistanche Tubulosa vandeninių ekstraktų panaikinimas į Alzheimerio ligą panašių žiurkių modelio elgsenos trūkumą: svarba amiloido nusėdimui ir centrinio neurotransmiterio funkcijai

Fonas

Alzheimerio ligai (AD), progresuojančiam neurodegeneraciniam sutrikimui, būdingi pažinimo sutrikimai ir trys neuropatologiniai požymiai: neuronų praradimas, senatvinės plokštelės ir neurofibriliniai raizginiai [1]. Pagrindinė AD patogenezė apima cholinerginę hipotezę ir amiloido kaskados hipotezę [2]. Pagrindinis amiloido kaskados hipotezės bruožas yra šalutinio amiloido peptido (A ) susidarymas iš amiloido pirmtako baltymo per amiloidogeninį kelią [1,2]. Kai A nusėda smegenyse, jis yra susijęs su smegenų neuronų praradimu, ypač cholinerginių neuronų grandinių degeneracija bazinėse priekinėse smegenyse (cholinerginė hipotezė) [2,3]. Daugybė tyrimų parodė, kad intracisterninė A 1-42 infuzija žiurkėms pirmiausia buvo nusėdusi priekinėje žievėje ir hipokampe, todėl sutrinka atmintis atliekant elgesio užduotis, įskaitant slopinimo vengimo užduotis ir Morriso vandens labirintą [3, 4]. Taigi A 1-42 intracisterninė infuzija į šoninį skilvelį sukėlė į AD panašius patologinius ir elgesio pokyčius gyvūnų modeliuose [3].

Cistanche tubulosa(Schenk) R. Wight (sutrumpintai kaip CT) dažniausiai vartojatradiciniai kinų gydytojai užmaršumui gydyti, impotencija ir senatvinis vidurių užkietėjimas [5]. Naujausi tyrimai parodė, kad išankstinis gydymas bendrais KT feniletanoidiniais glikozidais gali pagerinti slopinamąjį vengimo atsaką ir neuronų apoptozę, kurią sukelia chinolino rūgštis, A 25-35 arba bendrosios miego arterijos perrišimas pelėms [6-8]. jo antioksidacinis aktyvumas ir tarpląstelinių antioksidacinių fermentų, tokių kaip superoksido dismutazė ir glutationo peroksidazė, aktyvumas [9]. Bendrieji feniletanoidiniai glikozidai daugiausia apima 2'-acetillakteozidą, akteozidą, cistanozidus, echinakozidą ir izoakteozidą [10]. Echinakozidas ir akteozidas gali užkirsti kelią pelėms nuo skopolamino sukelto atminties sutrikimo [11,12]. Todėl iškėlėme hipotezę, kad CT gali turėti teigiamą poveikį AD sergantiems pacientams. Norėdami patikrinti šią hipotezę, naudojome CT ekstraktą, kuriame buvo kiekybiškai įvertintas fenilpropanoidų glikozidų kiekis, kad ištirtume poveikį amiloido sukeltams histopatologiniams ir elgesio pokyčiams į AD panašiame žiurkės modelyje. Remiantis Myhrer keturių elgesio užduočių metaanalizė [13], acetilcholinerginė ir katecholaminerginė veikla turi didelę įtaką mokymuisi ir atminčiai. Į AD panašus žiurkės modelis sukelia centrinių neurotransmiterių, tokių kaip acetilcholinas ir katecholaminai, disfunkciją, kuri yra glaudžiai susijusi su atminties trūkumu [3,14]. Taigi mes toliau įrodėme centrinio neurotransmiterio funkcijos vaidmenį KT ekstrakto sukeltam atminties sutrikimo, kurį sukelia A 1-42 infuzija, panaikinimui, matuodami centrinių neurotransmiterių lygį ir susijusių fermentų veiklą.

NATŪRALŪS CISTANCHE VAUBELIAI ALZHEIMERIO LIGOS PREVENCIJAI PHGS75% ECH 30% ACT 12%

Metodai

Augalų ekstrakto paruošimas

Išdžiovintas Cistanche tubulosa (Schenk) Wight (Citu970429) medžiagas nustatė Biotechnologijos plėtros centras (Taipėjus, Taivanas, ROC) ir deponavo Sinphar Tian-Li Pharmaceutical Co., Ltd. (Hangdžou, Kinija). Vandeniniame CT ekstrakte yra trysfeniletanoidiniai glikozidai, echinakozidas (25,4 %), akteozidas (3,8 %) ir izoakteozidas(4,1%), kurie buvo kiekybiškai įvertinti naudojant aukštos kokybės skysčių chromatografiją ir fotodiodų matricos detektorių pagal Jiang ir kt. metodą [9]. CT ekstraktas buvo šviežiai paruoštas steriliu distiliuotu vandeniu.

