Bruknių (Vaccinium Vitis-idaea L.) polifenolių ROS moduliuojantis poveikis nutukusių adipocitų hipertrofijai ir kraujagyslių endotelio disfunkcijai 1 dalis

Spustelėkiteoscar.xiao@wecistanche.comDaugiau informacijos

Santrauka:Oksidacinis stresas ir sureguliuota adipocitokinų sekrecija, lydima hipertrofuoto riebalinio audinio, sukelia lėtinį uždegimą, dėl kurio atsiranda kraujagyslių endotelio disfunkcija. Šiame tyrime buvo tiriamas antocianino (ACN) ir ne antocianino polifenolio (PP) frakcijų iš bruknių vaisių gebėjimas sušvelninti riebalinio audinio hipertrofiją ir endotelio disfunkciją, naudojant 3T3-L1 adipocitus ir žmogaus bambos venų endotelio ląsteles (HUVEC). Šis tyrimas parodė, kad PP frakcija sumažino tarpląstelinę ROS susidarymą hipertrofuotuose adipocituose, padidindama antioksidantų fermentų ekspresiją (SOD2) ir slopindama oksidantų fermentų ekspresiją (NOX4, iNOS). Be to, PP ir ACN frakcijos sumažino trigliceridų kiekį adipocituose, kartu sumažinant lipogeninių genų, tokių kaip aP2, FAS ir DAGT1, ekspresiją. Gydymas abiem frakcijomis moduliavo pagrindinių adipokinų mRNR ekspresiją ir baltymų sekreciją hipertrofuotuose adipocituose. Leptino ir adiponektino ekspresija ir sekrecija buvo atitinkamai sumažinta ir padidinta. Be to, PP ir ACN frakcijos sumažino uždegiminį atsaką TNF- -sukeltuose HUVEC, nes slopino uždegimą skatinančių genų (IL-6, IL-1) ir adhezijos molekulių (VCAM{{) ekspresiją. 14}}, ICAM-1, SELE). Gauti rezultatai rodo, kad polifenolių turtingų bruknių vaisių vartojimas gali padėti išvengti ir gydyti nutukimą bei endotelio disfunkciją dėl jų antioksidacinio ir priešuždegiminio poveikio.

Raktiniai žodžiai:polifenoliai; antocianinai;bruknių; antioksidacinis potencialas; kovoti su nutukimu; priešuždegiminis;cistanche tubulosa ekstraktas;3T3-Ll adipocitai; hipertrofija;adipokinai; endotelio disfunkcija

Norėdami sužinoti daugiau, spustelėkite čia

1. Įvadas

Nutukimas yra nepriklausomas širdies ir kraujagyslių ligų rizikos veiksnys ir viena iš pagrindinių padidėjusios dislipidemijos, atsparumo insulinui, hipertenzijos ir aterosklerozės rizikos priežasčių tiek suaugusiems, tiek vaikams [1]. Esant nutukimui, baltasis riebalinis audinys (WAT) dėl per didelio riebalų kaupimosi hipertrofuotuose adipocituose tampa disfunkcinis, o tai sukelia lėtinį uždegimą, oksidacinį stresą ir nereguliuojamą adipokinų sekreciją, kuri prisideda prie 2 tipo cukrinio diabeto ir yra nepriklausomai susijusi su vainikinių arterijų endotelio disfunkcija [2]. ,3]. Hipertrofiniai adipocitai yra esminis veiksnys, siejantis teigiamą energijos balansą, diabetą ir kardiometabolines ligas [2]. WAT veikia kaip endokrininis organas ir per išskiriamus adipokinus bei citokinus tarpininkauja kryžminiam pokalbiui tarp visceralinio arba poodinio WAT ir širdies ir kraujagyslių audinių.cistanche tubulosa redditAdipokinai, tokie kaip leptinas, adiponektinas ir rezistinas, citokinai, TNF-, IL-1, IL-6, IL-8 ir MCP-1 bei reaktyviosios deguonies ir azoto rūšys ( ROS ir RNS) veikia endotelio disfunkcijos vystymąsi per tiesioginius ir netiesioginius mechanizmus [4]. Be to, perivaskulinis riebalinis audinys (PVAT), daugiausia iš nutukusių asmenų, skatina vietinį uždegimą ir endotelio funkcijos sutrikimą.

