Kaip augalinė medžiaga Acteoside slopina naviko ląsteles?

Kontaktai: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 El. paštas:audrey.hu@wecistanche.com

SANTRAUKA

Natūralūs produktai pasižymi ypatinga struktūrine įvairove, todėl jie yra unikalus šaltinis naujų priešnavikinių medžiagų identifikavimui. Čia pranešame, kad augalinė medžiagaakteozidopažangiais fitocheminiais metodais išskyrus iš Lippia citriodora lapų, nustatytas padidėjęs citotoksiškumas prieš metastazavusias naviko ląsteles; veikė sinergiškai su įvairiais citotoksiniais agentais ir įjautrintomis chemiškai atspariomis vėžio ląstelėmis.Akteozidasiš herba cistanchcenebuvo toksiškas fiziologiniame ląstelių kontekste, tuo tarpu padidino oksidacinį krūvį, paveikė proteostatinių modulių aktyvumą ir slopino matricos metaloproteinazes auglio ląstelių linijose. Intraperitoninis arba oralinis (per geriamąjį vandenį) vartojimascistancheakteozido melanomos pelės modelyje padidino antioksidacinių atsakų reguliavimą navikuose; tačiau tik intraperitoninis įvedimas slopino naviko augimą ir sukėlė priešnavikinį reaktyvųjį imuninį atsaką. Masių spektrometrijos identifikavimo/kiekybinio nustatymo analizės atskleidė, kad intraperitoninis įvedimasakteozidolėmė žymiai didesnę, palyginti su peroraliniu vartojimu, junginio koncentracija gydytų pelių plazmoje ir navikuose, o tai rodo, kad jo priešnavikinis poveikis in vivo priklauso nuo vartojimo būdo ir pasiektos koncentracijos navike. Galiausiai, molekulinio modeliavimo tyrimai ir fermentinio aktyvumo tyrimai parodė, kad akteozidas slopina proteinkinazę C. Galima teigti, kad akteozidas yra geras cheminis pagrindas kuriant naujus priešnavikinius agentus.

Raktiniai žodžiai:Akteozidas, Vėžys, Natūralūs junginiai, Oksidacinis stresas, Proteostazė, Imunomoduliacija

Cistanche priešnavikinis, spustelėkite čia, kad gautumėte mėginį

1. Įvadas

Kancerogenezei būdingas kelių ląstelių signalizacijos kelių reguliavimo panaikinimas ir yra susijęs su padidėjusiu ląstelių oksidaciniu, replikaciniu, metaboliniu, genotoksiniu ir proteotoksiniu stresu [1]. Siekdamos prisitaikyti ir įveikti šiuos streso fenotipus, piktybinės ląstelės reguliuoja (išskyrus onkogenus) kelis ne onkogeninius kelius, kuriais siekiama nuslopinti arba (bent) sumažinti nuolatinį stresą. Tarp įvairių ne onkogeninių būdų, kurie dažnai yra reguliuojami navikogenezės metu, yra proteostazės tinklo (PN) moduliai kartu su ląstelių antioksidaciniais atsakais [2, 3].

Pagrindiniai PN komponentai yra du pagrindiniai skilimo mechanizmai, būtent autofagijos-lizosomų kelias (ALP) ir ubikvitino-proteasomos kelias (UPP), taip pat ląstelių molekulinių chaperonų tinklas. ALP daugiausia dalyvauja skaidant baltymų agregatus ir pažeistus organelius [4], o UPP skaido įprastus trumpaamžius baltymus ir nepataisomus netinkamai susilanksčiusius arba nesusilanksčiusius baltymus [5–8]. 26Seukariotinė proteasoma yra sudaryta iš 19S reguliuojančių dalelių (RP) ir 20 Score dalelių (CP); pastarąjį sudaro keturi sukrauti heptameriniai žiedai (du -tipo, aplink du - tipo), kurie sudaro statinę panašią struktūrą. Chimotripsino tipo (CT-L), tripsino tipo (TL) ir kaspazės tipo (CL) proteasomos peptidazės aktyvumas yra atitinkamai 5, 2 ir 1 proteasomų subvienetuose [6]. Įrodytas klinikinis proteasomų inhibitorių Bortezomibo (Velcade®; taip pat vadinamas PS-341) ir Carfifilzomib veiksmingumu kovojant su įvairiais piktybiniais hematologiniais navikais [9] yra „koncepcijos įrodymas“, kad UPP taikymas yra perspektyvi strategija. vėžio gydymas. Sudėtingas ląstelių antioksidacinės gynybos kelių tinklas, kuris dažnai sureguliuojamas kancerogenezės metu [3,10], apima antioksidacinius fermentus, taip pat keletą transkripcijos faktorių, kurie mobilizuoja citoprotekcinius genomo atsakus; tai yra šakės galvutės dėžutė O (Foxo) ir su branduoliniu faktoriumi susijęs eritroidinis 2-faktorius (Nrf{30}}). Nrf-2 yra pagrindinė ląstelių apsauga nuo oksidacinės ir (arba) ksenobiotinės žalos, nes skatina antioksidantų ir II fazės genų ekspresiją [11-13].