Dalykai

Šiame tyrime buvo naudojami Sprague-Dawley žiurkių patinai, sveriantys 300-350 g, gauti iš BioLASCO Taiwan Co. Ltd.. Jie buvo atsitiktinai laikomi keturių žiurkių tankiu vielinio tinklelio narve (39 × 26 × 21 cm) temperatūros (23 ± 1 laipsnis) ir drėgmės (60%) reguliuojamoje aplinkoje, kurioje buvo laisva prieiga prie standartinio maisto granulėse. vandens iš čiaupo ir 12 h - 12 h šviesos / tamsos ciklu (šviesos fazė: nuo 08:00 iki 20:00 h). Eksperimento protokolą (Protokolas Nr. 99- 127-B) patvirtino Kinijos medicinos universiteto Institucinis gyvūnų priežiūros ir naudojimo komitetas (IACUC), o gyvūnų priežiūra buvo vykdoma pagal Pagrindinius gyvūnų priežiūros ir naudojimo principus. Laboratoriniai gyvūnai. Po 1 savaitės aklimatizacijos žiurkės buvo naudojamos toliau nurodytiems eksperimentams.

AD tipo žiurkės modelis

Į AD panašus žiurkės modelis buvo sukurtas suleidus A 1-42 į smegenų skilvelį [4]. Trumpai tariant, žiurkės buvo anestezuotos fenobarbitaliu (45 mg / kg, ip) ir dedamos į David Kopf stereotaksinį instrumentą. Infuzinė kaniulė buvo implantuota į kairįjį smegenų skilvelį (AP -1.5, ML +0.9, V -3.6 nuo bregmos) ir nuolatinė A {{10 }} (300 pmol per dieną) buvo palaikoma mažiausiai dvi savaites, prijungiant infuzinę kaniulę prie miniosmosinio siurblio (Alzet 2002; Alza, Palo Alto, CA, JAV).

Eksperimento grafikas

Įdiegus kaniulę ir prijungus mini osmosinį pompą, prasidėjo A 1-42 infuzija ir ši diena buvo paskirta 0 diena. Kitą dieną (1 dieną) žiurkėms buvo duota sterilaus distiliuoto vandens, KT ekstrakto (100, 200 mg/kg) arba donepezilo (0,75 mg). /kg) per visą A 1-42 infuzijos laikotarpį. KT ekstraktas (100, 200 mg/kg) arba donepezilis (0,75 mg/kg) taip pat buvo duodama žiurkėms likus 1 valandai iki elgsenos testų, įskaitant atviro lauko testą ir skylės testą (7 dieną po A 1-42 infuzijos). , slopinimo vengimo testas (8-9 diena po A 1-42 infuzijos) ir Morriso vandens labirintas (10-14 diena po A 1-42 infuzijos). 15 dieną po A 1-42 infuzijos žiurkės buvo nužudytos praėjus 1 valandai po paskutinio CT ekstrakto (100, 200 mg/kg) arba donepezilio (0,75 mg/kg) suleidimo acetilcholinesterazės (AChE) ir monoaminooksidazės (MAO) aktyvumas smegenyse ir centrinių neurotransmiterių bei jų metabolitų lygis. Operacijos, gydymo vaistais ir elgesio testų grafikas parodytas 1 paveiksle.

Judamoji ir tiriamoji veikla

Lokomotorinė ir tiriamoji veikla buvo matuojama atviro lauko užduotimi (Coulbourn Instruments LLC, PA, JAV). Kiekvienas gyvūnas buvo padėtas atskirai prie aparato ir stebimas 10 minučių, kad būtų užfiksuotas judėjimo laikas, ilgis ir greitis (lokomotorinis aktyvumas), patekimas į skylę ir praleistas laikas (tyrinamoji veikla), naudojant TruScan v 2.07 (Coulbourn Instruments LLC, PA, JAV) [15].