PVAT prisideda prie kraujagyslių homeostazės, gamindamas vazoaktyvius junginius, tokius kaip adipokinai, ROS ir azoto oksidas (NO). Išskirdamas platų spektrą bioaktyvių molekulių, PVAT veikia kraujagyslių lygiųjų raumenų ląstelių susitraukimą, proliferaciją ir migraciją [4].

Cistanche gali pagerinti imunitetą

Endotelio ląstelės, išklojančios kraujagyslių vidinę sienelę, reguliuoja homeostatines funkcijas, o jų disfunkcija yra ankstyvas aterosklerozės ir širdies ir kraujagyslių ligų prognozuotojas [5]. Oksidacinis stresas prisideda prie endotelio ląstelių aktyvacijos, paruošdamas jas adhezijai, infiltracijai ir imuninių ląstelių aktyvacijai, todėl kraujagyslėse susidaro žemo laipsnio uždegiminis fenotipas [5, 6]. ROS gali pakeisti nuo endotelio priklausomą kraujagyslių atsipalaidavimą, padidindamas NO skaidymą [6]. Galima pakeisti endotelio disfunkciją, kuri gali sulėtinti ar net užkirsti kelią aterosklerozės progresavimui ir pagerinti arterijų funkciją bei sumažinti širdies ir kraujagyslių reiškinių dažnį I5]. Naujausi klinikiniai tyrimai parodė, kad nemedikamentiniai ir farmakologiniai gydymo būdai, skirti nutukimui ir atsparumui insulinui, pagerina endotelio funkciją ir sumažina mažo laipsnio uždegimą [7]. Šie radiniai parodė ryšį tarp nutukimo, atsparumo insulinui ir endotelio disfunkcijos; todėl nutukimo patologinės adipocitų funkcijos mažinimas turėtų būti širdies ir kraujagyslių ligų prevencijos tikslas. Terapinės ir mitybos strategijos, mažinančios oksidacinį stresą ir uždegimą hipertrofuotame riebaliniame audinyje, gali tapti pagrindiniu širdies ir kraujagyslių ligų prevencijos tikslu [7].

Uogose gausu polifenolių, tokių kaip flavonoliai, fenolio rūgštys ir antocianinai, šaltiniai, o epidemiologiniai tyrimai parodė ryšį tarp uogų suvartojimo padidėjimo ir nutukimo sumažėjimo bei širdies ir kraujagyslių ligų ]8]. Uogų vaisiai žinomi kaip natūralūs antioksidantai, o dėl didelio antioksidacinio potencialo jie vis dažniau vadinami natūraliu funkciniu maistu [9]. Bruknės priskiriamos „supervaisiams“, nes jose ypač gausu antioksidantų, tokių kaip vitaminai C, A ir E (tokoferolis) ir polifenoliai [10]. Tyrimai in vitro ir in vivo parodė įvairius teigiamus bruknių poveikius sveikatai, pavyzdžiui, priešuždegiminį[11], antioksidacinį [11] ir antiproliferacinį poveikį [8,9]. Be to, buvo įrodyta, kad bruknės apsaugo nuo dietos sukelto nutukimo ir žemo laipsnio uždegimų diabetu sergantiems gyvūnams [12]. Mūsų ankstesnis tyrimas parodė priešuždegiminį liofilizuotų bruknių vaisių ekstrakto priešuždegiminį potencialą[11]. Ekstraktas reguliavo priešuždegiminio (IL-6, MCP-1 ir IL-1) ir priešuždegiminio (IL-10) geno ekspresiją uždegiminiame TNF{{20} }sukėlė 3T3-L1 adipocitus ir slopino uždegiminį atsaką aktyvuotuose RAW 264.7 makrofaguose, sumažindamas priešuždegiminių mediatorių (TNF-, IL-1, IL-6, MCP{30) }}, iNOS, COX-2). Be to, pastebėtas reikšmingas antioksidacinis poveikis uždegiminiams adipocitams, apdorotiems bruknių vaisių ekstraktu. Intracelulinis ROS kaupimasis sumažėjo dėl padidėjusios antioksidantų gynybos fermentų (SOD, katalazės, GPx) ekspresijos ir slopinto prooksidanto fermento (NADPH oksidazės 4) [11].