Mes ir kiti neseniai pasiūlėme, kad nukreipimas į šias priklausomybes nuo naviko (ty į proteostatinius modulius ir (arba) antioksidacinio atsako kelius) arba padidinus ROS kiekį ląstelėse transformuoto genotipo kontekste yra galimas terapinis langas selektyviam naviko ląstelių žudymui [3]. ,14]; patvirtinant, buvo pranešta, kad selektyviai žudo vėžines ląsteles maža molekulė, kuri padidino ląstelių ROS lygį [2]. Tikimasi, kad kombinatoriniai metodai, įskaitant priešnavikinių imuninių atsakų aktyvavimą [15], greičiausiai padidins terapinį langą, kurį siūlo slopinti PN ir antioksidacinius atsakus ir (arba) padidinti ląstelių ROS lygį.

Natūralūs produktai (ekstraktai arba gryni junginiai) (NP) iš įvairių šaltinių (augalų, jūrų organizmų, mikroorganizmų ir kt.) yra tikrinami dėl jų gebėjimo veikti kaip priešnavikiniai agentai dėl ypatingos struktūrinės įvairovės ir cheminio sudėtingumo, taip pat dėl ​​to, kad jie veikia pleiotropiškai moduliuodami kelis ląstelių signalizacijos kelius [16]. Pranešama, kad NP suaktyvina priešuždegiminį, priešnavikinį ir (arba) antimetastazinį atsaką [16, 17] ir taip pat išvengia atsparumo daugeliui vaistų [18, 19]. Tarp jų fenoliniai junginiai (įskaitant feniletanoidinius glikozidus) sulaukė didelio susidomėjimo dėl jų vaidmens įvairių žmonių ligų prevencijoje ir (arba) gydyme.

Akteozidas, dar vadinamas kusaginu arba verbaskozidu [20], yra feniletanoidinis glikozidas, išskirtas iš daugelio dviskilčių augalų. Teigiama, kad akteozidas pasižymi įdomiu biologiniu aktyvumu, įskaitant antioksidacines, priešuždegimines ir ląstelių apoptozę reguliuojančias savybes [21, 22]. Nepaisant to, jo galimas priešnavikinis aktyvumas nebuvo sprendžiamas. Čia pranešame, kad akteozidas parodė padidėjusį citotoksiškumą žinduolių vėžio ląstelėms ir neturėjo akivaizdaus toksinio poveikio fiziologiniame ląstelių kontekste. Be to, akteozidas slopino melanomos naviko augimą in vivo pelės modelyje, (be kita ko) aktyvuodamas priešnavikinius imuninius atsakus.

priešnavikinis cistanche ekstraktas

2. Medžiagos ir metodai

2.1. Augalinė medžiaga ir gavyba

Džiovinti Lippia citriodora (Lamiaceae) lapai (4,5 kg) buvo įsigyti iš vietinės Atėnų (Graikijos) rinkos. Lapai buvo susmulkinti ir ekstrahuoti mechaniškai maišant 12 valandų metanoliu (2 × 20 l). Metanolinis ekstraktas išgarinamas iki sausumo ir plaunamas CH2Cl2/MeOH 98/2 mišiniu (15 l). Netirpi liekana buvo atskirta ir išdžiovinta, todėl gaunami žalsvai geltoni milteliai (450 g).

2.2. Akteozido gryninimas ir UPLC-HRMS analizė

Dalis (10 g) anksčiau minėtos liekanos buvo chromatografuojama priešpriešinės srovės būdu, naudojant greitojo išcentrinio pasiskirstymo chromatografijos (FCPC) aparatą (Kromaton, Prancūzija); EtOAc/EtOH/H2O mišinys santykiu 5/0,5/4,5 buvo naudojamas kaip dvifazė tirpiklių sistema. Surinktoms frakcijoms buvo atlikta plonasluoksnė chromatografija; tada chromatogramos buvo stebimos UV lempoje (254 ir 365 nm) ir vizualizuojamos purškiant metanolio vanilino sulfatu, po to kaitinant dvi minutes. Pirmiau minėtu būdu iš viso buvo išskirta 2,1 g akteozido (grynumas didesnis nei arba lygus 90 proc.). Akteozido identifikavimas atliktas branduolinio magnetinio rezonanso (BMR) ir masių spektrometrijos (MS) spektrais, o jo grynumas nustatytas UPLC-MS ir BMR analize; Daugiau informacijos rasite Suppl. Medžiagos ir metodai.