Slopinimo vengimo testas Buvo naudojamas slopinimo vengimo aparatas žiurkėms (Coulbourn Instruments LLC, PA, JAV). Kambaryje buvo tamsu per eksperimentinius seansus, kurie buvo vykdomi nuo 09:00 iki 12:00. Treniruotės metu (8 dieną) kiekviena žiurkė buvo patalpinta į šviesų skyrių nugara į giljotinos dureles ir buvo matuojamas laikas (praėjimo delsa), kol žiurkė pateko į tamsųjį skyrių. Žiurkei įėjus į tamsų skyrių,

durys buvo uždarytos. Neišvengiamas pėdos smūgis (0,8 mA 2 s) buvo duotas per tinklelio grindis. Žiurkė buvo pašalinta iš tamsaus skyriaus praėjus 5 sekundėms po šoko. Tada žiurkė buvo grąžinta į savo namų narvą iki sulaikymo bandymo. Po dvidešimt keturių valandų buvo atliktas sulaikymo tyrimas (9 diena). Žiurkė vėl buvo patalpinta į šviesos skyrių, atidarytos durelės ir užregistruotas perėjimo delsa kaip atminties išsaugojimo matas [15]. Buvo nustatytas 300 sekundžių viršutinis išjungimo laikas.

Morriso vandens labirinto užduotis Erdvinio veikimo funkcijai įvertinti žiurkės buvo išbandytos Morriso vandens labirinte, kurį sudarė juodas apskritas nerūdijančio plieno baseinas (165 cm skersmens ir 60 cm aukščio), užpildytas. su 23 ± 1 laipsnio vandeniu iki 35 cm gylio. Labirintas buvo geografiškai padalytas į keturis vienodus kvadrantus ir kiekviename kvadrante buvo paleidimo taškai. Baltosios žiurkės padėtis juodajame baseine užfiksuota vaizdo kamera ir automatizuotu vaizdo sekimo sistemos įrenginiu, aprūpintu EthoVision XT programine įranga (Noldus Information Technology, Leesburg, VA, JAV). Kiekvieno bandymo metu buvo registruojamas plaukimo kelias ir pabėgimo delsa norint rasti platformą. Kiekvienai žiurkei buvo atlikti du bandymai per dieną keturias dienas iš eilės (dieną 10 - 13 po A 1-42 infuzijos), siekiant rasti paslėptą plexiglass platformą (10 cm skersmens), esančią šiaurės rytų centre. kvadrante ir panardintas 1,0 cm žemiau vandens paviršiaus. Bandymas buvo pradėtas įdedant žiurkę į vandenį priešais baseino sieną viename iš keturių kvadrantų. Kiekvieno bandymo metu žiurkei buvo leista plaukti ne ilgiau kaip 120 sekundžių, kad surastų platformą. Kai pasisekė, žiurkei buvo leista 30-antrą poilsio laikotarpį ant platformos. Jei per nutrauktą laikotarpį nepasisekė, žiurkei buvo suteiktas 120 sekundžių balas, o po to ji fiziškai paguldyta ant platformos ir leista 30-sek. ramybės periodą. Bet kuriuo atveju žiurkei buvo nedelsiant atliktas kitas bandymas po poilsio laikotarpio [15]. Kitą dieną po keturių kasdienių sesijų (14 diena) zondo testas buvo atliktas kaip etaloninės atminties matas. Plexiglass platforma buvo pašalinta iš baseino ir kiekviena žiurkė buvo paleista iš kvadranto, esančio priešais platformos vietą. Parametrai, išmatuoti atliekant zondo testą per 60 sekundžių, buvo laikas ir atstumas kiekviename kvadrante, ypač sugaištas ieškant platformos treniruočių kvadrante, ir plaukimo greitis [15].

NATŪRALŪS CISTANCHE TUBULOSA, SKIRTAS ALZHEIMERIO LIGAI GYDYTI PHGS75% ECH 30% ACT 12%

1-42 imunohistocheminė dėmė

Žiurkės buvo anestezuotos natrio pentobarbitaliu (45 mg / kg) ir perfuzuotos fiziologiniu tirpalu per kairįjį širdies skilvelį, o po to - 4% paraformaldehido fiziologiniame fiziologiniame tirpale. Po postfiksacijos visos smegenys buvo pašalintos ir paruoštos parafino gabalėliams. Mikrotomu (Leica 2030 Biocut) buvo paimtos trys kiekvienos žiurkės smegenų dalys (10 μm). Audiniai buvo inkubuojami per naktį 4 laipsnių temperatūroje su pelių anti-žmogaus amiloido baltymo 17-24 monokloniniu antikūnu (1:300 praskiedimas, Dakopatts A/C; Glostrup, Danija). Imunitetai pažymėti skyriai buvo sukurti naudojant 0, 05% diaminobenzidino, naudojant Vectastain rinkinį (Vector Laboratories, Burlingame, CA, JAV). Smegenų sekcijos buvo išmatuotos 40 kartų padidinus, o mažiausiai 20 laukų iš kiekvienos smegenų dalies buvo suskaičiuoti vaizdo analizatoriumi (Leica, Q500MC, Nussloch, Vokietija).