Šiame tyrime buvo tiriamas bruknių vaisių antocianino (ACN) frakcijos ir ne antocianino polifenolio (PP) frakcijos gebėjimas užkirsti kelią ir gydyti hipertrofinį nutukimą ir endotelio disfunkciją, imituojamą in vitro modeliuose. ACN ir PP frakcijų poveikis molekuliniams keliams esant oksidaciniam stresui, uždegimui ir sureguliuotai adipokinų sekrecijai buvo analizuojamas nutukusių hipertrofuotų 3T3-L1 adipocitų organizme. Apsauginis potencialas nuo endotelio disfunkcijos buvo įvertintas naudojant TNF-x sukeltas žmogaus bambos venų endotelio ląsteles (HUVEC).

2. Medžiagos ir metodai

2.1.Antocianinų ir neantocianininių polifenolio frakcijų paruošimas

Šaldyti bruknių (Vaccinium Vitis-idea L.) vaisiai, gauti iš DANEX kompanijos (PHU"DANEX", Wielen, Lenkija), buvo homogenizuoti iki vaisių minkštimo, kuris vėliau buvo užšaldytas -80 laipsnių temperatūroje ir džiovinamas šalčiu. pagal anksčiau aprašytą procedūrą[11]. Vaisių milteliai buvo suspenduoti 0,75 procento (t/v) acto rūgšties tirpale. Kietųjų dalelių (g) ir ekstraktoriaus (mL) santykis buvo 1:10. Sumaišius sūkuriniame maišytuve 30s, suspensija buvo patalpinta į garsinę vonią (5 min., 20 laipsnių). Vėlgi, ekstrahavimo mišinys buvo maišomas sūkuriniame maišytuve 30 s ir paliekamas stovėti 20 laipsnių temperatūroje.

Po 10 minučių mėginys buvo centrifuguojamas 3600 × g (10 min., 20 laipsnių), o gautas supernatantas buvo surinktas. Šviežias ekstraktorius buvo supiltas į likusias kietąsias medžiagas, kad būtų pradėtas antrasis ekstrahavimo etapas. Antrojo etapo procedūra buvo tokia pati kaip ir pirmojo. Abiejų etapų ekstraktai buvo sujungti ir centrifuguojami 12, 000 × g, kad būtų pašalintos mažos vaisių likučiai.

Kitame frakcijos paruošimo etape iš ekstrakto buvo pašalintas cukrus ir organinės rūgštys. Atskyrimas buvo atliktas naudojant AKTA Explorer 100 Air (GE Healthcare, Chicago, IL, JAV) chromatografijos sistemą su XK 26/20 stiklo kolonėle (GE Healthcare, Chicago, IL, JAV ). Kolonėlė buvo užpildyta 40 ml Amberlite XAD-7 HP makroporingos adsorbentinės dervos (DuPont, Wilmington, DE, JAV). Prieš užkrečiant į kolonėlę, tirpalas (50 ml ekstrakto, gauto ekstrahavimo stadijoje) buvo filtruojamas naudojant 0,{7}} um porų dydžio švirkšto filtrą (Millex-HV Durapore PVDF) membraną su stiklo pluošto pirminiu filtru (Merck). Millipore, Burlington, MA, JAV). Taikyti trys eliuentai: A-5 procentai (t/o) skruzdžių rūgštis, B-metanolis ir C-0,1 proc. (v/o) skruzdžių rūgštis. Skruzdžių rūgšties tirpalai buvo paruošti sumaišant atitinkamą kiekį skruzdžių rūgšties su dejonizuotu vandeniu. Eliuento srauto greitis buvo nustatytas 5 ml/min. Atskyrimo metu buvo naudojama tokia chromatografinė programa: Kolonėlės balansavimas: 95 procentai A, 5 procentai B, 3 CV (kolonėlės tūris); mėginio injekcija-50 mL ekstrakto; nesurištų medžiagų plovimas-1:100 proc. C,6 CV;plovimas nesurištų medžiagų-2:100 proc. A,1 CV;eliuavimas: 20 proc. A,80 proc. B,5 CV;kolonėlės plovimas: 100 proc. B, 2,5 CV.