2.3. Ląstelių linijos

Žmogaus plaučių embrioniniai fibroblastai (IMR90 ląstelės) kartu su B16.F1, B16.F10, YAC-1 ir WEHI-164 pelių ląstelių linijomis buvo gauti iš Amerikos audinių kultūros kolekcijos (ATCC). U2 OS ir Sa OS žmogaus osteosarkomos ląstelių linijas maloniai padovanojo prof. V. Gorgoulis (Medicinos mokykla, Nacionalinis ir Kapodistrijos universitetas, Graikija), o KH OS osteosarkomos ląstelės ir chemiškai atsparios osteosarkomos ląstelių linijos [23]. dr. E. Gonos (Nacionalinis Graikijos tyrimų fondas, Graikija) auka. Pelių vėžio ląstelių linijos C5N ir A5 priklauso daugiapakopiam pelių odos kancerogenezės modeliui [24,25] ir jas padovanojo prof. A. Balmain (Išsamus vėžio centras, Kalifornijos universitetas, JAV). Naudotų ląstelių linijų auginimo sąlygos nurodytos Suppl. Medžiagos ir metodai.

cistanche ekstrakto nauda: kovoja su vėžiu

2.4. Melanomos pelės modelis

C57BL/6 pelių patinai (25–30 g svorio, 6–8 savaičių amžiaus) buvo gauti iš Graikijos Pastero instituto ir laikomi kontroliuojamoje temperatūroje (22 laipsniai) ir fotoperiodu (12 val. šviesos: 12 val. tamsus) su laisva prieiga prie vandens ir maisto. Pelės buvo po oda inokuliuotos 105 B16.F1 melanomos ląstelėmis (100 μL PBS) ir atsitiktinai suskirstytos į 3 grupes (n=5/grupė). Kai augliai tapo apčiuopiami (11 diena), pelės gavo akteozidą dviem būdais; arba į pilvaplėvės ertmę (IP) (1 mg/pelei, praskiedžiama 200 μL PBS; iš viso 6 dozės skiriamos kas antrą dieną) arba per burną, geriant vandenį (OR) (2,5 mg/pelei; iš viso 13 dozių 13 dienų iš eilės). Kontrolinėms pelėms buvo skiriamas PBS. Auglio augimas buvo fiksuojamas kas 2 dienas skaitmeniniu slankmačiu išmatuojant susidariusių navikų didžiąją ir mažąją ašis. Matavimai buvo transformuoti į naviko tūrį, naudojant formulę: naviko tūris (cm3)=pagrindinė ašis × mažoji ašis2 × 0,5. 28 dieną gyvūnai buvo eutanazuoti išnirę gimdos kaklelį, o blužnis aseptiškai pašalinta. Eksperimentas buvo pakartotas tris kartus su panašiais rezultatais.

Splenocitai buvo išskirti iš individualiai homogenizuotų blužnies ir iš karto buvo tiriami dėl jų citotoksiškumo, palyginti su B16.F1, YAC-1 ir WEHI-164 ląstelių taikiniais. Citotoksiškumas buvo įvertintas remiantis CD107 poveikio aptikimu ląstelės paviršiuje dėl efektorinių ląstelių degranuliacijos. Splenocitai (105 ląstelės/šulinėlyje) buvo kultivuojami kartu su taikiniais 96-šulinėlio U dugno mikroplokštelėse efektoriaus ir taikinio (E:T) santykiu 100:1, 37 laipsnių temperatūroje 5 proc. CO2. Į kiekvieną duobutę buvo pridėta FITC konjuguotų anti-CD107a ir anti-CD107b monokloninių antikūnų (25 μL/mL) ir monenzino (6 μL/mL; visi iš BD Biosciences). Ląstelės buvo surinktos po 6 valandų ir analizuojamos naudojant FACSCanto II srauto citometrą. Tuo pačiu metu navikai buvo išpjauti ir apdoroti tolesniems tyrimams, kaip aprašyta Suppl. Medžiagos ir metodai.

cistanche ekstrakto poveikis: priešnavikinis ir vėžys