Žievės ir hipokampo neuromediatorių lygio matavimas

Acetilcholino kiekiui matuoti žiurkės buvo numarintos apšvitinant mikrobangomis. Norint išmatuoti katecholaminų kiekį, žiurkės buvo nupjautos. Jų smegenys buvo greitai pašalintos iš kaukolės ir nedelsiant atskirtos į žievę ir hipokampą ant ledo pagal Glowinskio ir Iverseno protokolą [16]. Tada visi smegenų audiniai buvo homogenizuoti su ledine 0,2 M perchloro rūgštimi ir centrifuguojami 14, 000 aps./min 15 min 4 laipsnių temperatūroje. Supernatantai buvo surinkti, sudėti į 0.22 μM Ultrafree MC centrifuginius filtrų įrenginius (Millipore, JAV) ir vėl centrifuguoti 5 min 4 laipsnių temperatūroje. Surinkti mėginiai buvo laikomi -80 laipsniu, kad būtų galima išmatuoti centrinių neuromediatorių ir jų metabolitų koncentracijas naudojant didelio efektyvumo skysčių chromatografiją su elektrocheminiu aptikimu (EICOM HTEC-500, Japonija).

Žievės ir hipokampo AChE ir MAO aktyvumo nustatymas

Kiekviena žievė ir hipokampas buvo homogenizuoti 9-voltų lediniame fosfato buferiniame tirpale. Homogenatai buvo centrifuguojami 12, 000 aps./min. greičiu 15 min 4 laipsnių temperatūroje, o supernatantai iki naudojimo buvo laikomi –80 laipsnių temperatūroje. AChE aktyvumas buvo matuojamas Ellman metodu [17]. Smegenų homogenatai buvo inkubuojami su 5,5'-ditiobisu (2-nitrobenzenkarboksirūgštimi) 25 laipsnių temperatūroje 10 minučių, o po to buvo pridėta acetiltiocholino spalvai sukurti. 5-tio-2-nitrobenzenkarboksirūgšties gamyba buvo išmatuota esant 412 nm. AChE aktyvumas buvo išreikštas U AChE vienam mg baltymo. MAO-A ir MAO-B aktyvumas buvo nustatytas inkubuojant reakcijos mišinį, įskaitant žiurkės smegenų homogenatus, 5 U/mL krienų peroksidazę, 100 μM amplex raudoną ir substratą (5 mM serotonino MAO-A arba 5 mM benzilamino MAO- B) 25 laipsnių temperatūroje 60 min. Fermento aktyvumas buvo išreikštas kaip aktyvumo procentas, palyginti su žiurkėmis, kurioms buvo užpilta nešiklio [18]. Baltymų kiekis buvo nustatytas naudojant BioRad baltymų tyrimo rinkinį, naudojant galvijų serumo albuminą kaip standartą.

Statistinė analizė

Slopinimo vengimo testo duomenys buvo analizuojami naudojant Kruskal-Wallis neparametrinę vienpusę dispersijos analizę, po to Mann-Whitney U-testą. Erdvinio veikimo, zondo testo, amiloido nusėdimo santykio, AChE ir MAO aktyvumo bei centrinių neurotransmiterių ir jų metabolitų duomenims buvo atlikta vienpusė dispersijos analizė (ANOVA), po kurios buvo atliktas Scheff testas. Visuose statistiniuose vertinimuose statistinio reikšmingumo kriterijus buvo P < 0,05.