Visas eliuavimo etapo nuotekis, rodantis absorbciją (stebimas esant λ{0}}, 320 ir 520 nm), buvo išgarintas iki sausumo 30 laipsnių temperatūroje, naudojant sukamąjį garintuvą (Laborota 4003 HB kontrolė, Heidolph, Vokietija). Kietosios medžiagos buvo ištirpintos 0,75 procento (o/o) acto rūgšties vandeniniame tirpale. Tirpalas supilamas į stiklinius buteliukus ir užšaldomas -85 laipsnių temperatūroje, o po to dedamas į šaldymo džiovintuvą Beta {{8 }}(Martin Christ, Vokietija). Liofilizuotas džiovinimas vyko 48 val. Faktinis džiovinimas vyko esant 10 Pa slėgiui 40 val. (20 val. esant -15 laipsnio lentynos temperatūrai ir 20 val. 15 laipsnių). Galutinis džiovinimas buvo atliktas 22 laipsnių temperatūroje 8 valandas be slėgio kontrolės. Kietieji preparatai buvo laikomi hermetiškai uždarytuose buteliukuose azoto atmosferoje -85 C temperatūroje.

Buteliuko kietoji medžiaga buvo ištirpinta 5 procentų (o/o) skruzdžių rūgšties tirpale ir filtruojama naudojant 0.45-μm porų dydžio filtrą (Merck Millipore). Antocianinų atskyrimas nuo kitų mėginiuose esančių polifenolių junginių buvo atliktas naudojant AKTA Explorer 100 Air chromatografą su UV/VIS detektoriumi ir Agilent Zorbax SB C18 kolonėle (250×21,2 mm). Atskyrimas buvo atliktas 20 laipsnių temperatūroje. Skystos fazės srautas buvo 21 ml/min. Buvo naudojami du eliuentai: A-5 % (t/v) skruzdžių rūgšties vandenyje ir B-metanolio. Subalansavus kolonėlę (95 proc. A, 5 proc. B, 3 CV) ir įpurškus 2 ml mėginio, atskyrimas atliktas kompleksiniu gradientu. Gradiento programa buvo tokia: 5 procentai B-0,5 CV;20 procentų B-2 CV;20 procentų B-1,2 CV;30 procentų B-3. 5 CV;30 procentų B-1.2CV;45 procentų B-3.5 CV;45 procentų B-1.2CV;100 procentų B-2.5 CV;100 procentai B-2.5 CV. Išteka, kurios absorbcija ties λ=520 nm, buvo surinkta ir pažymėta kaip antocianino (ACN) frakcija. Ištekėjimas, rodantis absorbciją esant 入=320 nm, taip pat buvo surinktas ir pažymėtas kaip ne antocianino polifenolio frakcija (PP). Abi frakcijos buvo išgarintos, ištirpintos vandeniniame acto rūgšties tirpale, liofilizuotos ir laikomos, kaip aprašyta aukščiau. Visos cheminės medžiagos, naudojamos ACN ir PP frakcijoms paruošti, buvo perkamos iš „Sigma-Aldrich“ („Merck Group“, Poznanė, Lenkija).

2.2. Polifenolių identifikavimas ir kiekybinis nustatymas ACN ir PP frakcijose

ACN ir PP frakcijų polifenolio sudėtis buvo analizuojama HPLC-DAD-ESI-MS metodu naudojant Agilent 1200 serijos HPLC sistemą (Agilent Technologies, Inc., Santa Klara, CA, JAV), aprūpintą G1315D fotodiodų matricos detektoriumi ir prijungta prie interneto. su Agilent 6224 skrydžio laiko MS sistema. Chromatografinis atskyrimas buvo atliktas 150 × 2,1 mm, 3- μm C18 kolonėlėje (Advanced Chromatography Technologies, Aberdynas, Škotija). Anksčiau paskelbtame tyrime išsamiai aprašomos atskyrimo sąlygos (mobili fazė, gradiento eliuavimo programa, srauto greitis, mėginio įpurškimo tūris)[11].