Rezultatai

KT arba donepezilio poveikis judėjimo ir tiriamajai veiklai

Transporto priemonės infuzijos ir A 1-42-infuzuotų grupių judėjimo laikas, ilgis ar greitis nesiskyrė (P > 0.05). KT ekstraktas (100, 2{{20}}0 mg/kg) arba donepezilis (0,75 mg/kg) nepakeitė judėjimo laiko, ilgis arba greitis A 1-42-infuzuotų žiurkių (P > 0,05) (2 paveikslas (A) - (C)). Truputį sumažėjo, bet statistiškai nereikšmingai, laikas, praleistas duobėje ir patekimas į skylę tarp transporto priemonės infuzuotų ir A 1-42- 42-infuzuotų grupių (P > 0,05). KT ekstraktas (100, 200 mg/kg) nepakeitė laiko, praleisto duobėje ar patekimo į skylę A 1-42- infuzuotoms žiurkėms (P > 0,05). Tačiau 0,75 mg/kg donepezilo dozė padidino A 1-42- infuzuotų žiurkių duobutėje praleistą laiką ir patekimo į skylę skaičių (P < 0,05) (2 paveikslas (D) ir (E)).

KT arba donepezilio poveikis slopinimo vengimo užduočiai ir Morriso vandens labirintui

Atliekant slopinimo vengimo testo įsigijimo bandymą, nebuvo jokio skirtumo tarp bet kurios gydymo grupių pakopų delsos (duomenys nerodomi). Tačiau sulaikymo tyrime pastebėtas reikšmingas pakopinio delsos sumažėjimas A 1-42-grupėse, kurios buvo infuzuojamos, palyginti su grupe, kurioms buvo infuzuojama nešiklio (P < 0.0{{12) }}1). KT ekstraktas (100, 200 mg kg) arba donepezilis (0,75 mg/kg) padidino A 1-42-infuzuotų žiurkių sulaikymo tyrimo laipsnišką delsą (P < 0,001) (3 paveikslas (A)).

Erdvinis efektyvumas per aštuonis keturių treniruočių dienų bandymus (nuo 1 dienos 0 iki 13 dienos po A 1-42 infuzijos), ypač 3–7 bandymų, A 1-42- infuzijos grupėje buvo reikšmingas. sutrikusi, palyginti su grupe, kuriai buvo skirta transporto priemonė (P < {{10}}.01). KT ekstraktas (200 mg/kg) arba donepezilis (0,75 mg/kg) po A 1-42 infuzijos sumažino A 1-42 infuzijos sukeltą erdvinio veikimo pablogėjimą (P < 0,05, P < 0,01) (pav. 3 (B)).

Palyginti su transporto priemonių infuzijos grupe, 1-42-grupe, kuriai buvo skirta infuzija, žymiai sumažėjo laikas, praleistas platformos kvadrante treniruotės metu (P < 0).001 ). Visos KT ekstrakto ir donepezilio dozės (0,75 mg/kg) reikšmingai padidino laiką, praleistą platformos kvadrante, palyginti su A 1-42-infuzuota grupe (P < 0,001) (3 paveikslas (C) ). Plaukimo greitis nesiskyrė tarp nešiklio infuzijos grupės, A 1-42-infuzijos grupės arba KT ekstrakto ar donepezilo gydymo grupių (P > 0,05) (3 paveikslas (D)).

KT arba donepezilio poveikis A 1-42 nusėdimui

Amiloido baltymo nusėdimas A {{0}} infuzuotų žiurkių smegenyse buvo didesnis nei žiurkių, kurioms buvo užpilta nešiklio (4 paveikslas (A) ir (B)). KT ekstraktas (10{{20}}, 200 mg/kg) arba donepezilas (0,75 mg/kg) sumažino amiloido baltymo nusėdimą A smegenyse. 1-42-užpiltos žiurkės (4 paveikslas (C) – (E)). KT ekstrakto arba donepezilio poveikis A 1-42 nusėdimo santykiui A 1-42- infuzuotų žiurkių smegenyse parodytas 4 paveiksle (F). Palyginti su grupe, kuriai buvo infuzuojama nešiklio, 1-42-grupėje, kuriai buvo infuzija, buvo žymiai didesnis A 1-42 nusėdimų smegenyse santykis (P < 0,01). KT ekstraktas (100, 200 mg/kg) arba donepezilas (0,75 mg/kg) sumažino A 1-42 nusėdimo santykį A 1-42- infuzuotų žiurkių smegenyse (P < 0,05, P < 0,01) .

KT arba donepezilio poveikis smegenų neuromediatoriams ir jų metabolitams

Nuolatinė {0}} infuzija sumažino žievės ir hipokampo acetilcholino kiekį (P < 0.05 žievėje, P < 0.001 hipokampui), bet tik sumažino hipokampo cholino kiekį (P < 0,01). KT ekstraktas (200 mg/kg) arba donepezilis (0,75 mg/kg) panaikino šį žievės ir hipokampo acetilcholino kiekio sumažėjimą A 1-42- infuzuotoms žiurkėms (P < 0,05) (1 lentelė).

Nuolatinė A {{0}} infuzija sumažino žievės ir hipokampo DA lygį (P < 0.01), bet tik sumažino hipokampo NE lygį (P < {{1{{ 13}}}}.05). KT ekstraktas (100 ir 200 mg/kg) tik panaikino DA lygio sumažėjimą A 1-42- infuzuotų žiurkių hipokampe (P < 0,05). Donepezilas nepakeitė hipokampo DA lygio sumažėjimo (P > 0,05), tačiau padidino hipokampo NE lygio sumažėjimą A 1-42- infuzuotoms žiurkėms (P < 0,01) (1 lentelė).

KT arba donepezilio poveikis smegenų AChE, MAO-A ir MAO-B aktyvumui

Nuolatinė A {{0}} infuzija padidino žievės ir hipokampo AChE aktyvumą (P < 0.05 hipokampui, P < 0.0 1 žievei). KT ekstraktas (200 mg/kg) arba donepezilas (0,75 mg/kg) tik panaikino žievės AChE aktyvumo padidėjimą A 1-42- infuzuotoms žiurkėms (P < 0,05 donepezilui, P < 0,01 KT) (5 pav. A) ir (B)).

Nuolatinė A {{0}} infuzija padidino žievės MAO-A ir MAO-B aktyvumą (5 paveikslas (C) ir (E), P < 0.{11}}5, P < 0.01), bet sumažėjo žiurkių hipokampo MAO-A ir MAO-B aktyvumas (5 paveikslas (D) ir (F), P < 0.05) . 200 mg/kg KT ekstraktas tik panaikino žievės MAO-A aktyvumo padidėjimą A 1-42- infuzuotoms žiurkėms (5 paveikslas (C), P < 0,01). Donepezilas (0,75 mg/kg) nepakeitė MAO-A ir MAO-B aktyvumo pokyčių A 1- 42- infuzuotoms žiurkėms (5 paveikslas (C) – (F), P > 0,05).

Diskusija

Daugelis ataskaitų iš ląstelių kultūros tyrimų ir eksperimentų su gyvūnais įrodė, kad A yra pagrindinis baltymas AD sergantiems pacientams [2,3]. A 1-42 sukėlė neuronų pažeidimą ir apoptozę per oksidacinį stresą in vitro [2,3]. Intracisterninė A 1-42 injekcija žiurkėms sukėlė atminties sutrikimą, smegenų morfologijos pokyčius ir cholinerginę neuronų degeneraciją [3,4]. Šiame tyrime nuolatinė A 1-42 infuzija į smegenų skilvelį osmosiniu siurbliu (Alzet 2002) sukėlė elgesio trūkumą, įskaitant tiriamąjį elgesį,

slopinantis vengimo atsakas ir Morriso vandens labirinto erdvinis veikimas žiurkėms. Šie simptomai buvo panašūs į ankstesnius pranešimus [3, 4]. Donepezilas, selektyvus AChE inhibitorius, turi neuroprotekcinį aktyvumą prieš A sukeltą toksiškumą in vitro ir in vivo [19, 20]. Mūsų dabartiniai duomenys atitinka aukščiau pateiktą ataskaitą [20], rodančią, kad donepezilas sumažino elgesio sutrikimus, kuriuos sukėlė A 1-42 infuzija žiurkėms. CT ekstrakto (100, 200 mg/kg) įvedimas į skrandį per A 1-42 infuzijos laikotarpį sumažino pastebėtus elgesio trūkumus, kuriuos sukėlė A 1-42. Šis atmintį gerinantis poveikis atitinka kitus pranešimus, rodančius, kad bendras Cistanche rūšių feniletanoidų glikozidų kiekis gali apsaugoti nuo slopinamojo vengimo atsako, kurį sukelia ūmi intracisterninė A 25-35 injekcija pelėms [6]. Naujausios klinikinės ataskaitos taip pat parodė, kad AD pacientams, kuriems 48 savaites buvo skirti KT glikozidai, pažinimo funkcijos nepablogėjo [21]. Be to, KT ekstrakte, vartojamoje dozėje (100, 200 mg/kg), buvo echinakozido (25,4, 50,8 mg), akteozido (3,8, 7,6 mg) ir izoakteozido (4,1, 8,2 mg) pagal šiame tyrime atliktą kiekio tyrimą.Echinakozidas (50 mg/kg) ir akteozidas(1 mg/kg) gali užkirsti kelią pelių atminties sutrikimams, kuriuos sukelia skopolaminas [11,12]. Taigi mes siūlome taiKT yra potencialus antiamnezinis ir antidemencijos augalaskai jis kiekybiškai įvertinamas ir standartizuojamas naudojant feniletanoidinius glikozidus, ypač echinakozidą, akteozidą ir izoakteozidą.