HPLC chromatogramos buvo įrašytos ties 280 325 355 ir 520 nm, rekomenduojamos atitinkamai flavano -3-oliams, hidroksicinamono rūgšties dariniams, flavonoliams ir antocianinams aptikti.

Polifenolių junginiai ACN ir PP frakcijose buvo kiekybiškai įvertinti kaip cianidino -3-O-gliukozido (antocianinai), katechino ((epi)katechino ir procianidinų), 4-hidroksibenzenkarboksirūgšties (hidroksibenzenkarboksirūgšties darinių), ferulo rūgšties ekvivalentai. (ferulo rūgšties darinys), chlorogeno rūgštis (3-O-kofeoilchino rūgštis), p-kumaro rūgštį (kumaro rūgšties darinį), trihidroksibenzenkarboksirūgštį-galo rūgštį (benzenkarboksirūgštį ir arbutino darinius) ir kvercetiną (kvercetino glikozidus) . Visi mėginiai buvo švirkščiami trimis egzemplioriais iš nepriklausomai paruoštų ACN ir PP frakcijų tirpalų.

Praėjęs per DAD detektorių, kolonėlės eliuatas buvo nukreiptas į MS sistemą, turinčią elektropurškimo jonizacijos (ESI) šaltinį, veikiantį teigiamų jonų ir neigiamų jonų režimu. Anksčiau paskelbtame straipsnyje pateikiami ESI-MS parametrai, naudojami fenoliniams junginiams identifikuoti ACN ir PP frakcijose [11]. Prietaisų valdymas, duomenų rinkimas ir analizė buvo atlikti naudojant MassHunter B.04.{3}} programinę įrangą (Agilent Technologies, Inc., Santa Clara, CA, JAV). Sigma-Aldrich tiekė fenolio etalonus ir kitus reagentus HPLC/DAD/MS analizei.

2.3. 3T3-L1 adipocitų kultūra ir gydymas

Pelės preadipocitų 3T3-L1 ląstelės buvo gautos iš Amerikos tipo kultūrų kolekcijos (ATCC, CL-173). Ląstelės buvo kultivuojamos 37 laipsnių temperatūroje, esant 5 proc. CO, atmosferoje Dulbecco modifikuotoje erelio terpėje (DMEM) (Sigma-Aldrich, Poznanė, Lenkija) su 10 proc. (o/o) galvijų vaisiaus serumu (FBS). (Gibco, Thermo Fisher Scientific Polska, Varšuva, Lenkija) papildymas. 3T3-L1 preadipocitai buvo diferencijuojami pagal anksčiau aprašytą protokolą [11]. Preadipocitai buvo sėjami 2,5 × 104 ląstelių/cm² tankiu į 12-šulinėlių plokšteles ir kultivuojami, kol susiliejo. Tada jie 2 dienas buvo stimuliuojami diferenciacijos mišiniu, kuriame buvo 0,25 μM deksametazono (Sigma-Aldrich, Poznanė, Lenkija), 0,5 mM 3-izobutil-1-metilksantino (Sigma-Aldrich, Poznanė, Lenkija). ir 1 μM insulino (Sigma-Aldrich, Poznanė, Lenkija) DMEM su 10 procentų FBS. Terpė buvo pakeista DMEM, papildytu 10 procentų FBS ir 1 μM insulino. Po 2 dienų auginimo terpė buvo pakeista DMEM, pridėjus 10 procentų FBS, ir atnaujinama 2-dienų intervalais iki analizės 12 dieną. 3T3-L1 adipocitai buvo apdoroti 24 valandas ACN ir PP frakcijomis. koncentracijos 5, 10 ir 20 ug/ml.