NATŪRALUS CISTANCHE TUBULOZA NUO ALŽEIMERIO LIGA PHGS75% ECH 30% ACT 12%

Remiantis amiloido kaskados hipoteze, atminties trūkumas, kurį sukelia A, atsiranda dėl tarpląstelinio oksidacinio streso ir neuronų apoptozės, kurią skatina A susidarymas ir vėlesnė agregacija bei nusėdimas [2,3]. Nusėdimas yra glaudžiai susijęs su centrinių cholinerginių neuronų grandinių disfunkcija bazinėje priekinėje smegenyse [2,3]. Centrinių cholinerginių neuronų sistemų disfunkcija, įskaitant sumažėjusį acetilcholino kiekį smegenyse ir AChE aktyvumo padidėjimą, yra susiję su amnezijos laipsniais ir A nusėdimu AD smegenyse [2,3]. Remdamiesi aukščiau pateiktais rezultatais, toliau tyrėme KT ekstrakto arba donepezilio poveikį A -

sukeltų patologinių pokyčių žiurkėms. Mes nustatėme, kad A 1-42 nuolatinė infuzija sukėlė didelį patologinį A nusėdimo pokytį aplink hipokampą ir prefrontalinę žievę ir reikšmingą su tuo susijusį biocheminį pakitimą: sumažėjo acetilcholino ir cholino kiekis ir padidėjo AChE aktyvumas, ypač hipokampo sritys. Šie patologiniai simptomai buvo panašūs į kitus pranešimus [4,22], rodančius, kad intracisterninė A 1-42 injekcija per 2 savaites sukelia A nusėdimą žiurkės smegenyse naudojant imunohistocheminę dėmę, o vėliau sukelia AChE aktyvumo padidėjimą viduje ir aplink. senatvinės plokštelės. Šis padidintas reguliavimas skatina A surinkimą į fibriles, o šios A fibrilės galiausiai sukelia A neurotoksiškumą ir ypač cholinerginę disfunkciją [23]. A 1-42-infuzuotoms žiurkėms donepezilas sumažino A nusėdimo santykį ir žievės AChE aktyvumo pokyčius bei atkūrė ACh lygį visose smegenų srityse. Mūsų dabartiniai duomenys atitiko kitą ataskaitą [19, 20], rodančią, kad donepezilas gali slopinti AChE aktyvaciją ir sukelti neuroprotekcinį ir atmintį gerinantį poveikį prieš A 1-42. KT ekstraktas (100, 200 mg/kg) taip pat sumažino A nusėdimą, ypač hipokampo srityse, tačiau tik 200 mg/kg dozė panaikino žievės AChE aktyvumo pokyčius ir žievės bei hipokampo acetilcholino kiekio sumažėjimą. Remdamiesi šiais patologiniais ir biocheminiais rezultatais, mes pasiūlėme, kad KT ekstraktas, vartojamas 200 mg/kg, pakeistų žievės ir hipokampo cholinerginę funkciją, sumažindamas A nusėdimą. Kituose pranešimuose nurodyta, kad bendras Cistanche rūšių feniletanoidinis glikozidas arba akteozidas gali apsaugoti nuo atminties trūkumo ar neuronų pažeidimo, kurį sukelia A 25-35, pasitelkdami antioksidacinį mechanizmą ir sumažindami Bax/Bcl2 santykį in vivo arba in vitro [6,24] . Neseniai paskelbta ataskaita taip pat parodė, kad akteozidas slopino A 1-42 agregaciją priklausomai nuo dozės, naudodamas tioflavino-T tyrimą [25].Echinakozidassumažėjęs AChE aktyvumas SAMP/8 pelėms [12]. Taigi, mes manome, kad atmintį gerinantis KT ekstrakto poveikis gali būti susijęs su sumažėjusiu A nusėdimu ir neurotoksiškumu, dėl kurio pasikeičia neigiami žievės ir hipokampo cholinerginės funkcijos pokyčiai.

Klinikiniai mokslininkai nustatė, kad AD pacientai turi sudėtingų neurocheminių sutrikimų, įskaitant katecholaminergines, cholinergines ir glutaminergines neuronų sistemas [26]. Kai kuriose ataskaitose taip pat nustatyta, kad AD sergančių pacientų MAO-B aktyvumas padidėjo, palyginti su sveikais kontroliniais žmonėmis, ir šis padidėjęs MAO-B aktyvumas gali atspindėti dopaminerginių sistemų anomalijas [27]. Į AD panašiuose žiurkių modeliuose A 1-42 taip pat sukelia katecholaminerginę disfunkciją [14]. Kai kurie nootropai arba selegilinas pagerino A sukeltą atminties trūkumą, sustiprindami katecholaminerginį aktyvumą arba moduliuodami MAO veiklą [4,28]. Šiame tyrime A 1-42 nuolatinė infuzija taip pat sumažino žievės ir hipokampo DA ir hipokampo NE lygį. Taip pat nustatėme, kad A 1-42 nuolatinė infuzija lėmė skirtingą žievės ir hipokampo MAO aktyvumo pokyčius, įskaitant žievės MAO-A ir MAO-B aktyvumo padidėjimą ir hipokampo MAO-A ir MAO sumažėjimą. -B veikla. Šie patologiniai katecholaminerginės disfunkcijos simptomai buvo panašūs į kitus pranešimus [14,27]. Donepezilas nepakeitė šių A 1-42 infuzijos sukeltų katecholaminerginių pokyčių, tačiau sumažino hipokampo NE ir MHPG lygį, palyginti su A 1-42-infuzuotomis žiurkėmis. Šie duomenys atitinka kitą ataskaitą [19, 20], rodančią, kad donepezilas turi atmintį gerinantis poveikis prieš A 1-42, kuris daugiausia veikia per selektyvų AChE slopinamąjį poveikį, bet galbūt sukelia tam tikrų neuromediatorių pokyčius regionui. KT ekstraktas tik panaikino hipokampo DA lygio sumažėjimą ir žievės MAO-A aktyvumo padidėjimą, kurį sukėlė A 1-42 infuzija. Taigi mes siūlome, kad KT ekstraktas, esant 200 mg / kg, panaikintų neigiamą poveikį hipokampo dopaminerginei funkcijai, daugiausia sumažindamas A nusėdimą hipokampo srityse. Tačiau donepezilis taip pat sumažino A nusėdimą, bet neturėjo įtakos hipokampo dopaminerginei funkcijai.

Išvada

Remiantis mūsų dabartiniais duomenimis ir kitomis ataskaitomis [6-8, 21], CT yra potencialus antiamnezinis ir antidemencijos augalas. Echinakozido ir akteozido kiekio šioje naudojamoje KT ekstrakto dozėje pakanka, kad SAMP/8 pelėms atsirastų gerinantis atmintį arba skopolamino sukelta amnezija [11,12]. Taigi mes taip pat siūlome, kad, kaip augalui nuo demencijos, svarbu standartizuoti echinakozido, akteozido ir izoakteozido kiekį KT ekstrakte. Be to, KT ekstrakto atmintį gerinantis mechanizmas, kuris skiriasi nuo donepezilio, tuo sumažina A nusėdimą ir cholinerginę disfunkciją, nes slopina AChE aktyvaciją ir aktyvuoja nikotino receptorius bei fosfoinositido 3-kinazės/Akt kelius [19,20] , atsiranda dėl A nusėdimo sumažėjimo ir cholinerginės bei hipokampo dopaminerginės disfunkcijos pasikeitimo. Be to, tai nurodė kiti pranešimaivisų Cistanche rūšies feniletanoidinių glikozidųturi neuroprotekcinį ir atmintį gerinantį poveikį dėl savo antioksidacinio ir neurotrofinio aktyvumo [9, 29, 30]. Echinakozidas ir akteozidas taip pat turi neuroprotekcinį poveikį H2O2- MPTP arba A 25-35- sukeltam neurotoksiškumui dėl antioksidacinio ir neurotrofinio aktyvumo [24,31,32]. Taigi, ar CT ekstrakto apsauginis poveikis AD tipo žiurkės modelyje veikia per antiagregacinį, neuroprotekcinį ar neurotrofinį poveikį A, turėtų būti ištirtas ateityje.

NATŪRALUS CISTANCHE TUBULOSA, SKIRTA Alzheimerio ligai gydytiPHGS75% ECH 30% ACT 12%