2.4.HUVEC kultūra ir gydymas

Žmogaus bambos venų endotelio ląstelės (HUVEC) buvo gautos iš ATCC (CRL{{0}}). HUVEC buvo auginami F-12Kmedium (ATCC), papildytu 10 procentų FBS (Gibco), endotelio ląstelių augimo priedu iš galvijų nervinio audinio (30 ug/mL) (Sigma-Aldrich, Poznanė, Lenkija) ir heparinu ( 100 ug/ml) (Sigma-Aldrich, Poznanė, Lenkija). HUVEC buvo sėjami 6 × 103 ląstelių/cm² tankiu į 24-šulinėlių plokšteles, padengtas žiurkės uodegos kolageno tirpalu (Sigma-Aldrich, Poznanė, Lenkija). Tada 24-h HUVEC kultūros buvo veikiamos 3 valandas ACN ir PP frakcijomis, kurių koncentracija buvo 0,1, 1 ir 10 ug/ml, ir vėliau apdorotos TNF- (10 ng/mL) (Sigma-Aldrich, Poznanė). , Lenkija) dar 3 val. uždegimui sukelti.

2.5. Ląstelių gyvybingumo tyrimas

Hipertrofuotų 3T3-L1 adipocitų ir TNF- -sukeltų HUVEC, neapdorotų ir apdorotų ACN ir PP frakcijomis, gyvybingumas buvo analizuojamas taikant MTT(3-(4,{{7). }}dimetiltiazol-2-il)-25-difeniltetrazolio bromido) tyrimas (Sigma-Aldrich, Poznanė, Lenkija) pagal anksčiau aprašytą procedūrą[13]. Ląstelėms apdoroti naudotos mažos koncentracijos ACN ir PP frakcijos neturėjo įtakos terpės spalvai ir absorbcijos rodmenims atliekant MTT testą.

2.6.Intraląstelinės ROS gamybos nustatymas

ROS susidarymas 3T3-L1 adipocituose buvo matuojamas naudojant nitro mėlynojo tetrazolio (NBT) tyrimą, remiantis anksčiau aprašyta procedūra [14]. Po 90-min. inkubacijos 0,2 procentų NBT (Sigma-Aldrich, Poznanė, Lenkija) tirpale ląstelės buvo plaunamos fosfatiniu buferiniu tirpalu ir fiksuojamos metanoliu. Po formazano ekstrahavimo naudojant KOH ir DMSO, absorbcija buvo nuskaityta esant 620 nm (Tecan Infinite M200, Tecan Group Ltd., Männedorf, Šveicarija).

2.7.Intraląstelinio lipidų kiekio matavimas

PP ir ACN frakcijų poveikis lipidų kiekiui hipertrofuotuose adipocituose buvo nustatytas anksčiau aprašytu Oil Red O (Sigma-Aldrich, Poznanė, Lenkija) dažymo metodu [13] ir bendrų trigliceridų (TG) matavimu naudojant Adipogenesis Assay Kit. Sigma-Aldrich, Poznanė, Lenkija) pagal gamintojo instrukcijas. Intraląstelinis TG kiekis buvo nustatytas fermento tyrimu. Kolorimetrinis produktas, atitinkantis esamą TG, buvo išmatuotas esant 570 nm. TG koncentracija buvo apskaičiuota pagal kreivę, nubrėžtą TG standartui.

2.8.RNR ekstrahavimas ir realaus laiko PGR analizė

3T3-L1 adipocitai ir HUVEC buvo apdoroti TRI-reagentu (Sigma-Aldrich, Poznanė, Lenkija), kad būtų galima išskirti visą RNR. Pirmosios krypties cDNR sintezė buvo atlikta naudojant 1 ug visos RNR, naudojant Transcriptor First Strand cDNA sintezės rinkinį (Roche Diagnostics, Lenkija), remiantis gamintojo instrukcijomis. Genų ekspresijos kiekybinis įvertinimas buvo atliktas naudojant realaus laiko PGR sistemą (SmartCycler DX realaus laiko PCR sistema Cepheid, Sunnyvale, CA, JAV). PGR mišinys galutiniame 25 μL tūryje apėmė cDNR mėginį (1 μL), specifinį į priekį ir atvirkštiniai pradmenys (5 μM/1 μL) ir SYBR⑧ Select Master Mix (12,5 μL) (Life Technologies, Carlsbad, CA, USA). Pradmenų sekos parodytos S1 lentelėje. PGR ciklo sąlygos apėmė pradinį 94 denatūravimo laipsnį 10 min., po to seka 40 PGR ciklų: 40 s 95 laipsniais, 30 s 59 laipsniais C ir 30 s 72 laipsniais. Santykinė genų ekspresija buvo apskaičiuota naudojant 2-△ACT metodą. Transkripto lygiai normalizuoti iki -aktino 3T3-L1 adipocitams ir GAPDH HUVEC. Santykinė mRNR ekspresija buvo išreikšta kaip pokytis, lyginant su kontrolinėmis (neapdorotomis) ląstelėmis. Visos reakcijos buvo atliktos trimis egzemplioriais.

2.9.Adipokino gamybos nustatymas

Leptino ir adiponektino koncentracijos buvo matuojamos ELISA rinkiniais (Sigma-Aldrich, Poznanė, Lenkija), vadovaujantis gamintojo protokolais. Kiekybinis nustatymas atliktas naudojant etalonų kalibravimą. Kiekvienas standartas ir mėginys buvo tiriami trimis egzemplioriais. Apskaičiuoti, kad kintamumo koeficientai tarp tyrimų ir tarp tyrimų buvo atitinkamai 12,5 proc. ir 9,3 proc. leptinui ir 11,2 proc. ir 7,9 proc. adiponektinui.

2.10.Statistinė analizė

Statistinė analizė atlikta naudojant STATISTICA 13.3 versiją (Stat-soft, Inc., Talsa, OK, JAV). Vienpusė dispersijos analizė (ANOVA) ir Tukey post hoc testas buvo pritaikyti skirtumams tarp kelių grupių vidutinių verčių įvertinti. Levene testas patvirtino dispersijų lygybės prielaidą. Statistinis reikšmingumas nustatytas p<>

3. Rezultatai ir aptarimas

3.1. Polifenolio sudėtis bruknių ACN ir PP frakcijose

Tyrime daugiausia dėmesio buvo skiriama dviem polifenoliniams preparatams, atskirtiems nuo bruknių vaisių: antocianino ACN frakcijai ir ne antocianino PP frakcijai. Polifenolių profiliai ACN ir PP frakcijose, nustatyti remiantis HPLC-DAD-ESI-MS analize, pateikti 1 lentelėje. ACN frakciją sudarė trys pagrindiniai antocianinų junginiai, esantys bruknių vaisių ekstrakte[11], kurie yra cianidino dariniai, įskaitant 3-O-galaktozidą (82,5 proc.), 3-O-arabinozidą (13.0 proc.) ir 3-O-gliukozidą (4,5 proc.) (1A lentelė) .

1 lentelė. Antocianino (ACN) frakcijoje (A) ir ne antocianino polifenolio (PP) frakcijoje (B) nustatyti junginiai buvo gauti iš bruknių vaisių.

The purity of ACN preparation was evaluated at 97.3%; among the non-anthocyanin constituents, 1-O-Benzoyl-β-glucose was identified by HPLC-ESI-MS analysis in positive ion mode (precursor ion at m/z307.079, production at m/z 185.0432). The PP fraction contained polyphenolic compounds belonging to three predominant groups: Flavan-3-ols, hydroxycinnamic acid derivatives, and flavonols, which accounted for 40.4%, 22.8%, and 31.0%, respectively. In addition, the anthocyanin compounds' residue (5.8%)was detected in the PP fraction with cyanidin-3-O-galactoside as dominant anthocyanin, cyanidin-pentoxide, and cyanidin 3-O-(6"-acetyl)-glucoside (Table 1B), trace amounts of which have been identified previously in the original lingonberry fruit extract [11]. In the PP fraction, the following polyphenols were quantified in a significant amount (>5 proc.): A ir B tipo procianidinai, katechinas, 3-O-kofeoilchino rūgštis, ferulo rūgšties heksozidas, kvercetinas ir jo dariniai (3-O-galaktozidas, 3-O- arabinofuranozidas,{10}}O-ramnozidas). 1B lentelėje pateikti visų polifenolinių junginių, preliminariai identifikuotų bruknių vaisių PP frakcijoje, masės spektriniai duomenys.

Šis straipsnis ištrauktas iš Nutrients 2021, 13, 885 7